急性早幼粒细胞自血病PML／RARα融合基因的检测

目的探讨荧光原位杂交技术（FISH）在检测急性早幼粒细胞白血病（APL）患者PML／RARα融合基闪中的价值。方法对初诊的30例及20例疑似APL的患者进行FISH技术检测PML／RARα融合基因,对治疗过程中PML／RARα融合基因阳性细胞比例进行动态观察,进而协助诊断和指导治疗。结果30例APL中PML／RARα融合基因阳性率90％（27／30）,1例AML1／ETO融合基因阳性,确诊为AML-M2;20例未确诊者中AML1／ETO融合基因阳性率15％（3／20）,PML／RARα融合基因阳性率50％（10／20）,其余7例未检测到以上两种融合基因。达到完全缓解（CR）后有7例融合基因阴性,随访至CR后2年,发现7例PML／RARα融合基因阳性比例较高患者分别于1-3个月后复发。结论FISH技术对APL的诊断具有高灵敏度和高准确度,并精确定位复杂核型中融合信号的位置,可用以确定白血病类型,指导临床治疗和进行治疗后的疗效监测。     

急性早幼粒细胞白血病患者出现新的PML-RARα融合基因S型变异体

目的观察急性早幼粒细胞白血病（APL）患者PML—RARα融合基因在治疗前后的动态变化。方法采用筑巢式RT—PCR技术检测15例APL患者PML—RARα融合基因的表达。结果在7例初诊APL中我们检测到t（15；17）一种新的异构体——S变异型，其PML基因断裂点位于外显子4区域。对其中4例患者的追踪检测发现，随着临床治疗，基因表达由S变异型逐渐向经典S型转变。结论急性早幼粒细胞白血病存在一种新的异构体——S变异型，S变异体与其临床治疗存在密切的相关性。     

51例APL患者PML/RARα mRNA转录本的检测及其意义

目的建立实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法并检测初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)患者甲幼粒细胞白血病/维甲酸受体(PML/RARα)融合基因含量,评价检测结果的临床意义。方法采用"欧洲抗癌计划"推荐的引物和探针建立RQ-PCR方法,检测51例初诊APL患者的PML/RARα融合基因含量,并分析其临床意义。结果 APL初诊患者的年龄与外周血白细胞(WBC)数呈负相关(r=-0.376,P=0.014),相关性主要见于长型和变异型患者(r=-0.51,P=0.005)。51例APL初诊患者中,长型患者33例,变异型患者3例,长型和变异型36例。APL初诊患者PML/RARα转录本绝对含量为3.75×102～6.20×105拷贝/50ng(中位7.24×103拷贝/50ng);相对含量为0.51%～676.87%(中位9.31%)。15例短型患者PML/RARα转录本绝对含量为2.26×103～2.33×106拷贝/50ng(中位1.17×105拷贝/50ng);相对含量为12.04%～802.68%(中位95.26%)。短型患者外周血WBC数明显高于长型患者(P=0.041),其融合基因含量也明显高于长型患者(P<0.01),而在性别、年龄、外周血Hb、PLT,骨髓原粒及异常早幼粒细胞比例、血液学缓解时间和分子生物学缓解时间等方面比较差异无统计学意义。33例初诊患者血液学缓解时间、分子生物学缓解时间与患者的年龄、WBC数及融合基因含量无相关性。结论 RQ-PCR方法敏感、可靠,可以对APL初诊患者进行诊断和分型。     

筑巢式聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML／RARαmRNA

目的：观察急性早幼粒细胞白血病（APL）患者PML／RARαmRNA的表达情况。方法：应用逆转录筑巢式聚合酶链反应（Nested PCR)检测了30例APL患者的PML／RARαmRNA。结果：3例APL患者中22例检测到PML／RARαmRNA,其中16例为L型,6例为S型。结论：Nested PCR是检测APL患者PML／RARαmRNA有效而敏感的方法。     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的检测

目的 探讨荧光原位杂交技术(FISH)在检测急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARα融合基因中的价值.方法 对初诊的30例及20例疑似APL的患者进行FISH技术检测PML/RARα融合基因,对治疗过程中PML/RARα融合基因阳性细胞比例进行动态观察,进而协助诊断和指导治疗.结果 30例APL中PML/RARα融合基因阳性率90%(27/30),1例AML1/ETO融合基因阳性,确诊为AML-M2;20例未确诊者中AML1/ETO融合基因阳性率15%(3/20),PML/RARα融合基因阳性率50%(10/20),其余7例未检测到以上两种融合基因.达到完全缓解(CR)后有7例融合基因阴性,随访至CR后2年,发现7例PML/RARα融合基因阳性比例较高患者分别于1~3个月后复发.结论 FISH技术对APL的诊断具有高灵敏度和高准确度,并精确定位复杂核型中融合信号的位置,可用以确定白血病类型,指导临床治疗和进行治疗后的疗效监测.     

白血病患者融合基因检测

目的 测白血病患者融合基因水平,评估实时定量RT-PCR技术在辅助白血病临床诊断和药物疗效判定方面的价值.方法 30例慢性粒细胞白血病(CML)患者,15例急性早幼粒细胞白血病(APL)患者,实时定量RT-PCR技术检测骨髓或外周血单个核细胞中白血病融合基因M-bcr/abl或PML/RARα的表达,结合临床资料进行分析.结果 1)30例CML患者的 bcr/abl融合基因检测阳性率为93.3%(28/30);检测15例APL患者的PML/RARα融合基因检测阳性率为96.7%(13/15).2)3例CML患者应用甲磺酸-伊马替尼治疗后定量检测bcr/abl 融合基因的拷贝数较治疗前明显降低或转阴(2/3).15例APL患者融合基因检测阳性经亚砷酸+化疗治疗后PML/RARα融合基因的拷贝数较治疗前明显降低或转阴(7/15).结论 实时定量RT- PCR 技术操作简便,检测白血病融合基因的准确性高,在辅助临床诊断和白血病患者药物疗效判定方面都有较大的应用价值.     

PML/RARα融合基因及染色体检测在急性早幼粒细胞白血病诊断中的应用

目的:探讨PML/RARα融合基因检测及染色体分析对急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断的价值。方法:骨髓细胞24h培养后,采用FISH法检测PML/RARα融合基因,同时染色体R显带法分析是否存在t(15;17)。结果:41例确诊的APL患者中FISH检测发现所有病例均存在PML/RARα融合基因,检出率为100%,染色体核型分析发现典型t(15;17)38例,复杂核型1例,正常核型2例,检出率为92.7%。结论:PML/RARα融合基因检测和染色体分析是诊断APL的可靠方法,而PML/RARα融合基因检测灵敏度更高,可作为细胞遗传学的重要补充。     

急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因异构体的临床意义

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因异构体及其临床关系。方法：用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测２１例初诊ＡＰＬ患者细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因转录本，并分析其对临床特征的可能不同影响。结果：在ＡＴＲＡ诱导治疗过程中，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体ＡＰＬ组的早期死亡和复发率（４／８）（５０％）高于长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组（２／１３）（１５．４％）；与长型异构体相反，存活期２月至２年患者含短型异构体的比例（７５％）大于存活期２年以上组（３３．３％）；未观察到患者血液学参数改变与不同ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体有关。结论：与长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组ＡＰＬ患者相比，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组的预后可能更差。     

两种PML/RARa表型的急性早幼粒细胞性白血病104例临床观察

大部分急性早幼粒细胞性白血病（APL）都有染色体t（15;17）,15号染色体上的PML基因和17号染色体七的全反式维甲酸受体-a的融合基因PML／RARa形成后,抑制细胞的分化,使细胞成为肿瘤细胞。PML／RARa有短型（S型）和长型（L型）等类型存在。本文通过对104例APL患者的临床资料进行回顾性分析,探讨PML／RARa的不同表型与APL的临床治疗和预后的关系。     

荧光原位杂交在急性早幼粒细胞白血病治疗前后的研究

目的 探讨荧光原位杂交技术在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断及其微小残留病(MRD)检测中的价值。方法 应用PML/RARα易位探针对8例初诊和6例完全缓解的急性早幼粒细胞白血病和1例正常对照进行t(15；17)融合基因检测，并与经典细胞遗传学结果进行比较分析。结果 G显带分析8例初诊患者均为t(15；17)，6例缓解患者中3例为t(15；17)，3例为正常核型。FISH检测显示，8例初诊和5例缓解患者均存在PML／RARα融合基因红，绿荧光信号，只有1例缓解患者和正常对照为正常15红色信号和17绿色信号。研究发现2例M3V患者PML/RARα融合基因阳性率达80％以上，一般M3阳性率在60％左右，缓解中的患者阳性率普遍下降在20％以下，另外发现2例15三体患者和2例伴RML／RARα融合基因的同时增加1条17号染色体的绿色信号。结论 FISH技术是一种高灵敏度、高分辨率的分子遗传学新技术，对M3的诊断及缓解后残余的畸变肿瘤细胞检测具有重要意义。     

亚砷酸联合维甲酸、中剂量阿糖胞苷治疗急性早幼粒细胞白血病的临床研究

目的观察亚砷酸（ATO）、维甲酸（ATRA）联合中剂量阿糖胞苷（ID-Ara-c）治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）疗效。方法 36例初治APL患者联合应用ATO、ATRA诱导分化,序贯应用ATO、ATRA及ID-Ara-c方案巩固维持治疗,定期检测PML/RARα融合基因。结果治疗组CR率为94.4%,1年生存率（OS）91.67%,3年OS为86.11%,达到CR的时间短,缓解率高。结论序贯治疗有复发率低,无病生存期长等优点,其不良反应较轻微。     

建立RQ-PCR方法检测急性早幼粒细胞白血病患者６种不同PML/RARα异构体

［摘要］目的: 建立检测急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）患者PML/RARα融合基因６种特异性异构体（bcr1/2、P4R3、P46R3、bcr3及P2R3）的实时定量PCR（RQ-PCR）技术,并评价其特异性。方法: 设计不同异构体的特异性引物和探针,建立异构体特异性RQ-PCR方法对６种特异性异构体PML/RARα阳性模板进行扩增,评价异构体定量检测的特异性,并检测10例APL患者中不同异构体的含量。结果： 所建立的各异构体特异性RQ-PCR法最大敏感性均达10拷贝/μL,但其重复性较差,108~102拷贝/μL阳性模板的重复性良好,正常对照及空白对照无扩增信号,每个异构体特异性RQ-PCR均不能扩增其他异构体。5例长型（bcr1）和1例变异型（bcr2）阳性APL患者中bcr1/2异构体表达量为7.71%~89.71%（中位数13.70%）,P4R3异构体表达量为0.71%~16.26%（中位数4.48%）,P46R3异构体表达量为3.57%~14.09%（中位数6.33%）。4例短型（bcr3）患者中bcr3异构体表达量为21.43%~197.04%（中位数100.69%）,P2R3异构体表达量为0.34%~9.07%（中位数2.45%）。1例短型患者经诱导治疗缓解后bcr3和P2R3异构体转录本明显下降,复发时又明显升高。结论： 检测PML/RARα异构体特异性RQ PCR方法敏感、可靠,可用于APL患者不同异构体的定量检测和微小残留病灶的随访监测。     

双诱导联合蒽环类抗生素治疗初治急性早幼粒细胞白血病疗效观察

目的观察以全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）和亚砷酸（As2O3）双诱导,联合蒽环类抗生素（anthracycline,ATC）为主的治疗方案治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的疗效。方法对初治APL患者以ATRA和Asz03进行双诱导,联合DA方案化疗,达完全缓解（CR）后,以ATC为主的方案巩固化疗6疗程,以后以化疗、ATRA、As2O3交替序贯维持治疗,化疗方案中仍以ATC为主。总治疗时间3年。14例患者接受了PML／RARα融合基因监测。结果21例初治APL患者中,除2例早期死亡外,其余19例诱导治疗后均达CR,经巩固、维持治疗,此19例患者至今均为持续完全缓解（CCR）状态,其中CCR5年以上2例,3年以上6例。无患者出现严重或不可逆的毒副反应。接受PML／RARα融合基因检测的14例患者,初诊时均为阳性,巩固治疗结束时均转为阴性,在以后监测中无一例转阳。结论双诱导联合ATC治疗初治APL,疗效可靠,毒副反应小。     

分化综合征

急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）是一种特殊类型的急性髓系白血病,其细胞遗传学特征为t（15;17）染色体异位,该异位使15号染色体上的早幼粒细胞白血病（PML）基因与17号染色体上的维甲酸受体α（RARα）基因发生融合,表达PML—RARα融合蛋白,     

荧光原位杂交技术检测急性早幼粒细胞白血病的PML/RARα融合基因重排

目的：探讨双色双融合荧光原位杂交技术（dual-color and dual-fusion fluorescence in-situ hybridization,D-FISH）在急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）诊断中的应用价值。方法：同时应用常规细胞遗传学R显带（RHG）核型分析和双色双融合荧光原位杂交2种方法,对21例APL患者进行检测。结果：21例APL患者中,常规细胞遗传学检出t（15;17）染色体易位18例,D-FISH检测均为PML/RARα融合基因（＋）;2例阴性和1例因无分裂相而无法分析结果者经D-FISH检测均为（＋）。D-FISH检测总阳性率100%（21/21）,高于常规细胞遗传学检查阳性率85.71%（18/21）。结论：与常规细胞遗传学方法相比,D-FISH检测APL的PML/RARα融合基因具有简便、快速、灵敏、特异性强等优点,可以作为APL临床诊断的一种重要检测方法。     

急性髓细胞性白血病融合基因异构体分型与bcl-2表达、临床预后的关系

采用免疫组化、原位杂交方法 ,测定 2 8例急性早幼粒白血病 (APL)患者的抗凋亡基因 bcl 2 蛋白 /mRNA表达水平 ,并分析APL融合基因异构体分型与bcl 2基因表达、临床预后的关系。结果表明 ,异构体之间的bcl 2蛋白 /mRNA表达水平差异无显著性 (P >0 .0 5 )。提示PML RARα转录构型不影响临床特征和预后     

急性早幼粒细胞白血病患者早期死亡的临床分析

目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)患者早期死亡的临床特点。方法:分析早期死亡APL患者形态学、免疫分型、染色体核型和PML/RARα融合基因特点,并详细记录年龄、性别、起病时白细胞(WBC)计数、血小板(BPC)计数、血红蛋白(Hb)含量、骨髓中早幼粒白血病细胞占单个核细胞百分比(BMLP%)、纤维蛋白原浓度(Fib)等。结果:63例APL患者中13例早期死亡,早期死亡率20.63%。13例早期死亡APL中,7例起病时外周血白细胞大于10×109L-1,9例形态学上表现为M3v,8例为CD34+,8例为CD2+,9例PML/RARα融合基因BCR3亚型,与非早期死亡组相比形态学、免疫分型、染色体核型和PML/RARα融合基因特点等存在统计学差异。除1例死于维甲酸综合征外,其余12例均死于脑出血。结论:外周血高白细胞,形态学表现为M3v、CD34+、CD2+和PML/RARα融合基因BCR3亚型APL早期死亡率极高,临床预后差。     

50例初诊急性早幼粒细胞白血病患者6种PML/RARα异构体定量分析

目的: 探讨急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL) 初诊患者6种PML/RARα特异性异构体bcr1（长型）、bcr2（变异型）、bcr3（短型）、P4R3、P46R3、P2R3的临床意义。方法: 应用实时定量PCR法对50例APL初诊患者骨髓单个核细胞的PML/RARα转录本各异构体进行检测,并以看家基因ABL的表达量进行标准化。结果： 50例APL初诊患者中,长型和变异型患者35例,其bcr1/2相对表达量为0.86%~208.01% (中位数11.44%),P4R3相对表达量为0.71%~266.19% (中位数19.10%), P46R3的相对表达量为0.53%~222.90%(中位数8.82%)。15例短型患者bcr3的相对表达量为11.91%~326.55%(中位数58.04%),P2R3的相对表达量为0.02%~57.71%(中位数0.94%)。bcr1/2、P4R3及P46R3 3种特异性异构体的表达水平差异无统计学意义（P=0.364）。bcr1/2及P4R3的表达水平均与P46R3相关（r=0.73,P<0.01;r=0.50,P=0.04）,但bcr1/2与P4R3表达水平没有相关性（r=0.34,P=0.063）。P2R3的表达水平明显低于bcr3（P<0.01）,但无相关性 ( r=0.11,P=0.714)。患者年龄、外周血细胞计数、骨髓异常早幼粒细胞比例、初次血液学完全缓解时间和分子学完全缓解时间与几种融合基因的表达水平无明显相关性。 结论： 长型和变异型患者PML/RARα融合基因bcr1/2、P4R3和P46R3异构体的表达水平无统计学差异,短型患者bcr3的表达水平明显高于异构体P2R3。各异构体的表达量与初诊患者的年龄、外周血细胞计数、骨髓异常早幼粒细胞比例、患者初次达到血液学缓解和分子生物学缓解的时间无相关性。     

APL2008方案治疗43例儿童急性早幼粒细胞性白血病的临床分析

目的：评价采用的APL2008方案治疗儿童急性早幼粒细胞白血病（APL）的治疗现状及预后。方法对2008～2014年新诊43例A PL患儿临床资料进行回顾性分析,对进入A PL2008方案治疗的28例患儿进行疗效统计,总结治疗方案和现状。结果本组患儿中位年龄8岁4个月,男28例,女15例,以感染、贫血、出血、发热伴肝脾淋巴结肿大为主要临床表现。标、中、高危组所占比例分别为27．9％、48．8％和23．3％。11例诊断弥散性血管内凝血（DIC ）。骨髓形态学检查以早幼粒细胞（PMC）异常升高为主。37例患儿免疫分型共同特征表现为CD33、CD117、MPO高表达。43例进行 PML／RARα融合基因检测,阳性率100％,同时进行细胞遗传学分析37例阳性,其中t （15;17）（q22;q11．2）经典遗传学异常28例,有9例少见核型。43例患者中,早期死亡4例,都死于颅内出血,11例早期放弃,28例可进行疗效分析A PL患儿中,死亡2例,复发2例,失访1例。血液学缓解（HCR）率为96．4％,4年总生存（OS）率和无事件生存（EFS）率分别为（85．9±7．6）％和（80．4±8．8）％,去除不规范治疗患儿,2年OS和EFS率分别为（94．7±5．1）％和（88．9±7．4）％。结论 APL的临床表现以贫血、出血、发热伴浸润为主要特征。APL的PML／RARa融合基因与形态学诊断、免疫分型及染色体符合率分别为95．3％、90．2％和86．5％。APL2008方案治疗儿童A PL预后较好。     

筑巢式聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARαmRNA

目的观察急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARαmRNA的表达情况.方法应用逆转录筑巢式聚合酶链反应(Nested PCR)检测了30例APL患者的PML/RARαmRNA.结果30例APL患者中22例检测到PML/RARαmRNA,其中16例为L型,6例为S型.结论Nested PCR是检测APL患者PML/RARαmRNA有效而敏感的方法.