不同工艺提取的龙血竭中龙血素A、B的含量的测定

目的：测定不同提取工艺提取的龙血竭中龙素A和龙血素B的含量。方法：采用HPLC法，以C18反相键合硅胶为固定相，乙腈－1％冰醋酸（34：66）为流动相，检测波长为280nm，用外标法定量。结果：龙血素A在98－490ng范围有良好线性关系，r=0.9996，方法平均回收率为97.45%，RSD为1.82%。龙血素B在43.2-259.2ng范围有良好线性关系，r=0.9993，方法平均回收率为96.92%，RSD为1.57%。免加热工艺提取的龙血竭中龙血素A和龙血素B含量匀高于传统工艺提取的血竭，结论：免加热工艺为一种独创的、提取率高的新技术，具有推广价值。     

两种不同提取工艺制备龙血竭的比较

目的：把碱提工艺制备的龙血竭与现行醇提工艺制备的龙血竭进行比较。方法：把碱提龙血竭(前者)和醇提龙血竭(后者)在薄层色谱、紫外光谱、龙血素B含量等方面进行比较。结果：前者的外观颜色与后者有显著差异；前者的得率比后者的高，但龙血素B含量比后者低；药材、前者和后者的薄层色谱和紫外光谱基本一致，但前者紫檀芪、龙血素B、剑叶龙血素A、B的含量比后者的低。结论：碱提工艺制备的龙血竭与醇提工艺制备的龙血竭相比，在外观和内在质量上、均存在较大的差距，如要替代醇提工艺．尚有待进一步改进。     

剑叶龙血树根、茎、叶中血竭成分分析

目的通过对比剑叶龙血树根、茎、叶成分与龙血竭成分间的异同及对剑叶龙血树根、茎、叶中龙血素A、B的测定,寻找龙血竭原料的可能来源。方法薄层色谱法及高效液相色谱技术。结果剑叶龙血树根、茎、叶中均含有微量的龙血素A,分别为:58、53、15μg/g;叶中还含有微量的龙血素B,为2μg/g,而根、茎样品中未能检测到龙血素B。结论从色谱峰的积分面积及保留时间来看,剑叶龙血树根、茎、叶成分与血竭原料有少许的相关性,但差异显著;根、茎、叶3者间的化学组成成分也存在着显著差异,剑叶龙血树根、茎、叶中龙血素量都较低,不能直接用作生产血竭的原料。     

生肌化瘀膏质量标准研究

目的:建立生肌化瘀膏(龙血竭、大黄、当归、等)的质量标准。方法:采用TLC法对处方中龙血竭、大黄和当归进行定性鉴别,采用HPLC法测定制剂中龙血素A和龙血素B的含量。结果:TLC能特异性地鉴别龙血竭、大黄和当归。龙血素A进样量在3.65~365μg/mL范围内,线性关系良好,回归系数r=0.999 9(n=7),平均回收率为100.3%,RSD为1.33%(n=6);龙血素B进样量在3.62~362μg/mL范围内,线性关系良好,回归系数r=0.999 9(n=7),平均回收率为99.1%,RSD为1.50%(n=6)。结论:该法专属性强,简便,准确,可作为控制生肌化瘀膏质量的方法。     

龙血竭胶囊中龙血素B的含量测定及比较

目的用HPLC法测定龙血竭胶囊中龙血素B的含量,简化前处理,并对市售不同品牌的龙血竭胶囊中龙血素B的含量进行比较。方法选用色谱柱Eclipse XDB-C18(5μm,4.6 mm×150 mm,Agilent),乙腈-0.4%磷酸溶液(35∶65)为流动相,流速为1 ml/min,柱温30℃,检测波长275 nm。结果龙血素B在6.2~31.5μg/ml范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 99,n=5),龙血素B的加样回收率99.66%(RSD=1.48%)。结论该方法简便,准确,可靠,便于日常生产时制剂的含量控制,且市售中不同品牌的龙血竭胶囊中龙血素B的含量均符合国家标准(不低于0.6 mg/粒)。     

HPLC同时测定龙血竭及其提取物中5个有效成分的含量

目的:建立HPLC同时测定龙血竭及其提取物中龙血素A,龙血素B,7,4’-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇含量的方法。方法:采用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相乙腈-1%冰醋酸,梯度洗脱;流速1 mL.min-1;柱温40℃;检测波长龙血素A和龙血素B为278 nm,7,4’-二羟基黄酮、紫檀茋和白藜芦醇为319 nm。结果:5个有效成分在40 min内均达到基线分离,线性关系良好(r≥0.999 7)。龙血竭中龙血素A,龙血素B,7,4’-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇的平均回收率分别为102.9%,96.81%,97.29%,100.7%,103.7%,RSD分别为0.23%,1.5%,0.42%,0.58%,0.34%;龙血竭提取物中龙血素A,龙血素B,7,4’-二羟基黄酮,紫檀茋,白藜芦醇的平均回收率分别为102.2%,96.93%,97.90%,102.0%,103.3%,RSD分别为1.7%,0.91%,1.4%,1.5%,1.2%。结论:本方法操作简便、结果准确,具有较好的重复性和稳定性,为龙血竭及其提取物的质量控制提供了一个很好的参考。     

应用近红外光谱定量分析模型测定国产血竭中龙血素A、龙血素B含量

目的用近红外光谱技术快速测定国产血竭中龙血素A、龙血素B含量。方法根据国产血竭在5284~4169.34 cm-1、7131.47~5943.53 cm-1、8913.37~7470.88 cm-1内的近红外吸收光谱,采用偏最小二乘法(PLS)建立了校正模型。采用二阶导数预处理方法时能最有效地提取光谱的信息。结果龙血素A的校正集相关系数为0.9749,校正集标准偏差(RMSEC)为0.1720,预测集相关系数为0.9857,预测集标准偏差(RMSEP)为0.1450;龙血素B校正集相关系数为0.9933,校正集标准偏差(RMSEC)为0.0526,预测集相关系数为0.9872,预测集标准偏差(RMSEP)为0.0604。结论近红外光谱技术快速简便,适合中药指标成分的快速分析。     

龙血素B的药效学实验研究

目的 :考察龙血素B活血化瘀的药理作用。方法 :通过抗血栓、抗血瘀、抗凝血、镇痛等试验来观察龙血素B的活血化瘀作用。结果 :龙血素B0.092g/kg对大鼠血栓形成有明显的抑制作用 ,对急性血瘀模型大鼠全血比粘度及血浆粘度均有明显的降低作用 ,龙血素B0.046g/kg对全血比粘度亦有明显的降低作用 ,二者均能明显延长小鼠凝血时间 ;龙血素B0.046g/kg,0.023g/kg能明显减少醋酸引起的小鼠扭体次数 ;此外 ,龙血素B0.046g/kg还能明显提高小鼠痛阈值。结论 :龙血素B具有较好的活血化瘀药理作用。     

黄龙肝脂消颗粒质量标准的实验研究

目的:建立黄龙肝脂消颗粒(龙血竭、黄芪、淫羊藿,等)的质量标准.方法:采用TLC法对处方中的黄芪、龙血竭、淫羊藿进行定性鉴别,用HPLC测定制剂中龙血素B的含量.结果:在TLC鉴别中均能检出黄芪、龙血竭、淫羊藿,龙血素B进样量在0.032～0.096μg范围内有良好的线形关系,r=0.9997(n=5),平均回收率100.1%,RSD=3.33%(n=6).结论:该法简便、准确、专属性强,可作为控制黄龙肝脂消颗粒剂质量的方法.     

龙血竭小鼠灌胃给药后血中移行成分的分析

目的 对龙血竭进行中药血清药物化学研究,为确定龙血竭的药效成分奠定基础.方法 在建立龙血竭高效液相色谱指纹图谱的基础上,通过比较龙血竭提取物、含药血清和空白血清的HPLC指纹图谱,结合LC-MS/MS检测技术确定龙血竭给药后的血中移行成分.结果 在龙血竭含药血清中发现6个人血成分,其中5个都属原型成分,分别为3,4'-二羟基-5-甲氧基二苯乙烯、剑叶龙血素B、4'-羟基-4,2'-二甲氧基一二氢查耳酮(新化合物)、剑叶龙血素A和龙血素B;1个可能为原型成分或代谢产物.结论 6个人血成分是龙血竭在体内主要直接作用物质,有助于阐明龙血竭的药效物质基础.     

基于近红外光谱技术的散结镇痛胶囊中龙血素A、B的含量测定

目的：利用近红外光谱分析技术（NIRS）快速测定散结镇痛胶囊中龙血素A、B的含量。方法：利用HPLC法测定散结镇痛胶囊龙血素A、B的含量,运用偏最小二乘法（PLS）建立NIRS与HPLC测定值之间的多元校正模型,对未知样品进行预测。结果：龙血素A、B的定量校正模型相关系数r分别为0.987 9、0.981 5,校正集验证均方差（RMSEC）分别为0.021 3、0.020 7,内部交叉验证均方差（RMSEV）分别为0.025 5、0.023 6,对预测集进行预测,预测值与真实值的相关性良好。结论：近红外光谱法对散结镇痛胶囊中龙血素A和龙血素B含量预测结果较好,能满足制药中检测的精度要求,为中药生产过程的在线、无损定量分析提供了依据。     

HPLC测定龙血竭提取物中龙血素A B和7,4'-二羟基黄酮的含量

目的: 建立龙血竭提取物中龙血素A,B和7,4'-二羟基黄酮的含量测定方法。方法: 采用Kromasil C₁₈ 色谱柱流动相乙腈-1%冰醋酸梯度洗脱,体积流量1 mL ·min^-1,柱温40 ℃,进样量10 μL,检测波长龙血素A,B为278 nm,7,4'-二羟基黄酮为330 nm。结果: 龙血素A,B和7,4'-二羟基黄酮分别在10.05~60.36 μg,10.08~60.48 μg,3.26~19.56 μg呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为108.6%(RSD 0.99%),109.6%(RSD 1.03%),102.7%(RSD 1.24%)。结论: 方法简便易行,结果准确,可用于龙血竭提取物的质量控制。     

HPLC测定散结镇痛胶囊中龙血素A,B含量

目的:建立散结镇痛胶囊中龙血素A、龙血素B的含量测定方法.方法:75％甲醇超声提取龙血素A、龙血素B,以Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为分析柱,以乙腈-1％冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL· min-1,进样量10μL,检测波长278 nm,柱温30℃.结果:龙血素A在526.20～4.11 ng线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率101.84％(RSD 0.77％,n=6);龙血素B在506.09 ～ 3.95 ng线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率100.54％(RSD 1.46％,n=6);并具有较好的重复性和稳定性.结论:样品处理方法合理,方法学考察符合定量要求,结果准确,可用于散结镇痛胶囊中龙血素A、龙血素B的含量测定.     

杜仲皮化学成分研究

目的研究杜仲Eucommia ulmoides皮的化学成分。方法采用正相硅胶柱色谱、反向ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、制备HPLC等手段对杜仲皮化学成分进行分离纯化,并根据HR-ESI-MS、NMR等波谱数据进行结构鉴定。结果从杜仲皮95%乙醇提取物中分离得到9个化合物,鉴定为甘草黄酮B(1)、3,5,4′-三羟基-7,3′-二甲氧基黄酮(2)、甘草素(3)、formononetine(4)、(+)-4′-O-methylglabridin(5)、paratocarpin E(6)、龙血素C(7)、threo-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-methoxy-2-{4-[1-formyl-(E)-vinyl]-2-methoxyphenoxy}-3-propanol(8)、diospyrosin(9),其中7个黄酮和2个苯丙素类。结论化合物1～9均首次从杜仲属植物中分离得到。     

一测多评法测定龙血竭中5种有效成分

目的建立龙血竭中5种有效成分的一测多评法,探讨一测多评法在龙血竭质量控制中的应用。方法采用高效液相色谱法,使用Fortis Xi C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-1.0%冰醋酸水溶液(B),梯度洗脱,0~10 min,25%~30%A;10~60 min,30%~50%A,体积流量1.0 mL/min;检测波长278 nm;柱温30℃;进样量10μL。以紫檀茋为内参,分别建立7,4′-二羟基黄酮、白藜芦醇、龙血素A和龙血素B相对于紫檀茋的相对校正因子,分别采用外标法和一测多评法测定5种成分的量,并比较二者结果的相对误差。结果 7,4′-二羟基黄酮质量浓度在10.23~102.27μg/mL、白藜芦醇质量浓度在11.01~110.14μg/mL、龙血素A质量浓度在9.47~94.72μg/mL、龙血素B质量浓度在11.59~115.90μg/mL、紫檀茋质量浓度在24.35~243.52μg/mL线性关系良好;4种化学成分相对于紫檀茋的相对校正因子分别为0.626、1.064、1.154、0.837;且在不同实验条件下耐用性良好(RSD3.0%);一测多评法的计算结果与外标法测得结果无显著差异。结论建立的一测多评法可作为龙血竭中5种有效成分的测定方法,一测多评法为龙血竭质量控制提供了新的模式与方法。     

基于指纹图谱分析和多成分同时定量的龙血通络胶囊质量评价研究

目的建立龙血通络胶囊指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价龙血通络胶囊提供依据。方法采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,柱温35℃,检测波长为280、325 nm。测定10批次龙血通络胶囊,建立指纹图谱,同时采用Q-TOF/MS对指纹图谱中共有峰进行指认及对部分特征峰进行定量分析。结果得到分离度、重复性均较好的龙血通络胶囊指纹图谱,标示出18个共有峰,相似度在0.92以上;采用LC-Q-TOF/MS方法指认了16个共有峰,其中7个共有峰经对照品比对,分别为白藜芦醇、7,4′-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B、紫檀茋、2,6-二甲氧基-4,4′-二羟基二氢查耳酮和2-甲氧基-4,4′-二羟基二氢查耳酮,并对这7个成分进行了定量分析,平均回收率在98.47%~101.93%(RSD均小于2.27%)。结论同时对龙血通络胶囊指纹图谱和7个指标成分进行分析,方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一。     

基于分子对接方法的川芎治疗脑缺血的物质基础及分子机制研究

川芎具有广泛的临床应用,是常用中药之一,但其有效物质及作用机制尚不明确。该研究优选川芎治疗脑缺血的有效成分,并探究其作用机制。选取4个与脑缺血相关的靶蛋白,以对应的上市药物为参照,基于分子对接技术对文献报道的川芎所含45种成分进行联合筛选。结果显示川芎中多个成分与靶点的对接结果优于对应的上市药物,如苯酞类物质,提示可能是川芎治疗脑缺血的主要有效成分。该方法可用于研究中药的物质基础和分子作用机制。     

龙血素B对棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤的保护作用

目的: 初步探讨龙血素B对棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤的保护作用及其机制。 方法: 以小鼠胰岛β细胞系NIT-1细胞作为实验细胞。实验分为空白对照组,5,10,20 μmol·L^-1龙血素B对照组,0.5 mmol·L^-1棕榈酸处理组,5,10,20 μmol·L^-1龙血素B干预组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基（ROS）含量和细胞凋亡率,半定量RT-PCR测定葡萄糖转运受体-2（GLUT-2）编码基因表达水平。 结果: 和棕榈酸处理组比较,龙血素B高剂量组可使NIT-1细胞活性存活率显著上升（P<0.05）,能显著降低细胞内ROS水平和细胞早期凋亡率（P<0.05）,可提高GLUT-2编码基因的表达水平（P<0.05）。 结论: 龙血素B对棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤的保护作用可能是通过降低细胞内ROS含量、显著上调受抑制的GLUT2编码基因表达、降低细胞氧化应激水平、减少游离脂肪酸引起的NIT-1细胞早期凋亡、逆转由氧化应激激活的转录因子叉头框蛋白-1（FOXO1）导致的葡萄糖代谢障碍和其他效应,产生对胰岛β细胞的保护作用。     

采用超微粉碎提升散结镇痛胶囊活性成分溶出度的研究

该实验主要研究了超微粉碎技术对散结镇痛胶囊活性成分溶出度的影响。运用普通粉碎和超微粉碎技术制备细粉和超微粉后充填胶囊,再将超微粉湿法制粒后充填胶囊,制得的散结镇痛胶囊用浆法测定药物的体外累积溶出度,比较3种胶囊溶出差异。结果显示细粉、超微粉、超微粉制粒制得胶囊的白藜芦醇体外溶出度分别为26.11%,63.27%,67.49%;龙血素B的体外溶出度分别为7.160%,20.29%,23.05%。超微粉制粒制得的散结镇痛胶囊溶出度最高。超微粉碎粒径D₉₀为13.221 μm,可以显著提高散结镇痛胶囊活性成分白藜芦醇和龙血素B的溶出度(P<0.01)。