多发性骨髓瘤患者HHV-8的检测

目的：研究黑龙江地区多发性骨髓瘤(MM)患者人类疱疹病毒8(HHV—8)感染情况。方法：用筑巢式PCR技术检测了16例MM患者HHV—8感染情况，每批实验均设阳性质粒对照及无模板阴性对照；同时检测了10例急性白血病(AL)患者及26例正常人。结果：MM组、AL组及健康对照组筑巢式PCR反应均为阴性。结论：推测黑龙江地区MM患者不存在HHV—8感染。     

骨髓活检与涂片同步观察对诊断多发性骨髓瘤的探讨

目的探讨骨髓活检和骨髓涂片同步观察在多发性骨髓瘤（MM）诊断临床意义。方法对24例MM患者，采用骨髓抽吸活检双标本一步法取材，同时观察其骨髓涂片和活检塑料包埋切片。结果骨髓造血组织增生度在2＋以上者，切片为91．67％，而涂片为58．33％，3＋以上切片占41．67％，涂片16．67％，两者差异存在显著性意义（P〈0．05）。骨髓涂片和切片相结合有助于MM的诊断和分型。结论诊断多发性骨髓瘤的同步观察比常规涂片形态学观察的检出率明显增高。     

献血者EBV、HHV-6和HHV-7 DNA检测对输血意义

目的 了解青岛地区献血者单个核细胞（PBMC）和唾液标本中EB病毒（EBV）、人疱疹病毒6型（HHV6）和人疱疹病毒7型（HHV-7）的感染情况。方法采用PCR-Southern blotting检On,4109名健康无偿献血者外周血PBMC和唾液标本中EBVDNA,巢式PCR技术检测HHV-6和HHV7DNA,限制性酶切分析分别对HHV6、HHV-7进行分型和鉴定。结果109名献血者外周血PBMC中EBVDNA检出率为21．10％（23／109）,HHV-6DNA检出率为50．46％（55／109）,HHV-7DNA检出率为57．80％（63／109）。唾液标本中EBV、HHV-6和HHv7DNA检出率分别为24．77％（27／109）、66．06％（72／109）和90．83％（99／109）。PBMC中EBV、HHV-6和HHV-7均阳性者7例,占6．4％;唾液标本中均阳性者17例,占15．6％。酶切分析结果显示,55例献血者外周血PBMCHHV-6阳性标本中HHV-6A型占18．2％（10／55）,HHV -6B型占81．8％（45／55）;72例唾液HHV-6阳性标本中HHV6A型占16．7％（12／72）,HH~6B型为83．3％（60／72）。结论外周血PBMC和口咽部上皮细胞是EBV、HHv6和HHV-7潜伏的重要部位,献血员中存在上述病毒的共感染。     

Survivin在多发性骨髓瘤中的表达及其与VEGF的相关性研究

目的观察Survivin在多发性骨髓瘤中的表达及其与VEGF的相关性。方法选择2011年1月～2012年6月在我院就诊的MM患者40例,所有患者均符合张之南主编的《血液病诊断和疗效标准》（1998年）中提出的MM诊断标准及疗效标准。采用免疫组化S—P法检测多发性骨髓瘤患者Survivin、VEGF的表达以及二者间的相关性。结果Survivin在MM患者骨髓组织中的阳性率达72．5％（29／40）,VEGF在MM患者骨髓组织中的阳性率达65．0％（26／40）。Survivin、VEGF在MM患者骨髓组织中的表达与治疗情况及肿瘤分期关系密切,差异存在显著性（P〈0．05）。Sun,ivin与VEGF在MM患者骨髓组织中共同阳性表达例数为23例,共同阴性例数8例,MM患者骨髓组织中Survivin和VEGF表达呈正相关（r=0．562,P〈0．05）。结论Survivin和VEGF均参与了MM的发生、发展过程．且与疾病的进展关系密切,Survivin和VEGF存在协同关系,值得临床予以关注。     

多发性骨髓瘤CD38及CD56表达的研究

目的研究CD38及CD56在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）细胞上的表达。方法采用三色免疫荧光直接标记法及多参数流式细胞术分析13例多发性骨髓瘤的免疫表型。结果13例MM标本的CD38均为强阳性；70％（9／13）骨髓瘤标本CD56和CD38双阳性。结论CD38及CD56有助于对MM的诊断，并且为MM亚型的分类提供重要的依据。     

多发性骨髓瘤中细胞因子信号转导抑制因子1（SOCS1）基因异常甲基化的研

［摘要］目的　研究多发性骨髓瘤（MM）患者的SOCS1基因甲基化状态及其mRNA表达情况．方法　收集2009年1月至2011年6月在昆明医科大学第一附属医院和第二附属医院就诊的54例MM患者骨髓标本,采用甲基化特异性PCR法研究SOCS1基因启动子区甲基化情况;利用自动测序技术对扩增产物测序分析其碱基甲基化位点;运用荧光实时定量反转录PCR检测其mRNA表达水平．结果　54例多发性骨髓瘤患者中,存在SOCS1基因启动子区甲基化,与对照组比较具差异有统计学意义（P＜0.05）;测序结果也证实甲基化的存在; mRNA表达与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）．结论　SOCS1异常甲基化在MM的发病机制中具有一定作用,但其表达可能受到标本数量、临床治疗方案和其他免疫相关细胞因子等多因素影响     

FLT3基因在各种血液肿瘤患者中的表达及其临床意义

目的 为进一步研究各种类型血液肿瘤患者FLT3基因的表达情况。方法 采用多聚酶链反应（PCR）方法检测103例初治AML、76例急性淋巴细胞白血病（ALL）、53例慢性粒细胞白血病（CML）慢性期、31例CML急变期、11例慢性淋巴细胞白血病（CLL）、36骨髓增生异常综合征（MDS）患者、9例多发性骨髓瘤（MM）及13例伴有骨髓侵犯非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者FLT3基因表达情况。结果 FLT3基因在各种血液肿瘤表达为AML患者90．3％（93／103）、ALL患者60．5％（46／76）、CML慢性期患者5．7％（3／53）、CML急变期患者61．3％（19／31）、CLL患者9．1％（1／11）、MDS患者25．0％（9／36）。9例MM和7例伴有骨髓浸润NHL患者均未发现FLT3基因表达。AML患者FLT3基因检测阳性率显著高于其他类型白血病患者，CML急变期患者FLT3基因检测阳性率显著高于慢性期患者，ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于CLL患者。结论 各种类型白血病均可出现FLT3基因的表达，但表达率不同，以AML最高，而CLL和CML慢性期最低，FLT3基因在急性髓系白血病恶性克隆的增殖和维持中起重要作用。     

Bcl-2结合抗凋亡基因1的表达与多发性骨髓瘤的相关性

目的:观察蛋白和核酸水平Bcl-2结合抗凋亡基因1(Bcl-2-Associated Athanogene1,BAG-1)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的表达,探讨BAG-1在多发性骨髓瘤发病机制中的作用及其临床意义,为多发性骨髓瘤的治疗寻找相关的理论依据。方法:选取皖南医学院附属弋矶山医院2006年10月~2008年10月初诊MM患者骨髓活检标本28例用于BAG-1免疫组化检测;同时抽取上述患者骨髓液提取单个核细胞,用于BAG-1mRNA RT-PCR检测。结果:初诊多发性骨髓瘤患者的BAG-1蛋白表达水平率为64.29%,和对照组相比增高明显(P=0.008)。同样在核酸水平,BAG-1mRNA在初诊骨髓瘤患者表达率为71.4%,高于对照组(P=0.007)。BAG-1高表达的MM肿瘤负荷高、与多项临床指标有关。结论:BAG-1蛋白及BAG-1基因在多发性骨髓瘤患者中高表达,与对照组相比有显著性差异,与临床多项指标有关,经分析可能参与多发性骨髓瘤的发生,BAG-1蛋白及其基因高表达可能提示患者不良预后。     

骨髓活检病理检查在多发性骨髓瘤诊断中的应用价值

目的:探讨骨髓活检在多发性骨髓瘤(MM)诊断与治疗中的价值。方法:采用骨髓抽吸-活检双标本取材法,获取骨髓活检及涂片标本,分析153例初诊MM患者的骨髓活检与涂片,对骨髓增生度、骨髓瘤细胞浸润度及浆细胞增殖模式、骨髓瘤细胞形态进行比较研究。结果:骨髓活检的增生度以及其对MM诊断的敏感性明显高于骨髓涂片,两者比较差异有统计学意义;骨髓活检骨髓瘤细胞浸润度高于骨髓涂片,两者比较差异具有统计学意义;骨髓活检中浆细胞增殖模式以间质型、结节间质型较多见,骨髓涂片中骨髓瘤细胞形态以幼稚浆细胞型为主。结论:骨髓活检能准确地反映浆细胞增殖模式,能较涂片更好地反映骨髓增生度及骨髓瘤细胞浸润度,对MM诊断的敏感性较骨髓涂片高;而骨髓涂片浆细胞形态清晰、特征典型,容易辨认。骨髓活检病理检查结合与骨髓涂片能够提高MM诊断的敏感性及准确率,对MM的早期诊断、治疗具有重要价值。     

应用PCR检测石蜡包埋骨髓活检标本B淋巴细胞克隆性增生

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测慢性Ｂ细胞性白血病、多发性骨髓瘤及Ｂ细胞恶性淋巴瘤骨髓浸润的石蜡包埋骨髓活检标本克隆性免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排共１９例，其中１６例检测出ｌｇ基因单克隆性重排，总阳性率为８４％。非肿瘤大致正常骨髓标本和急性粒细胞白血病骨髓标本则出现多克隆性弥漫带或无扩增产物。以上结果表明：石蜡包埋骨髓活检标本来源的ＤＮＡ可用于ＰＣＲ检测单克隆性ＩｇＨ基因重排。     

Nested real-time quantitative polymerase chain reaction assay

Background  Successful treatment of hepatitis B can be achieved only if the template for hepatitis B virus (HBV) DNA replication, the covalently closed circular HBV DNA (cccDNA) can be completely cleared. To date, detecting cccDNA remains clinically challenging. The purpose of this study was to develop a nested real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) assay for detecting HBV cccDNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and bone marrow mononuclear cells (MMNCs).

Methods  Based on the structural differences between HBV cccDNA and HBV relaxed circular DNA (rcDNA), two pairs of primers were synthesized as well as a downstream TaqMan probe. Blood and bone marrow samples were collected from hepatitis B patients and healthy controls. To remove rcDNA, samples were incubated with mung bean nuclease and the resultant purified HBV cccDNA was then amplified by nested real-time fluorescence quantitative PCR. The cccDNA levels were calculated using a positive standard.

Results  The nested real-time fluorescence quantitative PCR method for HBV cccDNA was successful, with a linear range of 3.0×10² copies/ml to 3.9×l0⁸ copies/ml. Of the 25 PBMC samples and 7 MMNC samples obtained from chronic hepatitis B or liver cirrhosis patients, 3 MMNC samples and 9 PBMC samples were positive for HBV cccDNA, while all of the 21 PBMC samples from healthy controls were negative.

Conclusion  The nested real-time fluorescence quantitative PCR may be used as an important tool for detecting cccDNA in hepatitis B patients.

     

儿童细小病毒B19感染的诊断方法

目的：评价巢式PCR，ELISA，间接免疫荧光法(IIF)诊断B19感染的价值．方法：用ELISA及巢式PCR对129例小儿血液病和结缔组织病患血清进行B19-IgM，DNA检测；用IIF及巢式PCR对50例血液病患骨髓进行B19抗原及DNA检测．结果：病例组129例，血清B19-DNA阳性41例，阳性率31．8％；IgM阳性28例，阳性率21．7％；B19-DNA及IgM同时阳性26例，仅IgM阳性2例，B19感染率为33．3％．对照组50例，B19-DNA阳性率2％，IgM阳性率0％，B19感染率为2％．血液病患50例骨髓B19-DNA阳性17例，阳性率34％；抗原阳性8例，阳性率16％．与巢式PCR相比，ELISA法的灵敏度为63．4％，特异度为97．7％，符合率为86．8％，阳性预告值为( PV)为92．8％，阴性预告值(-PV)为85．1％；IIF法的灵敏度为47．0％，特异度为100％，符合率为82．0％， PV为100％，-PV为78．6％．结论：ELISA及IIF敏感性低于巢式PCR，诊断B19感染时最好同时检测B19-DNA和IgM或抗原．     

用PCR技术对多发性骨髓瘤免疫球蛋白重链基因重排的研究

用ＰＣＲ技术检测了２１例多发性骨髓瘤（ＭＭ）病人外周血或骨髓涂片免疫球蛋白重链基因重排，发现１７例阳性，４例阴性，其中２例为轻链型。外周血免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排的检出率与骨髓涂片的结果基本一致，表明ＩｇＨ基因重排为诊断ＭＭ的最敏感方法之一，可弥补形态学、血清学诊断之不足。     

Diagnosis of bone marrow metastases in children with solid tumors and lymphomas. Aspiration, or unilateral or bilateral biopsy?

BACKGROUND: Malignancies are among the most common causes of death in children. The present study was undertaken to evaluate and compare bone marrow aspiration and unilateral biopsy to detect bone marrow metastases in pediatric patients, using bilateral biopsy as the gold standard. METHODS: During a 6-month period, 63 consecutive newly diagnosed children with confirmed malignant diseases other than leukemia were evaluated for bone marrow metastases or infiltration. Biopsies were obtained from both right and left posterior iliac crests whereas aspiration was performed only at the right crest. Interpretation to the right-side biopsy was considered as the unilateral biopsy result, whereas the bilateral biopsy result was as follows: positively was accepted if one or both of the two-side samples were qualified as positive, while a negative result was considered only if both sides were negative. The bilateral biopsy was considered the gold standard, and sensitivity, specificity, positive and negative predictive value, and false positive and negative rates were computed for the unilateral biopsy and aspiration procedure. RESULTS: We identified bone marrow metastases in 11 (17.5%) patients. The sensitivity was the only significant difference (p <0.05) observed between unilateral biopsy and aspiration. Finally, of the 63 patients, unilateral biopsy was reported as inadequate in one patient (1.6%), while aspiration was inadequate in two (3.2%). CONCLUSION: Unilateral biopsy was better than bone marrow aspiration. However, because bilateral biopsy is the gold standard, we recommend using this and bone marrow aspiration simultaneously to evaluate a pediatric patient with any malignancy potentially infiltrating bone marrow.     

HHV6和HHV7感染与类风湿性关节炎的相关性

目的 探讨人疱疹病毒6型（HHV6）和7型（HHV7）感染在类风湿性关节炎（RA）病因学中作用。方法 用巢式PCR技术，检测62例类风湿性关节炎病人和138例健康献血员外周血单个核细胞（PBMCs）和血浆中HHV6和HHV7DNA。结果 类风湿性关节炎病人组PBMCs中HHV6和HHV7DNA阳性率与正常对照组比较均无显著性差异（P〉0．05）；部分类风湿性关节炎病人血浆中可检出HHV6和HHV7DNA，而对照组血浆中则为阴性。结论 类风湿性关节炎病人中可能存在HHV6或HHV7的活动性感染，与类风湿性关节炎的发生发展有一定关系。     

侵袭性淋巴瘤骨髓侵润MRI与病理活检的比较观察

目的 利用MRI进行骨髓浸润分析与骨髓活检的对比研究.方法 对已经诊断为侵袭性淋巴瘤的患者进行骨髓活检和MRI评估,两名放射科医生及一名病理科医生独立分析检查结果,当骨髓活检呈阳性或MRI检查出现阳性表现时认为骨髓受浸润.结果 临床确诊淋巴瘤患者48例,其中39例患者进行了MRI检查和病理学检查,MRI检查显示其中11例患者骨髓受浸润：其中3例患者髂棘病理活检呈阳性,为大B细胞淋巴瘤浸润;另8例患者髂棘骨髓活检为阴性,但此8例患者MRI检查均发现髂棘以外的病变,其中1例骨髓活检显示为小细胞型淋巴瘤.对所有病例进行针对淋巴瘤治疗后,病理活检和MRI检查均显示病变有好转.结论 无创性MRI形态学检查对评价侵袭性淋巴瘤比骨髓活检更有优势.     

18F-FDG PET/CT在诊断多发性骨髓瘤中的临床应用

目的分析多发性骨髓瘤的PET/CT表现,探讨其在诊断多发性骨髓瘤中的作用。方法 19例经骨髓穿刺活检证实为多发性骨髓瘤患者,均行全身PET/CT检查,分析影像形态、功能代谢的特点,并测量平均标准摄取值(SUVmean)。结果 19例患者均表现为全身多发骨病变。CT共检出病灶221处(占全部骨骼病变的85.3%),表现为穿凿样、皂泡样溶骨改变,以中轴骨受累为主,一般位于骨髓腔内,较少形成软组织肿块及髓外侵犯。PET检查198处阳性病灶(76.4%),表现为全身多灶性18F-FDG摄取增高,SUVmean为3.1±1.4(范围1.3-7.4)。PET所示病灶大部分与CT匹配,少数病灶不匹配。PET/CT表现出一定特征,大致可分为:①部分病例中CT表现为多发骨质破坏,而PET累及的不均匀性代谢增高区与之不完全相符。②部分病灶CT未见明确骨质破坏,PET表现为代谢异常增高。③少数病灶CT示骨质破坏并局部软组织肿块形成时,PET显示代谢显著增高,且与CT基本相当。本组有2例常规骨穿阴性的患者在PET/CT引导下活检确诊为多发性骨髓瘤。结论 PET/CT对多发性骨髓瘤诊断具有重要价值,其引导下穿刺活检有利于提高诊断的灵敏度,尤其在常规骨穿假阴性病例中。     

骨髓活检及涂片对多发性骨髓瘤的诊断价值的比较

目的探讨骨髓涂片及活检对多发性骨髓瘤（MM）的诊断价值。方法同步观察302例MM患者骨髓涂片和活检塑料包埋切片。观察骨髓增生程度、浆细胞形态、增殖模式及浸润程度、网硬蛋白积分。结果MM患者骨髓造血组织在骨髓活检中观察到的增生程度明显高于骨髓涂片,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。99例患者（32.7%）骨髓瘤负荷处于Ⅰ期,140例（46.4%）处于Ⅱ期,63例（20.9%）处于Ⅲ期。骨髓切片中浆细胞以簇片-间质型、结节-间质型、结节型及塞实型为主,以结节状浆细胞瘤出现为阳性诊断标准,其敏感性273例（90.4%）明显高于涂片中浆细胞〉15%的指标（70.5%）。136例（45.0%）显示骨髓涂片与活检切片内浆细胞的浸润度相符,109例（36.1%）患者的骨髓涂片浆细胞浸润度较活检低,57例（18.9%）患者的骨髓涂片浆细胞浸润度较活检高。骨髓涂片中双核、多核及火焰型浆细胞,以及浆细胞胞浆中出现Auer氏小体、鲁氏小体对诊断MM有重要的参考价值。结论 骨髓活检能准确反映骨髓组织的增生程度、浆细胞浸润情况及增殖模式、纤维增生程度,对MM的诊断及鉴别诊断有较高价值;骨髓涂片典型的浆细胞形态对确诊MM有重要作用,骨髓涂片结合骨髓活检能提高MM诊断的准确率,减少误诊。