纳米银体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究

【目的】 研究纳米银（silver nanoparticles,AgNPs）体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的作用,并初步分析其抗病毒作用机制,为PRRSV的防控提供新思路。【方法】 使用0.1875、0.375、0.75、1.5、3、6、12 μg/mL AgNPs处理Marc145细胞,采用CCK-8试剂盒评估AgNPs对Marc145细胞毒性,确定其安全浓度。通过显微观察、间接免疫荧光试验、病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs体外抗PRRSV感染Marc145细胞的效果。通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs对PRRSV的直接灭活效果。通过实时荧光定量RT-PCR方法分析AgNPs对不同感染复数（multiplicity of infection,MOI） PRRSV （0.0001~0.1）黏附和入侵Marc145细胞的影响,以及PRRSV感染Marc145细胞3、6、12、18和24 h后加入AgNPs对Marc145细胞增殖的影响。【结果】 AgNPs对Marc145细胞的最大安全浓度为1.5 μg/mL,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均具有良好的体外抗PRRSV活性,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均对PRRSV起一定灭活作用。AgNPs对不同MOI的毒株黏附和入侵Marc145细胞均有一定抑制作用,且不同时间（3、6、12、18、24 h）加入AgNPs对PRRSV增殖均有一定抑制作用。【结论】 AgNPs具有良好的体外抗PRRSV活性,体外抗PRRSV的作用机制包括直接灭活以及抑制病毒的黏附、入侵和增殖过程。     

7种药物体内外抗弓形虫效果分析

为了初步了解甘草酸、苦参碱、黄芩苷、硝唑尼特、巴龙霉素、磺胺嘧啶钠和磺胺氯吡嗪钠7种药物抗弓形虫的效果,进行体外、体内抗弓形虫试验。采用MTT法首先测定试验药物对培养巨噬细胞(Ana-1)的安全浓度,然后用弓形虫RH株的速殖子感染培养的上述细胞,加入药物继续培养48 h后观察药物体外抑制虫体在细胞内的增殖,以相对弓形虫抑制率为指标判断体外抗弓形虫效果。用弓形虫RH株速殖子按5×105/只腹腔接种昆明种小鼠,接种后4 h,药物治疗组通过饮水中给药,观察比较给药后感染弓形虫小鼠的精神状态,并记录各组小鼠死亡的时间和数目,每组随机抽选2只小鼠镜检腹腔虫体数量。体外试验结果表明,甘草酸、黄芩苷、磺胺嘧啶钠和磺胺氯吡嗪钠4种药物可显著抑制细胞内弓形虫增殖;体内试验表明,磺胺氯吡嗪钠治疗效果最佳,磺胺嘧啶钠次之,黄芩、苷草再次之,其余药物抗弓形虫作用不明显。     

甲磺酸瑞波西汀体外颉颃塞内卡病毒的研究

【目的】从含有127种化合物的FDA批准上市药物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)活性的化合物并研究其作用途径。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)结合荧光素酶高通量筛选技术，建立抗SVA化合物体外筛选平台。从FDA批准上市药物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的化合物，并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性，通过反映乳酸脱氢酶(LDH)释放水平的细胞毒性试验进而确定其最大无毒浓度。针对病毒感染周期的吸附、入胞、复制和组装释放等4个主要过程，采用不同的细胞处理方法和实时荧光定量RT-PCR、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)、蛋白免疫印迹(Western blotting)和病毒滴度测定(TCID₅₀)等技术进行化合物分子颉颃机制研究。【结果】从包含127种分子的FDA获批上市药物库中筛选出8种候选抗SVA活性分子，通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测，鉴定出1种安全、有效的化合物——甲磺酸瑞波西汀。在病毒感染细胞...     

鸡毒支原体烯醇化酶单克隆抗体研制及黏附阻断

通过对鸡毒支原体烯醇化酶的克隆和原核表达,利用表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体,以超声波裂解的MG全菌作为筛选抗原,结果获得了6株特异性单抗,分别命名为：1A4、2D7、2E4、2F4、384和3D8。经间接ELISA、免疫荧光试验及Western blot检测发现：1A4具有荧光效价和高滴度的ELISA效价,但无免疫印迹效价;而其他5株单抗,免疫印迹呈阳性,但无表面染色的活细胞免疫荧光。在所有6株单抗中,仅1A4单抗有MG细胞黏附抑制作用,可导致MG的黏附率降低34．40％,而且1A4与其他5种单抗混合后,则黏附率可下降57．69％。这些抗体的制备将为烯醇化酶生物学活性研究奠定基础。     

虫草素体外抗弓形虫的效果及其作用机制的探究

为探究虫草素抗弓形虫的效果及作用机制，本研究将不同浓度的虫草素与弓形虫RH株共同作用48 h后，采用CCK8法筛选对细胞安全的虫草素浓度。结果显示，以1μg/mL～200μg/mL (以对细胞的抑制率均为0判定)的虫草素为细胞的安全浓度。将巨噬细胞接种弓形虫RH-GFP株，同时分别加入1μg/mL～100μg/m L虫草素，根据弓形虫的荧光强度，计算虫草素对弓形虫的半数抑制浓度(IC₅₀)。结果显示，虫草素对弓形虫的IC₅₀为31.24μg/mL，且其对弓形虫的抑制作用与虫草素的浓度呈正相关。将巨噬细胞接种弓形虫RH株，同时加入100μg/mL虫草素，2 h后采用间接免疫荧光试验(IFA)检测并统计黏附与侵入细胞的弓形虫数量，分析虫草素对弓形虫黏附与侵入细胞的影响；24 h后采用吉姆萨染色后统计细胞感染率；收集上述各组细胞样品，一部分细胞采用q PCR检测细胞中弓形虫B1基因的转录水平，分析虫草素对弓形虫增殖的影响；一部分细胞采用IFA检测并统计每孔细胞100个空泡(PV)中的弓形虫速殖子的数量，分析虫草素对弓形虫复制水平的影响。结果显示，与...     

八角属植物的抗菌活性研究

为了研究八角属植物粗提物及从披针叶茴香中分离得到的5个单萜类化合物的抗菌活性,试验采用纸片法对八角属几种植物果实与叶子的35种粗提物进行抗菌活性研究,采用倍比稀释法对从披针叶茴香中分离得到的5个单萜类化合物进行抗菌活性筛选。结果表明:八角属几种植物粗提物对枯草芽孢杆菌都有不同程度的抑制作用,八角茴香果实和披针叶茴香果实的总提取物、乙酸乙酯部位和正丁醇部位、野八角果实和叶子及披针叶茴香叶子的乙酸乙酯部位对枯草芽孢杆菌显示了显著的抑制生长作用,其抑菌圈直径都在11.40 mm以上;所有的粗提物样品对大肠杆菌均无抑制作用。5个单萜类化合物对大肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌都有不同程度的抑制生长作用,MIC值均在2.00 mg/m L以下。说明八角属植物粗提物和5个单萜类化合物都具有一定的抗菌活性。     

抗弓形虫和新孢子虫药物体外筛选方法的研究进展

弓形虫和新孢子虫是2种在形态结构及生物学特征方面非常相似的细胞内寄生性原虫,二者引起的疾病对人和动物健康造成了严重危害。开发和筛选高效、低毒的抗弓形虫和新孢子虫药物一直是抗原虫药物研究领域的重要方向之一。药物筛选包括体外筛选和体内筛选,体外筛选的结果是进行体内筛选的依据和基础。对抗弓形虫和新孢子虫药物的体外筛选方法研究进展进行综述,以期为开发更加高效的抗弓形虫和新孢子虫药物体外筛选技术提供参考。     

亮甲酚蓝对猪卵母细胞体外成熟及核移植胚胎发育能力的影响

试验旨在研究亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)染色对卵母细胞体外成熟及后期胚胎发育潜力的影响。本研究利用13、26、39 、52 μmol/L BCB对成熟培养前的卵丘－卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complexes,COCs)染色90 min,比较各组卵母细胞的着色率、成熟率及孤雌激活胚胎和核移植胚胎的发育情况。结果表明,随着BCB浓度的增加,COCs着色率依次增加(20.00%、46.39%、51.66%和59.03%),但猪卵母细胞体外成熟率逐渐降低(74.03%、72.16%、70.53%和48.61%);不同浓度BCB染色后所得BCB⁺组卵的成熟率均明显高于BCB^-组。试验结果发现,BCB浓度在26 μmol/L时,经染色的COCs既有较高的着色率,且不影响其体外成熟的效率。基于此,研究选取26 μmol/L BCB作为最佳浓度对猪卵母细胞进行染色筛选,然后进行体外培养、孤雌激活及核移植试验。结果显示,筛选的BCB⁺组卵母细胞的孤雌胚和核移植胚的卵裂率和囊胚率均显著高于BCB^-组(P<0.05),而与对照组间无显著差异(P>0.05)。胚胎移植试验挑选BCB⁺组中发育较好的1-2细胞期重组胚对5头代孕母猪进行了移植,其中2头怀孕,1头顺利产下了6头健康胎儿。综合以上试验结果表明,利用BCB染色可作为一种有效的方法筛选体外成熟质量较高的猪卵母细胞,同时提高胚胎体外生产效率。     

弓形虫MIC10基因敲除株的构建及鉴定

为了解弓形虫MIC10基因特性,利用CRISPR/Cas9技术构建了弓形虫MIC10基因敲除虫株,通过乙胺嘧啶药物筛选、GFP绿色荧光观察及96孔板筛选阳性敲除虫株,并进行体外和小鼠体内PCR鉴定MIC10基因进一步确定单克隆敲除虫株。结果表明,加入乙胺嘧啶后MIC10基因敲除株能够正常生长,在荧光显微镜下观察敲除株呈现绿色荧光,在96孔板的单孔中筛选出唯一绿色荧光虫体;经体外和小鼠体内PCR鉴定MIC10基因,敲除虫株扩增出1 000 bp的外源片段,未扩增出MIC10基因片段,而在对照组RH虫株扩增出263 bp MIC10基因片段,未扩增出1 000 bp外源片段;说明本试验成功构建并筛选出MIC10基因敲除的单克隆虫株,暂命名为弓形虫KO-MIC10-RH。本试验为弓形虫MIC10基因敲除株的致病性研究奠定基础。     

固相微萃法对柚花、柠檬花和酸橙花植物学性状及挥发性成分分析比较

目的：分析比较在漳州地区栽培的琯溪蜜柚[Citrus grandis (L.) Osbeck. Cv. ‘Guanximiyou’]、柠檬[Citrus limon (L.) Burm. f.]和代代酸橙(Citrus aurantium L. cv. Daidai)花朵的植物学性状和挥发性成分。方法：采用五点采样法观测3种芸香科柑橘属植物花朵的植物学性状,运用顶空GC-MS技术分别进行挥发性成分测定,并对测定成分进行比较。结果：同等栽培条件下,柚花的个体最大且雌蕊粗壮凸出;柠檬花和酸橙花个体差异不大,但柠檬花为淡紫红色,花瓣数4;橙花为白色,花瓣数5。经GC-MS分析得知,柚花含21种挥发性成分,其中单萜类化合物占98.05%,倍半萜类化合物占0.20%,含量较多的为：β-蒎烯(43.74%)、桧烯(20.69%)、β-罗勒烯(12.78%)、芳樟醇(9.84%)及d-柠檬烯(9.15%);柠檬花含24种挥发性成分,其中单萜类化合物占87.47%,倍半萜类化合物占2.72%,二萜类化合物的含量占0.13%,含量较多的为：β-蒎烯(53.42%)、桉叶油醇(19.65%)、d-柠檬烯(7.55%)、芳樟醇(2.92%)及十七烷(2.78%);酸橙花含20种挥发性成分,其中单萜类化合物占96.27%,倍半萜类化合物占0.19%,含量较多的为：芳樟醇(41.16%)、d-柠檬烯(30.54%)、桧烯(15.19%)、3-蒈烯(3.84%)及β-蒎烯(2.76%)。结论：PCA主成分分析可知,三种柑橘属植物的花在植物学性状及挥发性成分方面均存在一定差异,为相关产业的发展提供一定的理论依据。     

弓形虫和新孢子虫交叉反应抗原MIC7A对小鼠的免疫保护效力分析

弓形虫和新孢子虫是两种亲缘关系接近的顶复亚门原虫，二者之间存在一定程度的交叉免疫保护作用，这种作用可能是基于交叉反应抗原产生的。本研究旨在表达并鉴定弓形虫和新孢子虫的交叉反应抗原TgMIC17A，通过将其应用于小鼠的免疫保护试验，评估该抗原对弓形虫和新孢子虫感染产生的交叉免疫保护作用。对TgMIC17A进行基因克隆和原核表达，通过免疫印迹试验鉴定其反应原性和交叉反应性。重组蛋白免疫小鼠后测定血清特异性IgG抗体水平，评价其免疫原性。二免后，分别用1×10³个弓形虫Pru速殖子、1.5×10⁷个新孢子虫Nc1速殖子攻虫，对小鼠的体重变化、存活率进行监测，并在攻虫30 d后检测各组存活小鼠的脑荷虫量，评价TgMIC17A重组蛋白免疫小鼠后对弓形虫和新孢子虫的交叉免疫保护效果。结果显示，rTgMIC17A可以被弓形虫和新孢子虫的阳性血清识别，相较于未免疫组小鼠，免疫组小鼠体内可产生高水平特异性IgG抗体(P＜0.01)，且感染弓形虫或新孢子虫的脑荷虫量均显著降低(P＜0.01)。本研究克隆并表达了TgMIC17A，鉴定其为新孢子虫和弓形虫的交叉反应抗原。该抗原可以刺激小鼠产生较好的体液免疫反应，并对弓形虫和新孢子虫的感染产生一定的交叉免疫保护作用，可以为弓形虫和新孢子虫共感染的防治，以及筛选具有交叉免疫保护力的重组疫苗提供可借鉴的研究资料。     

Antibody responses to Toxoplasma gondii antigens in aqueous and cerebrospinal fluids of cats infected with T. gondii and FIV.

Antibodies to antigens of Toxoplasma gondii were measured in the aqueous and cerebrospinal fluid (CSF) of 16 specific-pathogen free kittens experimentally infected with feline immunodeficiency virus (FIV), T. gondii, or both pathogens. The results indicated that all cats infected with T. gondii had antibody responses to antigens of T. gondii in both aqueous fluids and CSF. Co-infection with FIV did not affect antibody levels. Aqueous fluids from eyes of cats with toxoplasmic retinochoroiditis did not necessarily have higher antibody levels than those from eyes without lesions. Antibodies to T. gondii were also detected in the CSF of two cats from whose brains no parasites were isolated by in vivo mouse inoculation. Total IgG did not increase significantly in the aqueous fluids and CSF of cats infected with T. gondii whether or not they were also infected with FIV.     

Cloning and Sequence Analysis of Toxoplasma gondii GRA25 Gene

In this study,sequence variation of GRA25 genes among 22 Toxoplasma gondii (T.gondii) strains from different hosts and geographical locations were examined.The complete GRA25 genes from 22 T.gondii isolates were amplified,sequenced,and nucleotide variations were determined.Phylogenetic analysis among the different T.gondii isolates were conducted using maximum parsimony (MP) and maximum likelihood (ML) methods.The biological characteristics of the protein GRA25 of the T.gondii RH strain were predicted using bioinformatics software.The sequences of all the examined T.gondii strains were 939 or 948 bp in length.Sequence comparison of all 22 GRA25 sequences identified 82 variable nucleotide positions (0 to 4.4%).The results of phylogenetic analysis showed that strains belonging to the classical typeⅠand Ⅱ could not group into their own branches based on the GRA25 sequences.Bioinformatics analysis revealed that the protein GRA25 contained 7 hydrophobicity regions,10 alpha regions,3 beta sheets,8 random coils and 8 linear B-cell epitopes.These results suggested that the GRA25 gene was not an ideal genetic marker for population genetic study of T.gondii strains,but it might represent a good vaccine candidate against toxoplasmosis.     

刚地弓形虫GRA25基因的克隆及序列分析

本研究旨在对来源于不同宿主和地理分布的22株弓形虫的GRA25基因进行PCR扩增并测序,对获得的GRA25基因序列进行比对,利用MP和ML两种方法对不同分离株的GRA25基因构建系统进化树。利用生物信息学软件将弓形虫RH株的GRA25基因翻译成氨基酸序列,对其编码蛋白的生物学特征进行分析。结果显示,弓形虫GRA25基因序列有2种长度,分别为939和948 bp。序列比对结果显示,GRA25基因在不同虫株间有82个核苷酸变异位点,变异率为0~4.4%。进化分析结果显示,用GRA25基因不能区分弓形虫基因Ⅰ型和Ⅱ型虫株。生物信息学分析预测弓形虫GRA25蛋白含有7个亲水区域,10个α-螺旋,3个β-折叠,8个无规则卷曲和8个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。本研究结果表明,GRA25基因不能作为标记分子区分不同基因型的弓形虫虫株,但可能作为疫苗候选分子研制新型抗弓形虫基因疫苗或表位肽疫苗。     

洱源、怒江猫源弓形虫虫株的分离与鉴定

为了分离猫源弓形虫,本试验从云南洱源、怒江两地区捕捉18只野猫,取其心脏、肝脏、肺脏、脑组织用盐酸—胃蛋白酶溶液消化处理后,腹腔接种小白鼠,将分离到的弓形虫虫株至少传3代,用特异PCR方法对所分离的虫株进行鉴定。结果表明,从18只野猫的样品中分离出3株弓形虫虫株,用特异性引物对3株虫株进行PCR鉴定,均得到弓形虫的特异性目的条带,测序结果表明所扩增出的DNA片段确为弓形虫核糖体B1基因部分序列。同源性比对分析结果显示分离株与T.gondii B1的同源性为100.0%。将动物组织用盐酸—胃蛋白酶溶液消化处理后腹腔接种小白鼠是一种分离弓形虫虫株较理想的方法,对弓形虫B1基因进行特异性扩增,可以快速地鉴定弓形虫虫株。     

Isolation and Identification of Toxoplasma gondii Isolates from Cats in Eryuan and Nujiang

The assay was aimed to isolate Toxoplasma gondii (T.gondii) strains from stray cat in Eryuan and Nujiang of Yunnan province.The cat tissues (heart,liver,lung and brain) were digested by acid pepsin solution,intraperitoneally inoculated in Kunming mice,passaged at least 3 generations,and followed by specific PCR amplification of partial B1 gene using species-specific primers.Three T.gondii isolates were isolated from 18 stray cats,PCR result showed that we got the specific target band,and the sequence result of the specific PCR product showed that it was ribosome B1 gene sequence of T.gondii. Homology comparison analysis showed that the isolates was 100.0% homology with T.gondii B1.The method of inoculation into the mice with the tissues that was digested by acid pepsin solution was an effective way to isolate T.gondii strain from animals,and the specific PCR assay was an accurate method for the rapid identification of T.gondii.     

禽源烟曲霉菌和黄曲霉菌的分离鉴定及几种中药抑菌作用研究

[目的] 对保定市临床真菌感染病鸭进行菌株分离鉴定，并筛选分离菌株的体外抑菌药物。[方法] 通过形态学观察、PCR扩增、测序及动物回归试验对菌株进行鉴定，并采用微量稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）及体外药敏试验统计菌落数量和直径来探究石菖蒲、黄柏、决明子、苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英对烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus）和黄曲霉菌（Aspergillus flavus）的体外抑菌活性。[结果] 成功分离到烟曲霉菌和黄曲霉菌。动物回归试验结果显示，雏鸡出现与病鸭相似的症状，剖检可见肝脏长出灰白色结节，且病变组织出现肉芽肿病变，说明2种病原菌均可使雏鸡感染。烟曲霉菌MIC₈₀结果显示，石菖蒲、黄柏、决明子和苦参MIC₈₀分别为8、16、32和64 μg/μL，辣蓼、白头翁和蒲公英均为128 μg/μL；黄曲霉菌的MIC₈₀结果显示，石菖蒲、决明子和黄柏MIC₈₀分别为8、16和32 μg/μL，苦参和辣蓼均为64 μg/μL，白头翁和蒲公英均为128 μg/μL。体外药敏试验结果显示，在石菖蒲浓度为16 μg/μL时培养基长出烟曲霉菌和黄曲霉菌菌落，在决明子浓度为32 μg/μL时培养基长出黄曲霉菌菌落，黄柏浓度为32 μg/μL时培养基中长出烟曲霉菌菌落，而在苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英浓度128 μg/μL培养基中就已长出直径较大的烟曲霉菌和黄曲霉菌菌落。[结论] 石菖蒲、黄柏和决明子对烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长具有显著的抑制作用，其中石菖蒲的抑制作用最为显著。本试验可为抗家禽曲霉病的中药研发提供新的思路。     

弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能研究进展

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种重要的人兽共患寄生原虫，具有中间宿主广泛、生活史复杂、传播方式多样、呈全球性分布等特点，可感染几乎所有的恒温动物，导致人兽共患的弓形虫病。弓形虫慢性感染约1/3的世界人口，对免疫缺陷患者、孕妇、孕畜的健康更是造成严重威胁。致密颗粒蛋白是由致密颗粒（弓形虫的一种亚细胞分泌器官）分泌的蛋白质，它们可通过操控宿主（细胞）基因表达、信号通路进而调控宿主细胞的免疫反应和细胞周期，并在蛋白质的转运和定位、营养物质的摄取、纳米管网络（IVN）的形成与稳定性的维持、逸出、慢性感染等生理过程中发挥重要作用。本文综述弓形虫致密颗粒蛋白基本生物学功能的最新研究进展，旨在为深入研究弓形虫的致病机制、鉴定新的抗弓形虫潜在药物靶点和疫苗候选分子提供借鉴。     

弓形虫蛋白质翻译后修饰研究进展

弓形虫是一种复杂的单细胞原生动物寄生虫,通过入侵宿主细胞、分裂和诱导宿主细胞破裂等一系列的过程,在温血动物体内进行增殖。弓形虫的生物学特征受基因组、表观遗传及转录等多种因素的调控。蛋白质翻译后修饰（protein post-translational modifications,PTMs）,如磷酸化、泛素化、巴豆酰化、棕榈酰化、琥珀酰化、乙酰化、甲基化、糖基化和二羟基异丁酰化等,是弓形虫调节对细胞外刺激的反应和生命周期转变的主要机制之一。弓形虫蛋白质翻译后修饰通过改变靶蛋白的定位、结构、活性、蛋白质-蛋白质相互作用等增加蛋白质的复杂性和多样性,从而在虫体生命周期的任何时间点都可以发挥至关重要的作用。在这篇综述中,作者重点对弓形虫蛋白质翻译后修饰进行简要总结,以期为深入研究弓形虫的生物学特征奠定基础。     

Effects of Resveratrol on in vitro Fertilization of Sheep Oocytes

The purpose of this study was to investigate the effects of resveratrol (RES) at different concentrations (0,0.5,2.0,5.0 μmol/L) on in vitro fertilization (IVF) and antioxidant capacity of ovine oocytes and the secretion of steroid hormones by cumulus cells.Sheep oocytes were fertilized in vitro after maturated in different concentrations of RES for 24 h,and the in vitro maturation (IVM) medium was collected for detecting the enzyme activity of superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase (GSH-Px) and the content of monochrome display adapter (MDA).The ELISA method was used to detect the concentration of estradiol (E₂) and progesterone (P₄).The results showed that when compared to the control group,adding 0.5 μmol/L RES to the IVM medium significantly increased the cleavage rate (P<0.05),but had no significant effect on the fertilization rate and blastocyst rate (P>0.05);5.0 μmol/L RES significantly reduced the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05),which had an inhibitory effect on embryonic development.Adding 0.5 μmol/L RES to IVM and IVC (in vitro culture,IVC) medium significantly increased the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05).Compared to the control group,the addition of RES to IVM solution had a certain inhibitory effect on the secretion of E₂ by cumulus cells,5.0 μmol/L RES significantly reduced E₂ concentration (P<0.05);0.5 μmol/L RES significantly increased the P₄ secretion of cumulus cells (P<0.05).0.5 and 2.0 μmol/L RES increased the activity of SOD,GSH-Px and other enzymes,but there was no significant difference when compared with the control group (P>0.05),but significantly reduced MDA content (P<0.05),while 5.0 μmol/L RES significantly reduced the activity of antioxidant enzymes and increased the content of MDA (P>0.05).In conclusion,0.5 μmol/L RES simultaneously added to IVM and IVC medium could enhance the antioxidant capacity of oocytes and concentration of P₄,and reduced the content of MDA,thus improved the cleavage rate and blastocyst rate.