猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联冻干苗研究——第四报 改进联苗生产工艺及检验方法的试验

在试产猪三联苗中,对提高单位容积的菌数,减少配苗冻干量,曾试用加0.2—0.25%羧甲基纤维素钠(简称 CMC)将猪丹毒菌液浓缩成1/6或1/7,放10℃左右4天其活菌数仍较稳定,配制冻干苗性状良好,对联苗的安全效力亦无影响。对通气培养15小时的猪肺疫菌液,放15°—22℃24小时活菌数仅减少约20%,未见影响配苗的效果。检验联苗的猪肺疫效力时,曾以同批苗用小白鼠、家兔及猪同时进行,证明三者间有一定的平行关系。此外,用家兔作联苗的猪瘟效检时,用含青、链霉素的稀释液抑制猪丹毒与猪肺疫菌,对检验兔的热型反应,在本次试验中证明无明显区别。     

禽巴氏杆菌病B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗保存期试验

禽巴氏杆菌病 B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗在4～8℃温度环境下保存一年的10批苗,菌存率为76.7～93.3%,平均菌存率为86.4%;按瓶签头份稀释后免疫鸡,10批苗的保护率为75%～100%,总保护率为87.5%(37/40).本文就巴氏杆菌病 B_(26)-T_(1200)弱毒冻干苗在4℃～8℃的保存性能及免疫效力进行了试验,现将结果报告如下。     

25℃、10℃分娩新生仔猪血清蛋白、葡萄糖、尿素、甲状腺素、三碘甲状腺素含量变化及体温维持性能

母猪于妊娠108天时,置于分娩栏内,移至温暖(10头;25℃)及寒冷(6头;10℃)分娩舍。新生仔猪血样与生后、生后6、12、24小时从腔静脉采取,记录体重、直肠温度及体温维持性能(thermostability)。分析血样的总蛋白、葡萄粮、尿素、甲状腺素(T4)、三腆甲状腺素(T3)和氢化考地松(24小时)。新生仔猪死亡率寒冷组与温暖组分别为31.3%及6.4%。死亡的新生仔猪体重低于存活仔绪(P<0.05)。血清总蛋白生后由3g/dl 增至7g/dl 以上(P<0.05);然而,10℃下分娩的仔猪升高的较晚。仔猪血清葡萄糖10℃组高于25℃组(P <0.05)。10℃寒冷条件的仔猪血清尿素升高近于6.2mg/dl。血清 T4浓度10℃组仔猪生后6、12小时较低(P≤0.05),但生后24小时,则两组相似。10℃组仔猪 T 3浓度生后升高,并持续到生后12小时(P<0.05),而25℃则否。生后24小时仔猪血清氢化考地松的含量两组相同(10.3±1.02μg/dl)。寒冷组仔猪的体温较低(P<0.05),但两组体热丧失率相似。     

温度对侧耳菌处理秸秆饲料营养价值及纤维分解酶活性的影响

试验旨在研究温度对侧耳菌处理玉米秸秆饲料营养价值及纤维分解酶活性的影响。在16,20和24℃温度条件下,采用侧耳菌处理玉米秸秆饲料,测定处理秸秆纤维素、半纤维和木质素含量、纤维素和木质素分解酶活性及秸秆养分瘤胃消失率。结果表明,在3个温度条件下,处理秸秆的纤维素、半纤维素和木质素含量均随时间的延长而降低。16℃组3种纤维含量降低速度(P<0.05)、酶活性(P<0.01)及干物质瘤胃消失率(DMD₄₈)(P<0.05)显著低于20和24℃组,而20℃组与24℃组以上指标没有显著差异,这2组秸秆DMD₄₈随着时间延长而增加,21 d后趋于稳定。结果显示温度显著影响侧耳菌处理秸秆饲料的纤维含量和营养价值,16℃处理秸秆显著低于20~24℃,而20℃与24℃处理秸秆饲料的纤维含量和营养价值差异不显著。     

不同粪菌悬液处理方式对猪粪菌移植过程中细菌活性及活菌组成的影响

旨在探究不同粪菌液处理方法对其菌群活性及存活菌群物种组成的影响,为猪粪菌移植(FMT)的优化应用提供参考。本研究共设置7个试验组制备粪菌液:静置制备新鲜粪菌液组(FS)、静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组(FFS)、离心制备新鲜粪菌液组(FC)、离心制备粪菌液于-80℃冷冻1周组(FFC)、液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组(NS)、甘油+液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组(GNS)和液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组(NFS),在37℃厌氧培养箱中平板培养48 h后,进行菌落计数。从FS、 FFS、FC和FFC 4组中根据菌落形态随机挑取87个单菌落纯化后进行16S rRNA基因全长测序。结果表明,静置和离心两种方法制备新鲜粪菌液时,粪菌活性存在显著差异,离心组显著低于静置组(P0.05)。但冷冻粪便使用静置和离心两种方法制备的菌悬液,其粪菌活性无显著差异(P0.05)。无论是静置还是离心方法制备粪菌液,新鲜和冷冻两种不同处理方式下的粪菌活性均无显著差异(P0.05),且对活菌的组成也无显著影响。使用静置法制备粪菌液时,FS、NS、GNS和NFS组间粪菌活性无显著差异(P0.05)。综上表明,静置方法制备粪菌液时,超低温冷冻保存对粪菌活性及其活菌组成均无显著影响,这为大样本、长距离猪粪菌移植技术的应用提供了重要试验参考。     

不同粪菌悬液处理方式对猪粪菌移植过程中细菌活性及活菌组成的影响

旨在探究不同粪菌液处理方法对其菌群活性及存活菌群物种组成的影响,为猪粪菌移植（FMT）的优化应用提供参考。本研究共设置7个试验组制备粪菌液：静置制备新鲜粪菌液组（FS）、静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组（FFS）、离心制备新鲜粪菌液组（FC）、离心制备粪菌液于-80℃冷冻1周组（FFC）、液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组（NS）、甘油+液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液组（GNS）和液氮冷冻粪便24 h静置制备粪菌液于-80℃冷冻1周组（NFS）,在37℃厌氧培养箱中平板培养48 h后,进行菌落计数。从FS、FFS、FC和FFC 4组中根据菌落形态随机挑取87个单菌落纯化后进行16S rRNA基因全长测序。结果表明,静置和离心两种方法制备新鲜粪菌液时,粪菌活性存在显著差异,离心组显著低于静置组（P<0.05）。但冷冻粪便使用静置和离心两种方法制备的菌悬液,其粪菌活性无显著差异（P>0.05）。无论是静置还是离心方法制备粪菌液,新鲜和冷冻两种不同处理方式下的粪菌活性均无显著差异（P>0.05）,且对活菌的组成也无显著影响。使用静置法制备粪菌液时,FS、NS、GNS和NFS组间粪菌活性无显著差异（P>0.05）。综上表明,静置方法制备粪菌液时,超低温冷冻保存对粪菌活性及其活菌组成均无显著影响,这为大样本、长距离猪粪菌移植技术的应用提供了重要试验参考。     

牛血清白蛋白对湖羊精液低温保存效果的影响

为探究牛血清白蛋白(BSA)对湖羊精液低温保存效果的影响,在湖羊精液低温保存的稀释液中添加不同浓度BSA(0、1、2、3、4、5、6 g/L),检测分析BSA对精子在4℃保存条件下的活力、活率、顶体完整率和质膜完整率。结果表明:保存24～96 h时,2～3 g/L BSA组的精子活率显著高于对照组;保存120 h时,3g/LBSA组的精子活率显著高于其他组;保存24、48、120h时,3g/LBSA组的精子活力显著提高;保存24～120 h时,6 g/L BSA组的精子活力低于对照组;保存48～72 h时,1～4 g/L BSA组的精子质膜完整率显著提高;保存48～72 h时,4 g/L BSA组的顶体完整率显著高于对照组;保存96～120 h时,3 g/L BSA组的顶体完整率显著高于对照组。本研究结果表明,在4℃条件下,1～5 g/L BSA可以提高湖羊精子活率、活力和质膜完整率,其中3 g/L BSA的作用效果最佳。     

仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗C500株生产工艺的优化

为优化仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗生产工艺,对细菌生长曲线、耐热保护剂和冻干曲线进行了研究,建立了发酵体积1%、2%和3%的二级种子接种量下分别发酵12 h~20 h的细菌生长曲线,检测3个配苗比例、4种耐热保护剂和3条冻干曲线下成品疫苗的冻干菌存率、活菌存活率和安全性,确定了接种3%二级种子液发酵培养17 h为最佳发酵培养条件,发酵菌数达到428×108CFU/m L;最佳配苗比例为菌液︰耐热保护剂1∶1(V∶V),优化保护剂B作为最佳耐热保护剂,设定冻干程序3#作为最佳冻干曲线。基于此,仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗抗原含量达到40头份/瓶,冻干菌存率和活菌存活率均达到95%以上,大幅度降低了猪体免疫副反应,极大提升了疫苗的产品品质。     

低温保存蓝狐精液稀释剂配方筛选

为了获取低温保存蓝狐精液的最适稀释剂,试验设计了3种不同精液稀释剂配方,并与常用稀释剂进行对比,1组为对照组,2组为0.5×(G+柠)组,3组为(G+柠)组,4组为2×(G+柠)组,G为葡萄糖,柠为柠檬酸钠溶液。分别在4℃存放0,12,24,36,48 h后检测精子活率。结果表明:在保存温度为4℃的情况下,存放0小时时,第4组的精子活率最高,与其他各组差异显著(P0.05);存放12小时时,不同稀释剂的精子活率差异不显著(P0.05);存放24小时时,第2组的精子活率最高,但与其他各组差异不显著(P0.05);存放36小时时,第2组的精子活率最高,与第3组、第4组差异显著(P0.05),与第1组差异不显著(P0.05);存放48小时时,第2组的精子活率最高,与其他各组差异显著(P0.05)。     

禽巴氏杆菌病B26—T1200弱毒疫苗保存期试验

禽巴氏杆菌病Ｂ２６－Ｔ１２００弱毒疫苗在４－８℃温度环境中保存一年的１０批苗，菌存率为７６．７－９３．３％，平均菌存率为８６．４％；按瓶签头份稀释后免疫鸡，１０批苗的保护率７５－１００％，总保护率为８７．５％（３７／４０）。     

我国南方猪高热病的研究(Ⅰ)——大肠杆菌的分离、鉴定和致病性测定

从湖南3个高热病发病猪场11头病死猪的病料组织中均分离出了大肠杆菌,经血清学鉴定,鞭毛抗原(K88、K99、987P和F41)全为阴性反应。经过157种菌体抗原血清学检测,血清型为5、6、15、22、32和83型。药物敏感试验结果表明,分离的大肠杆菌对大多数常用药物耐药,对氟喹诺酮和头孢类药物敏感。将其中4头猪原代分离的大肠菌培养物以原倍(2×107个/mL)、104和108稀释的菌液分别感染18~22 g小白鼠,原倍菌液感染的小白鼠12/30在感染后24 h内出现死亡,而104和108稀释菌液感染的小白鼠均健活;将未经除菌的病死猪组织悬液、过滤除菌的组织悬液、大肠杆菌、过滤除菌的组织悬液及大肠杆菌分别感染30日龄左右的健康小猪,除未经除菌的组织悬液感染猪3/3发病,2/3死亡外,其余所有感染猪只出现体温升高,升幅达1~2℃,减食,精神萎靡,但没有死亡;将死亡猪再次分离到的大肠杆菌感染小白鼠和猪,小白鼠12/15出现死亡,感染猪只出现体温升高(超过1℃),没有出现死亡。结果证明:大肠杆菌在高热病的发病过程中只起协同诱发作用,引起猪发病死亡的真正原因可能是病毒感染。     

东佛里生奶绵羊精液冷冻保存方法的研究

本研究旨在探讨东佛里生奶绵羊冷冻稀释液中添加维生素B₁₂以及不同冷冻保护剂对冷冻精液品质的影响，并筛选适合东佛里生奶绵羊的精液冷冻程序。通过假阴道法采集3只健康配种用东佛里生奶绵羊的精液，分为3组，分别为对照组(基础稀释液+6%甘油)、维生素B₁₂组(基础稀释液+6%甘油+0.05 mg/mL维生素B₁₂)、冷冻保护剂组(基础稀释液+5%乙二醇)。在-10～-100℃温区内设置3种降温速率(40、30、20℃/min)进行冷冻。结果显示：维生素B₁₂组冷冻精液的运动性能和畸形率较对照组没有显著变化；对照组冷冻精液的总活率、前向运动比例、平均路径速度、直线速度、曲线速度、直线性、鞭打频率、摆动性优于冷冻保护剂组(P<0.05)，畸形率低于冷冻保护剂组(P<0.05)。在冷冻程序的设计上，在-10～-100℃温区内以-40℃/min速率进行降温的冷冻程序A，其冷冻精液总活率、前向运动比例、平均路径速度、直线速度、曲线速度、直线性优于其他2个程序(P<0.05)，其畸形率最低(P<...     

一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元的制备

为优化枯草芽孢杆菌与刺五加多糖合生发酵的条件,本试验采用4×2因子试验设计,筛选适宜的温度(30、34、37、40℃)和转速(120 r/min和170 r/min);采用单因素试验设计筛选接种量(1%、2%、4%、6%、8%)、装液量(50、100 m L)和初始p H值(5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5);根据菌液的活菌数和芽胞产率确定刺五加多糖的添加量(0、0.4、0.8、1.6、2.4、3.6、4.8、6.4、8、10 mg/m L)及合生元的培养时间(24、36、48 h)。结果表明,种子液的培养时间为24 h,温度为37℃、转速为170 r/min,接种量为4%,250 m L锥形瓶中装液量为50 m L,培养基初始p H值为7.0,刺五加多糖的添加量为1.6 mg/m L,合生元培养时间为36 h,把培养好的菌液按1 L菌液∶0.5 kg麸皮的比例用干燥细麸皮吸附,在45℃烘箱中烘干即得枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元。经检测,其活菌数为5×109cfu/g左右。     

种蛋冬春季低温保存对孵化效果的影响

将28周龄农大3号父母代种鸡的商品代种蛋共870枚,随机分为6个试验组,每组120枚,1个对照组150枚。试验设计分别是:-15℃～-10℃贮存0.5小时和1小时;0℃贮存12小时和24小时;2℃～6℃贮存24小时和48小时;对照组为15℃贮存48小时,测验种蛋受精率、死精率、受精蛋孵化率、入孵蛋孵化率、健雏率、死胎率的影响。试验结果表明,种蛋在不同的低温条件下与正常温度条件下相比,受精率、死精率均无显著差异。在2℃～6℃贮存24小时条件下受精蛋孵化率下降和入孵蛋孵化率下降,受精蛋孵化率差异显著(P<0.05);入孵蛋孵化率差异极显著(P<0.01)。在-15℃～-10℃贮存1小时和在2℃～6℃贮存48小时条件下健雏率下降,差异极显著(P<0.01)。在-15℃～-10℃贮存1小时和在2℃～6℃贮存24小时条件下死胎率上升,差异显著(P<0.05)。     

益生菌在婴幼儿奶粉保质期内活菌数变化情况的研究

将添加有益生菌的婴幼儿配方奶粉贮藏于30、40、50及60℃条件下,其中30、40℃条件下贮藏60天,50及60℃条件下贮藏10天,以益生菌最佳贮存温度-18℃作为对照,分别每隔6天测定一次奶粉中益生菌的活菌数残留。研究表明,益生菌在（～18±2）℃下,活菌数基本保持稳定,在30℃条件下放置2个月,在40℃条件下放置1个月,在50℃条件下放置1周,其活菌数仍大于1×10^6CFU／g,符合国家标准。在60℃条件下保存,第3天活菌数下降2个数量级,并于第5天发生褐变,说明益生菌奶粉不适宜在60℃或更高温度条件下放置。     

兔多杀性巴氏杆菌C51-17株在疫苗效力检验中保存方法的研究

通过将兔多杀性巴氏杆菌C51—17株菌液分装后置-80℃冻存的方法对菌液浓度进行预数,并与传统方法采用的将菌液置4℃保存过夜计算菌存率或通过测定菌液吸光值推算攻毒菌液浓度相比较。结果表明。用-80℃冻存保存方法估算的菌液浓度与实际浓度更接近,采用这种方法进行疫苗的效力检验,能确保对照成立,在兔多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗效力检验中可以采用-80℃冻存的方法进行攻毒菌液的预数。     

副鸡嗜血杆菌A、B型攻毒用菌液制备方法的研究

通过对副鸡嗜血杆菌A型、B型攻毒用菌液的活菌计数及预攻毒效果的比较,得出使用A型菌液攻毒,菌液制备的较佳条件是:菌种接种于鸡肉汤琼脂板,5%二氧化碳,37℃培养48小时后,挑取典型菌落,接种鸡肉汤培养基,摇菌8小时后,按兽药典方法要求进行攻毒。使用B型菌液攻毒,菌液制备的较佳条件是:菌种接种于鸡肉汤琼脂板,5%二氧化碳,37℃培养16小时后,挑取典型菌落,接种鸡肉汤培养基,摇菌6小时后,按兽药典方法要求进行攻毒。     

酸碱度和温度对重组凝乳酶活力的影响

研究不同酸碱度和温度对重组凝乳酶活力的影响。结果表明:重组凝乳酶具有较高的pH稳定性,在pH3.2～7.6,4℃下放置24h,其催化活力都能超过80%,在pH2.4放置24h,酶活力仍可保持65%。与酸碱度相比,温度对重组凝乳酶活力的影响则要显著很多,在35～50℃,随温度升高凝乳酶失活的速度急速升高。NaCl对该酶的稳定作用微弱。虽然该酶在动物体温条件下,能够保持较高的活力,但较低的失活温度给加工和储藏带来了一定的困难。     

不同精液稀释液对微胶囊化保存的猪精子质量的影响

为了提高微胶囊化保存的猪精子质量,筛选适宜微胶囊化保存的猪精子稀释液,试验将猪精液用A、B 2种稀释液稀释为1×108个/m L浓度,利用海藻酸钠和钡离子反应制成猪精子微胶囊,测定其对微胶囊化保存猪精子质量及精子缓释率的影响。结果表明:在17℃条件下保存48小时和72小时稀释液B组的精子活率显著高于稀释液A组(P0.05),而且在保存1~72 h的各阶段,稀释液B组的精子畸形率显著低于稀释液A组(P0.05);精子在37℃条件下培养6小时和24小时稀释液B组的精子缓释率显著低于稀释液A组(P0.05)。说明稀释液B较适宜作为猪精子微胶囊化保存的稀释液。     

仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌(CVCC79500株)运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18~24 h,37℃、200 r/min振荡培养8~24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108~31×108、33×108~41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108~66×108、78×108~88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5~5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。