TGF-β1促进卵巢癌细胞转移机制的研究

目的探讨转化生长因子-β1促进卵巢癌细胞转移的机制。方法应用RT—PCR、WesternBlot和明胶酶实验等方法检测了卵巢癌细胞HO-8910和HO-8910PM中TGF—B1对MMP-2、MMP-9表达及分泌的调节作用;通过免疫组化方法检测了121例标本（包括31例正常卵巢组织、45例卵巢癌卵巢原发灶组织和45例卵巢癌转移灶组织）中TGF—B1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果结果显示TGF-β1主要上调了低转移细胞系HO-8910中MMP-2和MMP-9的表达和分泌;免疫组化结果表明卵巢癌原发灶组织中MMP-2的表达高于正常卵巢组织（P〈0．05）;TGF-β1、MMP-2和MMP-9在卵巢癌转移灶中的表达均明显高于原发灶（P〈0．01）;且TGF-β1与MMP-2和MMP-9的表达均存在相关性（P〈0．05）。结论TGF-β1主要通过上调MMP-2和MMP-9的表达和分泌促进了卵巢癌细胞的转移。     

Smad4和Smad7在人脑胶质瘤中的表达及意义

 目的 探讨Smad₄和Smad₇在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法 采用免疫组化方法,对临床经过石蜡包埋的30例胶质瘤和8例正常脑组织标本进行定位和定性检测。结果 Smad₄和Smad₇蛋白在胶质瘤中有不同程度的表达,在正常脑组织、低、高级别胶质瘤中Smad₄的阳性表达分别为44．80±16．19,25．81±9．48,6．73±3．71,P<0．05。Smad₇的阳性表达分别为6．69±3．86,18．22±7．84,41．95±17．27,P<0．05。差别均有显著意义。且Smad4与Smad7的表达水平呈负相关,r=-0．82,P<0．01。结论 Smad₄随胶质瘤的病理分级增高阳性表达降低,对胶质瘤的进展有抑制作用。Smad₇则相反,可能参与了胶质瘤的恶性进展。     

白桦酯醇对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中MMP-2和MMP-9表达的影响及意义

目的 探讨白桦酯醇对卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响和意义。方法 建立卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,将30只裸鼠随机分为白桦酯醇高剂量组（80mg／kg）、中剂量组（40mg／kg）、低剂量组（20mg／kg）以及对照组（生理盐水）和紫杉醇组（135mg／m2）,每组6只,腹腔给药02ml/只,隔日1次,连续21d。停药后第2d处死裸鼠,测量其移植瘤体积和瘤重;用免疫组织化学法检测移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达并计算表达率。结果 白桦酯醇处理组和紫杉醇组的移植瘤体积和瘤重均小于对照组（P＜0.05）;白桦酯醇中、高剂量组的抑瘤率分别为44.5％和51.4％,均高于其低剂量组的17.5%（P＜0.05）。与对照组比较,白桦酯醇处理组和紫杉醇组移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均减弱;白桦酯醇低、中、高剂量组移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达率（％）分别为47.13±8.67和53.82±7.41、38.29±4.37和48.79±4.63、26.88±5.12和38.93±2.82,均低于对照组的56.78±6.42和69.35±5.03,且白桦酯醇3组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 白桦酯醇对卵巢癌SKOV3细胞皮下移植瘤的生长有抑制作用,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

人骨肉瘤原位移植模型的建立及生物学特征

目的 用人骨肉瘤细胞系HOS-98建立人骨肉瘤裸鼠胫骨原位移植模型,以探讨宿主器官微环境对人骨肉瘤细胞侵袭及转移等生物学行为的影响。方法 将人骨肉瘤细胞系HOS-98接种于裸鼠皮下,形成移植瘤,用传代移植瘤组织作为移植材料,进行胫骨原位移植及皮下移植。分别于移植后4周和8周处死小鼠,进行病理形态学检查,并对两种方法在成瘤率、生长方式及侵袭、转移等生物学行为比较。结果 两种移植方式在成瘤率及形态学上无明显不同,胫骨原位移植的潜伏期较短,并且生长快于皮下移植方式。皮下移植瘤呈局限性膨胀生长,有不完整的纤维包膜,瘤内类骨基质较少见,未见肺转移,观察8周时无明显消瘦;而胫骨原位移植瘤侵袭周围组织,可见发生肺转移,8周明显消瘦。原位移植的裸鼠血清ALP水平高于皮下移植者。原位移植的X线检查有明显的类似于人的骨性反应。结论 用人骨肿瘤细胞系HOS-98皮下接种的移植瘤作为移植材料是建立肿瘤异位移植的可行途径,裸鼠胫骨微环境较皮下组织更适合于人骨肉瘤的侵袭及转移表达,裸鼠胫骨原位移植模型的恶性生物学行为更接近临床骨肉瘤患者的体内侵袭及转移实际,该原位移植模型为今后的实验研究提供了更加接近患者实际的实验模型。     

TGF-β1可通过ERK信号通路调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）/丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）通路在调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达中的作用。方法 以MKN45和BGC823胃癌细胞系为研究对象。明胶酶谱法检测TGF-β1对各细胞MMP-2和MMP-9表达的影响,Western蛋白印迹检测在TGF-β1作用下各细胞中MAPK（P38、JNK、ERK）的活化情况。用相应MAPK通路的特异抑制剂对TGF-β1调节各细胞MMP-2和MMP-9的表达进行阻断研究。结果 TGF-β1可上调MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达;TGF-β1可诱导BGC823细胞P38、MKN45和BGC823细胞ERK及JNK的活化;ERK特异抑制剂PD98059可明显抑制TGF-β1诱导MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达,但P38特异抑制剂SB203580和JNK特异抑制剂SP600125对TGF-β1诱导这两种细胞MMP-2和MMP-9的表达无明显影响。结论 TGF-β1可通过活化ERK信号通路上调MKN45和BGC823胃癌细胞 MMP-2和MMP-9的表达。     

复尔康注射液抗肝肿瘤的实验

 目的 研究复尔康注射液对移植性小鼠肝癌的治疗作用,为开发新制剂提供药效依据。 方法 将肝癌H₂₂S及A型瘤细胞分别接种于小鼠腋皮下及腹腔内,每只小鼠接种瘤细胞数量为2×10⁶,次日随机分组,实验组分别静脉/腹腔注射复尔康注射液315、157.5、78.75 mg/(kg·d), 连续给药10d,分别计算肿瘤抑制率及小鼠生命延长率。 结果 复尔康注射液大中小剂量组对肝癌H₂₂S型实体瘤的抑制率分别为49.36%、39.10%、21.50%;对肝癌H₂₂ A型腹水瘤小鼠的生命延长率分别为82.19%、65.18%、50.61%。重复2次,结果基本相似。 结论 复尔康注射液对移植性肝癌小鼠有明显的治疗作用。     

CD44V 3 基因蛋白在胃癌中的表达及意义

 细胞粘附分子 CD44 是一种细胞表面跨膜糖蛋白 ,为了解 CD₄₄V ³ 表达与胃癌之间的关系 ,本文采用免疫组化 S- P染色方法 ,研究了 CD₄₄V ³ 在胃癌组织的表达情况 ,并探讨其临床病理意义。     

体外模拟CO2气腹环境对宫颈癌细胞生长与转移的影响

 目的 研究体外模拟CO₂气腹环境对宫颈癌细胞生长与浸润转移的影响。方法 利用宫颈癌细胞作为研究对象,建立体外CO₂气腹模型,将宫颈癌细胞经不同压强、不同时间CO₂作用后, 测定细胞生长曲线、细胞集落形成、细胞生长周期、细胞侵袭黏附迁移能力。观察癌细胞生长浸润转移的变化。结果 经CO₂作用后,宫颈癌细胞的生长增殖在受到短暂抑制后,增殖能力明显增强,但与CO₂压力的改变无关;宫颈癌细胞的侵袭、迁移和黏附能力显著下降。结论 CO₂对宫颈癌细胞的生长增殖能力起先抑制后促进的作用;对宫颈癌细胞的浸润转移能力是抑制的。     

乳腺癌组织中转化生长因子β1的表达及其介导乳腺癌侵袭和转移的机制

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白和mRNA在乳腺痛组织中的表达,及其与明胶酶和明胶酶抑制物的关系.方法 建它组织芯片平台,应用免疫组化SP法检测160例乳腺痛组织TGF-β1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)-1和TIMP-2蛋白的表达;应用原位分子杂交方法检测乳腺癌组织中TGF-β1 mRNA的表达.结果 160例乳腺癌TGF-β1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达的阳性率分别为73.7%、96.9%、95.0%、87.5%和89.4%,TGF-β1 mRNA表达的阳性率为56.2%.TGF-β1的蛋白表达与腋窝淋巴结转移、TNM分期和c-erbB-2表达有关(P＜0.05,P＜0.05和P＜0.01),TGF-β1的mRNA表达与腋窝淋巴结转移有关(P＜0.05).TGF-β1蛋白表达阳性组中位总生存期(OS)为60个月,中位无复发生存期(RFS)为59个月;TGF-β1蛋白表达阴性组中位OS为61个月,中位RFS为61个月,两组生存率差异无统计学意义(P=0.090),无复发生存率有统计学意义(P=0.023).TGF-β1的蛋白表达与MMP-2和MMP-9的表达均呈正相关(r=0.170,P＜0.05;r=0.221,P＜0.01).结论 TGF-β1的表达与乳腺癌侵袭和转移密切相关,TGF-β1的蛋白产物通过调控MMP-2和MMP-9促进乳腺癌的侵袭和转移.     

结直肠癌组织MMP-7、MMP-9表达与腹腔微转移的相关性研究

目的:探讨MMP-7、MMP-9在结直肠癌腹腔微转移中的作用以及相关性。方法:收集98例结直肠癌患者手术中腹腔冲洗液,进行CEA、CK20免疫细胞化学染色确定腹腔微转移。使用组织阵列仪制作组织芯片,进行免疫组化染色(SP),检测MMP-7、MMP-9在结直肠癌组织中的表达情况,分析其与腹腔微转移的关系。结果:CEA、CK20联合检测腹腔微转移率为32.7%(32/98)。MMP-7、MMP-9在伴有腹腔微转移的结直肠癌中阳性表达率分别为93.75%和96.88%,明显高于无腹腔微转移结直肠癌表达率72.73%和68.18%(P<0.05,P<0.01)。结论:MMP-7、MMP-9可能在结直肠癌腹腔微转移的发生过程中起重要作用。     

Molecular crosstalk between the proteasome, aggresomes and autophagy: Translational potential and clinical implications

Although it has been suggested that smad7 blocks downstream signaling of TGF-β, the role of smad7 in the EGF signaling pathway has not been fully elucidated. We determined the effect of smad7 on EGF-induced MMP-9 expression in SKBR3 breast cancer cells. The expression of smad7 and MMP-9 was increased by EGF or TGF-β1, respectively, and further increased by EGF and TGF-β1 co-treatment. EGF induced the phosphorylation of EGFR, smad3, ERK, and JNK, and MMP-9 expression was decreased by the EGFR inhibitor, AG1478. In addition, EGF-induced MMP-9 expression was inhibited by UO126 (a MEK1/2 inhibitor) or SIS3 (a smad3 inhibitor), but not by SP600125 (a JNK inhibitor). Interestingly, EGF-induced smad3 phosphorylation was completely blocked by smad7 over-expression, but not the phosphorylation of ERK and JNK. EGF- or TGF-β1-induced MMP-9 expression was completely decreased by adenoviral-smad7 (Ad-smad7) over-expression. We also investigated the role of smad3 on EGF-induced MMP-9 expression and showed that EGF-induced MMP-9 expression was decreased by smad3 siRNA transfection, whereas EGF-induced MMP-9 expression was further increased by smad3 over-expression, as expected. This study showed that EGF-induced smad3 phosphorylation mediates the induction of MMP-9, whereas smad7 inhibits TGF-β1 as well as the EGF signaling pathway in SKBR3 cells.     

Curcumin Inhibits TGF-β1-Induced MMP-9 and Invasion through ERK and Smad Signaling in Breast Cancer MDAMB- 231 Cells

Objective: To evaluate the effects of curcumin on matrixmetalloproteinase-9 (MMP-9) and invasion abilityinduced by transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in MDA-MB-231 cells and potential mechanisms. Methods:Human breast cancer MDA- MB-231 cells were used with the CCK-8 assay to measure the cytotoxicity ofcurcumin. After treatment with 10 ng/ml TGF-β1, with or without curcumin (≤10 μM), cell invasion was checkedby transwell chamber. The effects of curcumin on TGF-β1-stimulated MMP-9 and phosphorylation of Smad2,extracellular-regulated kinase (ERK), and p38 mitogen activated protein kinases (p38MAPK) were examined byWestern blotting. Supernatant liquid were collected to analyze the activity of MMP-9 via zymography. Followingtreatment with PD98059, a specific inhibitor of ERK, and SB203580, a specific inhibitor of p38MAPK, Westernblotting and zymography were employed to examine MMP-9 expression and activity, respectively. Results: Lowdose curcumin (≤10 μM) did not show any obvious toxicity to the cells, while 0~10 μmol/L caused a concentration–dependent reduction in cell invasion provoked by TGF-β1. Curcumin also markedly inhibited TGF-β1-regulatedMMP-9 and activation of Smad2, ERK1/2 and p38 in a dose- and time-dependent manner. Additionally, PD98059,but not SB203580, showed a similar pattern of inhibition of MMP-9 expression. Conclusion: Curcumin inhibitedTGF-β1-stimulated MMP-9 and the invasive phenotype in MDA-MB-231 cells, possibly associated with TGF-β/Smad and TGF-β /ERK signaling.     

TGF-β1 、TβR Ⅱ及cyclinD1 在大肠癌的表达及其意义

 目的　探讨TGF-β1 、TβR Ⅱ及cyclinD1 在大肠癌发生发展过程中的作用。方法　采用免疫组化SP 法从蛋白水平分析TGF-β1 、TβR Ⅱ、cyclinD1 在大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达情况。结果　TGF-β1 蛋白阳性表达率在腺瘤组织为28. 6 % ,大肠癌组织中为57. 1 %( P < 0. 05) ; TβR Ⅱ在大肠癌组织中的表达率为51. 8 % ,低于腺瘤组织( P < 0. 01) ; TGF-β1 、TβR Ⅱ表达的改变与大肠癌浸润深度、淋巴结转移有关; TβR Ⅱ和cyclinD1 的表达呈负相关( P < 0. 05) 。结论　TGF-β1 的过表达与大肠癌侵袭转移演进密切相关; TβR Ⅱ的失表达不仅有助于提高细胞对TGF-β1 的生长抵抗,也增强了大肠癌的侵袭性;cyclinD1 在TGF-β1 的生长抵抗中可能发挥了某些作用。     

Therapeutic targeting of oncogenic transforming growth factor-β1 signaling by antisense oligonucleotides in oral squamous cell carcinoma

The transforming growth factor-β1 (TGF-β1) signaling pathway is important in human oral squamous cell carcinoma (OSCC). Accordingly, the aims of this study were to evaluate the effect of antisense TGF-β1 oligonucleotides (ODNs) on OSCC in cell culture and in a xenograft model, as well as to evaluate any effects ODNs have on proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) expression in the xenograft model. We performed real-time cell electronic sensing (RT-CES) to determine the effect of antisense TGF-β1 ODNs on SCC-9?cell growth. To examine the in?vivo effect of antisense TGF-β1 ODN therapy, SCC-9?cells were grafted into nude mice. Antisense ODNs were injected into the mass daily. Tumor size, body weight and duration of survival were assessed daily. Specimens from the main mass were used for immunohistochemical staining to analyze PCNA and MMP-2 expression. In?vitro treatment with antisense TGF-β1 ODNs decreased TGF-β1 expression and growth of SCC-9?cells. In the xenograft model, the antisense TGF-β1 ODN group exhibited a significantly decreased tumor growth rate compared to the control, which received Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) (P=0.022). However, mean survival time and body weights were not significantly different between the groups (P>0.05). Immunohistochemistry showed that tumors from animals that received antisense TGF-β1 ODNs had significantly lower expression levels of PCNA and MMP-2 compared to tumors from animals in the DMEM group (P<0.05). In conclusion, antisense TGF-β1 ODN therapy significantly inhibits tumor growth compared to controls, however, there are no significant differences between groups with respect to changes in body weight.     

KAI1 、MMP-9 蛋白表达与胃癌浸润转移的关系

 目的 研究胃癌组织中KAI1、MMP-9蛋白表达，探讨它们在胃癌侵袭转移过程中的作用。方法 在71例胃癌组织及20例正常胃粘膜组织中，应用免疫组织化学SP法检测KAI1、MMP-9的蛋白表达，进而分析它们彼此之间的关系及与胃癌临床病理特征之间的关系。结果 KAI1、MMP-9在胃癌中的表达率分别为36．6％、67．6％，而20例正常胃组织中KAI1与MMP-9的阳性表达率分别为90％、45％，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）；KAI1与MMP-9的表达均与浸润深度、淋巴结转移密切相关（P〈0．05），此外，KAI1的表达还与TNM分期有关（P〈0．05）。经统计分析KAI1与MMP-9呈负相关。结论 KAI1、MMP-9与胃癌的侵袭转移密切相关，可作为评价胃癌的进展与预后的有力指标；KAI1、MMP-9可能通过影响血管生成参与胃癌的进展过程，为临床针对胃癌的抗血管治疗提供了新的思路。     

雌二醇对宫颈癌细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响

[目的]探讨雌二醇对宫颈癌细胞株Hela和Siha基质金属蛋白酶（MMP）2和9mRNA转录水平的影响。[方法]采用RT—PCR检测雌二醇（1×10^4mol／L）干预72h后两株细胞MMPs表达的变化。[结果]Hela细胞株表达MMP-9，但不表达MMP-2，而Siha细胞相反。雌二醇干预后，Hela细胞MMP-9 mRNA表达明显高于对照组（P=0．004），Siha细胞MMP-2 mRNA的表达与对照组的无显著性差异（P=0．409）。[结论]MMPs在宫颈鳞癌和腺癌中可能表达不同的亚型．1×10^-8mol／L的雌二醇能够促进Hela细胞MMP-9 mRNA的转录。     

葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响

 目的 探讨葡萄糖和胰岛素浓度的变化对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β₁的影响。 方法 体外常规培养Colon26肿瘤细胞,根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞分为12组,培养48小时后收集上清液,ELISA法检测TGF-β₁的浓度。 结果 (1)D组上清液TGF-β1的浓度明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而B、C组上清液TGF-β1的浓度与A组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。（2）E、F、G组上清液TGF-β₁的浓度与A组相比,对Colon26肿瘤细胞上清液TGF-β₁的分泌差异无统计学意义(P>0.05)。（3）L、M、N组上清液TGF-β₁的浓度均明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01); 而H、K组上清液TGF-β₁的浓度与A组相比差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 （1）高浓度的葡萄糖能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清TGF-β₁的分泌。（2）不同浓度的胰岛素不影响Colon26肿瘤细胞TGF-β₁的分泌。