黄芩苷元选择性诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究黄芩苷元诱导人白血病细胞凋亡的作用及机理。方法MTT法测细胞毒活性，Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡小体形成，流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测凋亡峰及细胞周期，同时流式细胞仪检测细胞Bcl-2，Fas和Caspase 3蛋白表达情况。结果黄芩苷元能选择性抑制人白血病K562细胞生长且呈浓度依赖关系，并能诱导细胞凋亡，细胞增殖被阻滞于S期；同时细胞Fas和Caspase 3蛋白表达增高，而Bcl-2蛋白表达不变。结论黄芩苷元能激活Caspase 3蛋白表达，诱导人白血病K562细胞凋亡且呈时效量效关系，此作用与Fas蛋白表达上调有关，与Bcl-2蛋白表达无关。     

白花前胡甲素联用低浓度紫杉醇对卵巢癌细胞紫杉醇耐药株A2780/TAX的作用研究

目的: 探讨白花前胡甲素(praeruptorin A, PA)增强卵巢癌A2780/TAX细胞对紫杉醇化疗敏感性的作用及机制,为卵巢癌的减毒增敏治疗提供新思路。方法: 体外培养A2780/TAX细胞,分组(对照组、紫杉醇组、PA组、PA+紫杉醇组)干预;噻唑蓝溴化四唑(MTT)法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法检测细胞毒性;克隆形成实验评价细胞增殖能力;流式细胞术Annexin V-FITC/ PI双染法检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹实验检测Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase 3、Caspase 3、Cleaved PARP、PARP及 MMP9、MMP2的蛋白表达水平;划痕实验检测细胞迁移情况。结果: PA与低浓度紫杉醇联用显著抑制A2780/TAX细胞活力和增殖能力;流式细胞术Annexin V-FITC/ PI双染结果显示,联用组的细胞凋亡率显著高于紫杉醇单用组;蛋白免疫印迹结果显示,与对照组、紫杉醇组相比,PA与低浓度紫杉醇联用能显著降低Bcl-2、Caspase 3、PARP、MMP9、MMP2蛋白表达量,提高Bax、Cleaved Caspase 3和Cleaved PARP蛋白水平;划痕实验结果显示,PA与低浓度紫杉醇联用能抑制A2780/TAX细胞迁移。结论: PA与低浓度紫杉醇联用可抑制A2780/TAX细胞活力和增殖能力,诱导细胞凋亡,并通过下调MMP9和MMP2表达抑制细胞迁移。     

半胱氨酸酶3和Bcl-2在三氧化二砷诱导Namalwa细胞凋亡过程中的表达及意义

目的:了解半胱氨酸酶3(Caspase 3)和Bcl-2在三氧化二砷(As2O3)诱导Burkitt’s淋巴瘤细胞系Namalwa凋亡效应中的作用。方法:琼脂糖凝胶电泳法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡。应用Caspase 3抑制剂DEVD-CHO和As2O3共同处理细胞,检测Caspase 3和Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:As2O3使Namalwa细胞Caspase 3表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。DEVD-CHO能抑制细胞凋亡,但不影响As2O3诱导Bcl-2蛋白表达水平降低的效应。结论:Caspase 3激活可能是As2O3诱导Namalwa细胞凋亡的机制之一。     

儿茶素对人肝癌细胞HepG2的影响

目的研究儿茶素[(+)-catechin,Cat]不同时间、不同浓度对人肝癌细胞(HepG2)的增殖、迁移能力的抑制及诱导凋亡作用。方法 HepG2细胞分别与不同浓度Cat作用,MTT法检测细胞增殖率的变化,显微镜观察细胞形态学变化,划痕法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色法检测HepG2的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 Cat(4~100mg·mL-1)能明显抑制人肝癌细胞HepG2的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示Cat(4mg.L-1)作用于HepG2细胞24h即可诱导细胞凋亡。免疫组织化学结果显示Cat(4~20mg·mL-1)的Bax和Caspase-3的表达呈浓度依赖性升高,而Bcl-2的表达呈浓度依赖性降低。结论 Cat可以一定程度的抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与其下调HepG2细胞内Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,从而促进Caspase-3活化有关。     

NF-κB和MAPK信号通路参与金雀异黄酮诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

目的探讨金雀异黄酮(genistein)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的可能机制。方法采用MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;集落形成法观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞集落形成能力的影响;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3及NF-κB、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间、浓度依赖性抑制乳腺癌MDAMB-231细胞增殖;集落形成实验结果显示,金雀异黄酮能明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的集落形成(P<0.05);Western blot结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组相比,Bcl-2、NF-κB、p-ERK蛋白表达水平明显下调(P<0.05),Bax、caspase-3、p-JNK蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论金雀异黄酮能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制NF-κB、ERK,激活JNK信号转导通路有关。     

Hsp90抑制剂HDN-1诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡的研究

目的：探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人急性粒细胞白血病NB4细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制。方法：采用MTT法检测HDN-1对NB4细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33324染色,Western Blot实验,流式细胞仪检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果：HDN-1能显著抑制NB4细胞的增殖,并呈剂量－时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化且流式细胞仪分析表明NB4细胞凋亡数量明显增加;HDN-1可引起Caspase-3, 8, 9激活,bid减少,线粒体中凋亡蛋白Bcl-2, Mcl-1的表达降低,以及γ-H2AX、Parp剪切带增加。但是NB4细胞中融合蛋白PML-RARα的表达不能被HDN-1所抑制。结论：HDN-1诱导凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导的,PML-RARα不是Hsp90的客户蛋白,其诱导凋亡机制可能是通过抑制Hsp90的其它蛋白表达进行的。     

熊果酸对HL-60细胞株凋亡及Bcl-2和bax表达的影响

目的探讨熊果酸(UA)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡作用,并观察Bcl-2和bax基因表达的影响。方法体外培养HL-60细胞。MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期分布;Western Blot分析Bcl-2和bax基因表达。结果 UA显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性;UA呈浓度依赖性诱导HL-60细胞凋亡,明显阻滞于细胞周期G1期;UA以浓度依赖方式下调Bcl-2蛋白表达和上调bax蛋白表达。结论 UA抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制与下调Bcl-2上调bax蛋白表达相关。     

喜树碱(CPT)诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡及其机制的研究

目的测定不同浓度的喜树碱(CPT)对前列腺癌PC-3细胞的促凋亡作用,并进一步探讨其促凋亡机制。方法人前列腺癌PC-3细胞,加入不同浓度的CPT(10~100μmol/L),继续培养24 h。采用形态学观察及MTT方法检测细胞增殖,流式细胞仪测细胞早期凋亡率。Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3和PARP的表达。结果形态学观察及MTT试验显示,不同浓度的CPT可导致PC-3细胞形态改变,并对其生长有明显抑制作用,具有剂量依赖性,其IC50为23.25μmol/L;细胞凋亡检测表明不同浓度的CPT可使早期凋亡比率增加。Western blot结果显示,不同浓度CPT可使PC-3细胞Bcl-2蛋白表达降低,而Bax和Cleaved Caspase-3蛋白,89-k Da PRPP蛋白表达增加且呈剂量依赖性。结论 CPT可以诱导PC-3细胞凋亡,其作用机制可能为激活Caspase依赖途径,并活化其作用底物PARP来实现。     

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭影响机制研究

目的观察白藜芦醇对肝癌细胞Bel-7404增殖、凋亡、侵袭影响,并研究其内在分子机制。方法采用MTT法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;Transwell法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭的影响。蛋白免疫印迹实验检测Pro-caspase 3,PARP,MMP-9及VEGF的表达。结果白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞增殖,呈时间和浓度依赖性。白藜芦醇可以诱导Bel-7404细胞凋亡,呈浓度依赖性,与下调Procaspase3和PARP蛋白表达有关。白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞侵袭性,呈浓度依赖性,与下调MMP-9、VEGF蛋白表达有关。结论白藜芦醇可以抑制肝癌Bel-7404细胞增殖、通过剪切Procaspase3,PARP蛋白而诱导凋亡,通过下调MMP-9和VEGF蛋白表达水平而抑制Bel-7404细胞侵袭性。     

蛇床子素通过PI3K/Akt通路诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡

目的探讨蛇床子素(osthole或osthol)能否通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。方法体外培养外阴鳞癌SW962细胞,加入不同浓度蛇床子素,MTT法检测细胞存活情况,DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测SW962细胞凋亡情况; Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、PI3K和p-Akt蛋白表达,及蛇床子素和IGF-1共作用下PI3K/Akt通路蛋白的变化。结果 MTT结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性地抑制SW962细胞增殖;DAPI染色和流式细胞术结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡。Western blot结果显示,蛇床子素能上调Bax和cleaved caspase-3蛋白表达,下调PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达。IGF-1诱导PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达增加,蛇床子素逆转IGF-1作用,3种蛋白表达下调。结论蛇床子素通过抑制PI3K/Akt通路,诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

2-甲基-正丁酰紫草素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制的研究

2-甲基-正丁酰紫草素[(2-methyl-n-butyl)shikonin,MBS,图1]是从紫草科植物紫草的根部提取得到的一个萘醌类化合物。研究表明,紫草素具有抗炎、抗菌、抗肿瘤的作用[1?3]。体外实验证实紫草素通过增加caspase-3的活化诱导多种肿瘤细胞的凋亡,如白     

槲皮素通过靶向GAS5/Notch1信号通路促进乳腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨槲皮素对乳腺癌细胞促凋亡作用的可能机制。方法用槲皮素处理乳腺癌MCF-7细胞后,采用MTT法检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖克隆能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;同时,分别采用槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)、GAS5小干扰RNA(siGAS5)、槲皮素(80μmol·L^-1)协同siGAS5处理细胞后,qRT-PCR法和Western blot法检测GAS5、Notch1、Jagged1、Hes1、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)处理MCF-7细胞后,发现40μmol·L^-1槲皮素可明显抑制增殖,而80、160μmol·L^-1槲皮素不仅明显抑制增殖且诱导凋亡;槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)可上调GAS5、Bax和Caspase-3的表达,下调Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2的表达;细胞转染siGAS5后,与sncRNA组相比,GAS5、Bax和Caspase-3表达下调,Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2表达上调;当siGAS5与槲皮素(80μmol·L^-1)共处理细胞后,与sncRNA加槲皮素对照组相比,GAS5、Bax和Caspase-3表达下调,Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2上调。结论槲皮素通过靶向GAS5/Notch1信号通路促进乳腺癌细胞凋亡。     

顺铂诱导人宫颈鳞癌细胞Caski细胞凋亡的分子机制

目的研究顺铂对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究顺铂诱导宫颈鳞癌细胞凋亡的分子机制。方法运用体外细胞培养,顺铂以不同浓度（20、10、5、2、1μg/ml）作用于人宫颈癌Caski细胞。采用噻唑蓝（MTT）法测定顺铂对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNALadder现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果顺铂对人宫颈癌Caski细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使Caski细胞G2/M期比例明显下降（P〈0.01）,S期比例升高（P〈0.01）;诱导细胞凋亡发生;顺铂作用Caski细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论顺铂在体外可有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡分子机制与Bcl-2家族表达调控,线粒体膜跨膜电位下降的线粒体参与凋亡途径相关。     

一种新的吲哚咔唑类化合物(ZWM233)的体外抗肿瘤作用及机制探讨

目的探讨ZWM233体外对多种肿瘤细胞株的增殖抑制及对K562细胞的凋亡诱导作用。方法采用MTT法检测ZWM233对K562、HL-60、A549、HeLa及HCT-116等10种肿瘤细胞株的增殖抑制作用;流式细胞仪检测对K562细胞周期的影响;AnnexinV/PI双染法考察对K562细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测K562细胞中凋亡相关蛋白bax、bcl-2、Caspase-3、Caspase-9及PARP的变化,同时检测蛋白激酶C(PKC)各亚型、GSK-3β、ERK1/2、JNK及其磷酸化水平的变化。结果 ZWM233体外能有效抑制多种肿瘤细胞株的增殖,其中对K562细胞作用明显,IC50为2.81μmol.L-1;流式细胞仪检测K562细胞被明显阻滞在G2/M期,并诱导其凋亡;Western blot结果显示ZWM233作用K562细胞24 h后,可明显下调抗凋亡蛋白bcl-2的表达,引起Caspase-9、Caspase-3及下游底物PARP的剪切,诱导K562细胞凋亡。Western blot检测结果进一步显示药物作用24 h后PKCδ的表达有所降低,其下游分子p-GSK-3β及p-ERK的表达水平降低,而p-JNK蛋白的表达水平升高。结论ZWM233体外能有效抑制K562细胞生长,并通过激活线粒体途径诱导其凋亡,其机制可能是通过下调PKCδ,进一步抑制p-GSK-3β及p-ERK1/2的表达来发挥凋亡诱导作用。     

去氧鬼臼毒素抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖和 体外迁移的研究

摘要： 目的 探讨去氧鬼臼毒素对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的影响, 并初步探讨其作用机制。方 法 应用 CCK-8 法、 流式细胞术、 细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 NCI-H358 细胞增殖、 周期 分布、 凋亡、 体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响, 并通过 Western blot 检测去氧鬼臼毒素对细胞周期蛋白 （Cyclin） B1、 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 （Cdc25c）、 细胞周期蛋白依赖性激酶 （CDK） 1、 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （Caspase） -3、 p53 肿瘤蛋白、 B 淋巴细胞瘤 （Bcl） -2 和基质金属蛋白酶 （MMP） 9 的表达水平, 以及细胞外信号调节激 酶（ERK） 1/2、 p38 分裂原激活蛋白激酶（MAPK）和 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平的影响。结果 去氧鬼 臼毒素能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞的生长, 流式细胞结果显示其能诱导细胞停滞在 G2/M 和 S 期, 诱导细胞凋 亡和细胞 ROS 产生, 同时细胞体外迁移能力也明显下调。Western blot 结果显示, 去氧鬼臼毒素能使 Cyclin B1、 Cdc25c、 CDK1、 Bcl-2 和 MMP9 的蛋白表达明显下调, 而 Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 且 ERK1/2、 p38MAPK 和 JNK 的磷酸化水平明显受到抑制。结论 去氧鬼臼毒素可抑制肺癌 NCI-H358 细胞的增殖和体外迁移, 是一种潜在 的抗肿瘤药物     

Nanoparticle realgar powders induce apoptosis in u937 cells through caspase mapk and mitochondrial pathways

Nanoparticle realgar powders (NRP) inhibited U937 cell growth in a time and dose-dependent manner. U937 cells treated with NRP showed typical characteristics of apoptosis including the morphological changes and DNA fragmentation. Caspase family inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-8, -9 inhibitor (z-IETD-fmk, Ac-LEHD-CHO, respectively) and caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) partially prevented NRP -induced apoptosis. Moreover, the classical substrates of caspase-3, poly-ADP ribose polymerase (PARP) was degraded after U937 cells treatment with NRP. In addition, NRP increased the ratio of Bax/Bcl-2 protein expression. Although p38 inhibitor (SB203580) and ERK inhibitor (PD98059) failed to block cell death, JNK inhibitor (SP600125) had marked inhibitory effects on NRP -induced apoptosis. Furthermore, the phosphorylation of JNK was up-regulated, suggesting that JNK was responsible for NRP -induced apoptosis in U937 cells. These results suggested that the caspase, mitochondria and MAPK signal pathways were involved in NRP-induced U937 apoptosis.     

全反式维甲酸联合阿司匹林对体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖和促凋亡的作用及其机制

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）联合阿司匹林（ASA）体外抑制肺癌A549细胞增殖,促凋亡作用和机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞,5,10 μmol·L^-1的ATRA单独及分别联合5,10 μmol·L^-1的ASA进行干预48 h、72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法观测药物作用48 h后细胞凋亡状态;RT-PCR法检测药物作用后肺腺癌A549细胞COX-2 mRNA的表达;Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、COX-2和caspase-3蛋白的表达。结果： ATRA与ASA联用对A549增殖具有协同作用;TUNEL法结果显示ATRA可诱导A549细胞凋亡,与ASA联用凋亡率显著升高（P<0.05）;RT-PCR显示A579细胞中COX-2 mRNA呈现高表达状态,ASA可下调COX-2表达,ATRA无此作用;Western blot结果显示ATRA和ASA协同作用使A549细胞中Bcl-2、COX-2蛋白表达受到抑制,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax值降低,对凋亡通路的影响大于单药作用（P<0.05）。结论： ASA联合ATRA可协同抑制肺腺癌细胞A549的增殖及以及促进其发生凋亡,其作用机制可能是ASA通过抑制COX-2蛋白表达,与ATRA共同通过Bcl/caspase通路诱导肿瘤凋亡实现的。     

番荔枝内酯诱导白血病细胞凋亡的机理

目的　研究番荔枝内酯(squamocin)诱导白血病细胞凋亡的机理。方法　DNA凝胶电泳法、荧光染色等检测细胞凋亡。试剂盒检测caspase-3的活性。Westernblot法检测PARP和caspase-3的剪切片断和磷酸化的SAPK/JNK量的变化。结果　Squamocin处理HL-60细胞后,导致染色质浓缩、片断化,DNA梯形条带出现,完整PARP的116ku条带逐渐减少,而85ku的片断逐渐增加,caspase-3酶的活性也增加。Caspase-3的特异性抑制剂DEVD-CHO预处理HL-60细胞,可阻止squamocin诱导的DNA片断化、PARP的剪切和细胞死亡。Squamocin激活HL-60细胞中SAPK/JNK。结论　Squamocin诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,squamocin激活caspase-3可能与SAPK/JNK的激活相关