大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶的筛选

目的：了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶的分布、表型及其检测方法。方法应用纸片法进行初筛后,分别用美国临床实验室标准化委员会（National Committee for Clinical Laboratory Standards,NCCLS）推荐的确证试验检测超广谱β-内酰胺酶（Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs）和用头孢西丁三相试验检测AmpCs酶。结果367株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中经ESBLs药敏初筛和确证试验,有115株（31.3%）产ESBL,有17株（4.6％）头孢西丁三相试验阳性者。结论本院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产β-内酰胺酶以ESBLs为主,AmpC酶占4.6%。     

从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检测超广谱β内酰胺酶和AmpC酶

目的研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产酶情况及耐药模式,并对9种抗生素做药敏试验,比较产酶菌与非产酶菌对9种抗生素的耐药率,为临床治疗产酶菌感染提供理论依据。方法应用头孢西丁三相试验检测AmpC酶,采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)表型筛选和确认试验检测ESBLs菌株,以K-B琼脂扩散法做药敏试验。结果在110株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,6株(5.45%)产AmpC酶,20株(18.2%)产ESBLs,1株(0.90%)同时产AmpC酶和ESBLs。产酶株对亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星耐药率低。结论产AmpC酶和产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为多重耐药菌株,治疗产2种β内酰胺酶细菌引起的感染亚胺培南为首选,头孢吡肟和阿米卡星可作为选用药物之一。     

从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β内酰胺酶基因

目的 了解产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型.方法 收集2002年1月-2004年5月间我院呼吸科临床标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共110株,用酶提取物三维试验检测AmpC酶;用等电聚焦电泳、耐药质粒电转化试验、聚合酶链反应(PCR)及测序确定AmpC酶基因型.结果 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶检出率分剐为9.30%和4.48%.药敏试验显示产酶株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、酶抑制剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药,对头孢吡肟及亚胺培南较敏感.7株产AmpC酶菌株中有5株通过电转化试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌,经PCR扩增和测序证实为质粒介导DHA-1型AmpC酶.结论 我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中已经出现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药性能够水平传播,给临床抗感染治疗带来重大威胁.     

从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检测超广谱β内酰胺酶和AmpC酶

目的研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产酶及耐药模式,并对9种抗菌药做药敏试验,比较产酶菌与非产酶菌对9种抗菌药的耐药率,为临床治疗产酶菌感染提供理论依据.方法菌株来源于2005年1月～2007年5月我院呼吸科住院患者送检合格痰标本中分离的大肠埃希菌43株、肺炎克雷伯菌67株.应用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)表型筛选和确认试验检测ESBLs菌株,以K-B琼脂扩散法做药敏试验.结果在110株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,6株(5.45%)产AmpC酶,20株(18.2%)产 ESBLs,1株(0.90%)同时产AmpC酶和ESBLs.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶检出率分别为6.98%、5.97%,ESBLs检出率分别为16.3%、20.9%.产酶株对亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星耐药率低.结论产AmpC酶和产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为多重耐药菌株,治疗产2种β内酰胺酶细菌引起的感染亚胺培南为首选,头孢吡肟和阿米卡星可作为选用药物之一.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型及流行病学分析

目的：研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产质粒型AmpC酶株的比率、酶的基因型及其流行病学状况。方法：收集本院、福建省立医院两家医院2004年9月至2005年3月的67株耐头孢西丁不重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，用酶提取物三维试验检测高产AmpC酶；抽提高产AmpC酶株质粒。用聚合酶链式反应（PCR）及产物序列分析确定质粒AmpC酶和β内酰胺酶的基因型；质粒转化试验定位耐药基因；ERIC—PCR指纹图确定产酶株间的同源关系。结果：福州两家医院耐头孢西丁菌中产质粒型AmpC酶的发生率，大肠埃希菌分别为16．7％和10．5％。肺炎克雷伯菌则分别为8％和0。2株肺炎克雷伯菌产DHA-1型、4株大肠埃希菌产CMY-2型、1株大肠埃希菌产CMY-22型质粒Am—pC酶；5株产CMY型AmpC酶的大肠埃希菌还分别同时产CTX—M-14、CTX—M-27、TEM-144和TEM-1型β内酰胺酶。7株菌中，1株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌可将头孢西丁耐药性转移给受体菌。7株产酶菌ERIC—PCR指纹图显示，2株肺炎克雷伯菌来自相同克隆，其余菌株来自不同克隆。结论：福州地区发现产DHA-1型AmpC酶肺炎克雷伯菌和产CMY-2型及CMY-22型AmtpC酶大肠埃希菌。CMY-22型AmpC酶和TEM-144型B内酰胺酶是国内外首次报道，GenBank登陆号为DQ256079和DQ256080。     

临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌质粒介导AmpCβ内酰胺酶的研究

目的 研究儿科临床大肠埃希菌和克雷伯菌中质粒介导AmpC β内酰胺酶的检出率和基因型.方法 收集2009年1至12月北京儿童医院住院患儿中分离的大肠埃希菌和克雷伯菌.采用头孢西丁纸片扩散法进行大肠埃希菌和克雷伯菌AmpC酶表型初筛,对AmpC酶表型阳性大肠埃希菌和克雷伯菌用多重聚合酶链反应(PCR)方法测定质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX基因型.结果 大肠埃希菌和克雷伯菌中,共筛选出65株对头孢西丁不敏感的菌株,经多重PCR扩增,有17株AmpC酶DHA型基因阳性,DHA型质粒AmpC酶的总检出率为26.2%.其中,肺炎克雷伯菌14株DHA-1基因阳性,检出率为38.9%(14/36);大肠埃希菌2株DHA-1基因阳性,检出率为7.7%(2/26);产酸克雷伯菌1株DHA-1基因阳性,检出率为33.3%(1/3).其余48株质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX型基因均为阴性.结论 儿科临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌中,均有质粒介导DHA-1型AmpC酶的产生,其中肺炎克雷伯菌的产生率更高.     

从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检测超广谱β内酰胺酶和AmpC酶

目的:研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产酶及耐药模式,并对9种抗菌药做药敏试验,比较产酶菌与非产酶菌对9种抗菌药的耐药率,为临床治疗产酶菌感染提供理论依据。方法:菌株来源于2005年1月~2007年5月我院呼吸科住院患者送检合格痰标本中分离的大肠埃希菌43株、肺炎克雷伯菌67株。应用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)表型筛选和确认试验检测ESBLs菌株,以K-B琼脂扩散法做药敏试验。结果:在110株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,6株(5.45%)产AmpC酶,20株(18.2%)产ESBLs,1株(0.90%)同时产AmpC酶和ESBLs。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶检出率分别为6.98%、5.97%,ESBLs检出率分别为16.3%、20.9%。产酶株对亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星耐药率低。结论:产AmpC酶和产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为多重耐药菌株,治疗产2种β内酰胺酶细菌引起的感染亚胺培南为首选,头孢吡肟和阿米卡星可作为选用药物之一。     

宁波地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因检测

目的 了解近三年宁波地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中质粒AmpC酶基因流行状态.方法 用K-B法对临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作耐药表型分析,对可能产生Am-pC酶的菌株通过聚合酶链反应(PCR)检测AmpC酶基因,然后用三维试验予以证实.结果 140株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,质粒AmpC酶基因阳性率2004、2005和2006年分别为4.4%(2/45)、8.6%(3/35)和13.3%(8/60);其中2004、2005年所检出的均为DHA基因型,2006年分别从2株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌中检出ACT-1基因.结论 宁波地区临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶基因的流行率有增长趋势.     

EDTA纸片法检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌高产AmpC酶的探讨木

目的 分析EDTA纸片法与头孢西丁三维试验检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌高产AmpC酶的符合程度,探讨应用EDTA纸片法检测高产AmpC酶在临床实验室应用的可行性.方法 从临床菌株中筛选出头孢西丁耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,应用EDTA纸片法和头孢西丁三维试验分别对头孢西丁耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是否高产AmpC酶进行检测,并进行方法学比较.结果 174株细菌中,用EDTA纸片法和三维试验检测为阳性的分别为16株和15株,两种方法阳性符合率为93.8%,阴性符合率为100%,总符合率为99.4%.结论 EDTA纸片法与头孢西丁三维试验的符合率很高,且EDTA纸片法操作简便、成本低廉且不需特殊仪器设备,适合于临床实验室推广应用.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmPC酶和ESBLs的检测及耐药性

目的了解急性阑尾炎患者阑尾残端脓液分离出大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs的情况及耐药性。方法采用纸片扩散确证法检测ESBLs，酶提取物三维试验方法检测AmpC酶。结果180株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出单产ESBLs43株、单产AmpC酶17株、同时产AmpC酶和ESBLs 10株，检出率分别为23．9％、9．4％和5．6％；产酶菌株对15种抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论阑尾残端脓液分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因研究

目的 研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因情况和耐药性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)法对耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌连续分离株进行AmpC酶DHA和ACT-1基因检测和分析.结果 68株大肠埃希菌中ACT-1基因阳性4株(5.9%),DHA基因全为阴性;44株肺炎克雷伯菌中DHA基因阳性4株(9.1%),ACT-1基因全为阴性.结论 质粒型AmpC酶基因可通过转化、接合等方式转移给其他同种或不同种菌,易于传播,应加强监测.     

三维提取试验检测肠杆菌AmpC酶

目的 了解临床常见肠杆菌科细菌产AmpCβ-内酰胺酶的产生率。方法 采用头孢西丁筛查试验和三维提取试验对170株茵进行检测。结果 头孢西丁筛查试验阳性29株，三维提取试验阳性5株，可疑4株。结论 头孢西丁筛查试验特异性较差，假阳性高；三维提取法能准确检测AmpCβ-内酰胺酶，其产生率达2.94％。     

41株大肠埃希菌和克雷伯菌耐药性的研究

目的:了解我院临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌的耐药性及耐药机制.方法:以双纸片确证试验、三维试验对头孢西丁耐药的大肠埃希菌和克雷伯菌测定产β-内酰胺酶(ESBLs)及C类头孢菌素酶(p-AmpC)的情况;K-B法测定受检菌对15种抗菌药物的耐药性;采用聚合酶链反应(PCR)分析ESBLs和p- AmpC基因型.结果:41株头孢西丁(FOX)耐药的受检菌中共检出产ESBLs 29株,阳性率为70.7%;产p-AmpC 19株,阳性率为46.3%.药敏试验结果显示,产酶组对一～三代头孢均存在不同程度的耐药(43.8%～93.8%),耐药率明显高于非产酶组,差异有统计学意义(P<0.05).所有细菌对头孢匹美的敏感性近70%,对亚胺培南全部敏感.基因检测结果提示,FOX 耐药大肠埃希菌和克雷伯菌ESBLs基因型以TEM和SHV为主,分别占61%和39%;DHA和ACT型p-AmpC检出率分别为41.5%和51.2%.结论:我院临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌为多重耐药菌,ESBLs及p-AmpC基因携带率较高.碳青霉烯类抗生素亚胺培南可作为治疗产ESBLs和AmpC菌感染的有效药物.     

肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解聊城地区临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶情况及其耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据。方法对156株肺炎克雷伯菌的标本来源进行回顾调查分析,采用Vitek2-compact全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定,药敏试验采用K—B纸片扩散法;同时采用纸片扩散确证法检测ESBLs、采用三维确认试验检测质粒介导AmpC酶。结果检出单产ESBLs54株（34．6％）,单产AmpC酶6株（3．8％）,同时产AmpC酶和ESBLs共3株（1．9％）。产ESBLs和AmpC酶菌株对亚胺培南和哌拉西彬他唑巴坦100％敏感,其对抗生素的耐药率除亚胺培南和哌拉西林／他唑巴坦外均高于不产ESBLs和AmpC酶菌株。结论肺炎克雷伯菌产Es—BLs和AmpC酶的情况在聊城地区已经出现,产ESBLs和AmpC酶菌株对常用抗生素的耐药率较高,应引起临床注意。     

新CMY型头孢菌素酶在大肠埃希菌中的流行

目的 对临床产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药表型以及分子生物学特性进行研究,以期发现新的头孢菌素酶。方法 对从临床分离的大肠埃希氏菌先后用纸片扩散法、三维试验、等电聚焦试验以及微量稀释法等进行表型检测。然后用接合试验、多重PCR以及基因测序等方法进行分子生物学研究。结果 719株受试的大肠埃希菌经三维试验,等电聚焦以及酶抑制试验表明有6株细菌都能够产一种等电点(PI)为8．9的能够被氯唑西林抑制而不能被克拉维酸抑制的β—内酰胺酶。用微量稀释法检测表明这些菌株对多种三代头孢菌素耐药,但对头孢吡肟、亚胺培南和美洛培南均敏感。接合试验表明它们携带的AmpC酶具有转移性,多重PCR检测表明这些基因来源于费氏枸橼酸杆菌家族,DNA测序表明该基因和CMY-2以及CMY-7有99％的同源性,为一种新的CMY型头孢菌素酶。结论发现了一种新的CMY型头孢菌素酶,它介导了高产AmpC酶大肠埃希菌对多种抗生素的耐药,其耐药性能够水平传播。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs酶和AmpC酶的检测结果分析

目的:了解对头孢菌素类耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶的分布及其对抗生素的敏感性。方法:利用双纸片协同试验及纸片法确证试验检测ESBLs,三相试验检测AmpC酶,并用纸片扩散试验和微量稀释法测定细菌对抗生素的敏感性。结果:从头孢噻肟耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs分别为91.4%和96.7%;产AmpC酶分别为17.1%和10.0%;产SSBL分别为8.6%和6.7%。产酶菌株对三代头孢菌素高度耐药,对环丙沙星、庆大霉素及复方新诺明耐药率较高,对亚安培南敏感,产AmpC酶细菌对含酶抑制剂的复合抗生素高度耐药。结论:产生ESBLs和AmpC酶是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢菌素耐药的重要机制,实验室应对其检测和监测给予足够重视,临床医生也应了解其对抗生素的耐药规律。