阿魏酸钠对β-淀粉样肽所致大鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的 研究阿魏酸钠（sodium ferulate, SF）对Aβ25-35引起的大鼠学习记忆障碍和海马CA1区锥体神经元损伤的保护作用.方法 大鼠灌胃给予SF（50,100,250mg/kg）三周,脑室内注射凝聚态Aβ25-35（5μl, 2 mmol/L）,2d后,进行Morris水迷宫定位航行实验,连续训练五天,第六天开始进行空间探索实验.行为学实验结束后,取脑组织,制成石蜡切片,进行尼氏（Nissl）染色和胶质纤维酸蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫组织化学染色,研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化浸润情况.结果 脑室内注射Aβ25-35可引起大鼠学习和记忆的障碍,表现为大鼠逃避潜伏期较对照组明显延长,大鼠在平台所在象限游泳距离百分比较对照组降低,这些行为学改变伴随着海马CA1区星形胶质细胞的浸润和锥体神经元的损伤.SF（50,100,250mg/kg）治疗组能剂量依赖的减轻Aβ25-35所致的学习记忆损伤,SF也能明显减轻海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞的浸润.结论 阿魏酸钠能对抗Aβ25-35引起的海马锥体神经元的损伤和星形胶质细胞的活化浸润,从而改善大鼠的学习记忆能力.     

吡格列酮对脂多糖所致大鼠海马损伤的保护作用及其对iNOS和IL-1β表达水平的影响

目的 研究过氧化体增殖物激活受体.y(PPARΥ)激动荆吡格列酮(pioglitazone,pio)对大鼠脑室注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致海马损伤的保护作用及对诱导型一氧化氮合酶(Inducibh Nitric Oxide Syn-thase,iNOS)和白介素-1β(Intedeukin-1β,IL-1β)表达水平的影响.方法 雄性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,即对照组,LPS模型组,LPS Hio40mg/kg组和LPS pio80mg/kg组.大鼠灌胃给予pio(40,80mg/kg)3周,脑室内注射LPS(5μl,30μg)1周后,取脑组织,制成石蜡切片,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色.研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化、浸润情况.采用Western蛋白印迹检测方法观察IL-1β、iNOS的表达情况.结果 大鼠脑室内注射LPS可引起海马CA1区星形胶质细胞的激活和浸润及椎体神经元的损伤,同时伴有IL-1β,iNOS的表达增加.Pio(40、80mg/kg连续应用1周)能减轻海马CA1区椎体神经元的损伤及星形胶质细胞的激活和浸润,抑制鹏引起的IL-1β、iNOS表达增加.侧脑室注射LPS后1周,LPS组大鼠海马CAI区IL-1β蛋白表达水平较对照组差异有统计学意义(P＜0.01),LSP pio40mg/kg组和LSP Pio80mg,/kg组大鼠海马CAI区IL-1β表达量较LPS模型组差别有统计学意义(P＜0.01).LSP Pio40mg/kg组和LSP Pio80mg/kg组大鼠海马CA1区iNOS表达量较LPS模型组差别有统计学意义(P＜0.01).结论 Pio能够通过抑制LPS引起的IL-1β、iNOS的表达,减轻海马椎体神经元的损伤.     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马COX-2、iNOS表达的影响

目的观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及大脑海马CA1区神经元炎性反应的影响,探讨针灸防治AD的具体作用机制。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组10只,采用双侧海马注射凝聚态Aβ25-35制备AD大鼠模型。电针组选取双侧肾俞穴、双侧足三里穴和大椎穴,接韩氏电针仪治疗。采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测脑组织中海马神经元环氧合酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果大鼠海马注射Aβ25-35导致海马CA1区锥体神经元的损伤,同时伴有COX-2、iNOS表达增加。与模型组相比,电针能有效抑制COX-2、iNOS表达(均P0.05),显著提高AD大鼠的学习记忆能力(P0.05)。结论电针能有效抑制AD大鼠脑内神经元炎性反应,改善AD大鼠空间探索的能力,其作用机制可能与减轻COX-2过表达,抑制iNOS活性有关。     

黄芩茎叶总黄酮对注射Aβ_(25-35)致大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对大鼠双侧海马注射Aβ25-35引起的海马神经元损伤的保护作用.方法:大鼠双侧海马注射Aβ25-35建立痴呆模型,并给予SSTF灌胃,观察海马神经元的形态变化及检测血清MDA含量.结果:模型组海马CA1区神经细胞脱失、肿胀,脱失处胶质细胞增生,SSTF给药组神经元损伤较轻l模型组大鼠血清中MDA含量显著高于对照组(P<0.01),SSTF给药组MDA含量明显低于模型组(P<0.01).结论:SSTF对海马注射Aβ25-35引起的海马神经元损伤有保护作用,其机制可能是减少A β引起的脂质过氧化产物堆积和对抗A β引起的胶质细胞增生.     

TAK-242 对Aβ25-35 诱导大鼠海马神经元损伤的作用及其机制研究

目的 探讨TAK-242 对β- 淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的大鼠海马神经元损伤的作用及其相关机制。方法 用Aβ25-35 注射大鼠双侧海马复制阿尔兹海默病的动物模型,TAK-242 腹腔注射进行治疗,Nissl 染色观察大鼠海马CA3 区神经元的形态和数量,Western blot 检测大鼠海马Toll 样受体4（TLR4）和髓样分化因子88（MyD88）蛋白的表达,酶联免疫吸附法检测大鼠海马白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达水平。结果 大鼠海马注射Aβ25-35 后引起大鼠海马CA3 区神经元破坏和数量减少,而TAK-242 可以抵抗Aβ25-35 所造成的神经毒性并保护海马神经元,同时TAK-242 可降低Aβ25-35 所引起的海马组织内TLR4、MyD88、IL-1β 和TNF-α 表达升高。结论 TAK-242 可以通过抑制TLR4/MyD88信号通路,降低炎症因子IL-1β 和TNF-α 水平,从而保护大鼠海马神经元抵抗Aβ25-35 诱导的神经毒性。     

杏仁核注射Aβ_(1-42)大鼠脑内星形胶质细胞形态学变化

目的　探讨Aβ1-42 诱导模拟人类Alzheimer’s病 (AD)的大鼠病理模型中星形胶质细胞形态学变化及其在AD中的作用机制。方法　双侧杏仁核内注射 β-淀粉样多肽 1～ 4 2片段 (Aβ1-42 )制作大鼠AD模型 ,注射一周后采用GFAP免疫组化染色分析大鼠海马GFAP的表达。结果　杏仁核内注射Aβ1-42 后海马区出现星形胶质细胞增生、肥大、数目明显多于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　AD模型神经元损伤、死亡与Aβ神经毒性直接相关 ,反应性星形胶质细胞参与Aβ导致神经元细胞毒性损伤作用。     

蛇床子素减轻Aβ（25-35）诱导的大鼠学习记忆减退及海马神经元结构损伤

目的观察蛇床子素对-淀粉样蛋白25-35片段（Aβ25-35）诱导的大鼠学习记忆减退及海马神经元结构损伤的影响。方法 40只雄性SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药组及蛇床子素组,阳性药组每日1次灌胃多奈哌齐1 mg/kg,蛇床子素组每日1次灌胃蛇床子素40 mg/kg,连续17 d,假手术组、模型组灌胃等体积的生理盐水,3 d后右侧脑室注射Aβ25-35制模,制模后d 10开始Morris水迷宫检测大鼠的空间记忆能力,透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元结构损伤。结果右侧脑室注射Aβ25-35后,大鼠在定向航行实验中的逃避潜伏期明显增加（〈0.01）,空间探索实验中的校正逃避潜伏期缩短（〈0.01）,海马CA1区神经元结构明显受损;然而,蛇床子素及多奈哌齐明显缩短了大鼠的定向航行实验中的逃避潜伏期（〈0.01）,延长了空间探索实验中的校正逃避潜伏期（〈0.01）,减轻了海马CA1区神经元结构损伤。结论蛇床子素可减轻Aβ25-35诱导的大鼠学习记忆减退及海马神经元结构损伤。     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果苏木素伊红(HE)染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

阿魏酸钠通过Notch1/Hes信号通路对抗Aβ所致大鼠海马神经元损伤的机制研究

目的 研究阿魏酸钠(SF)对β淀粉样蛋白1-42(Aβ_1-42)所致大鼠海马神经元损伤的保护作用,并阐明其相关机制。方法 将SD大鼠40只随机分为对照组、Aβ_1-42模型组、SF治疗组和SF+Notch1信号通路阻断剂(DAPT)组,每组10只。SF治疗组连续灌胃给药3周(100 mg/kg),对照组、Aβ_1-42模型组灌胃等量蒸馏水,SF+DAPT组连续腹腔注射DAPT(100 mg/kg)7 d,采用脑室内注射Aβ_1-42(5μL,2 mmol/L)制备痴呆动物模型,对照组注射等量生理盐水,脑室注射后第2天进行Morris水迷宫实验,检测大鼠的学习记忆能力,采用Nissl染色观察海马CA1区锥体神经元损伤情况,免疫组织化学染色观察胶质纤维酸蛋白(GFAP)表达水平,Western blot检测海马CA1区Notch1、NICD、Hes1蛋白表达。结果 与对照组比较,Aβ_1-42模型组大鼠出现明显的空间学习记忆障碍,表现为逃避潜伏期较对照组明显延长,在原平台象限游泳时间占总时...     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的：探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法：采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果：苏木素伊红（HE）染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论：Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

细胞外信号调节激酶1/2在Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应中的作用

目的 观察Aβ诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2的表达.探讨细胞外信号调节激酶1/2是否参与了星形胶质细胞激活炎症细胞因子作用及其作用机制.方法 传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为10μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35作用30分钟.在PD98059组,加入Aβ25-3520μmol/L前1小时,加入PD培养.用Western blot分析iNOS、COX-2、IL-1β、P-ERK1/2的改变.结果 Aβ25-35可使体外培养星形胶质细胞P-ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,Aβ25-35也可使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加,ERK1/2上游激酶MEK特异性阻滞剂PD98059可完全阻断Aβ25-35引起的ERK1/2表达增加,也可抑制Aβ25-35引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加.结论 ERK1/2信号转导通路参与Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用.     

达纳康对类老年痴呆大鼠脑组织胶质细胞原纤维酸性蛋白和IL-1β、IL-6及APP mRNA表达的影响

目的研究达纳康(EGb761)对β-淀粉样蛋白(Aβ)25~35所致类老年性痴呆(AD)模型大鼠神经免疫调节的作用机制。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25~35造成类AD大鼠模型,观察大鼠莫里斯(Morris)水迷宫空间记忆能力,并分别通过免疫组化和RT-PCR方法研究类AD大鼠神经元胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、APP mRNA表达;观察炎性细胞因子IL-1β、IL-6的变化以及EGb761的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,皮层、海马APP mRNA的表达上调;海马、皮层GFAP阳性胶质细胞和IL-6 mRNA以及海马IL-1βmRNA表达增高。EGb761能够提高模型大鼠定向学习记忆能力,降低海马、皮层GFAP阳性胶质细胞表达,降低海马部位APP mRNA的表达。结论EGb761能显著改善Aβ诱导的痴呆模型大鼠学习记忆障碍,降低海马APP mRNA表达,减轻神经细胞的炎症和免疫联级反应。提示有效控制AD患者脑内Aβ免疫联级反应是EGb761的重要作用机制之一。     

非凝聚态淀粉样蛋白对大鼠海马神经元瞬时外向钾电流的影响

目的 探讨凝聚前的β淀粉样蛋白(Aβ25-35)对新生大鼠海马CA3区锥体神经元瞬时外向钾电流(IA)的影响.方法 采用伞细胞膜片钳技术记录非凝聚态Aβ25-35作用前后IA峰值和动力学变化.结果 非凝聚态Aβ25-35对新生大鼠海马CA3区神经元IA有明显抑制作用,其效应具有时间依赖性,浓度依赖性和电压依赖性,同时使IA的激活动力学曲线和失活动力学曲线均明显左移.结论 β淀粉样蛋白在凝聚成老年斑之前就对大鼠海马CA3区神经元的瞬时外向钾电流有抑制作用,町能是其产生神经毒性作用的机制之一.     

人参皂甙Rg1对Aβ25～35引起大鼠海马mTOR/p70S6K通路和凋亡基因表达的影响

目的 探讨Aβ25～35对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR/核糖体亚基S6蛋白激酶(p70S6K)信号转导通路及凋亡相关基因表达的影响,观察人参皂甙Rg1对Aβ25～35引起细胞凋亡的对抗作用和作用机制.方法 取SD大鼠30只,随机分为5组,每组6只,即生理盐水对照组、Aβ25～35损伤组、Aβ25～35+ Rg1(20、40、80 mg/kg)3个剂量组.连续用Rg1灌胃3 周后,脑室注射Aβ25～3510 μL(1.0 mmol/L),生理盐水对照组注射等量生理盐水.脑室注射后7 d,快速取海马CA1区,-70 ℃冰箱冻存,RT-PCR分析 mTOR、p70S6K以及凋亡相关基因c-fos、Jun-B、c-jun的mRNA 表达水平.结果 脑室内注射Aβ25～35能使mTOR和p70S6K的mRNA表达水平降低,使凋亡相关基因c-fos、Jun-B、c-jun的 mRNA表达明显增加.Rg1可剂量依赖性对抗Aβ25～35引起的p70S6K mRNA表达水平降低及c-fos、Jun-B、c-jun的 mRNA表达水平增加.结论 mTOR/p70S6K信号转导通路下调可能参与了Aβ25～35引起的海马神经细胞的凋亡,Rg1通过对抗Aβ25～35引起mTOR/p70S6K信号转导通路下调,抑制促凋亡基因的表达,保护海马神经细胞.     

脑室注射Aβ1—40对大鼠皮质和海马纤连蛋白基因表达的影响

目的：研究脑室注射Aβ1-40对大鼠皮质、海马纤连蛋白基因表达的影响。方法：通过脑室注射Aβ1－40，建立大鼠AD模型，采用逆转录PCR方法研究纤连蛋白在皮质、海马的表达情况。结果：通过Morris氏水迷宫实验、脑片刚果红染色及胆碱乙酰转移酶表达水平等方面验证AD模型成功，在AD鼠皮质、海马纤连蛋白基因高表达。结论：纤连蛋白为整合素的配体，Aβ1-40诱导基基因高表达可能介导Aβ1-40与小胶质细胞的结合，激活小胶质细胞促进神经元死亡。     

壳聚糖磷脂酰胆碱对AD大鼠脑内PKC-δ及Iba1表达的影响

目的探讨壳聚糖磷脂酰胆碱对海马注射Aβ25-35所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、钙结合蛋白(Iba1)表达的影响。方法随机将50只Wistar大鼠分为对照组,AD模型组,壳聚糖磷脂酰胆碱低、中、高剂量组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠双侧海马CA1区各一次性注射凝聚态2.5μLAβ25-355μg/μL制备AD模型,用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组织化学方法检测大鼠脑内PKC-δ、Iba1的表达。结果壳聚糖磷脂酰胆碱明显缩短Aβ25-35所致AD模型大鼠的潜伏期,增加穿越平台的次数,显著降低PKC-δ、Iba1的阳性表达。结论壳聚糖磷脂酰胆碱通过下调脑组织PKC-δ表达,抑制小胶质细胞增生和激活,减轻脑皮层和海马神经元炎性反应,对Aβ25-35所致AD模型大鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用。     

β-淀粉样蛋白致大鼠Alzheimer病模型的研究

目的模拟人类Alzheimer病的大鼠模型,观察其学习记忆及病理性改变。方法大鼠双侧海马微量注射聚合态Aβ1-40制备AD动物模型,Y-型迷宫测定大鼠学习记忆能力,HE染色、刚果红染色检测病理变化。结果海马内注射Aβ1-40可引起大鼠学习记忆能力下降,注射区Aβ积,神经元丢失及胶质细胞浸润。结论Aβ1-40海马内注射能较好地模拟AD的学习记忆障碍、神经元损伤等行为学和病理学方面的改变,可作为AD研究较好的动物模型。     

侧脑室注射rAAV-HIF-1a基因治疗AD模型大鼠的研究

目的 在体观察侧脑室注射缺氧诱导因子-1a(hypoxia-inducible factor-1a,HIF-1a)腺相关病毒rAAV-HIF-1a对阿尔茨海默病(Alzheime s disease,AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只:①正常组(normal组):未作任何特殊处理;② AD模型组(AD组):右侧脑室注射2μ1β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ) 25-35 (10mg/m1);③假手术组(sham组):右侧脑室注射2μ1生理盐水;④AD模型+rAAV-HIF-1a 组(AD+rAAV-HIF-1a组):右侧脑室注射2μ1Aβ25-35后1周右侧脑室注射10μ1rAAV-HIF-1a(1x1012v.g./ml).以上各组动物于注射Aβ25-35或生理盐水后5周取材检测海马神经细胞HIF-1a蛋白表达及凋亡百分率.结果 Western blot 检测表明rAAV-HIF-1a组海马神经细胞HIF-1a蛋白表达明显增强(P<0.05),同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率.结论 侧脑室注射rAAV-HM-1a能够在AD模型大鼠海马高效表达HIF-1a蛋白并抑制海马神经细胞凋亡.     

黄芩茎叶总黄酮对Aβ_（25-35）致大鼠学习记忆损伤及海马抗氧化酶活性的影响

目的：探讨黄芩茎叶总黄酮（scutellaria baicalensis stem-leaf total flavonoid,SSTF）对大鼠海马注射Aβ25-35致大鼠学习记忆损伤及海马抗氧化酶活性的影响。方法：给大鼠灌胃（ig）SSTF 100,50,25 mg.kg-1剂量,采用双侧海马注射Aβ25-35制作大鼠痴呆模型,Morris水迷宫实验测定大鼠学习、记忆能力;HE染色观察大鼠海马CA1区神经元形态;检测海马组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果：模型组大鼠寻找平台潜伏期较对照组大鼠明显延长（P〈0.01）,2 min内在平台象限所游路程与总路程的比值明显低于对照组（P〈0.01）,SSTF 100,50 mg.kg-1剂量组及维生素E组的大鼠寻找平台潜伏期较模型组明显缩短,所游路程比值明显高于模型组;模型组大鼠海马CA1区神经元损伤明显,SSTF100,50 mg.kg-1剂量组及维生素E组大鼠海马神经元损伤较模型组明显减轻;SSTF100 mg.kg-1剂量组海马组织中SOD、GSH-Px活性较模型组明显升高,MDA含量明显减少。结论：黄芩茎叶总黄酮能减轻大鼠海马注射Aβ25-35引起的海马神经元损伤,改善学习记忆能力,其机制可能与提高组织中抗氧化酶活性有关。     

β-淀粉样蛋白所致模拟老年性痴呆动物模型的建立

目的 建立β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的模拟老年性痴呆(Alzheimer’s disease，AD)的动物模型。方法 将凝聚态Aβ1-40注射入大鼠左侧海马，Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力，病理检测采用尼氏染色方法。结果 海马内注射凝聚态Aβ1-40后，大鼠在定位航行试验中，平均逃避潜伏期明显延长；在空间探索试验中，跨越原平台位置的次数明显减少；在注射点附近可见弥漫性胶质细胞浸润和局部神经元的大量丢失。结论 海马内注射凝聚态Aβ1-40可以模拟AD的学习记忆障碍、炎症反应和神经元损伤等行为学和病理学方面的特征。