miR-206通过钙网蛋白调控乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的 探讨miR-206通过钙网蛋白(calreticulin,CALR)调控乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响及其机制.方法 乳腺癌MDA-MB-231细胞培养培养完成后,MTT法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能力.将miR-206 mimics和/或Ad-CALR分别转染到乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞术检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡情况;Western blotting实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR、E-cadherin和N-cadherin的表达.结果 作用48 h后,miR-206mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内CALR的表达被明显抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达则均明显提高(P<0.05),MTT检测结果显示细胞增殖抑制率为(52.96±3.12)％,与空白对照组比较有明显的统计学意义(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖抑制率分别为(26.64±1.78)％和(24.17±1.56)％,与空白对照组比较差异均有明显统计学意义(P<0.05).miR-206 mimics作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率为(21.96±1.72)％,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-206mimics+Ad-CALR和Ad-CALR作用乳腺癌MDA-MB-231干细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(6.93±0.41)％和(7.12±0.67)％,与空白对照组比较差异均统计学意义(P<0.05).与空白对照组比较,miR-206 mimics组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被增强,而N-cadherin的表达被抑制(P<0.05);miR-206 mimics+Ad-CALR组和Ad-CALR组乳腺癌MDA-MB-231细胞内E-cadherin的表达被明显抑制,而N-cadherin的表达被明显增强(P<0.05).结论 miR-206可以通过降低乳腺癌MDA-MB-231细胞中CALR的表达来抑制乳腺癌干细胞的恶性生物学行为.     

miR-630对三阴性乳腺癌细胞侵袭的影响及其机制研究

目的 研究miR-630在人体三阴性乳腺癌组织中的表达情况,探讨miR-630是否通过下调Sox4影响三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的侵袭.方法 收集157例行乳腺癌根治术患者癌组织标本及癌旁正常乳腺组织,其中三阴性乳腺癌36例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组(正常乳腺组、非三阴性乳腺癌组、三阴性乳腺癌组)组织中与乳腺癌相关的miR-630、miR-21、miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达情况;蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测3组标本中细胞侵袭相关蛋白COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9的表达情况;进一步在细胞实验中,通过转染miR-630mimic或空质粒后,再转染过表达Sox4的质粒或空质粒至离体培养的细胞中,Western blot检测细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达情况,划痕实验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶实验验证Sox4是miR-630的靶基因.结果 相比于正常乳腺组,miR-630、miR-21在三阴性乳腺癌组织中的表达降低(P＜0.01);miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05);相比于正常乳腺组及非三阴性乳腺癌组,三阴性乳腺癌组织中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达增多(P＜0.05).在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-630 mimic后,MDA-MB-231细胞中COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达减少(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的迁移侵袭能力减弱(P＜0.01);荧光素酶实验结果显示,miR-630能够显著降低Sox4-3’-UTR质粒的荧光素活性(P＜0.05);相比于过表达miR-630+空质粒组,转染过表达miR-630+过表达Sox4组,MDA-MB-231细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2和MMP-9表达增加(P＜0.05),细胞的迁移侵袭能力增强(P＜0.01).结论 在三阴性乳腺癌组织中,miR-630低表达;miR-630可以通过下调Sox4从而抑制MDA-MB-231的迁移和侵袭.     

Sox2下调表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞β-catenin与转录中介因子γ的影响

目的 下调乳腺癌MDA-MB-231细胞Sox2基因表达,观察对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响以及信号因子β-catenin和TIF1γ表达的影响.方法 将MDA-MB-231细胞分为重组质粒转染组(转染Sox2-shRNA干扰载体)、阴性对照组(转染pMafic7.1-shRNA-NC质粒)、空白对照组(未经处理的MDA-MB-231细胞,n=6),并将shRNA-Sox2-1瞬时转入乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western blot检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中Sox2蛋白表达水平,FCM检测细胞凋亡的情况,Transwell检测细胞的侵袭能力,MTS检测细胞活力和增殖能力.另外,采用Westem blot和免疫组化检测靶向抑制Sox2对信号因子β-catenin和TIF1γ蛋白的表达与分布.结果 成功构建重组载体pMafic7.1-shRNA-Sox2.与空白对照组(未转染组)和阴性对照组(转染pMafic7.1-shRNA-NC)相比,pMafic7.1-shRNA-Sox2转染至MDA-MB-231细胞后,Sox2蛋白的表达水平明显下调(P＜0.01),细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),细胞的侵袭能力、活力和增殖能力均明显下降(P＜0.05).与空白对照组(0.79 ±0.07)和阴性对照组(0.74±0.10)相比,重组质粒转染组β-catenin(0.15±0.04)蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05);同样,与空白对照组(0.74±0.05)和阴性对照组(0.64±0.07)相比,重组质粒转染组TIF1γ蛋白(0.11±0.01)的表达水平明显下调(P＜0.05).结论 靶向沉默Sox2基因能促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路与TIF1γ调控有关.     

RSRC2影响三阴性乳腺癌细胞增殖迁移及侵袭的初步研究

目的:探究富含精氨酸/丝氨酸卷曲螺旋2（RSRC2）对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:将RSRC2过表达、降表达和空载体质粒通过慢病毒包装转染至三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中,通过Western blot检测转染效果,通过Transwell 迁移实验、侵袭实验、划痕实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力的影响,通过平板克隆形成实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。结果:Western blot结果显示RSRC2过表达和降表达质粒成功转染至MDA-MB-231细胞中,Transwell迁移实验、侵袭实验、划痕实验、平板克隆实验显示,RSRC2过表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力减弱,RSRC2降表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力增强（均P<0.05）。结论:RSRC2在三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中起着重要的负调控作用。     

miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的 探讨miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用.方法 采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA -MB -231)中miR-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照.通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达miR-606模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染miR-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimemin和Slug蛋白表达的变化.荧光素酶报告基因分析实验检测M DA-MB-231细胞中miR-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响.结果 miR-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(P＜0.01).miR-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P＜0.01).MDA-MB-231和BT549细胞瞬时转染miR-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示miR-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达.Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染miR-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性.结论 在乳腺癌中,miR-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一.     

miRNA-34c对三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨miR-34c对三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及可能的分子机制。方法利用化学合成的miR-34c mimics转染三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过MTS实验、Transwell迁移实验观察过表达miR-34c后细胞增值及侵袭能力的变化;采用流式细胞术检测过表达miR-34c对细胞周期的影响;采用Western blot检测b-catenin及其下游靶蛋白的表达情况。结果 miR-34c过表达明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭。过表达miR-34c诱导细胞G1期阻滞。Western blot结果显示,过表达miR-34c的MDA-MB-231细胞b-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1、Snail、MMP2和MMP7的表达明显下调。过表达b-catenin则逆转miR-34c对MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭的抑制作用。结论 miR-34c可能通过抑制b-catenin信号而抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭。     

下调P55PIK基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力的影响

目的通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制P55PIK基因表达,观察下调P55PIK对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外增殖和迁移能力的影响。方法利用脂质体将特异性针对P55PIK的siRNA瞬时转染P55PIK高表达细胞株MDA-MB-231,以转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞作为对照。通过Western blot检测其对P55PIK表达的下调效果,MTT法和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。结果 siRNA-P55PIK明显下调MDA-MB-231细胞中P55PIK蛋白的表达;MTT检测显示下调P55PIK后,MDA-MB-231生长明显受到抑制;Transwell实验显示siRNA-P55PIK组穿膜细胞数为(5.2±1.3),显著低于siRNA-NC组(18.6±3.8)和空白对照组(18.4±4.3)(P<0.05)。结论应用RNAi抑制P55PIK基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力,为乳腺癌的靶向治疗提供了新思路。     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

RNAi沉默IBP基因表达对乳腺癌细胞的抑制作用

目的 构建IRF-4结合蛋白(IBP)基因RNA干扰 (RNAi) 的真核表达载体,观察其对MDA-MB-231乳腺癌细胞内IBP基因表达及细胞增殖和侵袭力的影响.方法 以IBP为靶基因,以pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR质粒为载体,设计构建4对重组体,并进行DNA测序鉴定.重组载体转染MDA-MB-231细胞后,选择转染效果最好的1对重组体建立稳定转染的细胞株,经RT-PCR和Western blot检测重组表达质粒对IBP mRNA和蛋白表达的抑制效果;MTT法检测对各组细胞生长的影响;细胞体外侵袭实验测定对侵袭力的影响.结果 重组体测序结果与目的序列完全一致;重组体转染MDA-MB-231细胞后IBP的mRNA和蛋白表达降低约70%;IBP表达下调后乳腺癌细胞增殖减缓(P<0.05);同时体外侵袭实验显示转染后乳腺癌发生迁移细胞数明显低于未转染组和空质粒对照组[分别为(25±7)、(67±6)、(68±5),P<0.05].结论 下调IBP能有效降低乳腺癌细胞的增殖和侵袭力.     

miR-134靶向基质金属蛋白酶1对喉癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的 探讨miR-134靶向基质金属蛋白酶1(MMP1)对喉癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响.方法 双荧光素酶报告基因实验验证MMP1基因是否为miR-134的靶向基因.转染实验分为miR-134 mimics组、miR-134 antagomir组和空白对照组,采用CCK-8、流式细胞术和Transwell法检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,Western blot检测过表达或降低miR-134对MMP1蛋白表达的影响.结果 双荧光素酶报告基因结果显示miR-134能和MMP13'-UTR端结合且明显抑制荧光素酶活性.miR-134 mimics组细胞在转染后24 h的细胞活力明显低于空白对照组(P<0.01),而miR-134 antagomir组明显高于空白对照组(P<0.05).与空白对照组凋亡率[(4.32±0.36)％]比较,miR-134 mimics组[(12.02±0.45)％]明显增加(P<0.01),而miR-134 antagomir组[(2.31±0.26)％]明显降低(P<0.05).与空白对照组比较,miR-134 mimics组的细胞侵袭和迁移能力明显减弱、MMP1蛋白表达明显降低(P<0.05),miR-134 antagomir组的细胞侵袭和迁移能力明显增强、MMP1蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 miR-134在转录后水平调控MMP 1蛋白表达来影响喉癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及迁移.     

miR-195在食管癌中的表达及其对食管癌细胞株增殖的影响

目的:探讨microRNA-195 (miR-195) 在食管癌中的表达及其对食管鳞癌细胞Eca109增殖的影响?方法: 采用Taqman 探针实时定量PCR方法检测10对外科手术食管鳞癌标本miR-195的表达,用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-195类似物转染入Eca109细胞,Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测蛋白表达水平?结果:与正常食管上皮相比,食管鳞癌组织miR-195表达明显降低(P < 0.05)?在48?72?96 h,miR-195转染组细胞吸光值明显低于对照组(P < 0.05),且miR-195转染组处于G0/G1期细胞的百分数明显高于对照组(P < 0.05)?Western blot结果显示miR-195转染组Cdc42蛋白水平明显低于对照组(P < 0.05)?结论:miR-195可阻滞Eca109细胞从G1期进入S期,抑制其增殖?     

miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用

探讨 miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用.方法 分别提取卵巢癌和癌旁组织总RNA并将它们逆转录成cDNA.实时荧光定量PCR检测miR-206在卵巢癌和癌旁组织中差异表达.在将miR-206 mimic和其特异抑制剂以及它们各自对照分别转染卵巢癌细胞后,MTT和流式细胞仪用于检测细胞增殖和细胞周期的改变.Western blot和荧光素酶报告基因活性分析鉴定miR-206的靶基因和其调控信号通路.miR-206诱导5-Fu对卵巢癌细胞化疗增敏作用被鉴定.结果 荧光定量PCR分析显示,miR-206在卵巢癌组织中表达明显下调.在转染miR-206 mimics后,细胞的增殖明显抑制,细胞周期也出现G/S转化障碍.机制分析显示,miR-206 mimic能明显抑制CDK4,c-Myc和CCNDl表达.与之相反,在使用miR-206特异抑制剂后,细胞的增殖能力明显恢复,而CDK4表达能明显增高.荧光素酶报告基因活性分析显示,miR-206能直接结合CDK43'UTR.药敏分析显示,miR-206能明显降低IC50值(P＜0.001),从而增加5-Fu对卵巢癌细胞的敏感性.结论 miR-206作为候选抑癌基因,直接靶击CDK4基因,从而抑制了卵巢癌细胞生长,并诱导了5-Fu对卵巢癌细胞的化疗敏感性.     

过表达miR-23b-3p对甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-23b-3p对甲状腺未分化癌(ATC)FRO细胞侵袭和迁移能力的影响。 方法qRT-PCR法检测52例ATC癌组织及其癌旁组织中miR-23b-3p和锌指E盒结合同源框1(ZEB1)的表达水平,并分析两者的相关性。培养人ATC细胞株FRO,将miR-23b-3p mimic及其阴性对照转染至FRO细胞中,qRT-PCR检测miR-23b-3p和ZEB1 mRNA表达水平。体外三维培养观察细胞血管生成拟态(VM)形成能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测ZEB1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p和ZEB1的靶向调控关系。 结果ATC组织中miR-23b-3p表达水平低于癌旁组织,而ZEB1的表达水平高于癌旁组织,且两者在ATC组织中的表达水平呈负相关。过表达miR-23b-3p能显著下调ZEB1表达水平,抑制FRO细胞VM形成以及侵袭和迁移能力,同时抑制细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶报告实验证实ZEB1是miR-23b-3p的靶基因。 结论过表达miR-23b-3p可能通过靶向下调ZEB1表达抑制FRO细胞的侵袭和迁移能力。     

Mechanism of Regulatory Effect of MicroRNA-206 on Connexin 43 in Distant Metastasis of Breast Cancer

Background:

MicroRNA-206 (miR-206) and connexin 43 (Cx43) are related with the distant metastasis of breast cancer. It remains unclear whether the regulatory effect of miR-206 on Cx43 is involved in metastasis of breast cancer.

Methods:

Using quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blot, the expressions of miR-206 and Cx43 were determined in breast cancer tissues, hepatic and pulmonary metastasis (PM), and cell lines (MCF-10A, MCF-7, and MDA-MB-231). MCF-7/MDA-M-231 cells were transfected with lentivirus-shRNA vectors to enhance/inhibit miR-206, and then Cx43 expression was observed. Cell counting kit-8 assay and Transwell method were used to detect their changes in proliferation, migration, and invasion activity. The mutant plasmids of Cx43-3’ untranslated region (3’UTR) at position 478–484 and position 1609–1615 were constructed. Luciferase reporter assay was performed to observe the effects of miR-206 on luciferase expression of different mutant plasmids and to confirm the potential binding sites of Cx43.

Results:

Cx43 protein expression in hepatic and PM was significantly higher than that in the primary tumor, while no significant difference was showed in messenger RNA (mRNA) expression. MiR-206 mRNA expression in hepatic and PM was significantly lower than that in the primary tumor. Cx43 mRNA and protein levels, as well as cell proliferation, migration, and invasion capabilities, were all significantly improved in MDA-MB-231 cells after reducing miR-206 expression but decreased in MCF-7 cells after elevating miR-206 expression, which demonstrated a significantly negative correlation between miR-206 and Cx43 expression (P = 0.03). MiR-206 can drastically decrease Cx43 expression of MCF-7 cells but exerts no effects on Cx43 expression in 293 cells transfected with the Cx43 coding region but the lack of Cx43-3’UTR, suggesting that Cx43-3’UTR may be the key in Cx43 regulated by miR-206. Luciferase expression showed that the inhibition efficiency was reduced by 46.80% in position 478–484 mutant, 16.72% in position 1609–1615 mutant; the inhibition was totally disappeared in double mutant (P = 0.02).

Conclusions:

MiR-206 can regulate the expression of Cx43, the cytobiological activity, and the metastasis of breast cancer through binding to the two binding sites in Cx43-3’UTR: position 478–484 and position 1609–1615.     

miR-148a对食管癌细胞迁移及侵袭的影响及潜在分子机制研究

目的探究微小核糖核酸148a（miR-148a）在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及对食管癌TE-1 细胞迁移和侵袭能力的影响。方法收集48例食管癌患者肿瘤及癌旁组织的RNA标本，逆转录PCR合成互补脱氧核糖核酸（cDNA），实时荧光定量聚合酶链反应PCR检测miR-148a 在肿瘤及癌旁组织中的表达情况，分析肿瘤组织中miR-148a 表达差异的临床意义。将人工合成的miR-148a模拟物（miR-148a mimics）转染入食管癌细胞TE-1中，划痕愈合实验检测过表达miR-148a对TE-1细胞迁移的影响，Transwell小室模型检测miR-148a 对TE-1 侵袭的影响。Western blot检测miR-148a 过表达对TE-1 细胞中原癌基因（c-myc）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达的影响。结果MiR-148a在食管癌组织中表达水平下调（P =0.031）；过表达miR-148a能够抑制TE-1细胞迁移（P =0.021）及侵袭（P =0.018）并下调细胞内c-myc（P =0.037）及MMP-9（ P=0.026）的表达水平。结论miR-148a 在食管癌中低表达，miR-148a可能通过抑制c-myc/MMP-9 通路的表达来发挥抑制食管癌细胞迁移及侵袭。     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

LncRNA MIAT靶向miR-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIAT靶向微小RNA(miR)-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。方法 将食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞分为ctrl组(正常培养的ESCC细胞)、si-NC组、si-MIAT组、si-MIAT+miR-NC组和si-MIAT+miR-206 inhibitor组。实时qRT-PCR检测各组细胞MIAT、miR-206表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;蛋白质印迹技术检测PCNA、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证MIAT和miR-206的关系。结果 与ctrl组、si-NC组比较,si-MIAT组ESCC细胞中miR-206表达、细胞凋亡率升高,MIAT、OD₄₅₀值(24、48、72 h)、划痕愈合率、PCNA和MMP9蛋白表达降低(P<0.05);干扰LncRNA MIAT表达能降低ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力,提高细胞凋亡能力,MIAT靶向调控miR-206表达。结论 干扰LncRNA MIAT表达能够阻滞ESCC...     

MicroRNA-149 对肺鳞状细胞癌转移能力的 影响及分子机制研究

目的 研究microRNA-149（miR-149）在肺鳞状细胞癌（LSCC）的临床意义及其对细胞迁移 和侵袭的作用。方法 选取2010 年1 月-2015 年12 月西南医科大学附属医院收治的60 例LSCC 患者的癌 灶及癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-149 在LSCC 及癌旁组织中的表达。 通过转染miR-149 模拟物升高LSCC 细胞系NCI-H226 中miR-149 的表达,划痕愈合试验检测过表达miR- 149 对NCI-H226 细胞迁移的影响,Transwell 小室探究miR-149 对NCI-H226 侵袭的影响。qRT-PCR 及Western Blot 检测miR-149 过表达对NCI-H226 细胞中叉头盒蛋白M1（FOXM1）及其靶基因基质金 属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。结果 miR-149 在LSCC 中表达水平低于癌旁组织（P <0.05）;过表 达miR-149 能够降低NCI-H226 细胞的迁移及侵袭能力（P <0.05）。过表达miR-149 能够下调其下游靶 点FOXM1 mRNA 和蛋白表达水平,抑制FOXM1 靶基因MMP-2 的表达（P <0.05）。结论 miR-149 在 LSCC 中呈低表达,miR-149 通过抑制FOXM1/MMP-2 信号通路来抑制LSCC 的细胞转移能力。     

miR-367通过靶向调控TET2对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-367通过靶向调控10-11异位的甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法将人子宫内膜癌HEC-1A细胞分为5组:空白组(NG)、阴性转染组(mimics NC)、miR-367过表达组(miR-367 mimics)、inhibitor NC组、miR-367 inhibitor组。qRT-PCR检测HEC-1A细胞中TET2 mRNA、miR-367表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TargetScan数据库预测miR-367的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证;Western blotting检测TET2、c-myc、cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。 结果与NG、mimics NC组相比,miR-367 mimics组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平下降(P < 0.05),miR-367表达水平升高,24、48 h细胞存活率上升,侵袭、迁移细胞数增加(P < 0.05),TET2蛋白表达水平降低(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平升高(P < 0.05)。与NG、inhibitor NC组相比,miR-367 inhibitor组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平升高(P < 0.05),miR-367表达水平下降,24、48 h细胞存活率降低,侵袭、迁移细胞数减少,TET2蛋白表达水平升高(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平降低(P < 0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-367是TET2潜在靶基因。荧光素酶报告实验结果显示,miR-367 mimics+WT组HEC-1A细胞荧光素酶活性低于miR-367 NC+WT组(P < 0.05),miR-367 NC+MUT组与miR-367 mimics+MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。 结论miR-367过表达可能通过靶向抑制TET2促进子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭。