miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27增殖和凋亡的影响

该文检测了人胃癌血清和胃癌细胞HGC-27中miR-181b-5p的水平,并研究了miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27增殖和凋亡能力的影响,以探讨miR-181b-5p在胃癌发生和发展中可能的作用。荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测胃癌患者和健康人群血清中miR-181b-5p的水平以及胃癌细胞HGC-27和胃黏膜细胞GES-1中miR-181b-5p的水平,采用脂质体瞬时转染技术将miR-181b-5p抑制剂(inhibitors)以及inhibitors阴性对照分别转入胃癌细胞HGC-27中,用q RTPCR验证转染后miR-181b-5p的水平,CCK-8法检测miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27的增殖能力的影响,流式细胞术检测转染后胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的变化。q RT-PCR结果显示,胃癌患者血清中miR-181b-5p的水平高于健康人群(P0.05);胃癌细胞HGC-27中miR-181b-5p的水平显著高于胃黏膜细胞GES-1中的水平(P0.01);转染miR-181b-5p inhibitors后其miR-181b-5p的水平显著低于inhibitors阴性对照组(P0.01)。CCK-8结果显示,将miR-181b-5p的水平下调后,胃癌细胞HGC-27的增殖能力明显下降(P0.01)。流式细胞术检测结果显示,转染miR-181b-5p inhibitors后,胃癌细胞HGC-27的凋亡率显著增高(P0.01)。细胞周期检测结果显示,转染miR-181b-5p inhibitors后,其S期明显缩短,G2/M期延长,细胞增殖受到抑制。以上结果表明,血清miR-181b-5p可能作为胃癌早期诊断的一个分子肿瘤标志物;miR-181b-5p在胃癌的发生和发展过程中可能起到癌基因的作用,并有可能作为胃癌分子治疗的一个新靶点。     

miR-1298表达对PC-12细胞糖氧剥夺/复氧损伤的影响及其机制研究

摘要 目的：通过体外细胞培养探讨miR-1298对缺血缺氧性神经损伤的调节作用。方法：首先通过细胞活性检测和乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性法确定大鼠PC-12细胞糖氧剥夺/复氧（OGD/R）的造模效果,同时采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测细胞miR-1298的表达差异。体外转染miR-1298mimic、mimic NC、miR-1298 inhibitor和inhibitor NC至大鼠PC-12细胞系,检测mimic、mimic NC、inhibitor、inhibitor NC的转染效率。经过OGD/R处理后将细胞分为Control组、OGD/R组、mimic组、mimicNC组、inhibitor组和inhibitorNC组。流式细胞术检测各组PC-12细胞凋亡的情况,免疫印迹试验（Western blot）检测各组PC-12细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因（BCL-2）和Bcl-2相关的x基因（Bax）表达的情况。结果：PC12细胞经过OGD/R处理后,其细胞存活率与Control组比明显下降且LDH漏出率明显上升（均P<0.05）;模型细胞中miR-1298相对表达量明显低于Control组（P<0.05）。转染24小时后mimic组细胞中miR-1298的相对表达量明显高于mimicNC组（P<0.05）;mimic组细胞凋亡率低于mimicNC组,而inhibitor组细胞凋亡率高于inhibitor NC组（均P<0.05）;mimic组的BCL-2表达量较mimicNC组升高,而BAX表达量下降,inhibitor组与inhibitorNC组相比,BCL-2表达量下降,而BAX表达量上升,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：miR-1298通过抑制细胞凋亡减轻PC-12细胞OGD/R的损伤。     

miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemES增殖和凋亡的影响及其机制

目的: 研究miR-125b-5p 对人血管瘤内皮细胞HemECs增殖、凋亡的影响。方法: RT-qPCR检测人血管瘤内皮细胞HemECs及其旁系组织细胞中miR-125b-5p与MCL-1 mRNA的表达;选取HemECs细胞分为对照组、miR-NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p inhibitor组、pc-MCL-1组、miR-125b-5p+ pc-MCL-1组,每组设9复孔。将100 nmol · L^-1 的miR-NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p inhibitor 、pc-MCL-1质粒分别或联合转染进入HemECs细胞。MTT法检测HemECs细胞增殖;流式细胞术检测HemECs细胞凋亡; 双荧光素酶报告检测靶向关系;蛋白印迹法检测Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p-p70s6k/ p70s6k、p-AKT/AKT、p-mTOR/ mTOR蛋白相对表达水平。结果: 通过比较miR-125b-5p在血管瘤组织和细胞中的表达水平,选择下调效果比较明显的HemECs细胞系进行后续实验。与对照组相比,miR-125b-5p mimic组HemECs细胞增殖及Ki67和PCNA表达明显减少(P＜0.01),细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax表达明显升高、Bcl-2表达明显降低(P＜0.01),p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K表达明显下调(P＜0.01);miR-125b-5p inhibitor组HemECs细胞增殖及Ki67和PCNA表达明显增加(P＜0.01),细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax表达明显降低、Bcl-2表达升高(P＜0.05,P＜ 0.01)。miR-125b-5p靶向下调MCL-1。与miR-125b-5p mimic组相比,miR-125b-5p+ pc-MCL-1组HemECs细胞增殖及Ki67和PCNA表达明显增加(P＜0.01),细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax表达明显降低、Bcl-2表达明显升高(P＜0.01), p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K表达明显上调(P＜0.01)。结论: miR-125b-5p抑制人血管瘤内皮细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与靶向下调MCL-1表达,抑制AKT / mTOR通路激活等有关。     

miR-374b-5p靶向调控UHMK1对前列腺癌PC-3细胞的影响

[目的]探讨miR-374b-5p调控UHMK1表达对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移及凋亡的作用。[方法]萤光霉素报告检测miR-374b-5p对UHMK1的调控作用,将miR-NC、miR-374b-5p inhibitor和miR-374b-5p mimic转染到前列腺癌PC-3细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,改良的Matrigel Boyden室测定对细胞的侵袭性实施检测,划痕实验对细胞的具体迁移力实施检测,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测miR-374b-5p和UHMK1 mRNA表达,Western Bloting检测UHMK1蛋白表达。[结果]与对照组比较,miR-374b-5p inhibitor组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);miR-374b-5p mimic组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与miR-374b-5p ...     

上调miR-216a-5p通过靶向双特异性磷酸酶10抑制胃癌细胞自噬并增强放射敏感性

摘要 目的：探究miR-216a-5p对胃癌细胞自噬和放射敏感性的调控机制及其对双特异性磷酸酶10（DUSP10）的调控作用。方法：采用直线加速器6-MV X射线照射SGC-7901细胞,剂量率为0.8Gy/min,总剂量为8Gy。用Lipofectamine 2000试剂将miR-216a-5p mimic、NC mimic、pcDNA DUSP10或pcDNA NC转染到SGC-7901细胞中。转染后,将细胞分为miR-216a-5p mimic组和NC mimic组,每组又分为0Gy和8Gy两个亚组。在拯救实验中,将细胞分为miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组和miR-216a-5p mimic+pcDNA NC组。通过qRT-PCR检测miR-216a-5p和DUSP10 mRNA水平。通过5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EdU）掺入实验和集落形成测定检测细胞增殖。通过流式细胞仪评估细胞凋亡。通过Western blot检测DUSP10、Bax、Bad、Bcl-2、LC3和p62的蛋白表达。通过免疫荧光法检测γH2AX的表达,用于评估细胞中的DNA双链断裂（DSB）。通过荧光素酶报告基因检测miR-216a-5p和DUSP10的靶向关系。通过GFP-mRFP-LC3检测自噬体。结果：与8Gy NC-mimic组相比,8Gy miR-216a-5p-mimic组的集落数量、EdU阳性率和Bcl-2蛋白表达水平降低,而γH2AX阳性率、细胞凋亡率和Bax和Bad蛋白表达水平升高（P<0.01）。与8Gy NC-mimic组相比,8Gy miR-216a-5p-mimic组的自噬体数量和LC3II蛋白表达水平降低,而p62蛋白表达水平升高（P<0.001）。与miR-216a-5p-mimic共培养后,与DUSP10-3''-UTR-MUT组相比,DUSP10-3''-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著降低（P<0.001）。与NC-mimic组相比,miR-216a-5p-mimic组的DUSP10 mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.001）。与miR-216a-5p mimic+pcDNA NC组相比,miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组的集落数量和自噬体数量升高,而细胞凋亡率降低（P<0.001）。结论：miR-216a-5p通过抑制DUSP10来抑制细胞增殖、增加放射诱导的细胞凋亡并抑制放射诱导的自噬,从而增强胃癌细胞的放射敏感性。     

环状RNA circMRPS35通过miR-130a-3p/ZNRF3轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

摘要 目的：探讨环状RNA MRPS35（circMRPS35）对胃癌（GC）细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调控机制。方法：体外培养人GC细胞系（HGC-27、MGC-803、MKN45和AGS）和正常胃上皮GES-1细胞,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测circMRPS35、miR-130a-3p和锌环指蛋白3（ZNRF3）mRNA表达。另取MGC-803细胞,分为对照组、pc-NC组、pc-circMRPS35组、pc-circMRPS35+miR-NC组、pc-circMRPS35+miR-130a-3p组,采用Lipofectamine 3000进行质粒转染。RT-qPCR检测circMRPS35、miR-130a-3p和ZNRF3 mRNA表达,Western blot检测ZNRF3蛋白表达,CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力,裸鼠移植瘤实验探究circMRPS35对GC细胞体内生长的影响。双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p与circMRPS35或ZNRF3的靶标关系。结果：GC细胞系中circMRPS35和ZNRF3 mRNA呈低表达,miR-130a-3p呈高表达（均P＜0.05）。过表达circMRPS35可降低miR-130a-3p,上调ZNRF3 mRNA和蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡（均P＜0.05）;circMRPS35过表达对GC细胞恶性行为和裸鼠移植瘤生长的抑制作用可被miR-130a-3p mimic逆转（P＜0.05）。双荧光素酶实验结果显示,过表达miR-130a-3p可降低circMRPS35-WT和ZNRF3-WT的荧光素酶活性（P＜0.05）。结论：circMRPS35可能通过miR-130a-3p/ZNRF3轴抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

lncRNA CBR3-AS1通过调控miR-145-5p影响胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

为探讨lncRNA CBR3-AS1靶向miR-145-5p对胃癌细胞HGC-27恶性生物学行为的影响,该研究先用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测30例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中CBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。然后,将CBR3-AS1干扰表达载体质粒、miR-145-5p模拟物、miR-145-5p抑制剂与CBR3-AS1干扰表达载体质粒转染至胃癌细胞HGC-27;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡流程;Transwell法检测迁移和侵袭的细胞数;双荧光素酶报告实验检测CBR3-AS1和miR-145-5p的靶向关系。实验结果显示,胃癌组织中CBR3-AS1表达水平高于癌旁组织,而miR-145-5p表达水平低于癌旁组织(P0.05)。过表达miR-145-5p或抑制lncRNA CBR3-AS1表达可降低HGC-27细胞活性,减少迁移侵袭细胞数,而提高细胞凋亡率(P0.05)。lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-145-5p;下调miR-145-5p逆转了抑制lncRNA CBR3-AS1表达对HGC-27细胞的作用。因此,抑制lncRNA CBR3-AS1表达可能通过上调miR-145-5p抑制HGC-27细胞的迁移侵袭、增殖,促进细胞凋亡。     

lncRNA CEBPA-AS1靶向miR-455-3p调控胃癌细胞生物学行为的分子机制研究

摘要 目的：探讨lncRNA CEBPA-AS1对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法：qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织与正常人胃上皮GES1细胞和人胃癌SNU-1、AGS、HS-746T细胞系中lncRNA CEBPA-AS1、miR-455-3p的表达量。si-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1、miR-NC、miR-455-3p mimics、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-455-3p分别转染至SNU-1细胞（分别命名为si-NC组、si-lncRNA CEBPA-AS1组、miR-NC组、miR-455-3p组、si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组和si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组）后,MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验与qRT-PCR实验验证lncRNA CEBPA-AS1与miR-455-3p的靶向调控关系,Western blot法检测MMP2、MMP9蛋白表达情况。结果：与癌旁组织比较,胃癌组织中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与GES1细胞比较,SNU-1、AGS、HS-746T细胞中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,其中SNU-1细胞的lncRNA CEBPA-AS1表达量最高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与si-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与miR-NC组比较,miR-455-3p组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。lncRNA CEBPA-AS1可靶向结合miR-455-3p,并可负调控miR-455-3p的表达。与si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组细胞活力升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增多,MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：干扰lncRNA CEBPA-AS1表达可通过靶向调控miR-455-3p而抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。     

MiR-18b-5p对人滋养细胞系HTR-8细胞迁移功能的影响

目的:通过研究子痫前期胎盘组织中低表达的miR-18b-5p(微小RNA18b-5p)对人滋养细胞系HTR-8迁移能力的影响,进一步探讨miR-18b-5p在子痫前期发病过程中的作用。方法:将化学合成的miR-18b-5p inhibitor、miR-18b-5p inhibitor NC,采用瞬时转染的方法将miR-18b-5p inhibitor转入人滋养细胞系HTR-8中设为实验组;miR-18b-5p inhibitor NC转入HTR-8细胞中设为阴性对照组;空白转染组为空白对照组。应用Realtime RT-PCR技术检测各组miR-18b-5p在mRNA水平的表达,同时采用微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell实验)检测实验组与对照组细胞迁移能力的变化。结果:Realtime RT-PCR结果显示:转染miR-18b-5p inhibitor后miR-18b-5p的表达量分别与阴性对照组和空白对照组相比明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。Transwell实验结果显示miR-18b-5p inhibitor组与两对照组相比细胞的迁移能力明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:在HTR-8细胞中降调节miR-18b-5p可以显著的降低细胞的迁移能力,推测病理性低表达的miR-18b-5p有可能通过降低滋养细胞的迁移能力,使妊娠早期细胞滋养细胞从固体绒毛顶端迁出减少,导致覆盖合体滋养细胞进而形成具有增殖能力的细胞簇减少,最终造成滋养层浅表植入,从而引起子痫前期的发生。     

miR-142通过靶向HMGB1对宫颈癌细胞生物学行为影响的实验研究

摘要 目的：通过实验探究miR-142靶向高迁移率族蛋白1（high-mobility group box 1 protein,HMGB1）对宫颈癌（cervical cancer,CC）细胞生物学行为的影响及其潜在的作用机制。方法：采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测CC组织和正常组织中miR-142和HMGB1 mRNA及蛋白表达水平,采用荧光素酶报告实验分析miR-142与HMGB1的靶向关系,CCK-8法检测CC细胞生存能力,克隆形成实验检测CC细胞增殖能力,划痕修复实验检测CC细胞迁移能力,基质胶侵袭实验检测CC细胞侵袭能力。结果：CC组miR-142 mRNA和蛋白表达水平显著低于正常组（P<0.05）,HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组（P<0.05）,且CC癌组织中miR-142和HMGB1 mRNA和蛋白表达水平均呈显著负相关（r=-0.399,P=0.002;r=-0.429,P=0.001）;miR-142与HMGB1存在靶向关系;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,miR-142 mimic组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著低于miR-NC组（P<0.05）,miR-142 inhibitor组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-NC组;Western Blot实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组HMGB1蛋白表达水平显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）。结论：miR-142可通过靶向负调控HMGB1表达,进而抑制CC细胞生存、增殖、迁移和侵袭。     

MicroRNA-137 Contributes to Dampened Tumorigenesis in Human Gastric Cancer by Targeting AKT2

MiRNAs play important roles in tumorigenesis. This study focused on exploring the effects and regulation mechanism of miRNA-137 on the biological behaviors of gastric cancer. Total RNA was extracted from tissues of 100 patients with gastric cancer and from four gastric cancer cell lines. Expression of miR-137 was detected by real-time PCR from 100 patients. The effects of miR-137 overexpression on gastric cancer cells’ proliferation, apoptosis, migration and invasion ability were investigated in vitro and in vivo. The target gene of miR-137 was predicted by Targetscan on line software, screened by dual luciferase reporter gene assay and demonstrated by western blot. As a result, the expression of miR-137 was significant reduced in gastric cancer cell line HGC-27, HGC-803, SGC-7901 and MKN-45 as well as in gastric cancer tissues compared with GES-1 cell or matched adjacent non-neoplastic tissues (p<0.001). The re-introduction of miR-137 into gastric cancer cells was able to inhibit cell proliferation, migration and invasion. The in vivo experiments demonstrated that the miR-137 overexpression can reduce the gastric cancer cell proliferation and metastasis. Bioinformatic and western blot analysis indicated that the miR-137 acted as tumor suppressor roles on gastric cancer cells through targeting AKT2 and further affecting the Bad and GSK-3β. In conclusion, the miR-137 which is frequently down-regulated in gastric cancer is potentially involved in gastric cancer tumorigenesis and metastasis by regulating AKT2 related signal pathways.     

外周血miR-17-92基因簇对于早期胃癌的诊断及预测价值

目的:探讨外周血mi R-17-92簇对早期胃癌的诊断价值,为胃癌的早期诊断及治疗提供参考依据。方法:收集胃癌125例(Ⅰ期35例,Ⅱ期28例,Ⅲ期39例,Ⅳ期23例)和癌前病变24例(包括肠化生及上皮内瘤变),同时选择65例慢性胃炎作为对照组。采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测患者血清中的mi R-17-92基因簇的表达水平。通过受试者工作曲线(Receiver Operating Curve, ROC)及曲线下的面积(Area Under the Curve,AUC)评估mi R-17-92基因簇表达水平诊断早期胃癌的敏感性和特异性。结果:(1)慢性胃炎与癌前病变mi R-17-92基因簇表达比较无显著差异(P0.05);(2)早期胃癌及进展期胃癌mi R-17-5p表达明显高于慢性胃炎(P0.05),mi R-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p和mi R-92a-3p表达则显著低于慢性胃炎及进展期胃癌(P0.05);(3)miR-17-5p诊断早期胃癌的曲线下面积较mi R-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p及CEA更高;(4)miR-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p高低表达组与在胃癌的浸润深度间有显著性差异(P0.05),mi R-19b-3p高低表达组在胃癌的临床分期间有显著性差异(P0.05);(5)miR-17-5p、mi R-19a-3p、mi R-19b-p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p诊断早期胃癌的阳性率较CEA、CA199高。结论:外周血mi R-17-92基因簇对于早期胃癌的诊断价值明显优于CEA和CA199,这可能为胃癌的早诊早治提供新的策略。     

Downregulation of microRNA-92b-3p suppresses proliferation,migration, and invasion of gastric cancer SGC-7901 cells by targeting Homeobox D10

To investigate the effect and mechanism of microRNA-92b-3p (miR-92b-3p) targeting Homeobox D10 (HOXD10) on proliferation, migration, and invasion of gastric cancer, we detected t he expression of miR-92b-3p and HOXD10 in SGC-7901 cells. The effects of miR-92b-3p or HOXD10 on proliferation, migration, invasion, and matrix metalloproteinase (MMP)-2/9 expression in SGC-7901 cells were measured by the Cell Counting Kit-8 assay, Transwell assay, and Western blot, respectively. The results showed that miR-92b-3p expression was increased, and HOXD10 expression was decreased in SGC-7901 cells, compared with human normal gastric epithelial cells GES-1. Functional experiments demonstrated that cell proliferation, migration, invasion, and expression of MMP-2/9 in SGC-7901 cells were significantly inhibited by miR-92b-3p silencing and HOXD10 overexpression. Moreover, HOXD10 was a potential target gene of miR-92b-3p as evidenced by the TargetScan software and double luciferase reporter assay. In the rescue experiment, knockdown of HOXD10, accompanied by higher expression of MMP-2/9, could significantly eliminate the inhibitory effects of miR-92b-3p silencing on cell proliferation, migration, and invasion. In conclusion, miR-92b-3p is highly expressed in gastric cancer SGC-7901 cells, and interfering with its expression might inhibit SGC-7901 cell proliferation, migration, and invasion via downregulating MMP-2/9 expression and targeting HOXD10.     

Bone marrow mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNA-19b-1-5p reduces proliferation and raises apoptosis of bladder cancer cells via targeting ABL2

BackgroundExosomes are involved in intercellular communication via specialized molecular cargo, such as microRNAs (miRNAs). However, the mechanisms underlying exosomal miR-19b-1-5p in bladder cancer remain largely unknown, thus, we aim to investigate the effect of exosomal miR-19b-1-5p on bladder cancer with the involvement of non-receptor protein tyrosine kinase Arg (ABL2).MethodsmiR-19b-1-5p and ABL2 expression were tested in bladder cancer. miR-19b-1-5p inhibition/elevation assays were conducted to determine its role in bladder cancer. Exosomes were extracted from bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). Exosomes and T24 cells were co-cultured to verify their function in biological characteristics of bladder cancer cells.ResultsmiR-19b-1-5p was down-regulated while ABL2 was upregulated in bladder cancer. Exosomal miR-19b-1-5p suppressed malignant behaviors of bladder cancer cells, and also inhibited tumor growth in vivo. Up-regulated ABL2 mitigated the effects of miR-19b-1-5p up-regulation on bladder cancer cells.ConclusionBMSCs-derived exosomal miR-19b-1-5p suppresses bladder cancer growth via decreasing ABL2.     

Mir-335-5p靶向G6PD对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的: 探讨Mir-335-5p通过靶向G6PD对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法: 设置正常结肠细胞组、空白对照组、NC组、miRNA-335-5p mimic组;体外培养结肠上皮细胞(IEC)和人源性结肠癌细胞SW480,并对NC组、miRNA-335-5p mimic组细胞进行转染;采用RT-qPCR检测各组细胞中miR-335-5p及G6PD mRNA表达水平;双荧光素酶报告实验验证Mir-335-5p对G6PD靶向作用;MTT实验检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测转染后各组细胞凋亡率;Western blot检测G6PD及凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase3相对表达水平。结果: 与正常结肠细胞相比,空白对照组、NC组结肠癌细胞SW480细胞中miR-335-5p相对表达水平降低,G6PD mRNA相对表达水平升高(P＜0.05);与空白对照组、NC组相比,miR-335-5p mimic组细胞miR-335-5p表达水平明显升高,G6PD mRNA表达水平显著降低(P＜0.05)。与空白对照、NC组相比,miR-335-5p mimic组结肠癌SW480细胞生长活性显著降低,凋亡率显著升高(P＜0.05)。miR-335-5p mimic+WT-G6PD 3′-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-335-5p NC+WT-G6PD 3′-UTR组(P＜0.05)。与空白对照组相比,miR-335-5p mimic组细胞中G6PD、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,Bax、caspase3蛋白表达水平显著升高(P＜0.05)。结论: Mir-335-5p可能通过靶向G6PD抑制结肠癌细胞增殖、促进凋亡。     

下调UCA1通过靶向miR-23b及其下游靶基因抑制胃癌细胞的增殖和转移

摘要 目的：探讨长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1（UCA1）调控胃癌细胞增殖和转移的分子机制。方法：将人胃癌细胞株SGC7901分为：对照组、siRNA-NC组、siRNA-UCA1组、inhibitor-NC组和miR-inhibitor组、si-UCA1+inhibitor-NC组和si-UCA1+miR-inhibitor组。对SGC7901细胞分别转染siRNA-UCA1及阴性对照（siRNA-NC）、miR-inhibitor及阴性对照（inhibitor-NC）,未转染的细胞作为对照组。通过RT-qPCR检测细胞中UCA1和miR-23b-3p的水平。通过CCK-8法、伤口愈合实验和Transwell实验评价细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过Western blot分析细胞中IL6R、BCL2和HSP90B1蛋白的表达。使用pcDNA-UCA1/pcDNA-NC与pGL3-miR-23b-3p-WT/pGL3-miR-23b-3p-Mut共转染细胞,通过双荧光素酶报告实验验证UCA1与miR-23b-3p的靶向关系。结果：细胞培养48 h和72 h后,与对照组比较,siRNA-UCA1组的细胞活力分别降低了31.58%和31.40%（P<0.05）。与对照组比较,siRNA-UCA1组的细胞迁移率[(61.46±5.43)% vs (23.16±3.17)%]、侵袭细胞数量（109.17±9.66 vs 50.83±6.96）、IL6R、BCL2和HSP90B1的蛋白相对表达量均显著降低,而miR-23b-3p相对表达量升高（P<0.05）。与pGL3-miR-23b-3p-WT共转染后,与pcDNA-NC组比较,pcDNA-UCA1组的相对荧光酶活性降低了66.12%（P<0.05）。与si-UCA1+inhibitor-NC组比较,si-UCA1+miR-inhibitor组的细胞活力、细胞迁移率、侵袭细胞数量、IL6R、BCL2和HSP90B1的蛋白相对表达量均显著升高（P<0.05）。结论：下调UCA1通过靶向miR-23b-3p及其下游基因IL6R、BCL2和HSP90B1来抑制胃癌细胞的增殖和转移。     

miR-135b-5p抑制脓毒症引起的小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制*

目的: 探究miR-135b-5p在小鼠脓毒症(sepsis)引起的急性肺损伤(ALI)模型中的表达水平及其对小鼠肺部炎症反应和细胞焦亡的影响。方法: 将C57BL/6小鼠随机分为6组,每组8只,通过盲肠结扎穿刺法(CLP)手术构建CLP诱导的脓毒症小鼠模型:腹腔注射0.1 mg/kg的巴比妥麻醉,腹部纵向切开暴露盲肠,结扎盲肠并用注射器针头进行穿孔,挤出部分肠道内容物后缝合伤口。假手术组(Sham组)开腹后不做任何处理缝合伤口,无CLP手术处理。治疗组分为CLP+NC mimic组,CLP+miR-135b-5p mimic组,CLP+NC mimic+empty vector组,CLP+消皮素D (GSDMD)组,CLP+miR-135b-5p mimic+GSDMD组。治疗组小鼠在CLP手术前一周皮下注射200 μl溶解于生理盐水的NC mimic(200 nmol/L),miR-135b-5p mimic(200 nmol/L),empty vector(100 nmol/L),GSDMD vector(100 nmol/L),每天注射1次,连续一周。术后24 h采用二氧化碳窒息法实施安乐死。采用qRT-PCR检测小鼠肺组织样本中miR-135b-5p和GSDMD mRNA的表达水平;苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠肺组织形态和损伤状态;采用5 ml生理盐水冲洗小鼠右肺3次,每次持续约3~5 min,收集肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中GSDMD、白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)的表达水平;蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织内含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase 1)以及切割后的N-端GSDMD端蛋白结构域(cleaved-GSDMD-N)的表达水平。双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-135b-5p与GSDMD的靶向结合关系。结果: 与对照组相比,CLP组小鼠肺组织中有大量的炎症细胞浸润,肺泡损伤,细胞间质水肿及肺泡塌陷等病理特征,小鼠肺组织内细胞焦亡相关蛋白(NLRP3,caspase-1和GSDMD)的表达水平明显增加(P<0.01),但miR-135b-5p的表达水平明显下调(P<0.01);与CLP组相比,超表达miR-135b-5p能够明显抑制CLP诱导的小鼠肺组织内细胞焦亡(P<0.01),靶向抑制GSDMD的表达水平(P<0.01);超表达GSDMD能够逆转超表达miR-135b-5p对肺组织细胞焦亡的抑制作用(P<0.01),超表达miR-135b-5p能够通过靶向GSDMD抑制小鼠BALF中IL-1β及IL-18的表达水平(P<0.01)。结论: miR-135b-5p靶向下调GSDMD抑制细胞焦亡,改善脓毒症引起的ALI,为脓毒症诱导的ALI治疗提供了潜在的治疗靶点和理论依据。