高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中瑞格列奈和二甲双胍及其在人体药动学中的应用

目的:建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定人血浆中瑞格列奈和二甲双胍浓度的方法,并进行人体药动学研究。方法:以乙腈沉淀蛋白处理血浆样品,替米沙坦做内标,采用Kromasil 60-5CN色谱柱(2.1 mm×100 mm, 5 μm),流动相为20 mmol·L^-1醋酸铵水溶液(含0.2%甲酸)-乙腈(45:55);质谱采用电喷雾离子化-多反应离子监测(ESI-MRM)。并测定12名健康志愿者单剂量口服瑞格列奈盐酸二甲双胍复方片(2 mg:500 mg)后瑞格列奈和二甲双胍的血浆浓度。结果:瑞格列奈和二甲双胍分别在0.05~50 μg·L^-1、2~2 000 μg·L^-1范围内线性良好,定量下限分别为0.05 μg·L^-1和2 μg·L^-1,日内日间精密度均小于8%,提取回收率分别为77.32%~80.65%和78.98%~82.46%。瑞格列奈和二甲双胍的主要药动学参数C_max分别为(29.50±9.57),(1 167±197.77)μg·L^-1;t_max分别为(0.83±0.39),(1.88±0.64)h;t_1/2分别为(1.11±0.38),(4.31±0.86)h;AUC_0→∞分别为(56.90±20.31),(7 407.32±1 653.25)μg·L^-1·h^-1。结论:建立的分析方法灵敏、准确可靠,样品处理快速、简便,适用于瑞格列奈/盐酸二甲双胍复方片人体药动学和生物等效性研究。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度

目的：建立快速灵敏高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度,并研究其单用及联用时在其体内的药动学特征。方法：色谱柱：Diamonsil ODS C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（70∶30,V/V）;流速：0.8 mL·min^-1,进样量10 μL。采用ESI+源,选择性离子检测方式（SIM）,对离子反应m/z 559.2（阿托伐他汀钙）,m/z 406.0（非洛地平）,m/z 325.2（内标为甲基睾酮）进行检测。结果：阿托伐他汀钙和非洛地平在0.01~0.8 μg·mL^-1范围内线性关系良好,定量下限0.01 μg·mL^-1,精密度、稳定性均符合要求。与单用组相比,药物联用组阿托伐他汀钙的最大血药浓度由（677.74±100.86）μg·L^-1增加到（789.80±12.16）μg·L^-1,血浆药物-时间曲线下面积由（5 755.90±1 210.84）h·μg·L^-1增加到（6 931.74±228.11）h·μg·L^-1,半衰期由（3.77±0.89）h变为（3.60±0.36）h;联用组中非洛地平的最大血药浓度由（492.40±69.30）μg·L^-1上升到（751.50±26.12）μg·L^-1,血浆曲线下面积由（4 150.66±725.61）h·μg·L^-1增加到（6 854.87±725.61）h·μg·L^-1,半衰期由（2.64±0.20）h延长至（2.88±0.23）h。结论：该方法灵敏、准确、可靠,专属性强,适用于阿托伐他汀钙和非洛地平在大鼠体内的药动学研究。     

高效液相色谱法测定重症患者亚胺培南血药浓度及PK/PD达标率研究

目的：建立高效液相色谱法测定重症患者血浆中亚胺培南浓度,并将接受连续性肾脏替代疗法（continuous renal replacement therapy,CRRT）与未接受该疗法患者的结果进行对比,为临床调整用药提供依据。方法：以0.5 mol·L^-1的3-吗啉丙磺酸缓冲液（pH 6~8）-乙二醇-水（2：1：1）为稳定剂,以5-羟基吲哚-3-乙酸为内标,采用超滤离心管去蛋白法进行前处理,取滤过液进样。色谱柱为TSKgel ODS-100V（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇-10 mmol·L^-1磷酸二氢钾（6：94,磷酸调pH为6.7~7.0）,流速为0.9 mL·min^-1,检测波长为300 nm,柱温为30℃,进样量为30 μL。测定分析33例接受亚胺培南/西司他丁治疗的重症患者的血药谷浓度,CRRT组14例,非CRRT组19例,以100% T>MIC作为PK/PD靶目标计算用药达标率,评估给药方案。结果：亚胺培南在0.5~50 μg·mL^-1内线性关系良好,定量下限为0.5 μg·mL^-1;批内、批间RSD均小于10%;稳定性试验结果表明血浆样品在处理过程中较稳定。当MIC大于2 μg·mL^-1时,达标率显著降低,且接受CRRT治疗患者的达标率低于未接受CRRT治疗患者。结论：该方法前处理过程简单,灵敏准确,分析时间短,适用于临床亚胺培南个体化用药指导。     

中空纤维离心超滤法检测人血浆中氨茶碱的游离药物浓度

目的:建立一个准确、简单、快速的分析人血浆中游离氨茶碱浓度的方法,并应用于临床治疗药物监测。方法:0.5 ml血浆样品经过中空纤维离心超滤(HFCF-UF)处理,以甲醇-10 mmol·L^-1乙酸铵缓冲溶液(15/85, V/V)为流动相,采用Diamonsil C₁₈色谱柱分离,流速为1.0 ml·min^-1,检测波长为275 nm,进样量为20 μl。结果:血浆中游离氨茶碱浓度在0.25~25 μg·ml^-1范围内线性关系良好,最低定量限0.1 μg·ml^-1,日内、日间RSD分别小于1.1%和1.3%。结论:该方法简单、准确、重现性好,特别适合基层开展临床游离药物浓度的监测。该方法成功的应用于临床游离氨茶碱浓度的监测,为临床游离氨茶碱治疗药物监测提供了一个可靠的分析平台和进一步阐述游离药物浓度与药物疗效或毒性之间的关系奠定了基础。     

左旋奥硝唑磷酸酯二钠比格犬4周长毒伴随毒代动力学

目的:研究左旋奥硝唑磷酸酯二钠及其代谢物左旋奥硝唑在比格犬静脉多次给药4周药物在体内的毒代动力学情况,为左旋奥硝唑磷酸酯二钠的安全性提供评价。方法:用HPLC-UV法测定血浆中药物的浓度,色谱柱为Venusil XBP C₁₈柱,流动相为甲醇-30 mmol·L^-1磷酸二氢钾(40:60),流速1 ml·min^-1,柱温30 ℃,波长319 nm,内标为甲硝唑。结果:首次静脉注射左旋奥硝唑磷酸酯二钠后低、中、高剂量组(40,100,300 mg·kg^-1)的左旋奥硝唑的AUC_0-24分别为(164.047±16.984),(461.867±60.782),(1 484.451±185.071)μg·ml^-1·h;末次静脉注射左旋奥硝唑磷酸酯二钠后3个剂量组的左旋奥硝唑的AUC_0-24分别为(185.144±23.346),(485.455±50.187)和(1 228.987±106.819)μg·ml^-1·h。首次给药后,随着剂量的增加,左旋奥硝唑的CL降低,MRT、t_1/2延长,说明左旋奥硝唑在比格犬体内存在一定的代谢或排泄饱和;末次给药后各组t_1/2 、V较首次给药降低,中、高剂量组的MRT较首次给药缩短,高剂量组CL增加,AUC_0-24降低,表明高剂量对肝药酶存在轻微的诱导。结论:连续1个月给比格犬静注左旋奥硝唑磷酸酯二钠后,未见左旋奥硝唑在犬体内有明显蓄积,经过2周的恢复期,左旋奥硝唑在比格犬体内完全消除,试验过程中也未见比格犬有明显的毒性反应。     

高效液相色谱法测定大鼠血浆中欧前胡素与异欧前胡素的浓度及药动学研究

目的：建立利用高效液相色谱法检测大鼠血浆内欧前胡素及异欧前胡素的方法,并进行灌胃及静脉注射后药动学研究。方法：血浆样品经乙醚萃取,吸取上层液置于氮气流下吹干,甲醇溶解后取20 μL进行检测。采用Agilent 1100型液相色谱仪,Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,Agilent C₁₈（12.5 mm×4.6 mm）预柱,流动相为甲醇-水（70：30）,流速为1.0 mL·min^-1,紫外波长为300 nm,进样体积为20 μL,蛇床子素作为内标物质。大鼠灌胃和静脉注射欧前胡素与异欧前胡素,定时剪尾取血测定血浆中药物浓度,药动学参数以3p97统计学软件处理。结果：欧前胡素及异欧前胡素浓度均为0.05~36.45 μg·mL^-1时,线性较好（r=0.999 9）;定量限均为0.05 μg·mL^-1;日内、日间精密度RSD<15%;方法回收率均在80%~90%之间;低、中、高3个系列规格的血浆样品在4℃保存7 d、-20℃及-80℃各保存2个月后结果均保持稳定。灌胃给予含欧前胡素与异欧前胡素剂量均为30 mg·kg^-1混合溶液,房室模型均拟合为一室模型：欧前胡素t_1/2Ke（74.7±18.15）min,t_max（8.7±1.54） min,C_max（1.15±0.16） μg·mL^-1,AUC（124.42±44.74） μg·min·mL^-1,CL/F（s）（0.25±0.1） L·kg^-1·min^-1,V/F（c）（24.44±3.55） L·kg^-1;异欧前胡素t_1/2Ke（60.48±14.22）min,t_max（8.6±1.21）min,C_max（0.3±0.04）μg·mL^-1,AUC（27.27±5.46） μg·min·mL^-1,CL/F（s）（1.14±0.25）L·kg^-1·min^-1,V/F（c）（96.42±12.96）L·kg^-1。静脉给予含欧前胡素与异欧前胡素剂量均为20 mg·kg^-1混合溶液,房室模型均拟合为二室模型：欧前胡素t_1/2β（85.64±23.25） min,AUC（1 152.02±555.25） μg·min·mL^-1,CL（s）（0.022 8±0.014 2） L·kg^-1·min^-1,V（c）（0.73±0.31）L·kg^-1;异欧前胡素t_1/2β（89.28±29.02） min,AUC（210.26±75.76） μg·min·mL^-1,CL（s）（0.105 4±0.034 1） L·kg^-1·min^-1,V（c）（2.74±0.6） L·kg^-1。欧前胡素与异欧前胡素灌胃给药,其绝对生物利用度经过计算结果为7.20%与8.65%。结论：经方法学验证,此方法具有操作简单、专属性强和准确率高等特点,能满足大鼠体内中欧前胡素与异欧前胡素含量检测及药动学研究。     

原子吸收法测定犬体内顺铂聚乳酸微球的药物动力学

目的:研究犬体内顺铂聚乳酸微球(CDDP-PLA)药物动力学。方法:20只杂种狗随机分为栓塞组和对照组。栓塞组 X线透视下CDDP-PLA经导管注入肝动脉,静脉取血,1 mg·kg^-1微球。对照组 CDDP,1 mg·kg^-1,其他同前。3P97软件处理药-时数据,原子吸收法测定血药浓度。结果:血浆CDDP动力学过程为三室;肝动脉灌注后8 h肝组织CDDP浓度分别为(22.08±12.15)μg·ml^-1(微球组)和(3.25±0.09)μg·ml^-1 (对照组),差异显著(P<0.05)。结论:CDDP-PLA具有良好的肝动脉栓塞性能,使栓塞部位组织CDDP浓度维持较长时间和较高浓度,同时降低体循环浓度,降低CDDP全身毒性。     

高效液相色谱法同时测定葛花中染料木苷和鸢尾苷的含量

目的:建立葛花中染料木苷和鸢尾苷两个异黄酮成分的HPLC含量测定方法。方法:Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈色谱柱 (4.6 mm×150 mm,5 μm);以不同浓度的乙腈-1‰磷酸水为流动相梯度洗脱,流速0.8 ml·min^-1,检测波长270 nm,柱温30 ℃。结果:染料木苷和鸢尾苷的线性范围分别为46.7~747.2 μg·ml^-1 (r=0.999 9)和54.1~864.8 μg·ml^-1 (r=0.999 9);平均回收率分别为101.1%(RSD为1.46%)和100.2%(RSD为1.58%)。结论:本方法简单,专属性强,重复性好,可用于葛花药材的质量控制。     

LC-MS/MS法测定人血浆中利培酮和9-羟基利培酮的浓度及临床应用

目的：建立简单快速的液相串联质谱法（LC-MS/MS）测定人血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮的浓度。方法：血浆样本采用甲醇沉淀蛋白法处理,以地西泮为内标,采用ES Industries Sonoma C₁₈（2）色谱柱（100 mm×2.1 mm,3 μm）分离化合物;流动相包括A-50%甲醇水溶液（含6 mmol·L^-1乙酸铵）、B-0.1%甲酸乙腈溶液;梯度洗脱,总流速0.60 mL·min^-1;进样量10 μL;柱温30℃。采用正离子MRM模式扫描,电喷雾电离,利培酮、9-羟基利培酮及地西泮内标离子通道分别为m/z411.3→m/z191.1、m/z427.2→m/z207.0和m/z285.1→m/z193.1。依据《中国药典》（2015年版）通则中9012"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法进行验证。结果：利培酮在0.16~101.40 μg·L^-1的浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,9-羟基利培酮在0.40~256.80 μg·L^-1浓度范围内线性关系良好（r>0.999）;在定量下限,低、中、高浓度批内与批间精密度的标准偏差（RSD）均小于10.9%,准确度符合要求;含分析物血浆样品在不同储存条件下结果稳定。该法已成功应用于临床样本治疗药物监测。运用此方法监测分析一千多份临床样本得出总利培酮临床实际测定浓度范围为13.30~93.22 μg·L^-1。结论：本研究建立了测定血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮浓度的快速、简便、实用的LC-MS/MS方法。利培酮临床实际测定浓度范围相比于神经精神药理学与药物精神病学协会专家组推荐治疗浓度范围更宽,且多次监测的患者中女性血药浓度相对于男性更趋于稳定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中抗肿瘤化合物WJD-A-1及其药动学研究

目的：建立大鼠血浆中抗肿瘤化合物WJD-A-1的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）测定方法，并研究静脉注射WJD-A-1后在大鼠体内的药动学特征。方法：以苯海拉明为内标，大鼠血浆样品经甲醇-乙腈处理，用色谱柱Waters ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）进行分离，以甲醇-0.1%甲酸（80∶20）为流动相，采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式及多重反应监测模式，检测离子对分别为WJD-A-1（m/z 480.6→334.6，480.6→164.3）以及苯海拉明（m/z 256.0→166.8）。将建立的检测方法应用于测定大鼠静脉注射化合物WJD-A-1后的血浆浓度。结果：大鼠血浆中化合物WJD-A-1在5.40~5.40×10³ ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好；低、中、高3个质控浓度下的日内、日间精密度均小于10%，质控样品的准确度为97.45%~106.80%；提取回收率为95.40%~96.17%，无明显基质效应且稳定性良好。大鼠静脉给与化合物WJD-A-1三个剂量75，150，300 μg·kg^-1后，血浆中WJD-A-1的半衰期t_1/2分别为（0.10±0.05） h、（0.24±0.02） h、（0.51±0.06） h；其浓度-时间曲线下的面积AUC_（0-t）分别为（150.60±21.69）μg·h·L^-1、（883.07±135.68）μg·h·L^-1、（3 311.59±418.15）μg·h·L^-1。结论：该检测方法简单、快速、灵敏、准确，适用于抗肿瘤化合物WJD-A-1在大鼠血浆内的浓度测定及其药动学研究。药动学参数表明大鼠静脉注射该化合物后体内消除较快，且该化合物在大鼠体内的暴露量与给药剂量成正比。     

超高效液相色谱法监测重症脑损伤患者血浆中丙泊酚的血药浓度

目的:建立测定重症脑损伤患者血浆中丙泊酚浓度的超高效液相色谱-荧光检测方法。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,取上清液进样分析,色谱条件为采用Thermo Acclaim C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:左泵-水(含1‰甲酸)-乙腈(V∶V)=40∶60,流速1.0mL·min-1,右泵:0～1min:水-乙腈(V∶V)=90∶10,流速:1mL·min-1;2～4min:水-乙腈(V∶V)=70∶30,流速:1mL·min-1,6～10min:水-乙腈(V∶V)=10∶90,流速:0.3mL·min-1;10.01～16min:水-乙腈(V∶V)=90∶10,流速:0.3mL·min-1;柱温40℃;检测波长276nm;发射波长:310nm;进样量:100μL,sensitivity:6;lamp mode:longlife。采用肝素采血管收集血液样品,血液样品分别于给药前0h,开始给药后1,3,5,10,15,30,60,70,80,90min,停药后1,3,5,10,15,30,60,90,120min从患者给药部位对侧上肢静脉采样1mL。结果:丙泊酚血药浓度在0.025～2μg·mL-l内线性关系良好,R2=0.999 7,回归方程为Y=2.113 5 X-0.016 7,最低检测限为0.01μg·mL-1。低、中、高(0.025,0.5,2μg·mL-1)3个浓度的日内RSD分别为5.7%、1.37%和2.85%,日间RSD分别为14.15%、11.25%和9.21%,平均方法回收率分别为103.46%、96.16%和99.5%。监测10例重症脑损伤患者丙泊酚血药浓度,稳态浓度范围为0.25～0.81μg·mL-1。结论:本方法操作简单快速、灵敏、准确度高,无介质效应影响,所需血浆样本量少,可作为患者丙泊酚治疗浓度的常规监测方法。通过监测重症脑损伤患者丙泊酚血药浓度发现,重症脑损伤患者单纯镇静时,给药速度为20mg·h-1均可满足临床需要。     

姜黄素衍生物64PH的抗肿瘤作用

目的:探讨姜黄素衍生物64PH的体内外抗肿瘤活性。方法:MTT法检测64PH对小鼠B16黑色素瘤细胞及人HepG2肝癌细胞的体外增殖抑制作用;采用小鼠移植性肿瘤H22观察64PH的体内抑瘤活性,HE染色观察肿瘤血管新生。结果:64PH对B16 的IC₅₀分别为10.30 μg·ml^-1(24 h),3.12 μg·ml^-1(48 h), 2.67 μg·ml^-1(72 h),对HepG2的IC₅₀分别为5.60 μg·ml^-1(24 h),7.60 μg·ml^-1(48 h),5.92 μg·ml^-1(72 h);低剂量(100 mg·kg^-1)、高剂量(300 mg·kg^-1)64PH对小鼠H22的抑瘤率分别为26.1%,33.0%,且可明显抑制小鼠H22肿瘤的血管生成。结论:64PH在体内外均具有较好的抗肿瘤活性。     

橙黄决明素在正常大鼠体内的药动学

目的:建立高效液相色谱测定大鼠血浆中橙黄决明素含量的方法,研究橙黄决明素在大鼠体内的药动学过程。方法:橙黄决明素灌胃给药7.2 mg·kg^-1后于5,10,20,30 min及1,2,3,4,6,8,10,12,16,24 h断尾取血,液-液萃取法处理血浆样品,HPLC测定血浆中橙黄决明素浓度,以3P97软件拟合药动学参数。结果:血浆中橙黄决明素在0.12~7.62 μg·ml^-1线性良好,相关系数为0.999 5(n=5),低、中、高浓度萃取回收率均> 95%,日内、日间RSD均< 10%,符合要求。灌胃给药后,大鼠血浆中其药动学过程符合二室模型。主要药动学参数(拟合值):C_max为3.96±0.51 mg·L^-1,T_max为16.31±2.85 min,t_1/2β为5.16±0.77 h,CL为0.21±0.03 L·h^-1·kg^-1,AUC为7.91±1.02 mg·min^-1·L^-1,MRT为2.26±0.97 min。结论:本实验建立的血浆处理法及HPLC法适用于大鼠体内橙黄决明素的含量测定和药动学研究,灌胃给药后橙黄决明素吸收迅速,具有较好的应用前景。