麦冬皂苷D对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞保护作用的研究

目的研究麦冬皂苷D对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的保护作用及其作用机制。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7, 按随机数字表法分为正常对照组、模型组和麦冬皂苷D预处理组。采用CCK-8法检测麦冬皂苷D对RAW264.7细胞活性的影响;采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧自由基(ROS)、MDA、SOD水平;Western Blot检测细胞NF-κB、TLR4、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与模型组比较, 麦冬皂苷D组细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA水平降低(P<0.05), SOD水平升高(P<0.05), NF-κB[(0.76±0.10)比(2.26±0.17)]、TLR4[(0.98±0.09)比(1.74±0.19)]蛋白表达降低(P<0.05), Nrf2[(0.85±0.03)比(0.54±0.03)]、HO-1[(0.97±0.11)比(0.37±0.04)]蛋白表达升高(P<0.05)。结论麦冬皂苷D可能通过抑制TLR4/...     

芪归方有效组分治疗特发性肺纤维化的实验研究

目的：基于Smurf2串话TGF-β1/Smad信号通路研究芪归方有效组分对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响及机制。方法：体外予以10 ng/mL TGF-β1培养MRC-5细胞，PCR仪检测α-SMA的mRNA水平判断模型是否成功。设立正常对照组、模型组（10 ng/mL TGF-β1处理）、泼尼松处理组、芪归方有效组分高剂量组、中剂量组、低剂量组，采用CCK-8法检测MRC-5的增殖情况，Western blot检测各组细胞Smad7、SnoN蛋白的表达水平，RT-PCR检测各组细胞Smurf2的mRNA水平。结果：与正常对照组比较，48 h模型组细胞增殖明显，α-SMA的mRNA水平增加（P<0.01），造模成功。经10 ng/mL TGF-β1处理细胞MRC-5，与正常对照组比较，Smad7、SnoN蛋白水平显著降低，Smurf2蛋白mRNA水平升高（P<0.01或P<0.05）。不同浓度芪归方有效成分处理组细胞增殖降低，可逆转以上各指标的改变，呈一定的量效关系。结论：芪归方有效组分能抑制MRC-5细胞增殖，可通过减少MRC-5细胞中Smurf2所介导的Smad7、SnoN的泛素化，恢复Smad7、SnoN蛋白的表达，从而调节肺纤维化的发生发展。     

软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的：探讨软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads 信号通路的影响。方法105只Wistar大鼠,按随机数字表法随机分为正常对照组,模型组,秋水仙碱组,大黄?虫丸组,软肝颗粒高、中、低剂量组,每组15只。采用四氯化碳和高胆固醇饮食诱导肝纤维化。模型制作后,软肝颗粒低、中、高剂量组分别灌胃软肝颗粒混悬液3.600、7.200、14.400 g/(kg?d);大黄?虫丸组灌胃大黄?虫丸混悬液0.180 g/(kg?d);秋水仙碱组灌胃秋水仙碱混悬液0.108 mg/(kg?d);正常对照组和模型组以等体积蒸馏水灌胃。均连续灌胃8周。采用免疫组化染色法检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7表达,运用 RT-PCR 技术检测肝组织 TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA 表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1[(2.59±0.99)比(0.43±0.21)]、Smad3[(2.56±0.67)比(0.41±0.18)]蛋白及 TGF-β1 mRNA[(2.25±0.21)比(0.71±0.09)]、Smad3 mRNA[(2.34±0.03)比(0.78±0.12)]表达显著升高（P均＜0.01）。与模型组比较,软肝颗粒高剂量组TGF-β1[(1.12±0.27)比(2.59±0.99)]、Smad3蛋白[(1.05±0.34)比(2.56±0.67)]表达下降,Smad7蛋白表达[(2.33±0.62)比(0.36±0.18)]升高（P＜0.01）,TGF-β1 mRNA[(1.09±0.11)比(2.25±0.21)]、Smad3 mRNA[(1.10±0.02)比(2.34±0.03)]表达下降,Smad7 mRNA[(1.18±0.13)比(0.38±0.11)]表达升高（P＜0.05）。结论软肝颗粒可通过下调TGF-β1、Smad3,上调Smad7调节肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路。     

氧化苦参碱抗角膜瘢痕作用机制的研究

目的:研究不同等级浓度的氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对兔角膜成纤维细胞增殖和转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA表达的影响,从而探讨OM抑制角膜瘢痕增生的机制。方法:选用试验用新西兰大白兔采集兔角膜成纤维细胞并进行培养,运用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察不同OM浓度(20、40、60、80、100μg/mL)对兔角膜成纤维细胞增殖的影响,运用RT-PCR技术研究不同浓度OM对兔角膜成纤维细胞TGF-β_1 mRNA及α-SMA mRNA表达的影响。结果:MTT法检测结果显示,加入不同浓度OM的实验组与对照组(0.631±0.004)相比较,实验组兔角膜成纤维细胞增殖均显著受抑制(OD值分别为0.568±0.002、0.465±0.002、0.331±0.004、0.236±0.003、0.105±0.002),差异有统计学意义(P0.01):不同浓度(20、40、60、80、100μg/mL)OM均可抑制兔角膜成纤维细胞TGF-β_1mRNA的表达,且随着浓度的增大,其抑制作用增强;从正常兔角膜成纤维细胞中未检测到α-SMA mRNA的表达。结论:OM对体外培养的兔角膜成纤维细胞增殖及TGF-β_1mRNA的表达具有抑制作用,并随着OM浓度的增加,其抑制作用也增强。     

黄芪毛蕊异黄酮对转化生长因子β1诱导内皮细胞转分化的影响

目的:探讨黄芪单体毛蕊异黄酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人脐静脉内皮细胞转分化的影响,以阐明黄芪毛蕊异黄酮对肾脏纤维化的保护作用。方法:人脐静脉内皮细胞系ECV-304为研究对象,体外培养ECV-304细胞株,分为正常对照组,TGF-β1组(10μg/L),TGF-β1+毛蕊异黄酮低、中、高剂量组(0.1、1、10mg/L)。各组细胞培养72h后,采用荧光倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,Western Blot检测肌成纤维细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。结果:与正常对照组相比,TGF-β1组细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态,TGF-β1明显促进α-SMA蛋白的表达(P<0.01);毛蕊异黄酮与TGF-β1共培养后可明显抑制TGF-β1诱导的细胞形态学改变及α-SMA的表达(P<0.05),高剂量组比低、中剂量组有更强的抑制效应,低剂量组抑制效应最弱。结论:黄芪单体毛蕊异黄酮可以抑制TGF-β1诱导的内皮细胞(ECV-304)向肌成纤维细胞转化,具有保护内皮细胞的作用,从而为防治慢性肾脏病提供了依据。     

生肌玉红膏通过下调TGF-β1/Smads抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原分泌

目的探讨生肌玉红膏(SJYHG)对人增生性瘢痕成纤维细胞(h HSF)增殖、胶原分泌及TGF-β1/Smads通路的影响。方法采用原代培养的h HSF模型,加入SJYHG培养后,CCK-8法测定450nm波长各孔溶液吸光度值(A值),荧光定量PCR检测α-SMA、I、III型胶原的mRNA表达,WB检测α-SMA、I、III型胶原和P-Smad2、P-Smad3的蛋白表达。结果 SJYHG浓度依赖地极显著地抑制h HSF增殖(P0.001),并显著抑制了α-SMA和I、III型胶原的mRNA和蛋白表达(P0.05),显著下调P-Smad2和P-Smad3的蛋白表达(P0.001)。结论 SJYHG具有潜在的抑制增生性瘢痕的作用。     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ刺激大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1及smad7表达的影响

目的：观察姜黄素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)刺激大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1及smad7表达的影响,探讨姜黄素改善肾间质纤维化的作用机制。方法培养大鼠肾小管上皮细胞,按随机数字表法分为空白组,AngⅡ对照组,姜黄素低、中、高剂量组。除空白组外,于其余各组细胞培养液中加入10-8mol/L的AngⅡ溶液进行干预;姜黄素低、中、高剂量组分别加入2.5、5.0、10.0μmol/L姜黄素溶液进行干预。干预48 h后,采用Western blot检测各组肾小管上皮细胞TGF-β1、smad7蛋白表达,采用RT-PCR检测肾小管上皮细胞TGF-β1、smad7 mRNA表达。结果与空白组比较,AngⅡ对照组肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白[(0.23±0.03)比(0.16±0.01)]、TGF-β1 mRNA[(1.89±0.20)比(1.00±0.00)]表达升高(P＜0.05),smad7蛋白[(0.19±0.03)比(0.24±0.02)]、smad7 mRNA[(0.48±0.05)比(1.00±0.00)]表达降低(P＜0.05);与 AngⅡ对照组比较,姜黄素低、中、高剂量组 TGF-β1蛋白[(0.18±0.02)、(0.17±0.02)、(0.16±0.03)比(0.23±0.03)]、TGF-β1 mRNA[(1.58±0.11)、(1.34±0.16)、(0.97±0.19)比(1.89±0.20)]表达下降(P＜0.05),smad7蛋白[(0.28±0.04)、(0.31±0.03)、(0.34±0.04)比(0.19±0.03)]、smad7 mRNA[(0.68±0.07)、(0.80±0.06)、(0.98±0.09)比(0.48±0.05)]表达升高(P＜0.05)。结论姜黄素可对抗AngⅡ介导的肾间质纤维化从而发挥肾脏保护作用,其作用机制可能与降低TGF-β1蛋白及其mRNA表达、上调smad7蛋白及其mRNA表达有关。     

组分复方“CKJ”药物血清对大鼠原代肝星状细胞活化和转化生长因子β_1及其受体的影响

目的探讨由虫草多糖、苦杏仁苷、绞股蓝总皂苷组成的"CKJ方"药物血清对大鼠原代肝星状细胞(primary hepatic stellate cells,r HSCs)活化的影响及相关药理作用机制。方法分离并培养r HSCs,将培养4天的r HSCs分为正常组、模型组及CKJ组。模型组及CKJ组以2.5 ng/m L转化生长因子β1(TGF-β1)刺激造模24 h,正常组以不含TGF-β1的基质液(无血清的DMEM)作为对照。药物组以5%CKJ方药物血清继续孵育24 h,正常组及模型组以5%空白血清孵育24 h。采用细胞高内涵筛选技术(HCS)免疫荧光法及Western blot检测r HSCsα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、血小板源性生长因子β受体(PDGF-βR)、TGF-β1、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、转化生长因子β受体2(TGF-βR2)mRNA的表达水平。结果与正常组比较,模型组r HSCsα-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA表达水平明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,5%CKJ药物血清组r HSCsα-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA表达水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论组分复方"CKJ"药物血清可降低大鼠r HSCsα-SMA的蛋白表达,其主要作用机理可能与抑制TGF-β1及其相关受体有关。     

补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化的机制研究

目的:通过观察补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏TGF-β_1/Smads通路信号分子的表达作用,阐释补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤的作用。方法:将20只雄性盐抵抗大鼠(dahl salt resistant rat,SS)随机分为正常对照组,中药对照组,20只雄性dahl盐敏感大鼠(dahl salt sensitive rat,DS)随机分为模型组和中药治疗组,每组10只。高盐饲料喂养12 d后,中药对照组和中药治疗组予以补阳还五汤灌胃治疗,每日1次,共治疗5周。治疗结束后取大鼠左肾组织检测TGF-β_1Smad2 Smad7及α-SMA的mRNA表达和P-Smad2蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达升高(P0.05),Smad7mRNA表达降低(P0.05),P-Smad2蛋白表达升高(P0.05);补阳还五汤治疗后,与模型组比较中药治疗组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达降低(P0.05);Smad7mRNA表达升高(P0.05),P-Smad2蛋白表达降低(P0.05)。结论:补阳还五汤可能是通过调节肾脏TGF-β_1/Smads通路相关信号分子的表达抑制肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤。     

加味黄风汤对IgA肾病大鼠肾组织α-SMA及TGF-β表达的影响

目的:观察加味黄风汤对IgA肾病模型大鼠肾组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β(TGF-β)的影响。方法:IgA肾病大鼠造模后,随机分为空白正常组、模型组、雷公藤对照组、加味黄风汤单倍剂量及双倍剂量治疗组,给药12周。检测大鼠尿液、生化、肾组织病理及α-SMA及TGF-β表达改变。结果:加味黄风汤治疗组尿蛋白水平低于模型组(P<0.05)。治疗组肾小球系膜区IgA沉积较模型组明显减弱,系膜基质及系膜细胞增生程度较模型组轻,免疫组化α-SMA及TGF-β表达强度较模型组弱(P<0.05)。加味黄风汤治疗组α-SMA及TGF-β蛋白表达明显下降(P<0.05),m RNA表达亦明显下降(P<0.05)。结论:加味黄风汤能减少尿蛋白,减少肾组织系膜区IgA沉积,减轻系膜细胞及系膜基质增生,下调α-SMA及TGF-β蛋白及m RNA的表达,保护肾脏功能。     

实脾固肾化瘀方对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织I型胶原蛋白、转化生长因子β1、层黏连蛋白及α平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的：观察实脾固肾化瘀方对阿霉素诱导肾纤维化大鼠I型胶原蛋白、转化生长因子β1（TGF-β1）、层黏连蛋白（LN）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、治疗组、福辛普利组,每组10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用尾静脉注射阿霉素（4 mg/kg）制作肾纤维化模型。造模后2周,治疗组和福辛普利钠组分别灌胃给予实脾固肾化瘀方浸膏（43 g/kg）和福辛普利钠溶液（2 mg/kg）,正常对照组和模型组灌胃给予等体积生理盐水,均为1次/d。给药30 d后,检测尿蛋白,并采用免疫组织化学法检测肾组织I型胶原蛋白、层黏连蛋白（LN）、转化生长因子β1（TGF-β1）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化。结果治疗组肾组织 I 型胶原蛋白、LN、TGF-β1及α-SMA 表达[分别为（24.64±0.67）、（18.71±0.72）、（14.71±0.68）、（17.64±0.74）]较模型组[分别为（32.86±0.88）、（28.35±0.87）、（18.35±0.96）、（25.86±0.85）]下降（P＜0.01）,与福辛普利钠组[分别为（27.33±0.73）、（20.44±0.81）、（15.44±0.85）、（19.33±0.77）]比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HE染色结果显示,治疗组大鼠肾小球系膜细胞及基底膜增生程度均较模型组明显改善。结论实脾固肾化瘀方可下调阿霉素诱导肾纤维化大鼠I型胶原蛋白、LN、TGF-β1和α-SMA表达。     

参藤三黄汤合葛根芩连汤对糖尿病肾脏疾病大鼠的治疗作用

目的:探讨参藤三黄汤合葛根芩连汤对糖尿病肾脏疾病(DN)的保护机制。方法:通过单侧肾切除术联合注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型大鼠,采用随机数字表法分为空白组、模型组、厄贝沙坦组(15 mg·kg-1)、参藤三黄汤合葛根芩连汤高、中、低剂量(5,10,20 g·kg-1)组。分别予以相应药物灌胃8周,检测各组大鼠体质量、血糖、血尿素氮(BUN),24 h尿量(24 h U-vol),24 h尿蛋白(24 h U-pro),血清肌酐(SCr),肾质量/体质量指数(KW/BW),取各组大鼠肾组织,匀浆取上清,试剂盒检测丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad泛素化调节因子2(Smurf2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P<0.05),KW/BW增大(P<0.05),各项生化指标明显异常,表现在血糖明显升高(P<0.05),BUN,24 h U-vol,24 h U-pro,SCr及MDA明显升高,SOD及CAT明显降低(P<0.05)。Western blot显示,Smurf2及TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05),MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,厄贝沙坦组和参藤三黄汤合葛根芩连汤各组指标改善明显,体质量增加(P<0.05),KW/BW降低(P<0.05),血糖,BUN,24 h U-vol,24 h U-pro,SCr及MDA明显降低,SOD及CAT明显升高(P<0.05),Smurf2及TGF-β1表达明显降低(P<0.05),MMP-9表达明显升高(P<0.05)。结论:参藤三黄汤合葛根芩连汤能有效改善DN模型大鼠多项生化指标,改善肾脏功能,其作用机制与降低Smurf2及TGF-β1表达,增强及MMP-9的表达密切相关。     

扶正通络消积三方对肺纤维化大鼠肺组织上皮间质转化的影响

目的:探讨扶正通络消积三方(养清抗纤方、保肺化纤方、金水缓纤方)对肺纤维化大鼠肺组织上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:180只雄性SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、吡非尼酮组、养清抗纤组、保肺化纤组及金水缓纤组,每组30只,采用气管内滴注博来霉素(5mg/kg)的方法制备肺纤维化模型。以造模日为第0天,各组于造模后第1~13天、15~27天、29~41天采用上述药物灌胃,第14、28、42天每组取10只取材。采用Masson染色检测肺组织病理变化和评分;免疫组化测定肺组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)表达;分子生物学技术检测肺组织转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cad)mRNA和蛋白表达。采用R值综合评价法评价扶正通络消积三方对肺纤维化大鼠EMT的影响。结果:在各个时间点,与空白组比较,模型组大鼠肺组织纤维化评分、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ及TGF-β1、α-SMA mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01),E-cad表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组在各个时间点均不同程度改善,第14天,养清抗纤组肺纤维化评分降低(P<0.05),肺组织TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达较金水缓纤组和保肺化纤组显著降低(P<0.05,P<0.01);第28天,保肺化纤组Col-Ⅰ和Col-Ⅲ表达较吡菲尼酮组显著降低(P<0.05),α-SMA mRNA较养清抗纤组和金水缓纤组显著降低(P<0.05);第42天,金水缓纤组肺纤维化评分显著降低(P<0.05),α-SMA mRNA、TGF-β1蛋白表达较养清抗纤组显著降低(P<0.01)。结论:扶正通络消积三方在不同疾病发展阶段均能改善肺纤维化,保肺化纤方和金水缓纤方在中、晚期改善纤维化尤为显著。     

Effect of Tangnaikang on TGF-β1-induced transdifferentiation of human renal tubular epithelial HK-2 cells

Objective

To explore the function of Tangnaikang (TNK) in the prevention and treatment of renal interstitial fibrosis through transdifferentiation of the human renal tubular epithelial cell line HK-2 induced by transforming growth factor-β₁ (TGF-β₁).

Methods

HK-2 cells cultured in dulbecco's modified eagle medium/F12 (1:1) with 10% fetal calf serum were divided into six groups: blank control group, TGF-β₁ group (TGF-β₁ 10 ng/mL), serum control group (TGF-β₁ 10 ng/mL + 10% serum), treatment group 1 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 5% TNK serum), treatment group 2 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 10% TNK serum), and treatment group 3 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 20% TNK serum). Cell proliferation was detected by 4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin were observed by immunohistochemical assay. The contents of collagen I (Col I), collagen III (Col III), and fibronectin (FN) in the culture medium supernatant were detected by ELISA.

Results

E-cadherin was expressed and α-SMA was not expressed in normal HK-2 cells. In HK-2 cells cultured with TGF-β₁ α-SMA expression significantly increased, HK-2 cells significantly proliferated, and secretion of Col I, Col III, and FN significantly increased compared with the blank control group (all P<0.05). In the HK-2 cells cultured with TGF-β₁ and TNK serum, the expression of α-SMA significantly decreased, the expression of E-cadherin significantly increased, and the cell proliferation and the secretion of Col I, Col III and FN were significantly inhibited compared with the TGF-β₁ group (all P<0.05).

Conclusion

TNK can inhibit cell proliferation and reduce secretion of Col I, Col III, and FN. This indicates that TNK can inhibit transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells induced by TGF-β₁, with the effect of preventing and treating renal interstitial fibrosis.     

白杨素调控NF-κB/Twist 1信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化的机制研究

研究白杨素(ChR)是否通过影响核转录因子κB(NF-κB)/Twist 1信号通路,进而抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化作用。动物实验设对照组、博莱霉素组(BLC)、BLC+ChR(50 mg·kg^-1)和BLC+ChR(100 mg·kg^-1)剂量组,每组动物15只。气管注射BLC(7500 U·kg^-1)诱导肺纤维化大鼠模型,造模后连续灌胃给药28 d。细胞实验设对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)(5 ng·mL^-1)组、TGF-β1+ChR(1,10,100μmol·L^-1)组,Ⅱ型肺泡上皮细胞先用TGF-β1处理24 h,再用TGF-β1和(或)不同剂量ChR处理48 h。肺组织病理变化和胶原沉积情况分别采用HE染色、Masson染色和免疫组化法进行观察。肺组织和细胞内Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、E钙粘蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和Twist 1 mRNA及蛋白表达分别采用qPCR和(或)Western blot法检测。动物实验结果显示,与BLC组相比,ChR给药28 d后,大鼠肺纤维化程度明显减轻;肺组织collagenⅠ表达明显下降(P<0.05或P<0.01);肺组织肺泡上皮细胞EMT程度明显受到抑制[ZO-1和E-cadherin的表达明显升高,α-SMA和vimentin的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)];肺组织细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平、胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果表明,不同剂量ChR能够明显减轻TGF-β1诱导的collagenⅠ的表达(P<0.05或P<0.01),显著抑制细胞EMT[E-cadherin和ZO-1的表达明显升高,vimentin和α-SMA的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)],同时能够明显抑制TGF-β1诱导的细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平并降低细胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达(P<0.05或P<0.01)。综上结果推测ChR能够逆转肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT、缓解肺纤维化,其机制可能与其降低细胞内IκBα磷酸化水平、抑制NF-κB p65的磷酸化和其核转移,进而下调Twist 1的表达有关。     

丹参涂膜剂对肥厚性瘢痕裸鼠模型血液流变学及细胞因子TGF-β1、bFGF的影响

目的:研究丹参涂膜剂对肥厚性瘢痕裸鼠模型微循环及细胞因子TGF-β1、bFGF的影响。方法:利用微循环检测仪分别在实验初期、中期(用药4周)、末期(用药8周)观察各组瘢痕内毛细血管形态,毛细血管流态,毛细血管与周围组织吻合状况,并计数微血管;免疫组化EnVision法检测TGF-β1、bFGF表达。结果:丹参涂膜剂可改善增生期瘢痕微循环局部缺氧状态,抑制成熟过渡期瘢痕微循环血供,也可显著降低TGF-β1在肥厚性瘢痕中光密度值(P<0.05),增加bFGF在肥厚性瘢痕中光密度值(P<0.05)。结论:丹参涂膜剂可改善肥厚性瘢痕微循环状态,下调TGF-β1、上调bFGF的表达。     

扁蒴藤素对肺纤维化模型小鼠肺组织形态及转化生长因子-β1、α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的观察扁蒴藤素对肺纤维化模型小鼠肺组织形态及转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其作用机制。方法采用气管内注射博来霉素溶液制备小鼠肺纤维化模型。将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、扁蒴藤素组及吡非尼酮组,每组8只。正常组和模型组给予等量生理盐水腹腔注射,扁蒴藤素组给予1 mg/kg扁蒴藤素溶液腹腔注射,吡非尼酮组给予50 mg/kg吡非尼酮溶液腹腔注射。给药体积10 mL/kg,每日1次,连续28 d。取肺组织行HE及Masson染色,评估小鼠肺组织病理学变化及胶原沉积;免疫组化和Western bot检测小鼠肺组织TGF-β1及α-SMA蛋白的表达。结果HE及Masson染色显示,扁蒴藤素组小鼠肺泡炎及肺纤维化评分低于模型组(P<0.05,P<0.01);免疫组化及Western blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠TGF-β1及α-SMA蛋白表达明显升高;与模型组比较,扁蒴藤素组和吡非尼酮组小鼠肺组织TGF-β1及α-SMA蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论扁蒴藤素可改善模型小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1及α-SMA蛋白表达有关。     

地龙提取物通过抑制TGF-β1信号通路发挥抗肺纤维化作用研究

目的:探讨地龙提取物对抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路诱导的肺泡上皮细胞间质转化和肺成纤维细胞活化的影响。方法:MTT法分析地龙提取物对两种细胞增殖的影响。TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化和MRC-5肺成纤维细胞的活化; 圆形度定量法分析细胞形态,免疫细胞化学法检测细胞E-钙黏附素(E-cad)和Collagen-Ⅰ蛋白的表达; 双抗体夹心酶联免疫吸附法检测Collagen-Ⅰ和FN水平。结果:对于A549细胞,与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达均显著降低(P<0.01),Collagen-Ⅰ表达显著升高(P<0.01); 与TGF-β1组比较,地龙组能显著抑制E-cad表达的下调(P<0.05),地龙组能显著抑制Collagen-Ⅰ表达的上调(P<0.05)。对于MRC-5细胞,与正常组比较,TGF-β1组FN、Collagen-Ⅰ的分泌量均显著增加(P<0.01); 与TGF-β1组比较,地龙组的上述两种蛋白的分泌量均显著减少(P<0.05)。结论:地龙提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化,提示地龙提取物可能具有抑制肺纤维化的形成和发展的作用。     

紫草色素对兔耳增生性瘢痕的影响

目的：研究紫草色素对兔耳增生性瘢痕的抑制作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法：建立兔耳增生性瘢痕动物模型,造模成功后分为模型对照组（M组）和紫草色素组（S组）。肉眼观察紫草色素对兔耳增生性瘢痕组织学影响,采用免疫组织化学法对样本进行成纤维细胞计数、CD34＋血管计数及对TGF-β1、TNF-α进行阳性表达,比较S组与M组在组织形态学、成纤维细胞数量与血管密度、TGF-β1、TNF-α阳性表达的差异。结果：组织形态学观察和兔耳瘢痕厚度测量结果显示,S组较M组能减淡瘢痕且降低瘢痕厚度;染色结果显示给予紫草色素后能够减少成纤维细胞数量和抑制血管增生,抑制TGF-β1及促进TNF-α阳性表达,两组比较均具有统计学意义（P〈0.05,0.01）。结论：紫草色素能够抑制增生性瘢痕,且其机制可能与抑制成纤维细胞增殖、血管增生及TGF-β1的阳性表达,提高TNF-α阳性表达有关。     

人参皂苷Rg1对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血红细胞生成素受体(EPOR)表达变化的关系。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、5μg/L TGF-β1刺激组,人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5μg/L TGF-β1的基础上分别加入10,20,40 mg/L的人参皂苷Rg1)。每组细胞干预72 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定细胞培养上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的含量。实时荧光定量PCR方法检测EPOR mRNA转录水平,免疫细胞化学法检测各组表达EPOR细胞的阳性率。结果 TGF-β1诱导NRK52E细胞形态变化,从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞形态,并抑制细胞增殖(P<0.05),增加细胞表达Col-Ⅰ和FN,抑制EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05);人参皂苷Rg1以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态的改变,减少Col-Ⅰ和FN的表达,上调EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT具有一定的抑制作用;该作用可能与人参皂苷Rg1上调肾小管上皮细胞EPOR的表达有关。