实验性自身免疫性脑脊髓炎神经元、胶质细胞及其细胞缝隙连接的超微结构改变

目的 探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)豚鼠发病前、后脑内神经元、胶质细胞及其细胞间缝隙连接的超微结构变化.方法 采用髓鞘碱性蛋白经豚鼠足底注射制作EAE动物模型.将大鼠随机分为试验组(n=18)和对照组(n=6),采用抗Cx43和Cx32免疫电镜双标记的免疫组化方法观察EAE豚鼠脑白质内神经元、胶质细胞及其细胞之间连接部位超微结构改变.结果 胶质细胞之间和/或神经元之间形成大量的缝隙连接和半通道,同时除存在髓鞘破坏外神经元亦受到损伤.结论 (1)在EAE发展过程中,不仅存在髓鞘改变而且还存在轴索和突触的改变;(2)缝隙连接的增多提示EAE发生后星形胶质细胞与神经元间信息交流可能加强,缝隙连接很可能在神经元和髓鞘损伤中起关键作用.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠小胶质细胞的变化

目的　观察活化的小胶质细胞 (表达主要组织相容性抗原 )在实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)大鼠脊髓中的变化 ,探讨 EAE大鼠发病相关生物学机制。方法　采用免疫组化法观察豚鼠全脊髓匀浆诱导的 Wistar大鼠 EAE过程中脊髓内表达 MHC 、MHC 类抗原的小胶质细胞的变化情况。结果　对照组脊髓内未发现表达 MHC抗原细胞 ,实验组脊髓内表达 MHC 抗原细胞与表达 MHC 抗原细胞的分布和形态一致 ,小胶质细胞变化与 EAE大鼠的病程一致。动物临床症状评分 2分和 3分 EAE大鼠脊髓表达 MHC抗原的小胶质细胞比评分 1分大鼠明显增高 ( P <0 .0 1 ) ,恢复期 EAE大鼠表达 MHC抗原的小胶质细胞明显减少 ( P <0 .0 1 )。结论　活化小胶质细胞与 EAE大鼠的病情相关 ,提示其可能通过表达 MHC抗原在 EAE大鼠的发病机制中具有作用     

基质金属蛋白酶-9在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9．MMP-9）在多发性硬化（MS）动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis．EAE）大鼠脑脊髓中的表达和作用。方法 应用豚鼠脑脊髓匀浆与完全福（氏）佐剂（CFA）混匀于Wistar大鼠颈背部皮下注射诱导建立EAE模型．同时将单独注射CFA或NS的大鼠设为对照组。采用半定量免疫组化方法检测Wistar大鼠发病后72h内及7、14d不同时间段脑脊髓中MMP-9的表达．并与对照组比较。结果 经免疫组化方法检测结果显示EAE大鼠脑脊髓内有特异的MMP-9表达．与对照组比较差异有显著性。发病72h内MMP-9表达高于发病后7d（P〈0．05）及发病后14d（P〈0．01）。结论 EAE大鼠脑脊髓的单核淋巴样细胞有特异MMP-9表达．且发病早期MMP-9阳性细胞率高于发病后期、恢复期及对照组．提示MMP-9与EAE发病有关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎的历史和现状

<正> 多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘性自身免疫性疾病,其确切的发病机制仍不清楚,研究MS的实验动物模型成为探索该病病因学的最佳途径和方法。MS的实验动物模型主要分为免疫介导模型和病毒诱导模型两种,其中以免疫介导模型多用,该模型主要是通过注射CNS髓鞘蛋白(或分子肽段)与抗原佐剂的乳化复合物诱导动物对抗原反     

实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的比较

目的 比较两种不同品系大鼠及不同免疫原诱发的EAE模型特点。方法 应用MOG35-55、同种脊髓匀浆（DA-SCH）、MBP68-86、豚鼠-MBP为免疫原．分别免疫DA大鼠或Lewis大鼠制备EAE动物模型。观察比较大鼠发病过程、临床评分及病理变化。结果 应用MOG35-55或DA-SCH为免疫原致敏的DA大鼠病程呈现缓解-复发的双相病程．应用MBP68-86、豚鼠-MBP致敏Lewis大鼠而诱发的EAE模型为急性单相病程。豚鼠-MBP诱发的EAE模型发病时间匀齐、发病率最高、病情也最重．应用DA-SCH诱发的EAE模型病情其次重但发病时间不匀齐．MOG及MBP肽段引发的病情相对较轻。各实验组在发病高峰期组织病理变化以炎症反应为主。DA大鼠两个实验组第二次发病期炎症反应相对较轻而脱髓鞘较明显。结论 不同免疫原制备的EAE模型具有不同的特点．可根据研究目的不同选取所需模型。     

雄激素在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的保护作用

多发性硬化(multiple sclerosis, MS)及其动物模型即实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)都具有性别差异,但其确切机制仍不清楚.近年来,大量研究发现雄激素与EAE的发病和病程有一定关系.此文就EAE存在的性别差异及雄激素在其中的作用做一综述.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎的视神经病理改变

目的 研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的视神经病理改变.方法 足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆和完全弗氏佐剂(CFA)混合物制作Wismr大鼠EAE模型,于发病后第6d将大鼠处死,取视神经、脑和脊髓,行HE和LFB染色,光镜和电镜下观察其病理改变.结果 病理检查发现EAE模型组大鼠脑、脊髓有不同程度的炎症反应和脱髓鞘改变;均有视神经病变,光镜主要表现为炎症反应和脱髓鞘,视神经髓鞘脱失重于炎症反应;电镜主要表现为髓鞘稀疏,少突胶质细胞数量减少、胞核固缩,其周围包裹的髓鞘板层松解,轴突髓鞘分离.结论 EAE大鼠存在明显的视神经病变,主要为视神经炎症反应和脱髓鞘改变.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型脑组织硫化氢的变化

目的 观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脑组织中硫化氢(H2S)动态变化,探讨H2S与多发性硬化(MS)的关系. 方法 按随机区组设计方法将SD大鼠分成对照组及模型组,每组78只.模型组制备EAE模型,对照组用生理盐水代替诱导乳剂,余措施相同.采用HE染色、尼氏染色观察2组大鼠脑组织病理变化;比较不同时间点(建模后5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 d和65 d)2组大鼠平均临床评分;采用比色法检测各时间点H2S和丙二醛(MDA)水平. 结果 (1)HE和尼氏染色显示模型组中可见明显的炎性细胞浸润现象及血管袖套形成,对照组未发现明显改变.(2)模型组于建模后第20天及第50天出现2次发病高峰,临床评分分别为(4.0±0.55)分和(3.5±0.25)分;对照组的评分为0分.(3)模型组大鼠各时间点脑组织中H2S表达量随着发病呈逐渐下降趋势,从第10天开始低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).相反,模型组大鼠各时间点脑组织中MDA呈逐渐增加趋势,从第10天开始高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组大鼠H2S和MDA水平无明显变化.(4)模型组大鼠脑组织中H2S水平的变化与临床评分、MDA水平呈负相关(r=0.960,P=0.000;r=-0.920,P=0.000);临床症状评分和MDA水平呈正相关(r=0.910,P=0.000). 结论 H2S在EAE模型中表达明显降低,在MS中的作用机制有待进一步研究.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立和长期观察研究

目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型(EAE)并长期观察研究.方法 C57BL/6小鼠30只,随机分为EAE模型组、PBS对照组和正常对照组.应用神经功能评分进行临床评估,通过HE和髓鞘染色观察组织病理变化.结果 小鼠在诱导后的12±3d急性起病,16±2d内达到高峰,严重度评分为3.2±0.6分.半年观察期内复发1次,复发率为25%.光镜下可见EAE组以脊髓组织病变为主,表现为大量炎性细胞浸润和白质脱髓鞘.结论 采用MOG_(35-55)诱导C57BL/6小鼠建立的模型既往被认为是一种慢性迁延EAE模型,本研究通过长期观察发现其存在缓解复发现象.

Abstract：

Objective To establish a mice model of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and perform a long term study. Methods C57BL/6 mice were immunized with 300μg MOG_(35-55) in complete Freund' s adjuvant (CFA) to establish EAE model in EAE group (n = 10). Mice in adjuvant group( n = 10)were treated with CFA without MOG_(35-55) and control group( n = 10)were treated with normal saline. The pathologic changes of the central nervous system were studied by HE staining and myelin staining. Results The clinic symptoms of EAE were present in the 12±3th day post-immunization,and went to the peek in the 16±2 th day post-immunization. The severity score was 3.2±0.6. One relapse was observed in the term of 6 months, and the rate was 25%. Light microscopy showed there were abundant inflammatory cells infiltrated especially in spinal cord tissues in EAE mice,with evident demyelination in white matter. Conclusion The relapse of this EAE model was observed in the study, though it was believed to be a chronic persistent model without relapse.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎豚鼠模型的建立及其病理和MRI的观察

目的　探索建立实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)豚鼠动物模型 ,了解其病理及磁共振 ( MRI)的变化特点 ,为多发性硬化 ( MS)实验性治疗研究提供实验依据。方法　采用注射完全福 (氏 )佐剂 -豚鼠全脊髓匀浆( CFA-GPSCH) ,并辅以注射百日咳疫苗 ( BPV) ,诱导豚鼠 EAE模型。分别利用光镜和 MRI观察 EAE豚鼠中枢神经组织 ( CNS)的病理与影像改变。结果　豚鼠在注射抗原 1 6d后出现 MS症状 ,发病率达 90 %以上。脑、脊髓组织可见血管周围炎细胞呈袖套样浸润并有白质脱髓鞘。MRI检查可发现中枢神经系统病变异常信号。结论　采用 CFA-GPSCH并辅以注射 BPV诱导的 EAE模型简单、经济、可靠 ,并具有发病率高的特点。其病理特点是血管周围炎性浸润 ,白质脱髓鞘。 MRI可用于评价 EAE豚鼠 CNS病变     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠血脑屏障通透性与紧密连接蛋白-5的变化

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠血脑屏障(BBB)通透性与紧密连接蛋白-5(claudin-5)表达的变化。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为EAE组和正常对照组,应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55诱导制作小鼠EAE模型,每日进行神经功能缺损评分。采用苏木精-伊红、髓鞘染色和免疫组化法观察炎症细胞浸润、髓鞘脱失及轴索损坏程度。伊文思蓝染色和Western blot法观察BBB通透性和claudin-5表达的变化。结果与正常对照组比较,EAE组小鼠神经功能缺损评分、炎症细胞浸润、髓鞘脱失、轴索损坏和BBB通透性均明显增加;而claudin-5表达显著降低(均P0.01)。BBB通透性的变化与平均神经功能缺损评分、炎症细胞浸润和轴索损坏均呈正相关(P0.01);而与claudin-5表达水平呈负相关(P0.05)。结论 EAE发病过程中claudin-5表达减少,可能导致BBB通透性增加,使外周大量的炎症反应细胞向中枢迁移,继而进一步加重中枢的炎症反应。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎胶质纤维酸性蛋白变化的研究

目的通过建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型研究Wistar大鼠脑内神经脱髓鞘后星形胶质细胞损伤随时间变化的规律。方法对Wistar大鼠经足垫注射豚鼠脊髓匀浆制作EAE模型,并于不同时间点将其处死,取脑组织进行免疫组化染色及图像分析检测脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平并与健康对照组进行比较。结果GFAP阳性细胞随损伤时间呈先上升后下降的变化趋势,于发病后第7天表达最高,第21天恢复正常。其中发病后第7、14天GFAP阳性细胞突起增长、增粗,染色加深。结论EAE模型中星形胶质细胞可能参与了脑组织损伤后的修复过程,其标志性蛋白GFAP水平随损伤时间呈规律性改变。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织Nogo-A和NgR的变化

背景：Nogo-A蛋白是一种中枢神经系统髓鞘相关轴突再生抑制因子,与其受体作用可抑制轴突再生。 目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE）大鼠侧脑室周围Nogo-A和NgR蛋白的动态变化,探讨Nogo-A和NgR蛋白在EAE发生发展中的可能作用机制。 设计、单位、时间：随机对照动物研究。试验于2008年9月至11月在湖南省人民医院临床研究所进行。 材料：6~8周龄清洁级雌性Wistar大鼠60只,体重（180±10）g,由湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场提供。 方法：60只大鼠随机分为EAE组和对照组各30只,各组再分为6个亚组,每组5只大鼠,分别于免疫后11天、13天、15天、18天、24天、30天处死各亚组大鼠取脑。采用免疫组化方法测定2组大鼠侧脑室周围白质Nogo-A和NgR蛋白在不同时间点表达情况。 主要观察指标：通过免疫组化后阳性细胞数计数观察侧脑室周围Nogo-A和NgR表达水平。 结果：EAE组在免疫第11天Nogo-A蛋白表达升高,第13天下降,后又升高,第30天仍高于对照组;EAE组NgR蛋白在第13、15、18表达升高。 结论：Nogo-A和NgR蛋白可能在EAE的发生发展中起重要作用     

PLP不同肽段诱导EAE模型的对比研究

目的建立不仅与多发性硬化(multiple sclerosis，MS)临床表现、病理特征接近而且病程相似的较为理想的复发一缓解型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)模型。方法应用髓鞘蛋白脂质蛋白(proteolipid potein，PLP)多肽的两种免疫优势表位肽段PLP139-151和PLP178-191免疫雌性SJL／J小鼠，制作复发缓解型EAE(relapse remitting experimental autoimmune encephalomyelitis，RR—EAE)模型，观察其体重及神经功能评分的变化，应用HE、Luxol fas tblue髓鞘染色等方法观察模型的组织形态学改变。结果两种PLP肽段免疫的小鼠发病均具有缓解一复发的特点，出现明显的神经系统体征；小鼠发病时脑和脊髓组织显示明显的血管鞘形成、卫星现象和炎性细胞浸润以及脱髓鞘改变。结论PLP两种肽段均可诱发RR-EAE模型，这与临床MS的缓解一复发病程更相似，更能表现MS的临床特点，是研究MS的较为理想的动物模型。     

小胶质细胞活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用机制

目的探讨小胶质细胞活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病机制中的作用。方法利用同种脑脊髓匀浆诱导EAE模型。采用免疫组化法、免疫组织荧光染色观察小胶质细胞对EAE不同病期炎性脱髓鞘病灶的反应,采用免疫组化法、ELISA法观察脑组织及外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果EAE发病前小胶质细胞即开始激活并持续至高峰期,形态学上表现为从正常的细小分枝状逐渐演变为高度分枝状、阿米巴状。免疫组化染色显示TNF-α阳性细胞多为小胶质细胞。EAE大鼠发病前脑组织中小胶质细胞、TNF-α阳性细胞数及外周血TNF-α水平已升高并持续至高峰期。结论小胶质细胞活化伴随EAE发病的整个过程。活化后的小胶质细胞可能通过合成和释放多种炎症介导物及细胞因子如TNF-α,进一步扩大炎症反应,进而促使髓鞘病变。     

Spatiotemporal Patterns of Dexamethasone-Induced Ras Protein 1 Expression in the Central Nervous System of Rats with Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Dexamethasone-induced Ras protein 1 (Dexras 1), a brain-enriched member of Ras subfamily of guanosine triphosphatases, as a novel physiologic nitric oxide (NO) effector, anchor neuronal nitric oxide synthase (nNOS) that could form a ternary complex with carboxy-terminal PDZ ligand of nNOS (CAPON) and nNOS, to specific targets to enhance NO signaling. The present study was to explore the expression pattern of Dexras 1 in the development of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), an animal model for multiple sclerosis. Western blot and immunochemistry analysis showed that the gene and protein expression of Dexras 1 in the central nervous system (CNS) of rats increased significantly during the process of EAE compared with control groups (p < 0.01) and maintain a high level in the remission period. The protein expressions of nNOS and CAPON in hippocampus were approximately paralleled Dexras 1. Immunofluorescence revealed that both neurons and glial cells expressed the Dexras 1 in EAE CNS. Importantly, the damaged CNS in EAE-affected rats showed the codistribution between Dexras 1 and caspase 3, indicating the role of Dexras 1 played in the apoptotic process in EAE. Furthermore, colocalizations of Dexras 1 were observed in neurons and glial cells in CNS with nNOS or CAPON, supporting the ternary complex in this model. Thus, these findings suggest the postulation that Dexras 1 might participate into CNS neuronal cell death and demyelination in the whole process of EAE through regulating the NO signaling by binding to nNOS and CAPON.     

2-BFI对EAE小鼠血脑屏障通透性和AQP4 mRNA表达的影响

目的观察2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠血脑屏障和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达的影响。方法 C57BL/6小鼠39只随机分为正常对照组、EAE组和2-BFI干预组。各组每日进行神经功能缺损评分;第20天进行病理学检查;伊文思蓝荧光定量方法检测血脑屏障通透性;电子显微镜观察血脑屏障的超微结构变化;Real-time PCR法测定AQP4 mRNA的表达水平。结果与EAE组比较,2-BFI干预组小鼠神经功能缺损及血脑屏障病理损伤减轻,AQP4 mRNA的表达水平明显降低,均差异有统计学意义。结论 2-BFI对EAE小鼠的神经保护作用与减少AQP4 mRNA的表达、减轻血脑屏障通透性有关。     

己酮可可碱对实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的：观察己酮可可碱抑制急性EAE豚鼠发病,病情程度,以及对血清TNF,IL－6活性和PRL水平的影响。方法：将EAE模型豚鼠随机分为处理组和对照组,分别肌注己酮可可碱30mg/(kg.d)和等容量生理盐水,观察发生EAE的数目,临床评分,病灶计数及检测血清TNF,IL－6活性及血清PRL水平,并对数据进行显著性检验和相关性分析。结果：处理组豚鼠发病数减少,临床表现及病理变化明显减轻,血清TNF,IL－6活性及PRL水平较对照组显著降低。结论：己酮可可碱可能通过抑制TNF活性抑制EAE的发病。