西藏小型猪的线粒体DNA控制区分析

目的 研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪的亲缘关系.方法 扩增102 头西藏小型猪以及16 头巴马小型猪、17 头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪进行比较.结果 西藏小型猪线粒体DNA D-loop区分三个区域.串联重复序列区处于中间位置,包含有15～29 个10 bp的重复片段,分为A、B 两种类型.D-loop 3′端340 bp,与国内其他猪的序列相同比较保守;5′端704 bp,共有22个变异位点.由22 个变异位点中归纳出25 个单倍型,其中有两种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%.根据三个转换位点:305、500、691,将西藏小型猪分成了两组,几乎与串联重复序列所分的A、B两组类型相对应.与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4 种和2 种单倍型,串联重复区也只有一个类型.结论 西藏小型猪可能有两个母系祖先并且与我国西南地区的品种猪有较近的亲缘关系;不同的串联重复片段类型和5′ 端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记.     

米非司酮对恒河猴促性腺激素分泌水平的抑制作用

目的测定西藏小型猪以及巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪的mtDNA控制区5’端序列,比较研究其遗传变异和与国内家猪的亲缘关系。方法扩增四种小型猪的mtDNA控制区5’端,测序并进行所测序列多重比对,确定变异位点、单倍型,并建立亲缘关系树。结果与荣昌猪相比,西藏小型猪mtDNA控制区5’端侧翼区704bp,有20个变异位点,由此归纳出26个单倍型;其中有两种主体单倍型,三个转换位点（305,500,691）的碱基分别为t,a,a和c,g,g。巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪mtDNA控制区5’端变异位点较少,分别只有4、4、3种单倍型。亲缘关系树的分析表明,西藏小型猪与其它三种小型猪有较近的亲缘关系。结论西藏小型猪群体存在遗传分化,与巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪亲缘关系较近;巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪遗传均一性较高,可能与长期的人工选择有关。     

三种小型猪线粒体DNA控制区的比较研究

目的分析五指山小型猪、巴马小型猪和贵州香猪线粒体DNA控制区碱基序列,比较研究不同猪种的遗传标志。方法应用PCR技术分别对这三种小型猪的血液总DNA样品中线粒体DNA D-loop区进行扩增,测序比对。结果猪的线粒体DNA D-loop区分3个区域。Ⅰ区（靠近5′端区域）704 bp,五指山小型猪在此区共有6个变异位点,通过6个变异位点中归纳出3个单倍体,而巴马小型猪在此区有9个变异位点,通过9个变异位点归纳出4个单倍体,贵州香猪在此区共有6个变异位点,通过6个变异位点归纳出3个单倍体。     

西藏小型猪MSTN基因5''调控区的酶切多态性分析

目的对西藏小型猪MSTN基因进行PCR—RFLP基因多态性分析，并对五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪进行MSTN基因多态性的比较研究。方法以42头西藏小型猪、17头五指山小型猪、7头巴马小型猪和22头贵州香猪作为研究对象，对猪MSTN基因5’调控区进行了PCR—RFLP多态性研究。结果1、不同猪种之间的基因型频率和等位基因频率有显著性差异（P=0．000），西藏小型猪的MSTN基因表现出3种基因型TT（9．52％）、AA（61．90％）、TA（28．57％），T和A的频率分别为23．81％和76．19％；五指山小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（82．35％）、AA（17．65％），T和A的频率分别为82．35％和17．65％；贵州香猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（81、82％）、TA（18．18％），T和A的频率分别为90．91％和9．09％；巴马小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（71．43％）和TA（28.57％），T和A的频率为85．71％和14．29％。2、不同MSTN基因型的西藏小型猪的初生重（P=0．761）和离乳重（P=0．319）无显著性差异。结论西藏小型猪、五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪的MSTN基因5’调控区存在多态性，但暂不能把MSTN基因做为西藏小型猪繁殖性能的分子标记。     

KLF4在内毒素血症小鼠中的表达模式及其意义

目的对西藏小型猪MSTN基因进行PCR—RFLP基因多态性分析，并对五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪进行MSTN基因多态性的比较研究。方法以42头西藏小型猪、17头五指山小型猪、7头巴马小型猪和22头贵州香猪作为研究对象，对猪MSTN基因5’调控区进行了PCR—RFLP多态性研究。结果1、不同猪种之间的基因型频率和等位基因频率有显著性差异（P=0．000），西藏小型猪的MSTN基因表现出3种基因型TT（9．52％）、AA（61．90％）、TA（28．57％），T和A的频率分别为23．81％和76．19％；五指山小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（82．35％）、AA（17．65％），T和A的频率分别为82．35％和17．65％；贵州香猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（81、82％）、TA（18．18％），T和A的频率分别为90．91％和9．09％；巴马小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（71．43％）和TA（28.57％），T和A的频率为85．71％和14．29％。2、不同MSTN基因型的西藏小型猪的初生重（P=0．761）和离乳重（P=0．319）无显著性差异。结论西藏小型猪、五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪的MSTN基因5’调控区存在多态性，但暂不能把MSTN基因做为西藏小型猪繁殖性能的分子标记。     

广西巴马小型猪PGC-1α基因克隆与组织表达分析

目的 克隆广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区（CDS）序列，利用RT-PCR和QRT-PCR方法分析PGC-1α mRNA组织表达情况。方法 本实验以广西巴马小型猪背最长肌cDNA为模版，PCR扩增PGC-1α基因CDS序列，将其连接至pEASY-T5载体，转染细菌、验证和序列测定；通过RT-PCR半定量和QRT-PCR实时荧光定量检测PGC-1α基因在小型猪多个组织中的表达情况。 结果 克隆获得广西巴马小型猪PGC-1α基因CDS序列，全长2391bp，编码796个氨基酸，与参考序列的同源性为99.9%，两处碱基发生同义突变，分别C-A1105和G-A1524；PGC-1α基因在广西巴马小型猪心脏和肾脏中的表达丰度最高，其次是肝脏、皮下脂肪和背最长肌，而在胰腺中未检测到其表达。 结论 成功克隆了广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区序列并进行了多种组织表达分析，为后续研究PGC-1α在小型猪2型糖尿病发生过程中作用途径打下基础。     

我国特有三个小型猪品系PGC-1基因内含子8、9的多态性分析

目的分析我国特有的三个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪,过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同激活子1基因intron8-exon10序列单核苷酸多态性（SNPs）分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以三个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果在PGC-1基因intron8-exon10这段扩增序列上存在7个单核苷酸多态位点,分别为：1534C→G,1546G→A,1589位插入T,1648C→T,1 653位插入A,1 660位插入G或T,1 830G→A,这些多态位点均位于非编码区,其中,有三个位点发生了单碱基的插入。结论小型猪品种不同多态位点分布有很大差异。     

云南滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D-Loop的初步研究

目的研究封闭群滇南小耳猪与广西巴马小型猪线粒体DNA（mtDNA）的多态性,探索小型猪遗传监测的方法。方法用18种限制性内切酶对23头滇南小耳猪和21头广西巴马小型猪mtDNA D-loop的PCR产物进行RFLP分析。结果滇南小耳猪和广西巴马小型猪的mtDNA D—loop在品种内和品种间均表现出相同的酶切图谱,未见多态性。结论滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D—loop的遗传多样性贫乏,mtDNA PCR—RFLP技术在其遗传监测中不具应用价值。     

用Cy5-ddNTP结合修饰引物延伸测定人类3种SNP

目的：建立一种简便快速的分析方法检测人类基因中的单核苷酸多态性（SNP）。方法：在适当的dNTPs和CyS荧光染色标记的ddNTPs存在的情况下，利用修饰引物从SNP位点进行特异性碱基延伸，延伸产物通过芯片电泳来检测。修饰引物的3’端第三个碱基处人为导入一个错配碱基来改善引物延伸反应的开关特性。结果：测定了人类p53、CK20、CK30基因上3种SNP的可能形态（野生型、突变型和杂合型），所有样本在芯片电泳中100s左右被准确检测。结论：该方法简便易行，可用于快速检测已知的SNP。     

西藏小型猪线粒体DNA控制区变异类型及其血液指标比较研究

目的分析实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区碱基序列变异分化类型,比较血液生理生化指标的差异,为实验动物新品种的培育奠定分子遗传学基础。方法采集59头西藏小型猪血液,分别进行全基因组DNA提取、线粒体DNA控制区的扩增、测序并分类,同时进行血液生理生化指标的测定和比较研究。结果根据串联重复区重复片段的变化,西藏小型猪线粒体DNA控制区分为A、B两种类型,分别占57.6%和42.4%,几乎与5′端序列在305、500和691的3个主要转换位点的变化相对应。