人子宫内膜间质细胞的分离培养方法

目的改进正常子宫内膜和子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞原代和传代培养的方法 ,以使其可作为的体外实验模型之一。方法在原代分离细胞、传代培养条件和细胞纯化等方面对子宫内膜间质细胞原代培养的方法作了改进。结果 43例标本培养成功37例,仅1例污染,角蛋白、波形蛋白染色证实细胞纯度达95%以上符合实验要求。结论改进后的子宫内膜间质细胞原代培养法克服了污染问题,增加了可获得的细胞数,子宫内膜间质细胞的分离、培养可作为子宫内膜异位症的体外实验模型之一。     

酶消化联合玻片覆盖组织块法用于牙龈上皮细胞原代培养的研究

目的探讨一种快速、便捷、成功率高的牙龈上皮细胞原代培养的方法。方法通过细胞形态观察、免疫组化等方法对比单纯dispase酶消化、玻片覆盖组织块法、dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法进行牙龈上皮细胞原代培养的成功率。结果酶消化联合玻片覆盖组织块法原代培养成功率高，细胞成铺路石样生长；单纯酶消化法原代培养成功率低，仅见少量散在细胞；单纯玻片覆盖组织块法成纤维污染严重，成功率仅为30％。结论dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法可显著提高牙龈上皮细胞原代培养的成功率。     

用绒毛细胞培养法制备染色体

目的 探讨绒毛组织培养及染色体制备的理想方法 .方法 将73例标本用不同的消化酶处理后培养,应用原代传位法进行收获和染色体制备.结果 经不同消化酶处理后,绒毛细胞培养时间具有显著相关性,但与核分裂相的数目无相关性.73例中,68例培养成功,成功率93.15%,检出异常核型30例.结论 应用不同比例的胶原酶和胰酶的混合酶解液消化处理绒毛细胞后培养,用原代传位法进行染色体制备,具有效率高、组织细胞生长快、细胞生长周期短、收获中期分裂相不受影响和染色体形态保持良好等优势.     

大鼠脑星形胶质细胞的体外培养及鉴定

目的 探讨新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的分离、培养以及鉴定方法.方法 取出生1～2 d的Wistar大鼠大脑皮质,用机械法和胰酶消化法分散细胞,制成细胞悬液,差速黏附处理后,将未贴附的细胞接种培养.待细胞铺满瓶底后,置摇床摇晃,舍弃含脱落细胞的培养液,细胞传代.GFAP免疫细胞化学染色鉴定.结果 成功分离培养了原代星形胶质细胞,传代培养的星形细胞形态典型,纯度可达95%以上.结论 成功建立了大鼠星形胶质细胞体外培养方法.     

三氧化二砷诱导人类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡研究

目的：研究三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）对体外培养的人类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）滑膜细胞凋亡诱导作用。方法：酶消化法进行人关节滑膜细胞原代培养，MTT法研究As2O3对RA滑膜细胞活力影响；用光镜、电镜、DNA凝胶电泳等方法检测As2O3诱导RA滑膜细胞凋亡。结果：成功体外培养人关节滑膜细胞。MTF法显示As2O3可抑制RA滑膜细胞活力；光镜、电镜下发现As2O3作用于RA滑膜细胞可出现凋亡表现；DNA凝胶电泳显示有凋亡梯带出现。结论：As2O3可以诱导RA滑膜细胞凋亡。     

乳腺癌细胞株两种原代培养方法的比较

目的 探讨乳腺癌细胞株原代培养的方法.方法 取“人乳腺-人乳腺”小鼠模型的乳腺癌原位灶,用组织块培养法和细胞培养法分别对其进行原代培养,并对两种培养方法的结果进行比较.结果 两种方法均能得到乳腺癌原代细胞,组织块培养法的成功率为90.0％,细胞培养法的成功率为20.0％.结论 组织块培养法是较好的原代培养方法.     

牙周膜成纤维细胞多种培养法的研究

目的：提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率,提高组织块贴壁率,缩短培养时间,加快细胞增殖。方法以高血清结合改良组织块培养法培养原代 HPDLCs 与传统组织块法及改良组织块培养法作比较。通过免疫组化方法鉴定细胞的来源,绘制细胞的生长曲线,对三种方式的培养成功率、组织块贴壁率及细胞增殖速度进行比较。结果三种方法所培养的原代细胞生长均趋于正常,细胞呈长梭形或多角形,波形蛋白鉴定呈阳性,角蛋白鉴定呈阴性,符合正常 HPDLCs 的正常形态及生物学特点。高血清结合改良组织块培养法的成功率为86．67％,明显高于其他两种方法（P ＜0．01）。结论高血清结合改良组织块培养法明显提高了 HPDLCs 原代培养的成功率,适合在临床上运用。     

关于改善细胞培养实验教学质量的几点建议

细胞培养是医学细胞生物学实验教学的重要内容，由于此技术作为实验、研究工作的基本步骤．已广泛应用于各学科的多项领域，通过学习，使学生了解细胞培养的基本知识，初步掌握基本的培养技术及观察、检测方法．为其今后进一步学习及科研、实验奠定基础。它能提高学生的实际操作能力．是做好医学细胞生物学其他实验的基础和前提。细胞培养是指细胞在体外条件下的培养技术，即在无菌条件下．从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件．让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖的方法。细胞培养分为原代培养和传代培养。而原代培养是细胞培养中最为重要的．它是传代培养的前提，也是有关医学细胞生物学后续实验如传代培养、细胞骨架、细胞融合和染色体提前凝集等实验的重要基础，如果原代培养不能成功．后继实验将无法进行。细胞培养简化了环境因素，排除了体内实验时一些复杂因素的影响，利于应用各种物理、化学和生物等外界因素探索和揭示细胞生命活动的规律；便于应用各种不同的技术和方法观察和研究细胞结构和功能的变化；可以长期观察和研究细胞遗传行为的改变；同时提供大量生物性状相同的细胞．特别是人的活细胞材料作为研究对象，不仅耗费少，比较经济，关键是解决了不能用人做实验的问题。     

人胚胎生殖细胞的传代培养

目的 探求人胚胎生殖细胞最适宜的传代时间及最佳的传代方法.方法 取8周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人胚胎生殖细胞,选择原代培养第8天和第16天的细胞,采用挑取传代法和消化传代法,其中的消化传代法采用三种不同的消化液进行传代培养,记录各代培养的细胞集落数.结果 在原代培养第8天时,挑取传代法传2代后获得的细胞集落数减少;消化传代法传4代后获得的细胞集落数明显增多.原代培养第16天时未能传代培养,但却看到人胚胎生殖细胞集落的分化.结论 人胚胎生殖细胞传代培养最适宜的传代时间为原代培养第8天,最佳的传代方法为消化传代法.     

不同原代培养方法培养人牙髓细胞的研究

目的：比较并建立一种操作简单方便的人牙髓细胞原代培养方法。方法：选择因正畸拔除的完整无龋双尖牙,无菌条件下取出牙髓,分别采用组织块法、酶消化法和改良组织块法进行人牙髓细胞的体外原代培养,比较观察三种不同培养方法的成活率、细胞形态和数量,测定生长曲线并进行细胞来源鉴定。结果：三种方法均可从人牙髓组织分离培养获得外胚间充质来源的牙髓细胞,呈成纤维细胞样,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。组织块法耗时较长,培养成功率26.7%;酶消化法培养成活率较低,且细胞数量较少,培养成功率仅为13.3%;在改良组织块法中未发现有漂浮的组织块,培养成活率较高为80%。结论：改良组织块法解决了传统组织块法中组织块难以贴壁的问题,简化了操作步骤并具有较高的成功率,是一种科学可行的人牙髓细胞原代培养方法。     

纤维支气管镜检取材与细胞学涂片阳性率分析

目的：观察纤维支气管镜(纤支镜)取材对肺癌的诊断价值。方法：对365例肺癌患者经纤支镜直视病灶采用抽吸、刷检、抽吸加钳夹、刷检加钳夹的活检进行分析。结果：支气管内新生物型、浸润型刷检阳性率分别是72．8％、42．1％，刷检加钳夹阳性率分别可达86．7％、66．7％。管腔内膜粗糙型抽吸、抽吸加钳夹阳性率分别为77．9％、88．0％。结论：根据肺部肿瘤生长不同部位，用不同取材方法可提高对肺癌诊断的阳性率。     

卷席法采集胃标本病理检查结果分析

目的观察胃切除标本病变区及其周围粘膜的病理特点。方法采用卷席法取材对351例胃手术切除标本进行观察。结果胃癌组106例,肠化生检出率为57.5%;良性溃疡组85例,胃溃疡伴肠化生、异型增生、早期胃癌的检出率分别为45.9%、7.1%和7.1%;十二指肠溃疡组160例,肠化生和异型增生的检出率分别为6.3%和1.9%,未检出早期癌。结论胃手术切除标本,尤其是术前诊断为“良性”溃疡标本,卷席法取材能显著提高癌前病变及早期胃癌的检出率。     

Sysmex UF-500i与XS-500i在体液细胞计数中的应用评价

目的评价Sysmex UF-500i与XS-500i在体液细胞计数中的应用。方法收集86例胸腹水和脑脊液标本并将其分为非血性组和血性组,分别用Sysmex UF-500i、XS-500i和手工法对两组标本进行细胞检测,并进行对比分析。结果血性组中,手工法与Sysmex XS-500i细胞计数差异无统计学意义（P〉0.05）;非血性组中,手工法与Sysmex UF-500i、XS-500i细胞计数差异有统计学意义（P〈0.05）。结论Sysmex XS-500i对血性胸腹水、脑脊液的细胞计数有一定的可行性,但不适用非血性胸腹水、脑脊液的细胞计数。     

胃癌根治术中组织印片细胞学诊断的意义

目的探讨印片细胞学检查在胃癌术中的应用价值。方法在34例胃癌根治术的新鲜标本上,分别在癌灶、近癌旁组织近切缘、远切缘及部分淋巴结145处印片取材,凉干,瑞氏染色,行细胞学检查,观察有无癌细胞,其结果与常规病理检查结果相对照。结果癌组织处假阳性、假阴性各1例,准确率94.1%;切缘处无假阴性、假阳性14例;癌旁组织假阴性3例,假阳性12例;全组标本示假阳性较高;敏感性90.5%,特异性72.8%,准确率77.9%。结论胃癌术中印片细胞学检查对判断切缘有无残留病灶有一定价值,尤其是对不具备快速病理检查的基层医院确有帮助,但不能完全取代快速病理检查,二者结合更为有利。     

个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立

目的:建立人肺癌个体化可传代组织块动物模型.方法:组织块移植组将直径2mm的人肺癌新鲜标本癌组织块移植于BALB/C裸鼠背部皮下组织内,每例人肺癌新鲜标本均移植入5只裸鼠体内,成瘤者为第1代.取第1代移植瘤组织块以相同方法每例标本移植于另5只BALB/C裸鼠背部皮下组织内,成功者为第2代.重复上述传代方法得到第3代移植瘤.将人肺癌细胞株A549、H1795分别移植于BACLC裸鼠背部皮下组织内,成瘤达500 mm3后取癌组织块.分别取实验组的原代人肺癌肿瘤及第1、2、3代移植瘤部分组织,及作为对照的细胞系移植瘤组织,固定于10％福尔马林溶液中,石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察比较其形态异同.结果:组织块移植组瘤细胞不仅保留了人肺癌细胞的异型性,还保持原有排列结构；而作为对照的细胞系移植瘤细胞失去了原有的排列结构,仅保留了癌细胞的异型性.结论:利用不同患者的手术切除肺癌标本所建立的裸鼠荷人肺癌肿瘤模型具有个体化特征,为肺癌个体化治疗的研究提供依据.     

利用NSCLC患者ROSE细胞学制片进行EGFR、KRAS、PIK3CA基因检测可行性的研究

目的 探讨应用 xTAG70plex 液相芯片技术对非小细胞肺癌（NSCLC）患者的快速现场评价（ROSE）细胞学制片进行 EGFR、KRAS 和 PIK3CA 基因检测的可行性及其临床价值。方法 纳入就诊于天津医科大学总医院行支气管镜检查并最终病理诊断为 NSCLC 的患者 75 例 ROSE 细胞学制片和配对的组织学标本，分别用 xTAG70plex 液相芯片进行 EGFR、KRAS 和 PIK3CA 基因突变检测。结果 除 1 例在组织学标本检出为 KRAS 突变而在配对的ROSE 细胞学标本没有检测出来的病例，其他病例基因突变检测结果均相同，两种标本 EGFR 基因突变检测结果一 致率为 100%，KRAS 基因突变检测结果一致率为 98.7%。结论 xTAG70plex 液相芯片技术可以有效地检测 ROSE细胞学制片 EGFR、KRAS 和 PIK3CA 的基因突变状态，对于 NSCLC 患者，ROSE 细胞学制片可以作为组织学替代标本进行基因检测。     

HER2在膀胱肿瘤中的表达及其单抗诱导膀胱肿瘤细胞凋亡

目的为探讨膀胱肿瘤的HER2表达阳性率及其与肿瘤分级的关系,以及抗HER2单克隆抗体对HER2表达阳性细胞株的增殖影响。方法用免疫组织化学法检测43例膀胱肿瘤标本和肿瘤细胞株的HER2表达量,用不同浓度的抗HER2单抗和阿霉素作用于HER2表达阳性和阴性的细胞株,MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测抗HER2单抗作用后肿瘤细胞的凋亡率。结果43例膀胱移行细胞癌标本中,I级12例,HER2高表达者0例;II级14例,HER2高表达者2例（14％）;III级17例,HER2高表达者13例（76％）。T24细胞株HER2高表达,BIU87阴性。抗HER2单抗对HER2表达阳性的细胞株增殖抑制呈剂量和时间依赖性,并能诱导HER2表达阳性的肿瘤细胞凋亡,但对HER2表达阴性的细胞株无明显作用,P〈0．05／P〈0．01。阿霉素对四株细胞均有细胞毒作用,P〉0．05。结论分化较差的移行细胞癌HER2阳性率高,抗HER2单抗能够选择性诱导HER2高表达的膀胱肿瘤细胞株凋亡。     

甲胎蛋白抑制PTEN活性导致肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡的研究

目的研究分析甲胎蛋白对PTEN活性产生抑制引起肝癌细胞耐受ATRA发生凋亡。方法选取2012年11月一2013年11月期间本院诊治36例肝癌患者,将患者术后肝癌细胞制成标本。结果人体肝癌HepG2与Bel7402细胞均存在PTEN表达,经160μmol／L的ATRA处理24h后可加强这些细胞的PTEN的表达。Co—IP技术实验得知甲胎蛋白可与PTEN相结合,最终对ATRA产生影响。结论肝癌细胞中表达的甲胎蛋白可与PTEN相结合,最终发现AFP为肝癌细胞耐受ATRA的重要因子。     

Identification of oligopeptide binding to colon cancer cells separated from patients using laser capture microdissection

The development of intravascular conjugates that efficiently deliver genes or drugs to tumors is limited by the lack of efficacious targeting ligands. Small targeting peptides, such as those iterated by phage display technology, offer enormous potential for these applications. The majority of reports published to date have focused on the identification of peptides isolated for their ability to bind to human cancer cell lines in vitro, and have failed to account for the loss of polarization and de-differentiation of such cells from their in vivo state. Here, we report a novel approach for the identification of peptides capable of binding specifically to cancer cells derived from clinically resected human colon cancer. In this strategy, laser capture microdissection (LCM) is performed on a surgically resected colon cancer specimen to separate only cancer cells from the specimen. Subsequently, biopanning was performed on the LCM-selected colon cancer cells to identify peptide sequences that bound specifically to them. A peptide containing the SPT motif was selected as the most promising consensus sequence binding specifically to the LCM-selected colon cancer cells. Phage clones displaying the SPT motif demonstrated 9-fold higher binding to colon cancer cells derived from a patient than insertless phage (p < 0.05), while, recovery of the SPT phage from the colon cancer cell lines DLD-1 and HCT-15 was 7-fold higher than that of the control insertless phage (p < 0.05). The binding of SPT phage to colon cancer cells from the patient was confirmed by immunofluorescence. Additionally, a synthesized SPT-containing peptide (SPTKSNS) showed binding activity in the absence of mitogenic effects on colon cancer cells in vitro. In summary, we have introduced LCM into a biopanning procedure and identified a small peptide that binds preferentially to colon cancer cells derived from a clinically resected sample. This procedure could be applicable for the design of customized cancer cell targeting methodologies using clinical biopsy samples from human subjects.     

2000例农村35~64岁妇女宫颈癌筛查结果分析

国内外研究表明,宫颈癌仍然是威胁妇女健康和生命的主要疾病。然而它是感染性疾病,是可以预防和治愈的。正据世界卫生组织统计,我国每年新增宫颈癌13.15万例,约占世界宫颈癌新发病例的28.8%。为保障妇女身体健康,裕民县开展了农村35~64岁妇女子宫颈癌自愿免费筛查,对2000例裕民县户籍的农村35~64岁妇女进行妇科内诊检查,宫颈脱落细胞液基标本采集,细胞学阳性者在阴道镜下活检可疑病灶病理检查。患病率现将该县2000名农村已婚妇女宫颈癌筛查结果分析如下。