大豆异黄酮和壬基酚对雄性大鼠生殖系统的联合作用

[目的]探讨大豆异黄酮、壬基酚联合孕期暴露对雄性子代大鼠生殖系统的危害。[方法]SD大鼠同笼交配获取40只孕鼠。将孕鼠随机分为5组:对照组(A)、200mg/kg壬基酚组(B)、200mg/kg壬基酚 50mg/kg大豆异黄酮组(C)、200mg/kg壬基酚 150mg/kg大豆异黄酮组(D)、200mg/kg壬基酚 450mg/kg大豆异黄酮组(E)。孕期灌胃染毒,对其子一代雄鼠90天龄剖杀检测其精子数量、质量,睾丸组织重量、酶活性等。[结果]与A组比较,B组睾丸重量和睾丸系数、精子活动度、附睾尾精子计数、每日精子生成量、睾丸组织碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)和血清睾酮(TT)水平显著下降,壬基酚与各剂量大豆异黄酮联合作用组睾丸重量、精子活动度、附睾尾精子计数、睾丸每日精子生成量、ALP、TT水平均显著下降;与B组比较,C组的睾丸重量、睾丸系数、睾丸每日精子生成量、ALP、LDH水平均显著升高,E组睾丸重量、睾丸系数、每日精子生成量、ALP、LDH显著升高而平均窝活产只数、精子活动度睾酮水平表现出下降的趋势。[结论]50mg/kg大豆异黄酮对壬基酚所致雄性生殖系统危害似具有拮抗作用。450mg/kg的大豆异黄酮对壬基酚的雄性生殖系统危害似表现出相加作用。     

氰戊菊酯对雄性大鼠生殖系统的时间毒性

目的研究农药氰戊菊酯(Fen)对雄性生殖功能系统的时间毒性及机制。方法选择健康雄性SD大鼠49只,以光照起点时间定为ZT 0,将自然时间转换为授时时间(ZT)。将大鼠分为对照组和6个Fen染毒组。Fen染毒组:以mg/kg BW的灌胃剂量分别在ZT 02、ZT 06、ZT 10、ZT 14、ZT 18、ZT 22授时时间点给药,连续30d;对照组给予等量食用调和油。制作睾丸HE病理切片,测定每日精子生成量(DSP)、检测精子活率(LSR)、畸形率(ASR)及睾丸标志酶(ACP和γ-GT)活性,应用RIA法测定大鼠睾丸中的睾酮(T)和雌二醇(E2)水平。结果 (1)与对照组相比,Fen引起大鼠睾丸组织病理性改变,且在ZT 18时损伤最为严重;Fen降低了雄性大鼠每日精子生成量、精子活率、睾丸标志酶活性和睾酮含量,增加了雌二醇含量和精子畸形率。(2)Fen引起大鼠雄性生殖指标每日精子生成量、精子活率、睾丸磷酸酶活性的变化具有昼夜节律性,其敏感时间点分别为:ZT 04、ZT 14、ZT 23。结论 Fen对雄性生殖指标具有毒性并在每日精子生成量、精子活率、睾丸磷酸酶活性中表现出一定的昼夜时间节律性。     

铅、汞对实验大鼠睾丸LDHx活性影响

采用饮用醋酸铅和腹腔注射氯化汞法分别给雄性大鼠染毒14周后,称取睾丸绝对重量,凝胶电泳法测定大鼠睾丸 LDHx 活性,并用组化法观察附睾尾精子 LDH 活性.结果显示:铅染毒各剂量组大鼠睾丸重量均低于对照组,P<0.05,汞染毒各剂量组间未见明显差异。铅、汞染毒各剂量组 LDHx 活性均显著低于对照组,P<0.01;且 LDHx 活性与铅染毒剂量呈负相关,r=-0.919,P<0.05,与睾丸重量呈正相关,r=0.962,P<0.05。铅染毒组精子颈体部 LDH颗粒着色变浅、变粗大、数目减少,且随染毒剂量增高而加重,汞染毒组未见明显异常。     

应用计算机辅助精子分析系统检测镉对大鼠精子运动能力的影响

目的　为镉的雄性生殖毒性评价筛选出敏感指标 ,以便对其生殖毒性进行早期监测。方法　应用氯化镉对成年雄性SD大鼠进行腹腔染毒 (连续 7d) ,染毒剂量分别为 0 .2、0 .4、0 .8mg/kg体重 (以镉计 )。对大鼠进行睾丸精子头计数 ,并计算每日精子生成量。应用计算机辅助精子分析(CASA)系统对附睾尾精子运动能力进行检测。结果　 0 .8mg/kg染镉组大鼠睾丸精子头计数和每日精子生成量为 (16 .45± 3 .0 1) 10 6/g和(2 .6 5± 0 .5 1) 10 6·d-1·g-1,比对照组 [(119.2 0± 14.5 1) 10 6/g和(19.5 1± 2 .37) 10 6·d-1·g-1]明显降低 ,0 .2mg/kg染镉组大鼠附睾尾精子曲线运动速度 (VCL)即明显降低 ,0 .4mg/kg染镉组大鼠精子运动能力的改变更为显著 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。 0 .8mg/kg染镉组未见活动精子。结论　精子运动参数是镉雄性生殖毒性评价较敏感的观察指标 ,CASA系统是雄性生殖毒理学研究的有力工具     

氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸组织和血清睾酮水平变化

目的研究氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸功能和组织学变化。方法将55只雄性大鼠随机分成5组,4个剂量组分别给予4.3、8.6、17.2和34.4mg/kg的氯乙酸甲酯,对照组给予生理盐水共13周,观察睾丸和附睾组织形态学的变化,检测精子活力、精子计数以及精子畸形率,血清睾酮水平和睾丸细胞的凋亡率。结果高剂量染毒组睾丸脏器系数、血清睾酮水平、睾丸细胞凋亡率[0.85±0.05、(5.93±2.75)μg/L、(18.22±7.03)%]与对照组[0.80±0.09、(14.70±8.04)μg/L、(6.40±4.51)%]之间差异有显著性(P<0.05)。结论最高剂量氯乙酸甲酯处理大鼠睾丸和血清睾酮水平有变化。     

邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯联合染毒对雄性大鼠精子生成的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对雄性大鼠精子生成的联合毒性作用.方法 将32只健康清洁级成年SD雄性大鼠按体重随机分为4组,分别为阴性对照组(玉米油)、DBP染毒组(1/20 LD50,1.0 g/kg)、DEHP染毒组(1/20 LD50,1.7 g/kg)和DBP+DEHP染毒组(1.0g/kg DBP+1.7 g/kg DEHP),每组8只.采用灌胃方式进行染毒,每天1次,每周5 d,连续染毒8周.末次染毒24 h后,测量大鼠体重、睾丸和附睾及肝脏脏器湿重,测定精子参数(精子数量、精子活动率及精子畸形率),并观察睾丸及附睾组织形态学改变.结果 DBP和DEHP联合染毒对大鼠体重增长无交互作用(P＞0.05);对睾丸和附睾及肝脏脏器系数存在交互影响,使睾丸和附睾的脏器系数明显降低,肝脏的脏器系数明显升高,表现为协同作用;对精子计数、精子活动率及精子畸形率存在交互影响,使精子数量和存活率明显降低,畸形率明显升高,表现为协同作用.光镜下可见DBP和DEHP联合染毒可引起曲细精管外形不规则、萎缩变性,间质增宽,生精上皮退化变性,甚至几乎消失,生精细胞耗竭,基底部仅有少量的支持细胞且细胞肿胀、变性,出现空泡样改变,基膜尚完整;附睾上皮受损且变薄,间质增宽,管腔内几乎不见成熟精子.结论 DBP和DEHP联合染毒对雄性大鼠具有明显的生殖毒性作用,可严重影响精子生成数量和质量,且对附睾有一定的毒作用.     

全氟辛烷磺酸对雄性大鼠生精功能的影响

目的探讨全氟辛烷磺酸(Perfluorooctanesulfonate,PFOS)对雄性大鼠生精功能的影响。方法36只雄性Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别在饲料中添加PFOS0、05、15和45mg·kg-1。65天后,观察大鼠睾丸、附睾脏器系数以及精子数量、活动度和畸形率;检测大鼠睾丸组织中乳酸脱氢酶同工酶(LDHx)、山梨醇脱氢酶(SDH)的活性和丙二醛(MDA)含量。结果PFOS染毒使大鼠体重和睾丸重量下降(P<005),但睾丸和附睾脏器系数未见显著性变化(P<005)。PFOS15和45mg·kg-1剂量组大鼠精子数,LDHx和SDH活力与对照组比较,均显著降低(P<005);精子畸形率与对照组比较,均显著升高(P<005)。PFOS45mg·kg-1剂量组大鼠MDA含量显著高于对照值(P<005),精子活动率明显低于对照值(P<005)。结论PFOS对大鼠精子形成和成熟过程有损伤作用。     

砷染毒大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力的变化

目的观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力表达的变化。方法将40只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成4组,分别为低、中、高剂量(0.375、0.75、1.5 mg/kg)砷染毒组和对照组,以灌胃法连续染毒16周后计算各组大鼠精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞端粒酶活力的表达。结果与对照组比较,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P<0.01),生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞端粒酶活力表达明显降低(P<0.01);每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);生精细胞凋亡与端粒酶活力呈负相关(r=-0.896,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞端粒酶活力,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量减少,产生雄性生殖毒性。     

环境雌激素壬基酚对仔鼠精子的损伤作用

目的研究孕期暴露王基酚对雄性仔鼠精子的损伤作用。方法大鼠妊娠第14～19d灌胃染毒壬基酚（0、20、40、80、200mg／kg），仔鼠90d龄断头取血测睾酮，取睾丸和附睾称重，检测精子活动度和畸形率、附睾尾精子计数、睾丸每日精子生成量。结果与阴性对照组比较，80～200mg／kg组精子活动度、附睾尾精子计数、睾丸每日精子生成量显著下降，且与睾酮浓度正相关；精子畸形率与染毒剂晕正相关。结论孕期暴露壬基酚80mg／kg可损伤仔鼠生精功能。     

氟对雄性大鼠生殖系统的内分泌干扰作用研究

目的　探讨高氟对雄性大鼠生殖系统的内分泌干扰作用。方法　给予雄性Wister大鼠含氟化钠 15 0mg/l的水 10周后 ,检测其精子计数、活动率、畸形率 ,测定睾丸、附睾生化标志酶和性激素 ,观察睾丸组织病理改变。结果　染毒组精子计数、活动率下降 ,畸形率升高 ,血清睾酮、促黄体生成激素下降 ,较对照组差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,睾丸组织有明显的病理学改变。结论　长期接触高浓度的氟对雄性生殖系统有明显的内分泌干扰作用     

计算机辅助精液质量分析系统参数调校方法

目的：调校精子质量分析系统的体积参数和速度参数。方法：按WHO规定的标准和方法自制精液分析的标准品，分别进行人3-．分析、CASA分析精子的浓度和活力，以人工分析结果来调校精子质量分析系统的体积、速度参数。结果：自制标准品的人工分析精子浓度（×106／mL）、总活力（％）、前向运动精子（％）分别为47．6±3．3、56．6±4．9、36．4±3．8：精子质量分析系统调校前、后的精子浓度（×106／mL）、总活力（％）、前向运动精子（％）分31]为74．8±7．5、53．3±3．6、31．9±2．8和51．3±5．1、55．1±4．5、37．5±3．4。精子质量分析系统体积参数调校前计算出的精子浓度与人工分析结果间存在显著性差异（P〈0．01）。结论：虽然精子质量分析系统经过厂家的定标，但在临床使用前仍有必要进行体积和速度参数设置。     

Freezing-Free Preservation of Human Spermatozoa – A Pilot Study

This study tested a method for maintaining human spermatozoa without freezing for subsequent use in intracytoplasmic sperm injection (ICSI). We demonstrated that human sperm stored in electrolyte-free solution maintain their motility and viability for at least 4 and 6 weeks, respectively. We also have shown that preserved spermatozoa are fully functional in ICSI. Sperm chromosome analysis after injection of human sperm into mouse oocytes revealed that two weeks of storage does not negatively affect sperm DNA integrity. A mouse model was used to analyze the ability of preserved sperm to participate in normal embryogenesis. Mouse sperm preserved in electrolyte-free solution in a similar manner as human sperm maintained motility for up to 3 weeks. When mouse spermatozoa stored for 1 week were injected into the oocytes by ICSI, they yielded normal blastoctysts and normal viable fetuses. The results of the study bear significance for human assisted reproduction technologies (ART) and provide clinicians and infertile patients with a new method that can simplify sperm preparation for ICSI, assisting men who are unable to provide semen on the day of assisted fertilization.     

辛硫磷对大鼠精子生成量和精子运动能力的影响

为探讨有机磷杀虫剂辛硫的雄性生殖毒性,运用动物实验研究了不同剂量辛硫磷径口染毒大鼠６０天对精子生成量和精子运动能力的影响。采用计算机辅助精子分析仪分析精了轨迹。结果显示：辛硫磷２４．５和７３．５ｍｇ／ｋｂＢＷ染毒组,大鼠睾丸精子生成量低于对照组。     

Effect of Sample Collection Site on Semen Parameters of Healthy Young Volunteers

The effect of sample collection site on semen parameters in ten men aged between 22 and 24 years was investigated. Sperm was collected at two sites: in a university hospital restroom for general use and in a one-person hospital room. Samples were collected from the same individual twice, with an interval of two weeks between collections. Semen parameters for the two sites were compared. Samples were collected after a minimum of three days and not longer than seven days of sexual abstinence. Sperm concentration did not differ significantly between the university hospital restroom location (86.8 ± 25.4 × 10⁶/ml; mean ± standard deviation) and the private hospital room (97.1 ± 72.0 × 10⁶/ml). There was no difference in the total motile sperm count or daily sperm production between the collection sites. These results suggest that the collection site has little effect on semen parameters.     

精子DNA碎片与精液各参数的相关性分析

目的探讨男性不育患者精子DNA碎片与精液各参数的相关性,研究精子DNA完整性在评估男性生育力方面的应用价值。方法回顾性分析2014年1月至2015年11月就诊于邢台不孕不育专科医院生殖中心男科的不育患者265例,采集精液标本,通过计算机辅助行常规精液分析,采用瑞-吉染色镜检观察精子形态及通过精子染色体扩散试验(SCD法)行精子DNA碎片率检测,对精子DNA碎片率与年龄、精液各参数(精子浓度、前向运动精子、正常精子形态)进行分组比较及相关分析。结果不同年龄段精子DNA碎片组间比较差异有统计学意义(P0.05);不同精子DNA碎片化指数(DNA fragmentation index,DFI)、精子浓度组间比较差异无统计学意义(P0.05),前向活动精子、正常形态精子组间比较差异有统计学意义(P0.05);年龄与精子DNA碎片存在正相关关系,前向运动精子率、正常形态精子率均与精子DNA碎片存在负相关关系。结论年龄是影响精子DNA损伤的因素,精子DNA损伤可能是导致精子活力和正常形态精子的影响因素。     

形态正常精子百分率与顶体酶活性的关系

目的:探讨精子形态与精子顶体酶活性的关系。方法:对737例男性不育患者采用分光光度比色法测定顶体酶活性,采用精子形态检测系统下人工修正方法分析精子形态。结果:精子形态正常组的顶体酶活性明显高于精子形态异常组,两组间比较差异显著(P<0.05);顶体酶活性正常组形态正常精子百分率明显高于顶体酶活性异常组形态正常精子百分率,两组间比较差异亦具有显著性(P<0.001);顶体酶活性与形态正常精子百分率间呈显著正相关关系(r=0.172,P<0.001)。结论:精子形态可影响精子顶体酶活性。     

蜱类精子的形态

作者从蜱总科的两科5属中共观察蜱精子8种,并对科、属和种之间精子的差别做了比较。硬蜱和软蜱两科精子的主要区别是:前者纤细,后者粗大,后者长度为前者的1.5～6.9倍。除血蜱属外,头尾分明是两科精子的共同特征。在硬蜱科,不同属的精子,其长度不同,其中以血蜱属的长角蜱为最长,以硬蜱属的全沟硬蜱为最短。同属不同种的精子,其类型相同,但长度各异。     

Comparative study of sperm washing and selection methods after cryopreservation and its influence on sperm subpopulational structure in a bovine model

Abstract

The effect of different sperm washing-selection methods on sperm morphometric characteristics as a study to detect differences in the subpopulational structure has been carried out in detail in a bovine model. Cryopreserved sperm samples from 5 bulls were thawed, pooled, and processed by TALP-washing centrifugation method (TWCM), selective Percoll discontinuous density-gradient centrifugation method (PDGM), and self-migration swim-up separation method (SUMM). Live-dead assay (SYBR-14/ethidium homodimer-1), chlortetracycline assay (CTC), and sperm motility were assessed, and aliquots of sperm were processed for automated sperm morphometry analysis (ASMA) simultaneously before (raw thawed sperm used as control, RTS) and after different sperm washing-selection techniques. Deleterious effects of different methods were evident, particularly on sperm membrane integrity (p?<?0.05) and capacitation status (p?<?0.05). Moreover, each cell was measured for four primary dimensional parameters, and three shape parameters. All sperm morphometric parameters evaluated were analyzed by principal component analysis (PCA) and multivariate clustering analyses. PCA revealed two principal components for each sperm washing or separation method explaining more than the 91% of the variance. The number of subpopulations found was the same for all methods (four) except for PDGM (three). However, irrespective of the number of subpopulations defined by PCA and clustering analyses, the sperm subpopulational structure was found to be different and strongly influenced by the sperm selection procedure due to statistical differences found regarding the sperm biophysical changes induced by each method used (p?<?0.001). It is concluded that different sperm washing-selection methods commonly used during IVF process, may lead to alterations in sperm morphometric characteristics, which might explain the different results seen after IVF, since an important influence of these methods on sperm subpopulational structure has been demonstrated.     

Analysis of Sperm Karyotypes in a Patient Treated with Griseofulvin

Griseofulvin is known to interfere with chromosome segregation by binding to microtubule-associated proteins. Studies in mouse germ cells have demonstrated that griseofulvin can induce aneuploidy (numerical chromosome abnormalities) at therapeutic concentrations. The aim of this study was to determine if chronic griseofulvin treatment led to an increased frequency of sperm chromosome abnormalities in one male subject. We analyzed 290 full sperm karyotypes using the human sperm-hamster oocyte fusion system. The frequency of X- and Y-bearing sperm was equal. There was no increase in the frequency of numerical (1.7%) or structural (9.3%) abnormalities in the subject compared to unexposed controls. Although reassuring, this is the first report on this subject and future studies are needed to assess the risk of griseofulvin.     

三种不同来源精子行卵胞浆内单精子注射临床结局的比较

目的：比较三种方法获得的精子行卵胞浆内单精子注射的临床结局。方法：回顾性分析笔者所在医院2011年1月-2012年12月374个卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）治疗周期的妊娠结局,依据精子来源不同分为三组：射出精液组（A组）,经皮附睾穿刺和经皮睾丸穿刺取精子组（B组）,供精组（C组）,比较三组的受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率。结果：A组的优胚率高于C组（P〈0.017）,三组患者的受精率、卵裂率、临床妊娠率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：精液、附睾或睾丸精子、供精行ICSI助孕的结局相近。精子的成熟度、精子的冷冻可能并不影响最终的妊娠率。