蛋白核小球藻冻融破壁条件优化及对其抗氧化活性的影响

探讨了蛋白核小球藻反复冻融破壁工艺,同时研究了其对抗氧化活性的影响。考察了冻融次数、冻融时间和细胞密度对蛋白核小球藻破壁率的影响,在单因素的基础上通过响应面法优化破壁工艺参数。研究结果表明,蛋白核小球藻破壁最佳工艺条件为冻融次数5次,冻结时间1.1 h,细胞密度1.94×10~(-7),在此条件下,蛋白核小球藻破壁率为(62.18±1.2)%。同时利用DPPH、O_2~-·清除能力的强弱评价反复冻融法对蛋白核小球藻抗氧化活性的影响,结果表明,经反复冻融蛋白核小球藻对DPPH和O_~2-·清除能力均优于未经冻融处理的对照组。     

响应面优化提取小球藻蛋白质及其性质研究

采用响应曲面法优化小球藻蛋白质提取工艺并对其抗氧化活性进行表征。以小球藻蛋白质的提取率为指标,考察p H、液料比(V/m)、浸提时间、吐温添加量及超声时间对提取率的影响。在单因素试验的基础上,采用三因素三水平的响应面分析法确定小球藻蛋白提取工艺。结果表明小球藻蛋白质最佳提取工艺条件:p H 8.0、浸提时间6 h、吐温添加量0.1%,提取率达46.39%。在最优条件下提取的小球藻蛋白对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和ABTS自由基的半数清除质量浓度分别为1.40 mg/m L,1.45 mg/m L和16.6μg/m L,说明小球藻蛋白质具有一定的抗氧化活性。     

南瓜籽抗氧化肽的制备及分离纯化

以脱脂南瓜籽蛋白为原料,酶解制备抗氧化肽,并进行分离纯化。通过单因素试验,筛选最佳蛋白酶并考察了酶解p H、酶解温度、底物浓度、加酶量及酶解时间对水解度及DPPH自由基清除率的影响,在此基础上进行响应面试验优化酶解条件。然后采用大孔吸附树脂对南瓜籽抗氧化肽进行脱盐及分离纯化。结果表明:南瓜籽抗氧化肽的最佳酶解条件为选用碱性蛋白酶、酶解p H10.1、酶解温度52℃、底物浓度5.7%、加酶量2%、酶解时间120 min;在此条件下,20 mg/m L的南瓜籽抗氧化肽对DPPH自由基清除率为85.36%;75%乙醇溶液洗脱组分PD-3对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除率及总还原力最高,洗脱组分的抗氧化性能相比粗多肽大幅提高;PD-3组分肽含量79.63%,PD-3组分77.56%相对分子质量分布在2 000以下。     

响应面优化酶解法制备韭菜籽蛋白抗氧化肽工艺

以韭菜籽蛋白质抽提物为原料,采用响应面分析法优化酶解韭菜籽蛋白质制备抗氧化肽工艺。采用酸性蛋白酶酶解制备韭菜籽抗氧化肽,以酶解产物对DPPH自由基清除力为评价指标,考察酶解p H值、底物质量浓度、酶添加量及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素试验的基础上,采用3因素3水平的响应面分析法确定酶解韭菜籽蛋白质制备抗氧化肽工艺,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。以酶解p H值、酶添加量和酶解温度为自变量,研究这3个因素的交互作用及最佳酶解工艺条件并进行验证。研究结果表明,对酶解韭菜籽蛋白质制备抗氧化肽工艺的影响因素主次顺序为:p H值酶添加量酶解时间,最佳酶解工艺条件:酶解时间6.5 h,p H 3.00,酶添加量1345.7 U。在最佳工艺条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为80.12%。     

响应面优化酶解法制备蒲公英籽蛋白抗氧化肽工艺

以蒲公英籽蛋白质抽提物为原料,采用响应面分析法(RSM)优化酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺。采用碱性蛋白酶酶解制备蒲公英籽抗氧化肽,以酶解产物对DPPH自由基清除力为评价指标,考察酶解p H、底物浓度、酶底比及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素实验的基础上,采用三因素三水平的响应面分析法确定酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。以酶解时间、酶底比和酶解p H为自变量,研究这3个因素的交互作用及最佳酶解工艺条件并进行验证。研究表明,对酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺的影响因素主次顺序为:p H酶底比酶解时间,最佳酶解工艺条件:酶解时间4.90 h,p H8.5和酶底比7.80%。在最佳工艺条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为79.13%。     

响应面法优化龙须菜蛋白酶解工艺及酶解液的抗氧化活性

为获得高抗氧化活性的龙须菜蛋白酶酶解液,运用响应面(RSM)分析方法对龙须菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素实验基础上,以亚铁离子螯合率和DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、p H、酶解温度、底物质量浓度、加酶量对龙须菜蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。结果表明:在所选的5种蛋白酶中,复合蛋白酶是龙须菜蛋白酶解的最适用酶;酶解液抗氧化活性的最优酶解条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50.1℃、p H7.0、底物浓度10 g/L、加酶量0.1%(0.15 AU/g)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为74.61%,DPPH自由基清除率为47.66%,水解度为17.58%。对比常用抗氧化剂,酶解液在亚铁离子螯合能力方面显著高于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05)。优化后的龙须菜蛋白酶酶解液具有一定的抗氧化活性。     

苦杏仁醇溶蛋白酶解抗氧化肽的制备工艺优化

以苦杏仁醇溶蛋白为原料,采用甲醛电位滴定法以水解度和自由基清除率为评价指标对风味蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶五种生物酶在最适条件下对苦杏仁醇溶蛋白的酶解效果进行酶的优选。在单因素实验的基础上,以酶添加量、底物浓度、p H、时间为自变量,通过四因素三水平Box-Bohnken响应面分析法对生物酶解工艺进行优化。结果表明碱性蛋白酶为酶解苦杏仁醇溶蛋白的最优选择,预测最优工艺条件为时间:4.12 h、酶添加量5208.93 U/g、底物浓度3.21%、p H 9.22,根据最终试验目的,选取条件为:时间:4.0 h、酶添加量5000.0 U/g、底物浓度3.0%、p H 9.0。通过验证试验得出响应值DH%为26.74%±0.54%,DPPH自由基清除率为97.86%±0.58%,与预测值相差较小,故此条件下酶解苦杏仁醇溶蛋白抗氧化肽为最优工艺。     

胃-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽

为了建立酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽的最佳优化条件,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶分步水解的方法。运用四因素三水平的正交试验确定胃蛋白酶的酶解优化组合,以水解度和DPPH自由基清除能力为响应值,最终确定酶解的最优组合为:酶解时间1 h,酶添加量8 000 U/g,底物浓度1%,p H2。在此基础上,采用响应面分析法研究胰蛋白酶酶解时间、酶添加量、p H、底物浓度对工艺的影响,以羟自由基(·OH)为响应值,确定的酶解最优条件为:酶解时间1.42 h,酶添加量7 744.93 U/g,p H7.96,底物浓度1.35%,此条件下的·OH清除率为74.7%,与理论值75.59%相对误差在1%以内,说明所建立的模型具有较好的拟合性。     

风味蛋白酶酶解蚕蛹蛋白工艺研究

以蚕蛹蛋白为原料,蚕蛹蛋白水解度为指标,通过单因素试验和正交试验对影响蚕蛹蛋白水解度的因素,如底物浓度、酶与底物比、酶解p H、酶解温度、酶解时间等进行优化,并对蚕蛹氨基酸成分和蚕蛹蛋白水解液的抗氧化能力进行分析测定。结果表明,当底物浓度为4.0%、酶解时间为4.0 h、酶解pH为7.0、酶与底物比为20%时,蚕蛹蛋白水解度最高,达37.04%。抗氧化分析结果显示,风味蛋白酶酶解蚕蛹蛋白的水解液对DPPH清除活性较高,为90.19%,对超氧阴离子的清除率为24.79%,对羟基自由基的清除率为37.07%。     

响应面法优化绿豆抗氧化肽的制备工艺

绿豆是一种药食同源性植物,富含丰富的蛋白质和氨基酸,具有巨大的发展潜力。为了合理利用和开发绿豆蛋白资源,人们开发出了天然无毒的抗氧化肽。实验以绿豆蛋白为原料,对绿豆抗氧化肽的制备工艺进行优化。实验采用单因素与响应面结合的实验方法,以DPPH自由基清除率为优化指标,研究分析了酶解温度、酶解时间、酶浓度、pH对DPPH自由基清除率的影响。结果表明,各个因素对绿豆多肽抗氧化肽的抗氧化性影响的主次顺序为:酶解温度 pH酶浓度酶解时间。优化最佳工艺条件为酶解温度43.47℃、pH9.19、酶解时间2.22h、酶浓度6.51%时,其DPPH自由基清除率达到最高为47.03%,与软件分析出的47.13%相差0.23%。本研究能够为绿豆抗氧化肽的制备工艺优化提供一定的理论依据。     

拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺优化及体外清除自由基能力

以加酶量、酶解温度、pH值、酶解时间为影响因素,以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,通过正交试验优化拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺,并与三氯乙酸法、等电点法脱蛋白效果进行比较。同时对脱蛋白多糖的体外清除自由基能力进行研究。结果表明,拟目乌贼肌肉多糖脱蛋白最佳工艺条件为:加酶量3.0 g/100 m L、酶解温度53℃、p H 8.2、酶解时间1.5 h。此条件下蛋白脱除率为89.43%,多糖损失率为1.78%,优于三氯乙酸法和等电点法。清除自由基结果显示,多糖质量浓度为10 mg/m L时,酶法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对羟自由基清除率分别为45.72%、38.72%和25.18%,相应的IC_(50)值分别为12.44、16.37、34.64 mg/m L;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除率分别为68.00%、30.08%和23.10%,相应的IC50值分别为7.62、16.71、28.96 mg/m L。3种脱蛋白方法所得拟目乌贼肌肉多糖清除自由基效果依次为:酶法三氯乙酸法等电点法。     

Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏制备抗氧化肽

通过Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白制备抗氧化肽,以酶解液的水解度(DH)、DPPH·和羟自由基清除率为指标,比较不同酶添加量、p H值、温度、料液比以及酶解时间对酶解效果的影响,并用响应面法优化Alcalase蛋白酶酶解反应的工艺条件。结果:Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白的最优工艺条件为:酶解p H9.0、底物质量浓度8 g/100 m L、温度62℃、加酶量4.26%、酶解时间3.7 h。在此条件下,蛋白质水解度为30.66%,DPPH自由基清除率为85.97%,羟自由基清除率为75.79%。对优化的酶解液进行氨基酸成分分析表明:大黄鱼内脏多肽含有丰富的组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro),具有较高的抗氧化活性。     

响应面法优化酶解羊乳酪蛋白制备抗氧化肽

作为生物活性肽的一种,抗氧化肽能够抑制脂类物质的氧化和清除自由基,保持自由基的平衡,从而抵御各种疾病。研究以DPPH自由基清除能力和螯合铁离子能力为评价指标,采用响应面法对碱性蛋白酶水解羊乳酪蛋白制备抗氧化肽的工艺进行了优化。结果表明,最佳酶解工艺参数为:温度为62.5℃,p H为8.9,底物浓度4.4%,酶加量2.5%,水解时间173 min。在此条件下,DPPH自由基清除能力为69.07%±1.26%,螯合铁离子能力为87.21%±0.88%,验证值与预测值无显著性差异(p0.05),说明响应面法优化Alcalase酶解羊乳酪蛋白制备抗氧化肽是可行的。     

影响单酶法制备核桃多肽的因素研究

为寻求核桃多肽的最佳制备方法,以酶法水解核桃蛋白为基础,通过单因素和正交试验对核桃多肽制备工艺进行优化。结果表明,在酶解时间3 h、酶解温度38℃、p H 6.8、酶添加量4%、底物浓度为2.4%时,核桃多肽的抗氧化活性最佳,此时DPPH清除率可达92.35%。     

玉米胚芽蛋白水解物的制备及其抗氧化活性研究

为高效利用脱脂玉米胚芽蛋白,采用双酶分步酶解制备玉米胚芽蛋白水解液,通过单因素和响应面试验设计对酶解条件进行优化;利用膜分离对其进行初步纯化并测定其体外抗氧化活性。结果表明,一步酶解的最佳条件:碱性蛋白酶的加酶量为0.58%,p H 8.65,酶解4.78 h时,蛋白溶出率为57.70%+1.92%;二步酶解的最佳条件:木瓜蛋白酶加酶量0.11%,p H 6.54,酶解2.28 h后,蛋白溶出率达88.71%+1.5%;不同分子段蛋白质水解物均具有较强的自由基清除能力和一定的还原力。纯化组分中3 k Da肽段(E1)对超氧阴离子自由基的清除效果最好,有望作为一种有效的抗氧化肽,在医药、食品和饲料行业等发挥应用优势。     

蛋清粉酶解制备蛋清肽工艺优化研究

筛选了用于酶解蛋清粉的蛋白酶,并对碱性蛋白酶酶解蛋清制备活性肽的最佳工艺条件进行了优化。单因素试验结果表明酶解温度50℃、酶解p H值9.5和10%的底物浓度可以获得较佳的酶解产物抗氧化活性,正交试验表明,p H值9.5,底物浓度10%和反应温度50℃,酶解产物清除DPPH自由基能力最强;在p H值10.5,底物浓度5%和反应温度50℃时,酶解产物具有最佳的还原力0.514。基质辅助激光解析串联飞行时间质谱对酶解产物多肽分析结果表明,蛋清肽的分子量集中在2100-5000。     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

本文研究了酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,通过水解度与羟自由基(·OH)清除率来综合评价水解产物的抗氧化能力。以·OH清除率为指标,从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适酶。在单因素实验研究酶浓度、底物浓度与水解时间对酶解产物·OH清除率和水解度影响的基础上,通过L_9(4~3)正交实验对水解工艺进行优化。结果得出,碱性蛋白酶活力高于其他4种蛋白酶,能使蛋白质充分水解,正交实验各因素对水解产物·OH清除率的影响程度依次为底物浓度酶浓度水解时间。其中,碱性蛋白酶的最佳水解工艺条件为:底物浓度3.0%、酶浓度3500 U/g、p H9.0、温度55℃、水解时间3.5 h。在此条件下,水解产物的·OH清除率可达82.7%,水解度为23.1%。碱性蛋白酶水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺可行,为滑菇蛋白高附加值产品的开发提供技术参考。     

蛴螬酶法制备抗氧化活性肽

建立蛴螬多肽的制备工艺,探究多肽的抗氧化活性。采用酶法将蛴螬制备成蛴螬蛋白水解肽,以蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力为衡量指标,通过单因素试验确定了酶种类、酶虫比、底物浓度、水解体系pH值、酶解温度和时间对蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力的影响。通过正交试验优化蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力,获得最佳酶解工艺,即底物浓度5%、水解体系p H 7、酶解温度40℃。在此试验条件下,蛴螬多肽的提取率为14.21%,总抗氧化能力为0.752 mmol/L。     

酶解条件对鹰嘴豆多肽抗氧化活性的影响

以鹰嘴豆蛋白粉为原料制备鹰嘴豆蛋白抗氧化活性肽,采用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶分别对鹰嘴豆蛋白进行酶解,测定了不同酶作用下的鹰嘴豆多肽抗氧化活性,确定木瓜蛋白酶是酶解鹰嘴豆蛋白的最适蛋白酶。研究了温度、p H、底物浓度、酶添加量等酶解条件对产物抗氧化活性的影响。结果表明,不同的酶解条件对鹰嘴豆多肽的抗氧化活性具有显著影响,最优酶解条件为:温度60℃,p H 6.0,底物浓度3.0%,酶的添加量3.0%,在此条件下酶解180 min,制得的鹰嘴豆多肽具有较高的抗氧化活性,其多肽含量高达71.31%。