丁苯酞对糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞炎症反应的调节作用

目的 研究丁苯酞调节糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）条件下人脑微血管内皮细胞（human brainmicrovascular endothelial cells,HBMEC）炎症反应的机制。方法 采用OGD方法处理HBMEC,将细胞分为对照组、模型组和丁苯酞低、中、高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC,模型组为OGD处理的细胞,低剂量组为OGD+5 μmol·L^-1的丁苯酞,中剂量组为OGD+10 μmol·L^-1的丁苯酞,高剂量组为OGD+20 μmol·L^-1的丁苯酞。采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,CCK-8法检测细胞活力的变化,Western-Blot法检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB （p-P65）、caspase-1和procaspase-1的表达水平,免疫酶联法检测上清中白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素6（IL-6）的分泌水平。实时荧光定量PCR检测HMGB1、TLR4、NF-κB（P65）、caspase-1、IL-1β的mRNA表达。结果 OGD处理可以诱导HBMEC活力下调和HBMEC细胞凋亡,且具有时间依赖性,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预后,HBMEC细胞活力比模型组显著上调（P<0.05）,细胞凋亡率比模型组显著下降（P<0.05）。OGD处理可以导致HBMEC中HMGB1-TLR4-NF-κB信号的激活,诱导炎症因子caspase-1、IL-1β的表达上调,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预可以显著下调HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达,下调caspase-1、IL-1β的表达。结论 丁苯酞可能通过抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达调节OGD下HBMEC细胞炎症反应。     

番茄红素通过ROS/NF-κB调控乳腺癌干细胞干性和化疗敏感性的研究

目的 探讨番茄红素对乳腺癌干细胞(breast cancer stem cell,BCSC)干性和化疗敏感性的影响及其可能的作用机制。方法 体外培养乳腺癌MCF-7细胞,通过悬浮培养和流式细胞术筛选CD44⁺MCF-7干细胞(BCSC)进行后续实验;BCSC分为对照组和番茄红素组(5 μmol·L^-1),给药24 h后,球体形成试验检测BCSC球体形成大小和数量;对照组和番茄红素组BCSC经不同浓度顺铂(0,5,10,20,40,80 μmol·L^-1)处理24 h,CCK8试验检测BCSC细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测对照组和番茄红素组BCSC中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;BCSC经10 μmol·L^-1活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)或10 μmol·L^-1 NF-κB抑制剂BAY 11-7085(BAY)处理24 h后,Western blotting检测细胞中p NF-κB和干性相关蛋白LSD1及SOX9的表达水平。结果 CD44⁺细胞中LSD1和SOX9蛋白表达水平显著高于CD44^-细胞;番茄红素明显降低BCSC球体形成数量和大小;番茄红素显著提高顺铂诱导的BCSC细胞凋亡率;番茄红素显著降低BCSC中ROS水平;番茄红素与NAC均降低细胞中p NF-κB蛋白表达水平;番茄红素、NAC和BAY均抑制细胞中LSD1、SOX9蛋白表达水平,且分别经番茄红素、NAC和BAY处理后,BCSC对顺铂敏感性明显升高。结论 番茄红素可能通过ROS/NF-κB信号通路抑制乳腺癌干细胞干性,增强顺铂治疗的敏感性。     

2',4'-二羟基-3'-甲基-3-甲氧基查耳酮上调p21抑制人肝癌HepG2细胞的生长

目的 探讨2'',4''-二羟基-3''-甲基-3-甲氧基查耳酮(C20)对人肝癌HepG2细胞的体外抗肿瘤作用及其潜在的作用机制。方法 通过CCK-8法、集落形成实验、5-乙炔基-2''-脱氧尿苷(EdU)染色法检测C20对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;通过彗星实验检测C20(10 μmol·L^-1)对HepG2细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测C20(5、10 μmol·L^-1)对HepG2细胞周期阻滞的影响;通过Hoechst染色和流式细胞术检测C20(5、10 μmol·L^-1)对HepG2细胞凋亡的影响。借助Western blotting法检测C20(5、10 μmol·L^-1)处理对HepG2细胞中与凋亡、DNA损伤、细胞周期阻滞相关蛋白表达水平的调控作用。结果 与对照组比较,C20显著抑制HepG2细胞的活力(P<0.001),给药48 h的半数抑制浓度(IC₅₀)为7.937 μmol·L^-1;5 μmol·L^-1 C20能够显著抑制HepG2细胞的集落形成能力(P<0.01);EdU染色结果显示5、10 μmol·L^-1的C20能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖能力;5、10 μmol·L^-1的C20显著诱导HepG2细胞G₂/M期阻滞(P<0.001);5、10 μmol·L^-1的C20显著促进HepG2细胞凋亡(P<0.001),并显著上调Caspas-3、Caspase-9以及PARP的剪切水平(P<0.01);10 μmol·L^-1的C20能够诱导HepG2细胞发生DNA损伤,并且5、10 μmol·L^-1的C20显著上调γH2AX、p21的蛋白水平(P<0.01)。结论 C20能够造成HepG2细胞发生DNA损伤,上调p21蛋白水平,导致细胞G₂/M期阻滞,并进一步诱发凋亡,发挥体外抗肝癌作用。     

6种药物对有机阴离子转运多肽OATP1B1及其基因多态性A388G、T521C转运作用的影响

目的 研究6种药物对有机阴离子转运多肽OATP1B1及其基因多态性A388G、T521C转运作用的影响。方法 体外培养稳定高表达OATP1B1和OATP1B1基因多态性A388G、T521C的人胚肾细胞（HEK293）株,高表达空白载体（Mock）的HEK293细胞为空白对照,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测各转运体细胞中mRNA表达;放射性标记化合物³Hestrone sulfate作为转运底物、利福平作为阳性抑制剂验证各高表达细胞的转运活性;测定30 μmol·L^-1的达比加群、辛伐他汀、替格瑞洛、卡培他滨、多西他赛、依那普利对各细胞³H-estrone sulfate摄入活性的抑制作用,并依据抑制试验结果,进一步测定辛伐他汀、替格瑞洛、多西他赛对转运体细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）。结果 HEK293细胞内导入的各种转运体基因都呈现良好的复制表达;OATP1B1、OATP1B1/A388G、OATP1B1/T521C对底物³H-estrone sulfate（5 μmol·L^-1）的转运活性分别为Mock细胞的39、49和48倍,30 μmol·L^-1利福平添加后,可将细胞的转运活性抑制到50%以下;辛伐他汀、替格瑞洛、多西他赛对OATP1B1的抑制作用较强,30 μmol·L^-1给药的转运活性分别为对照组的（40.09±1.95）%、（33.82±0.61）%、（45.08±0.22）%;辛伐他汀对OATP1B1、OATP1B1/A388G、OATP1B1/T521C的IC₅₀分别为14.2、＞100、＞100 μmol·L^-1,替格瑞洛的IC₅₀分别为19.1、68.4、＞100 μmol·L^-1,多西他赛的IC₅₀分别为17.6、22.9、19.3 μmol·L^-1。结论 OATP1B1基因多态性在一定程度上改变了抑制剂对转运体活性的影响程度。     

松果菊苷抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭和干细胞样特性

目的 探讨松果菊苷对卵巢癌SKOV3细胞的作用。方法 选择不同浓度的松果菊苷处理卵巢癌SKOV3细胞,24 h后CCK8检测细胞存活率;选择不同浓度松果菊苷浓度(0,20,40,80μmol·L^-1)进行后续实验,EdU染色检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;免疫印迹法检测VEGF、E-cadherin、Vimentin的表达及p38 MAPK的磷酸化;显微观察细胞肿瘤球形态;流式细胞仪检测CD133和CD44的含量。结果 SKOV3细胞的存活率与松果菊苷呈浓度依赖性降低,松果菊苷浓度≥40μmol·L^-1时,SKOV3细胞的存活率较松果菊苷0μmol·L^-1时均明显降低(P<0.05)。与松果菊苷0μmol·L^-1组比较,松果菊苷40μmol·L^-1组和80μmol·L^-1组EdU阳性细胞数和侵袭细胞数均减少(P<0.05);VEGF和Vimentin蛋白表达水平及p38 MAPK磷酸化水平均降低(P<0.05);E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05);肿瘤干细胞成球直径减小(P<0.05),成球数减少(P<0.05);CD133和CD44表达均降低(P<0.05)。结论 松果菊苷可以抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭、干细胞样特性及p38 MAPK的磷酸化。     

吉马酮通过HBXIP/p53信号通路诱导A549、CNE-1、HepG2细胞凋亡

目的 研究吉马酮诱导肺癌 A549、 鼻咽癌 CNE-1、 肝癌 HepG2 细胞凋亡的机制 。 方法 50、 150、 200、250、300 μmol·L^-1的吉马酮处理肝癌 HepG2、肺癌 A549、鼻咽癌 CNE-1、结肠癌 Caco-2 细胞 24、48、72 h 后,MTT 实验检测细胞的存活率的变化。100、150、200 μmol·L^-1的吉马酮分别处理 A549、HepG2、CNE-1细胞 48 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Western blotting 实验检测细胞凋亡标志蛋白 cleaved-Caspase-3、Caspase-3 的变化,检测乙型肝炎 X相互作用蛋白（HBXIP）、p53蛋白的表达量变化。分别在 A549、HepG2、CNE-1细胞中应用 siRNA 敲低 HBXIP,Westernblotting实验检测 HBXIP的敲低效果及 p53蛋白表达变化;MTT实验检测敲低 HBXIP对吉马酮诱导的细胞增殖抑制作用的影响。结果 吉马酮对鼻咽癌CNE-1、肝癌HepG2细胞增殖抑制作用较强,与溶剂对照组比较,200、250、300 μmol·L^-1组细胞存活率显著下降（P＜0.05）;在高浓度时对肺癌A549细胞增殖抑制效果较强,与溶剂对照组比较,250、300 μmol·L^-1组细胞存活率显著下降（P＜0.05）;对结肠癌Caco-2细胞作用相对较弱。与对照组比较,100、150、200 μmol·L^-1吉马酮处理A549、HepG2、CNE-1细胞 48 h后,凋亡率显著升高（P＜0.05）,cleaved-Caspase-3、p53蛋白表达显著上升（P＜0.05）;以 150、200 μmol·L^-1吉马酮处理A549、HepG2、CNE-1细胞48 h后,HBXIP的蛋白表达显著降低（P＜0.05）。siRNA-HBXIP处理48 h后,与对照组比较,HBXIP的蛋白表达量显著下降（P＜0.05）,p53蛋白表达量显著上升（P＜0.05）。与单独使用的相同浓度的吉马酮相比,沉默HBXIP后A549、HepG2、CNE-1细胞对吉马酮的敏感度明显提高,150、200、250 μmol·L^-1组均差异显著（P＜0.05）。结论 吉马酮可以抑制A549、HepG2、CNE-1细胞增殖、诱导细胞凋亡,作用机制可能与调控HBXIP/p53信号通路相关。     

基于转基因血管荧光斑马鱼的芦丁、甘草酸、汉防己甲素、葛根素、柚皮素、鞣花酸、黄芩苷、大黄素、穿心莲内酯、苦参碱促血管新生活性初探

目的 采用转基因血管荧光斑马鱼研究芦丁、甘草酸、汉防己甲素、葛根素、柚皮素、鞣花酸、黄芩苷、大黄素、穿心莲内酯、苦参碱促进血管新生的作用。方法 选取48 hpf转基因血管荧光Fli-1品系斑马鱼3 480尾于六孔板中,每孔均处理30尾(实验组),分别水溶给予芦丁81.90~1 637.95 μmol·L^-1、甘草酸60.76~1 215.17 μmol·L^-1、汉防己甲素5.02~80.29 μmol·L^-1、葛根素120.08~2 161.49 μmol·L^-1、柚皮素3.67~734.59 μmol·L^-1、鞣花酸0.21~3.31 μmol·L^-1、黄芩苷28.00~448.07 μmol·L^-1、大黄素0.19~740.08 μmol·L^-1、穿心莲内酯35.67~570.69 μmol·L^-1、苦参碱50.33~805.28 μmol·L^-1,同时设置对照组(养鱼用水处理斑马鱼),处理24 h后观察记录斑马鱼的毒性表型和死亡情况,确定供试品对斑马鱼的最大耐受浓度(MTC)。用10个化合物的MTC与斑马鱼共培养24 h,检测肠下血管面积和肠下血管出芽数。结果 与对照组比较,芦丁组、甘草酸组、汉防己甲素组、葛根素组、柚皮素组、黄芩苷组、穿心莲内酯组、苦参碱组斑马鱼肠下血管面积像素升高,其中甘草酸组、汉防己甲素组、黄芩苷组、穿心莲内酯组差异显著(P<0.05、0.01、0.001);鞣花酸组、大黄素组斑马鱼肠下血管面积像素降低,差异不显著;芦丁组、汉防己甲素组、葛根素组、柚皮素组、鞣花酸组、苦参碱组斑马鱼肠下血管出芽数比对照组多,芦丁组差异显著(P<0.05);甘草酸组、黄芩苷组、穿心莲内酯组斑马鱼肠下血管出芽数比对照组少,大黄素组斑马鱼肠下血管出芽数与对照组相当。结论 芦丁、甘草酸、汉防己甲素、黄芩苷和穿心莲内酯对斑马鱼具有促进血管新生作用;葛根素、柚皮素、鞣花酸、大黄素和苦参碱对血管新生无明显影响。     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

乌骨藤中C21甾体苷诱导SACC-83和SACC-LM细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 研究乌骨藤提取物C₂₁甾体苷对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinomacv,SACC）低侵袭细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma-83,SACC-83）和肺高转移细胞株（SACC-LM）增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 用不同浓度（5,10,20,40,60,80,100 μmol·L^-1） C₂₁甾体苷处理SACC-83和SACC-LM细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,并计算药物的IC₂₀和IC₅₀;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测SACC-83及SACC-LM细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测SACC-83和SACC-LM细胞Bcl-2、Bax、caspase 3的mRNA和蛋白的表达。结果 不同浓度的C₂₁甾体苷降低SACC-83和SACC-LM细胞活力,抑制细胞增殖,并且作用于SACC-83细胞C₂₁甾体苷的IC₂₀浓度为7.49 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为38.34 μmol·L^-1;作用于SACC-LM细胞的C₂₁甾体苷IC₂₀浓度为9.30 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为46.04 μmol·L^-1;细胞克隆集落形成明显减少。C₂₁甾体苷IC₂₀浓度分别促进SACC-83及SACC-LM细胞凋亡,且随着给药时间延长,凋亡率增加,具有显著性差异（P<0.05,P<0.01）。经7.49,9.30 μmol·L^-1 C₂₁甾体苷分别处理SACC-83及SACC-LM细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白水平显著降低（P<0.01）,而Bax、Caspase 3的mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论 乌骨藤C₂₁甾体苷抑制SACC-83及SACC-LM细胞增殖、促进凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax和Caspase 3表达有关。     

大花红景天介导PI3K/AKT-HDAC2轴对人胚肺成纤维二倍体细胞衰老的调控作用

目的 探究大花红景天中杞柳苷（salipurposide,Sali）、红景天苷（salidroside,Sal）、异柳糖苷（isotachioside,Isota）对人胚肺成纤维二倍体细胞（2BS）衰老调控作用及可能机制。方法 显微镜下观察并选取年轻28代龄2BS （28PD）细胞和衰老50代龄2BS （50PD）细胞。MTT试验测定1.25,2.5,5.0,7.5,10.0 μmol·L^–1 Sal,2.5,5.0,7.5,10.0,12.5 μmol·L^–1 Sali以及Isota对50PD细胞活性的影响。根据MTT结果,5.0 μmol·L^–1 Sal和10.0 μmol·L^–1 Sali、Isota用于进行后续实验。28PD和50PD细胞分为28PD组、50PD组、50PD+Sali组、50PD+Sal组、50PD+Isota组,各组相应药物干预24 h。测定细胞衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence associated-beta-galactosidae,SA-β-gal）表达情况,细胞丙二醛（malondialdehyde,MDA）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）活性情况,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞磷脂酰肌醇三羟基激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B （AKT）、组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）的mRNA表达以及PI3K、磷酸AKT （p-AKT）、HDAC2蛋白表达情况。结果 与28PD组比较,50PD组细胞SA-β-gal表达增加,MDA、ROS含量增加,SOD、GSH-PX活性降低,PI3K、AKT、HDAC2的mRNA以及相应蛋白表达降低（P<0.01）。50PD细胞经Sali、Sal、Isota干预后,SA-β-gal表达显著降低（P<0.01）,MDA、ROS含量显著降低（P<0.01）,SOD、GSH-PX活性显著提高（P<0.01）,PI3K、AKT、HDAC2的mRNA以及相应蛋白表达均显著增加（P<0.05或P<0.01）。结论 大花红景天中Sali、Sal、Isota能降低50PD细胞SA-β-gal表达,其作用可能与抑制氧化应激、调控PI3K/AKT-HDAC2轴表达有关。     

Endogenous Neural Stem Cells in the Adult Brain

Despite progress in our understanding molecular mechanisms of neuronal cell death in many central nervous system (CNS) diseases, widely effective treatments remain elusive. Recent studies have shown that neural stem cells (NSCs) are present in the subventricular zone (SVZ) lining the lateral ventricles and the subgranular zone (SGZ) of the hippocampal dentate gyrus (DG) in adult mouse, rat, nonhuman primate, and human brain. Newly generated cells in the SGZ can differentiate into mature, functional neurons and integrate into the DG as granule cells, which are involved in memory formation. In addition, many CNS diseases can stimulate the proliferation of neuronal stem/progenitor cells located in the SVZ and SGZ of the adult rodent brain, and the resulting newborn cells migrate into damaged brain regions, where they express mature neuronal markers. Therefore, it might be possible for damaged cells to be replaced from endogenous neural stem cell pools. However, the capacity of self-repair is obviously not enough. Proliferation, migration, and neuronal differentiation of endogenous NSCs could be manipulated by pharmaceutical tools to reach the adequate benefits for the treatment of CNS diseases. This work is supported in part by National Institute of Health (NIH) grant AG21980 (K.J.).     

Feridex标记胎盘来源的间充质干细胞分化为神经干细胞的实验研究

目的分离胎盘组织来源的间充质干细胞并诱导分化为神经干细胞,以期找到能成功标记神经干细胞的方法。方法将胎盘组织剪碎后消化、培养,加入神经干细胞诱导因子10ng/mL表皮生长因子（EGF）＋10ng/mL重组人碱性成纤维生长因子（bFGF）＋DMEM/F12,并分别添加相应浓度的血清,预诱导3d后加入DMEM/F12＋0.1μmol/L全反式维甲酸（RA）,10ng/mL胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）＋10ng/mL脑源性神经营养因子（BDNF）进行正式诱导7d。结果诱导10d后用Feridex标记诱导后的细胞,普鲁士蓝染色显示90%以上的干细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,Nestin染色显示阳性。结论胎盘来源的间充质干细胞能成功诱导为神经干细胞,且Feridex可成功标记诱导后的细胞。     

腺苷促进体外培养神经干细胞增殖作用研究

目的研究腺苷促进体外培养神经干细胞（NSCs）增殖作用。方法取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,观察神经球生成情况,特异性蛋白质免疫细胞化学染色和BrdU标记鉴定并判断其增殖能力;将腺苷按0.4,2.0,10.0 μmol&#8226;L 13个浓度加入神经干细胞培养基,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过观察神经球形态、神经球生成数目及 MTT法定量比较,分析不同浓度腺苷对神经干细胞分裂增殖的影响。结果培养物中有大量神经球生成,神经干细胞特异性蛋白质免疫细胞化学染色呈阳性,BrdU标记亦呈阳性反应,所培养的细胞为神经干细胞,具有增殖能力;腺苷中、高浓度组神经球数目、MTT比色结果明显高于溶媒对照组。结论腺苷具有促进NSCs增殖作用。     

托吡酯促进体外培养神经干细胞增殖的实验研究

目的:研究托吡酯对体外培养神经干细胞的促增殖作用。方法:取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,托吡酯按0.4、2、10μmol.L-13个量级(或3种浓度)加入神经干细胞培养基中,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过神经球生成数目及MTT法定量比较,分析不同浓度托吡酯对神经干细胞分裂增殖的影响。结果:2、10μmol.L-1托吡酯组神经球数目分别为20.67±4.04和49.68±3.79;MTT比色结果分别为0.3546±0.0705和0.5018±0.0369,明显高于溶媒对照组(7.34±2.31、0.2880±0.0093,P<0.01)。结论:托吡酯具有促进神经干细胞增殖的作用。     

依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用

目的探讨依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用及机制。方法取大鼠13.5 d胚胎皮质,提取神经干细胞,分为谷氨酸处理组(500μmol/L)、依达拉奉干预组(500μmol/L谷氨酸+500 ng/mL依达拉奉)和正常对照组。谷氨酸及依达拉奉处理24 h后,应用光学显微镜高倍下观察各组细胞的形态和数量;并对各组细胞作DAPI及TUNEL染色,计数阳性细胞。结果与正常对照组比较,谷氨酸处理组细胞的数量减少(P<0.05);依达拉奉组细胞的数量较谷氨酸组明显增多(P<0.05)。谷氨酸处理组的TUNEL阳性细胞明显多于正常对照组(P<0.05),依达拉奉组的TUNEL阳性细胞明显少于谷氨酸组(P<0.05)。结论依达拉奉通过拮抗谷氨酸诱导的细胞凋亡对谷氨酸所致的神经干细胞损害起到保护作用。     

Comparison of Ectopic Gene Expression Methods in Rat Neural Stem Cells

Neural stem cells (NSCs) have the ability to proliferate and differentiate into various types of cells that compose the nervous system. To study functions of genes in stem cell biology, genes or siRNAs need to be transfected. However, it is difficult to transfect ectopic genes into NSCs. Thus to identify the suitable method to achieve high transfection efficiency, we compared lipid transfection, electroporation, nucleofection and retroviral transduction. Among the methods that we tested, we found that nucleofection and retroviral transduction showed significantly increased transfection efficiency. In addition, with retroviral transduction of Ngn2 that is known to induce neurogenesis in various types of cells, we observed facilitated final cell division in rat NSCs. These data suggest that nucleofection and retroviral transduction provide high efficiency of gene delivery system to study functions of genes in rat NSCs.     

骨髓基质细胞和神经干细胞体外共培养的实验研究

目的:研究神经干细胞(NSCs)和骨髓基质细胞(MSCs)共培养时对各自分化的影响。方法:将2种细胞按接种数目分为5组,A组为NSCs∶MSCs=105∶0;B组为NSCs∶MSCs=105∶104;C组为NSCs∶MSCs=105∶105;D组为NSCs∶MSCs=104∶105;E组为NSCs∶MSCs=0∶105。培养7d后分别进行5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)、半乳糖神经酰胺(GalC)免疫细胞化学双染色。结果:随着MSCs比例的提高,各组BrdU和NSE或MAP2的双阳性细胞表达差异有统计学意义(P<0.05),且B、C及D组分别与A组比较差异亦有统计学意义(均P<0.01);随NSCs比例的增高,B、C、D组NSE、MAP2和GFAP双阳性MSCs表达逐渐增高(均P<0.01)。结论:MSCs可以促进NSCs分化为神经元,而且在NSCs诱导下部分MSCs可以转化为神经元和星形细胞。     

Characterization of Ionic Currents in Human Neural Stem Cells

The profile of membrane currents was investigated in differentiated neuronal cells derived from human neural stem cells (hNSCs) that were obtained from aborted fetal cortex. Whole-cell voltage clamp recording revealed at least 4 different currents: a tetrodotoxin (TTX)-sensitive Na⁺ current, a hyperpolarization-activated inward current, and A-type and delayed rectifier-type K⁺ outward currents. Both types of K⁺ outward currents were blocked by either 5 mM tetraethylammonium (TEA) or 5 mM 4-aminopyridine (4-AP). The hyperpolarization-activated current resembled the classical K⁺ inward current in that it exhibited a voltage-dependent block in the presence of external Ba²⁺ (30µM) or Cs⁺ (3µM). However, the reversal potentials did not match well with the predicted K⁺ equilibrium potentials, suggesting that it was not a classical K⁺ inward rectifier current. The other Na⁺ inward current resembled the classical Na⁺ current observed in pharmacological studies. The expression of these channels may contribute to generation and repolarization of action potential and might be regarded as functional markers for hNSCs-derived neurons.     

神经干细胞移植治疗脊髓损伤临床疗效观察

目的探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的临床疗效。方法对9例脊髓损伤患者进行脊髓探查加损伤局部神经干细胞移植术,术前及术后半年应用ASIA评分系统进行神经功能评定。结果患者在皮肤感觉、运动、二便、排汗等方面均有一定程度的改善;术后ASIA评分与术前比较,两者间有显著差异。结论神经干细胞移植可以改善脊髓损伤患者的感觉、运动、二便及排汗等多方面的神经功能,提高患者生活质量。     

3，6＇-二芥子酰基蔗糖抗抑郁作用及对新生大鼠海马神经前体细胞增殖的影响

目的探讨远志活性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖（DISS）的抗抑郁作用及对新生大鼠海马神经前体细胞增殖的影响。方法通过小鼠悬尾和强迫游泳试验来考察DISS抗抑郁作用;体外分离培养新生大鼠海马神经前体细胞,同时给予DISS,用四甲基噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,观察DISS对神经细胞增殖的影响,并初步探讨其抗抑郁的作用机制。结果DISS不同剂量（5,10,20mg／kg）给药后,能明显缩短小鼠在悬尾和强迫游泳试验中的不动时间,并且随着剂量的增大抗抑郁作用逐渐降低;DISS不同质量浓度（0．4,10,50~g／mL）对所培养具神经前体细胞特性的细胞有促进增殖的作用。结论DISS具有较好的抗抑郁作用,该作用可能是通过调控神经干细胞的增殖、促进功能性神经再生和保护作用实现的。