轴突稳定及细胞骨架

<正> 胼胝体是研究大脑皮质轴突发育的一个好模型。猫脑胼胝体内的轴突数量在初生时最多,而在生后的早期发育过程中就减少70%。这一发现及解剖学的束路追踪研究结果提示大脑半球间的纤维联系在生后的早期发育过程中有一个明显的重组合过程。同时也对轴突的保留或取消的机制提出了若干问题。细胞骨架对轴突的生长及稳定可能有重要作用。在轴突消失的末期,胼胝体轴突内出现神经细丝的大分子量亚单位(H-NF),这一发现表明H-NF对轴突稳定有作用,因为H-NF已被证明对神经细丝的交连有作用。另外,H-NF的磷酸化也被认为是轴突成熟的标     

大鼠腰骶髓中间带外侧核向臂旁核的投射——BDA顺行追踪研究

为了解贫办脏器感觉信息的传递道路，用结合生物素的葡聚糖妥作为顺行追踪剂，研究了大鼠腰骶髓中间带外侧核向脑桥臂旁核的投射。将ＢＤＡ注射酝中间带外侧核后，顺行标记的轴突终末出现于双侧的臂旁核，同侧略大。大量的ＢＤＡ标记的轴突终末出现于臂旁外侧核的外侧内核和外侧中央核，少量分布于外侧背核。     

大鼠中脑导水管周围灰质—中缝大核—三叉神经脊束核尾侧亚核通…

用ＰＨＡ－Ｌ顺行追踪和ＨＲＰ逆行追踪结合的方法，在电镜下观察到来自中脑导水管周围灰质的ＰＨＡ－Ｌ顺行标记轴突终末与中缝大核向三叉神经脊束核尾侧亚核投射的ＨＲＰ逆行标记神经元形成以非对称性为主的轴－树突触，另外，发现顺行标记的轴突终末也与中缝大核内它神经元之间形成多种触联系，本研究结果首次在突触水平证明了中脑导水管周围灰质－中缝大核－三叉神经脊束核尾侧亚核的间接通路，同时又发现中脑导水管周围灰质下行     

大鼠中脑导水管周围灰质－中缝大核－三叉神经脊束核尾侧亚核通路的电镜研究

用ＰＨＡ－Ｌ顺行追踪和ＨＲＰ逆行追踪结合的方法，在电镜下观察到来自中脑导水管周围灰质的ＰＨＡ－Ｌ顺行标记轴突终末与中缝大核向三叉神经脊束核尾侧亚核投射的ＨＲＰ逆行标记神经元形成以非对称性为主的轴树突触。另外，发现顺行标记的轴突终末也与中缝大核内其它神经元之间形成多种突触联系。本研究结果首次在突触水平证明了中脑导水管周围灰质中缝大核－三叉神经脊束核尾侧亚核的间接通路，同时又发现中脑导水管周围灰质下行投射的终末与中缝大核内的神经元成分之间还形成比较复杂的突触联系，并对之进行了讨论。     

周围神经损伤后局部一次给予重组CNTF对神经元变性和再生的作用

目的 :研究周围神经损伤后 ,局部一次给予重组CNTF对神经元变性和再生的作用。方法 :用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经 ,术时在损伤神经局部一次性给予重组CNTF ;用甲苯胺蓝染色和胆碱酯酶组织化学方法研究神经元的逆行变性 ,用HRP逆行追踪研究轴突的再生 ,并进行后足功能测试。结果 :重组CNTF减轻损伤运动神经元胞核偏位和胆碱酯酶活性的变化 ,增加轴突再生的运动神经元数量 ,改善功能指数。结论 :局部一次给予重组CNTF和再加皮下注射一样能保护损伤运动神经元并促其轴突再生。     

猫丘脑腹后外侧核内皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元之间的突触连接

用ＣＢ－ＨＲＰ逆行追踪与顺行溃变相结合的方法，对描丘脑腹后外侧核内的来自大脑皮质体感Ⅰ区的皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元之间的突触连接进行了电镜观察。向猫大脑皮质体感Ⅰ区内注射ＣＢ－ＨＲＰ５ｈ后，电解损毁原注射部位，术后动物存活４ｄ。电镜下发现丘脑瓜后外侧核内存在５种突触连接方式；（１）溃变的轴突终未与ＨＲＰ标记神经元胞体形成轴－体突触；（２）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记的树突形成轴—树突触；（３）溃变的轴突终末和其它突触前成分共同与中央树突形成汇聚型的突触复合体；（４）溃变的轴突终末与未标记树突形成的轴—树突触；（５）正常的轴突终末与ＨＲＰ标记神经元形成对称型的轴—体突触。     

大鼠丘脑前核内海马下托复合体谷氨酸能传入终末与皮质投射神经元的突触联系

目的 探讨大鼠丘脑前核-海马下托复合体神经元环路的突触结构及谷氨酸分布特征.方法 应用HRP束路追踪结合包埋后胶体金免疫电镜技术.结果 在丘脑前核内,可见HRP顺行标记的海马下托复合体传入轴突终末,终末多为卵圆形,内含圆形透亮突触小泡和数个线粒体.其做为突触前成分与HRP标记的树突或非HRP标记的树突形成非对称性突触.在谷氨酸胶体金免疫反应切片上,胶体金颗粒标记胞体、树突、轴突终末等.HRP标记的轴突终末和一些非HRP标记的与突触后成分形成非对称性突触的轴突终末(Gray Ⅰ型)内,胶体金颗粒密度明显大于背景(胞体、树突、Gray Ⅱ型轴突终末等)的胶体金颗粒密度.其平均胶体金颗粒密度为突触后树突的3倍多,为对称性轴突终末(Gray Ⅱ型)的6倍多.在两张邻近的连续切片,γ-氨基丁酸(GABA)胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记Gray Ⅱ型轴突终末,背景标记极少;而非对称性轴突终末(Gray Ⅰ型)胶体金颗粒标记极弱.谷氨酸胶体金免疫反应切片上,Gray Ⅱ型轴突终末胶体金颗粒标记极弱.GABA阳性轴突终末与HRP标记的树突形成对称性突触,在同一树突上可见GABA能轴突终末形成的对称性突触和其他轴突终末形成的非对称性突触.结论 丘脑前核内来自海马下托复合体投射神经元的轴突终末是谷氨酸能的;来自海马下托复合体皮质投射神经元轴突终末,在丘脑前核与投射至海马下托皮质的神经元树突形成非对称性轴-树突触.     

大鼠孤束核向伏核投射的神经元接受迷走神经的初级传入——溃变与HRP追踪结合法的电镜观察

本文用切断一侧结状神经节近侧端的迷走神经和HRP注入伏核逆行追踪相结合的方法,在电镜水平对孤束核向伏核投射的神经元是否接受迷走神经初级传入纤维终末进行了研究。在孤束核内可见下列突触关系:(1)溃变轴突终末与HRP逆标树突形成轴-树突触;(2)无标记正常轴突终末与HRP逆标胞体或树突分别形成轴-体或轴-树突触;(3)HRP顺标轴突终末与无标记树突形成轴-树突触;(4)溃变轴突终末与无标记树突形成轴-树突触。由上述结果可知:孤束核向伏核投射的神经元接受迷走神经的初级传入终末;伏核神经元的下行终末与孤束核内的神经元之间有突触联系。     

成年金黄地鼠大脑运动皮质神经元轴突的再生

在用ＨＲＰ逆行追踪法确定金黄地鼠大脑运动皮质的准确位置后，将截取的三组实验动物的自体坐骨神经分别插入之。存活８周后，在坐骨神经移植段的远端，注射２０％ＨＲＰ溶被１μｌ，做全脑及脊髓颈段连续冰冻切片，观察ＨＲＰ逆行标记的运动皮质锥体细胞。结果发现：在移植的正常坐骨神经段的诱导下，运动皮质神经元的受损轴突可以再生并长入到该移植段内（ｎ＝１２，平均＝９．７５），用预先渍变法未能导致运动皮质轴突再生神经元数目的增加（ｎ＝９，平均＝７．５），而经冻化处理后的移植神经则未能诱导出运动皮质神经元的轴奕再生。本文结果证明，周围神经移植法可诱导成年金黄地鼠运动皮质神经元的轴突再生，雪旺氏细胞的存在及其功能活动与锥体神经元轴突再生密切相关。     

猫后索核内后根初级传入终末与丘脑投射神经元之间的突触联系

用ＨＲＰ逆行追踪与顺行溃变相结合的方法，研究了猫后索核内初级传入终末与丘脑投射神经元之间的突触联系形式。在电镜下可见后索核内有５种突触联系式：１．溃变轴突终末与ＨＲＰ标记树突形成的轴－树突触；２．溃变轴突终末与ＨＲＰ标记胞体形成的轴－体突触；３．溃变轴突终末与非标记树突形成的轴－树突触；４．轴－轴－树连续性突触；５．非溃变的含扁平小泡或多形小泡轴突终末与ＨＲＰ标记的神经元胞体形成的轴－体突触。本文     

大鼠纹状体边缘区P物质样免疫反应神经终末的超微结构研究

边缘区是用免疫组织化学与束路追踪相结合的方法,在大白鼠纹状体发现的一个新区,其间的P物质、脑啡肽等免疫反应神经终末的数量,比纹状体的其他部分多。本文用包埋前免疫电镜方法,研究了该区的P物质免疫反应神经终末的突触特点。发现4种主要的突触类型,最常见的是轴-树和轴-棘突触,几种由两个以上突触组成的复合型突触群也较常见,偶尔可见轴-轴突触。同时也观察到未标记的轴突终末与P物质样免疫反应树突形成突触。P物质样免疫反应轴突终未形成对称型和非对称型突触。非对称型突触、突触后小型树突以及突触构成的复杂性,证明该区的P物质样免疫反应神经终末的来源可能与纹状体其他部位不同,并且提示该区的功能与纹状体其他部分可能不同。     

疱疹病毒用于跨神经元追踪研究

七十年代兴起的神经追踪法极大地丰富了人们对脑内神经元联系通路的认识。HRP、PHA-L等示踪剂可通过轴浆流顺行或逆行运输，以显示单个神经元的轴突、轴突分校及与之相连的神经元胞体。但它们只能标记某一级神经元的分布，不能显示两个或两个以上神经元间的连接情况[1]。WGA、W     

铜银法镀银漂白复染技术

<正> 多年来神经追踪技术一直受到人们广泛的关注。人们用各种追踪技术及镀银染色对中枢神经系统损伤后神经纤维和终末的溃变进行了研究。其中镀银技术的出现对溃变纤维的镀染又作出了重大的贡献并较好地显示了溃变纤维的全貌。早期的镀银染色较难区分溃变纤维和正常纤维,追踪溃变纤维很不容易。因此以后又出现了不少改良方法,旨在增加溃变纤维的特异性,从而区分溃变纤维和正常纤维及鉴定轴突的终末。而铜银法为此改良法之一,由DeOlmos首次报道。在国内,作者首次用于实验中,证明是一种追踪溃变纤维较好的方法。在此法的基础上增加了漂白复染技术。     

猫丘脑腹后外侧核内皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元…

用ＣＢ－ＨＲＰ逆行追踪与顺行溃变相结合的方法，对猫丘脑腹后外侧核内的来自大脑皮质体感Ｉ区的皮质－丘脑纤维终末与丘脑－皮质投射神经元之间的突触连接进行了电镜观察。向猫大脑皮质体感Ｉ区内注射ＣＢ－ＨＲＰ５ｈ后，电解损毁原注射部位，术后动物存活４ｄ。电镜下发现丘脑腹后外侧核内存在５种突触连接方式：（１）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记神经元胞体形成轴－体突触；（２）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记的树突形成轴－树突     

发育中和成年哺乳动物中枢神经系统束路追踪的新技术

一、前　言远在 Golgi和 Cajal时代 ,追踪神经元之间的联系即已是神经解剖学研究中的重大目标 ,它对研究神经的功能、神经系统的发育和成熟都具有重要的价值。这种方法学的建立始于 19世纪末的逆行和顺行溃变的研究。逆行溃变主要是指毁损轴突后神经元胞体 (即去除其靶区之后的神经元胞体 )的溃变 [1 7,1 70 ] ;而顺行溃变技术是以 Marchi法显示的 Waller变性 (胞体或轴突损伤后的轴突终末的溃变 ) [1 2 0 ] 。在神经解剖学形成的早期 ,在 Golgi及其支持者倡导的“网状说”和Cajal提倡的 :“神经元说”论战的推动下 ,Cajal利用 Galgi镀…     

单纯疱疹病毒Ⅰ型SM_（44）株和17Syn~＋株用作跨神经元追踪示踪物的实验研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型已被证明是一个很有前途的跨神经元追踪示踪物。它可被轴突顺行或／和逆行运输,还可被跨神经元传递;病毒的株不同,其运输方向亦可不同。本文研究了此病毒ＳＭ４４株和１７ｙｎ＋株在鼠脑内跨神经元传递的方向性和可靠性。结果提示：此两株病毒均能被跨神经元传递,并且以顺行跨神经元传递为主,因而可被作为示踪物用于跨神经元追踪研究。     

背侧抑制性轴突导向蛋白对鸡胚后脑内23C10阳性神经元轴突投射的影响

目的:初步探讨背侧抑制性轴突导向蛋白即draxin对鸡胚后脑23C10阳性神经元轴突投射过程中的调控作用。方法:对HH13-14发育阶段的正常鸡胚后脑内进行跨膜型和分泌型draxin质粒转染,通过免疫组织化学染色方法,观察HH25-26发育阶段鸡胚23C10阳性神经元轴突的投射情况;应用活组织离体培养方法,检测draxin对鸡胚后脑神经元轴突生长的影响。结果:跨膜型draxin过表达后,有较多23C10阳性神经元的轴突异常投射到同侧后脑背侧部;分泌型draxin过表达后,有少部分23C10阳性神经元的轴突异常投射到同侧后脑背侧部;正常鸡胚和空白质粒过表达对照组均未观察到异常投射的神经元轴突。鸡胚后脑活组织离体培养中,draxin显著抑制体外培养组织内树突的生长,而对照组可见体外培养的组织内有大量树突形成。结论:draxin对鸡胚后脑内23C10阳性神经元的轴突投射具有抑制性导向作用。     

猫外侧颈核内脊颈纤维终末与颈丘脑投射神经元间的突触联系

本实验采用顺行溃变和ＨＲＰ逆行追踪结合的方法研究了猫脊颈丘脑通路在外侧颈核水平的突触联系。在脊髓颈段刀切损毁一侧背外侧索后将ＨＲＰ注射于对侧丘脑腹后外侧核。在电镜下于损毁同侧的外侧颈核内可见到下列突触联系：（１）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记的树突形成的轴—树突触；（２）溃变的轴突终末与标记的神经元胞体形成的轴—体突触；（３）溃变的轴突终末及正常的轴突终末与标记的中央树突形成的汇聚型突触复合体；（４）溃变的轴突终末与非标记的神经元树突和胞体形成的轴—树和轴—体突触；（５）正常轴突终末与标记的神经元树突和胞体形成的轴—树和轴—体突触。此外，在正常的神经元成分之间还可见到许多类型的突触。     

Nogo-A在小鼠胚胎新生视网膜节细胞及其轴突的表达

目的 研究小鼠胚胎阶段Nogo-A在视网膜节细胞(RGCs)及其轴突上的表达及时程变化. 方法 取不同发育阶段的小鼠胚胎,采用免疫荧光染色,以激光扫描共焦显微镜观察Nogo-A在视觉传导通路中的表达.并采用免疫双标染色确定视网膜中表达Nogo-A蛋白的细胞类型. 结果 在视网膜发育的早期阶段(E12),Nogo-A密集表达于具有放射状形态的细胞上,Nogo-A免疫阳性产物出现在胞质、胞膜以及轴突上.Nogo-A与Tuj-1双标染色显示,此阶段的视网膜中几乎所有RGCs及其轴突都表达有Nogo-A;在稍晚的发育阶段(E13),视网膜中表达Nogo-A的RGCs数量明显减少,且仅出现在节细胞层以外的室周带和睫状体边缘区.在视网膜的神经纤维层,大部分RGCs轴突不再表达Nogo-A,仅有少量视觉纤维为Nogo-A免疫阳性;RGCs的神经发生基本完成后(E15), 视网膜中几乎检测不到Nogo-A免疫阳性的细胞,但视网膜纤维层仍有少量表达Nogo-A的节细胞轴突.与之类似,视神经盘、视茎、视交叉和视束都观察到少量Nogo-A免疫阳性的轴突.值得注意的是,视束中表达Nogo-A的纤维集中位于表浅部位,而此处恰为新近到达轴突的通过部位. 结论 Nogo-A在视网膜RGCs以及轴突上表达的时程变化和位置特点提示,新生RGCs及其轴突表达Nogo-A,成熟后RGCs内Nogo-A的表达则下调.推测新生RGCs及其轴突中表达的Nogo-A可能与减少轴突分叉等细胞的内在功能有关.     

大鼠中缝核5-HT能神经元向嗅结节的投射-HRP法与免疫组化法双标记研究

应用HRP逆轴突追踪法结合免疫组织化学法研究了大鼠中缝核内5-HT能神经元向嗅结节的投射,并对中缝核标记细胞的分布和形态特点进行了详细观察.当一侧嗅结节注射HRP后,在中缝背核(RD),中央上核(CS)规律地出现标记细胞,然后用Hank's方法稳定,继而用Sternberger的PAP法进行免疫组织化学反应,光镜下在RD和CS中观察到HRP、5-HT,5-HT/HRP三种标记细胞.