TCRγδ+CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞在3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠慢性病毒性肝炎发病中的作用

目的本研究拟探讨在MHV-3诱导的慢性病毒性肝炎模型小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞在T淋巴细胞中比例变化以及其主要表面分子标记的变化。方法取60只C3H/Hej小鼠,腹腔注射10pfu MHV-3;应用流式细胞仪三色或四色荧光分析法分别检测小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞在T淋巴细胞中的比例及其CD25、CD28、CD30和CD44表达的变化。结果 MHV-3诱导的慢性病毒性肝炎小鼠各时间点外周血和脾脏TCRγδ+DNT在T淋巴细胞中的比例较对照组显著升高(P<0.05);在感染后10天达到最高峰:外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞占T淋巴细胞的比例分别为4.8±1.5%和4.5±1.3%;模型小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞的表型均为TCRγδ+CD3+CD4-CD8-CD25-CD28-CD30-CD44+。结论感染MHV-3后C3H/Hej小鼠体内TCRγδ+DNT细胞的数量增加,提示TCRγδ+DNT细胞参与了MHV-3诱导的小鼠慢性病毒性肝炎的发生和发展过程。     

CD4-CD8-T细胞对小鼠病毒性肝炎慢性化的免疫调节作用

目的：探讨CD4-CD8-T细胞（DNT细胞）在小鼠病毒性肝炎慢性化中的作用和机制.方法：C3H/Hej小鼠感染3型鼠肝炎病毒（MHV-3）建立了小鼠慢性肝炎模型.分离感染病毒5天后的小鼠脾脏细胞,利用磁珠法分选得到DNT细胞,通过小鼠尾静脉注射过继到同样感染MHV-3的小鼠,观察其生存率、组织炎症和病毒载量的变化,检测FasL表达情况.体外将DNT细胞与同来源的CD8＋T淋巴细胞共培养观察其抑制效应.结果：实验发现,肝炎小鼠的生存率由23.3％提高到46.67％,肝脏组织炎症减轻,病毒载量无变化.体外实验DNT细胞高表达FasL,对CD8＋细胞有特异性杀伤效应.结论：CD4-CD8-双阴性T细胞可以通过Fas/FasL途径对CD8＋T细胞进行特异性杀伤,从而导致肝炎的慢性迁延.     

T细胞抗原受体γδ+T细胞在小鼠暴发型肝炎模型中的作用

目的:T细胞抗原受体(TCR)γδ+T细胞是一种表型和功能独特的T淋巴细胞亚群.通过检测TCR γδ+T细胞在3型鼠肝炎病毒(MHV-3)诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的比例变化,初步探讨TCRγδ+T细胞在该疾病模型中的作用.方法:通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱导暴发型肝炎,利用流式细胞术来检测小鼠外周血、肝脏及脾脏TCRγδ+T细胞的比例变化,并进行统计学分析.结果:BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,全部在3～6天内死亡,小鼠外周血、脾脏及肝脏中的TCR γδ+T细胞占CD3+T细胞的比例均在感染后48小时发生显著升高(P＜0.05).MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中TCR γδ+T细胞的比例显著升高,与疾病严重程度呈正相关.结论:TCR γδ+T细胞可能在小鼠暴发型肝炎发生发展中发挥重要作用,为进一步研究小鼠暴发型肝炎的发病机制提供更充分的理论基础.     

MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏表达IL-9免疫细胞的变化

目的研究MHV-3病毒感染所致的暴发性肝炎小鼠肝脏T淋巴细胞亚群胞内细胞因子IL-9表达的变化,以探讨IL-9在该疾病模型中的作用。方法利用MHV-3病毒诱导Balb/cJ小鼠暴发性肝炎模型,采用流式细胞术检测肝脏分泌IL-9的淋巴细胞亚群比例的变化。结果随着MHV-3感染时间的延长,肝脏分泌IL-9的CD4＋T细胞比例由感染前的1.87±1.36%于48小时升高到4.77±0.42%,差异显著（P〈0.05）;而分泌IL-9的CD4-CD8（-DN）T细胞比例则于感染后72小时达峰值7.83±3.30%,显著高于感染前（3.57±1.82,P〈0.05）和24小时时（3.60±0.85,P〈0.05）。结论随着感染时间延长,肝脏分泌IL-9的CD4＋T和CD4-CD8（-DN）T淋巴细胞显著升高,说明IL-9可能参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠免疫诱导的肝脏损伤发病过程。     

IL-22和SOCS3在3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠慢性病毒性肝炎发病中的作用探讨

探讨鼠3型肝炎病毒（MHV-3）诱导的慢性病毒性肝炎C3H/Hej小鼠肝组织白细胞介素-22（IL-22）和细胞因子信号抑制因子3（SOCS3）mRNA水平的变化。方法给C3H/Hej小鼠腹腔注射MHV-3（100 pfu）,诱导慢性病毒性肝炎模型,采用实时荧光定量PCR 法检测MHV-3感染后0、5、10、15和20 d时小鼠肝组织IL-22和SOCS3 mRNA水平的变化。结果模型鼠肝组织IL-22和SOC3 mRNA水平在0 d时分别为（0.26±0.15）%和（6.35±2.21）%,在感染后10、15和20 d后IL-22水平分别为（6.28±2.79）%、（2.50±1.24）%和（2.73±0.85）%,SOC3水平分别为（16.92±4.39）%、（14.06±4.09）%和（13.36±1.89）%,均较0 d时显著增高（P〈0.05）,且在第10 d达到最高峰。结论 IL-22和SOCS3可能参与了MHV-3诱导的小鼠慢性病毒性肝炎的发生发展过程。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在不同类型肝炎小鼠模型中的作用探讨

目的:观察CD4+CD25+Treg细胞(CD4+CD25+调节性T细胞)在不同类型肝炎小鼠模型中的比例变化,探讨CD4+CD25+Treg细胞在不同类型肝炎小鼠模型中的作用.方法:通过腹腔注射3型鼠肝炎病毒(MHV-3),在Balb/cJ和A/J两种小鼠上分别建立暴发型肝炎和无症状携带者两类小鼠病毒性肝炎模型,观察病毒感染后两种小鼠肝脏病理变化,检测其血清中的AST、ALT和TBil水平,比较感染后不同时间点脾脏和外周血CD4+CD25+Treg细胞的比例.结果:Balb/cJ小鼠在3～7天内死亡,其肝脏出现大面积坏死,血清AST、ALT和TBil水平急剧上升,CD4+CD25+Treg细胞比例没有发生变化;A/J小鼠长期存活并且肝脏无病理改变,CD4+CD25+Treg细胞比例明显增加.结论:CD4+CD25+Treg细胞可降低MHV-3病毒感染导致的免疫反应强度,减少肝脏的免疫病理损伤,促进了MHV-3病毒性肝炎的慢性化.     

MHV-3诱导暴发型肝衰竭小鼠肝组织细胞因子表达的变化

目的研究病毒感染所致急性肝衰竭小鼠细胞因子的变化。方法利用MHV-3病毒诱导Balb/cJ小鼠暴发型肝炎模型;采用ELISA法测定外周血和肝脏IFN-γ和TNF-α水平。结果随着MHV-3感染时间的延长,动物外周血和肝组织IFN-γ和TNF-α水平逐渐增高,在小鼠死亡时达到高峰。结论 IFN-γ和TNF-α可能参与了MHV-3诱导的暴发型肝炎肝脏损伤的发病过程。     

CD4-CD8-T淋巴细胞在3型鼠肝炎病毒诱导的鼠慢性肝炎中的作用

目的 探讨CD4-CD8-双阴性T淋巴细胞(DNT细胞)的致病作用及其表面标志分子.方法 取30只C3H/Hej小鼠,腹腔注射10 pfu 3型鼠肝炎病毒(MHV-3),采用磁珠分选和Cytotox96非放射性细胞杀伤活性测定方法,检测MHV-3感染后0、4、15、30、40 d脾脏DNT细胞分别对肝细胞、脾脏CD8+T淋巴细胞以及鼠巨细胞病毒感染后的脾脏CD8+T淋巴细胞的杀伤效应.免疫荧光抗体标记后,用流式细胞技术三色荧光分析法对脾脏内DNT细胞的表型进行检测.数据进行t检验或单因素方差分析,并用S-N-K法进行差异显著性检验. 结果 MHV-3感染后的DNT细胞对CD8+T淋巴细胞具有明显的杀伤作用,其杀伤作用随着效应细胞与靶细胞的比例增加而增强.感染15 d时,当效靶比为1:1,2.5:1,5:1,10:1时,其杀伤效率分别为8.1%,38.6%,62.4%,90.3%.而对感染后的肝细胞以及非相关病毒感染的CD8+T淋巴细胞无明显杀伤效应.表型分析提示此群DNT细胞为一群全新的细胞群(TCR αβ+CD3+CD4-CD8 CD25 CD28-CD30-CD44+).结论 C3H小鼠感染MHV-3后的TCR αβ+CD3+CD4-CD8 CD25-CD28-CD30 CD44+细胞对同种病毒感染后的CD8+T淋巴细胞有特异性杀伤作用,提示该群细胞在慢性病毒性肝炎的发生和发展中起着一定的负性免疫调节作用,导致病毒感染慢性迁延.     

病毒性肝炎时肝B1-a细胞对肝脏保护作用的实验研究

目的:检测小鼠感染鼠肝炎病毒3型(MHV-3)后肝脏B-1a淋巴细胞亚群变化,探讨B-1a细胞在病毒性肝炎中的作用。方法:通过流式细胞术检测MHV-3诱导的耐受型小鼠及引起暴发性肝炎敏感小鼠肝脏中B细胞、B-1a细胞的基础水平,以及在感染后不同时间点的比例变化。磁珠分选出未感染敏感小鼠肝脏B-1a细胞并过继给敏感小鼠,观察感染MHV-3病毒72h后小鼠肝脏的病理组织学特征。结果:未感染时MHV-3耐受型小鼠肝脏中B细胞明显高于敏感型小鼠(43.6%±2.1%vs15.6%±3.3%,P<0.01),B-1a细胞在耐受型小鼠略高于敏感型小鼠(6.38%±2.13%vs5.84%±1.32%,P>0.05);感染后耐受型小鼠B-1a明显升高至(10.80%±2.82%,P<0.05),而敏感型小鼠呈现下降趋势。过继B-1a细胞的敏感小鼠肝脏坏死程度明显低于其它细胞组及PBS对照组。结论:肝脏固有B-1a细胞对MHV-3引起的病毒性肝炎具有保护性作用。     

大蒜新素、双黄连对小鼠MHV-3性暴发型肝炎模型的作用

目的:探讨大蒜新素、双黄连在整体水平抗鼠肝炎病毒3型(MHV-3)感染效应.方法:将小鼠分为:大蒜新素、双黄连治疗组,大蒜新素、双黄连预防组,大蒜新素、双黄连预防+治疗组,感染模型对照组,每组18只,及正常对照组,6只.建立MHV-3诱导的小鼠暴发型病毒性肝炎模型,通过观察模型小鼠存活时间、血浆ALT水平、肝脏病理改变...     

KCTD9在暴发性肝炎小鼠中的作用机制初探

目的 初步探讨KCTD9在暴发性肝炎模型小鼠中的作用机制.方法 78只BALB/cJ小鼠(其中雄性6只)随机分为暴发性肝炎对照组和暴发性肝炎模型组,每组39只(每组雄性3只);75只C3H/HeJ雌性小鼠分为慢性肝炎对照组(36只)和慢性肝炎模型组(39只).模型组每只小鼠腹腔注射MHV-3(100 PFU).暴发性肝炎对照组和模型组48 h试验点以1只雄性小鼠供取睾丸,2只雌性小鼠供取肝脾等组织标本和分离肝细胞,10只雌性小鼠为1个单位取肝组织供分离肝脾淋巴细胞;慢性肝炎对照组和模型组48 h时以1只小鼠供取肝脾组织,1只小鼠供分离肝细胞,10只为1个单位供分离肝脾淋巴细胞,重复3次,剩下3只小鼠在建模15d时处死,仅供取肝脾组织.磁珠分选肝脾单个核细胞,采用免疫组织化学、实时定量PCR技术检测KCTD9在暴发性肝炎、慢性肝炎模型动物中的表达差异,各组间比较用t检验或方差分析.结果 与对照组比较,KCTD9 mRNA在暴发性肝炎模型组小鼠肝CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤细胞(NK)细胞中分别上调8.8倍、59.4倍、577.1倍,t值分别为-5.393、-3.706和-4.714,P值均＜0.05,差异有统计学意义;在脾CD4+T细胞、CD8+T细胞中,KCTD9 mRNA表达水平分别下调了43％和69％,t值分别为2.906、10.98,P值均＜ 0.05,差异有统计学意义.与对照组比较,在慢性肝炎模型组小鼠肝NK细胞和CD4+T细胞中KCTD9 mRNA分别下调71％、51％,t值分别为3.827、5.746,P值均＜0.05,差异有统计学意义.KCTD9蛋白在暴发性肝炎模型组小鼠肝细胞中呈弱阳性表达,坏死灶周围及组织中炎症浸润细胞中呈强阳性表达;脾中阳性细胞仍散在分布,与对照组比较,脾白髓中细胞数量减少达71％.结论 KCTD9在MHV-3诱导的暴发性肝炎模型小鼠肝脏高表达,可能参与疾病发生和发展过程.     

MHV-3诱导暴发性肝炎小鼠肝组织KCNJ15的表达变化

目的研究病毒感染所致的急性肝衰竭模型中离子通道基因KCNJ15表达水平,探讨该疾病模型中KCNJ15的变化及其与疾病进程的关系。方法利用MHV-3病毒诱导的Balb/cJ小鼠暴发型肝炎模型,采用定量PCR和免疫组化技术分别从基因及蛋白水平检测肝脏KCNJ15表达水平,并应用流式细胞术检测肝脏淋巴细胞亚群KCNJ15表达。结果随着MHV-3感染时间的延长,肝组织中KCNJ15表达水平逐渐增高,以感染后72小时最为显著。在肝脏CD4+T细胞,KCNJ15蛋白表达水平于48小时显著升高,达到25.17±7.68%,与0h(3.92±1.33%)相比差异具有统计学意义(P<0.001),随后于72小时回落;肝脏表达KCNJ15的CD8+T细胞比例变化与CD4+T细胞趋势一致,于48h达到37.08±8.73%,与0h(6.98±3.48%)相比有显著差异(P<0.001);而表达KCNJ15的肝脏NK细胞比例则从7.72±1.34%上升到感染后24小时的峰值19.80±4.25%(P<0.001),随后回落。结论肝组织及肝脏淋巴细胞过表达KCNJ15可能参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠免疫诱导的肝脏损伤过程。     

肝脏自然杀伤细胞在小鼠急性肝衰竭中的作用

目的 探讨肝脏自然杀伤(NK)细胞在3型鼠肝炎病毒(MHV-3)诱导的小鼠急性肝衰竭中的作用.方法 取6～8周龄雌性Balb/cJ小鼠,腹腔注射100 pfu MHV-3,采用流式细胞术检测感染MHV-3 0、24、48、70 h后的Balb/cJ小鼠肝脏、脾脏、外周血和骨髓中NK细胞的百分率及肝脏NK细胞表面活化分子CD69表达的百分率.细胞内细胞因子染色法检测肝脏NK细胞分泌干扰素γ的水平.非放射性细胞毒试验检测肝脏NK细胞的杀伤活性. 结果Balb/cJ小鼠感染MHV-3后,肝脏NK细胞的比例显著升高,在感染48 h后达到峰值(43.9%±2.3%),约为感染前的4倍,随后仍维持在较高水平至小鼠死亡;外周血NK细胞比例同样明显升高,在感染48 h后达到峰值(18.0%±5.4%),但随后显著同落,至70 h仅为1.3%±0.6%,脾脏和骨髓NK细胞比例均先明显减少后又有所上升.肝脏NK细胞在MHV-3感染48 h后其表面活化分子CD69表达明显上调,杀伤活性显著增强,同时分泌干扰素Y的水平也显著增加. 结论 Balb/cJ小鼠感染MHV-3后,来自骨髓和脾脏的NK细胞在肝脏迅速大量募集和活化,且杀伤活性显著增强,分泌干扰素Y水平也显著增加,表明肝脏NK细胞在MHV-3导致的急性肝衰竭中可能发挥着关键作用.     

Phenotypical analysis and cytokine release of liver-infiltrating and peripheral blood T lymphocytes from patients with chronic hepatitis of different etiology

Cytokines released by infiltrating T cells may contribute to the hepatic injury in chronic hepatitis. Therefore, we characterized peripheral blood- and liver-infiltrating T cells from patients with chronic hepatitis of different etiology and determined the T cell phenotypes and the cytokine release. Liver tissue and peripheral blood-derived T cells from patients with autoimmune hepatitis and primary biliary cirrhosis predominantly expressed CD4-molecules and the α- and β-chains of the T cell receptor (TCR). In chronic viral hepatitis B and C, liver- and blood-derived T cells were preferentially CD8+ T cells expressing the αβ TCR. Mitogenic stimulation with irradiated Daudi lymphoma cells and phytohemagglutinin led to a strong release of interferon-gamma (IFN-γ), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-2 (IL-2) by T cells in patients with chronic hepatitis and in healthy controls. T cells from patients with primary biliary cirrhosis and some patients with autoimmune hepatitis showed a significantly higher secretion of interleukin-4 (IL-4) and interleukin-10 (IL-10) than T cells from patients with chronic viral hepatitis or healthy controls. Histologic inflammatory activity did not correlate with the amount of cytokines released after mitogenic activation. In conclusion, liver tissue and peripheral blood T cells of patients with autoimmune hepatitis and primary biliary cirrhosis were dominated by CD4+ TCR αβ+ T helper/inducer cells, whereas in chronic viral hepatitis an enrichment of CD8+ TCR αβ+ cytotoxic/suppressor T cells was observed. In addition, analysis of the cytokine release showed that T cells in autoimmune and chronic viral liver diseases secreted high amounts of IFN-γ and TNF-α, cytokines predominantly secreted by T_hl-like cells. The secretion of the T_h2 cytokines. IL-4 and IL-10, however, was increased in autoimmune hepatitis and primary biliary cirrhosis. These data show that in autoimmune and chronic viral liver diseases different functional T cell subsets are activated.