槲皮素对宫颈癌放射增敏作用及机制研究

目的研究槲皮素(Que)对人宫颈癌Hela细胞株的体外放射增敏作用并初步探讨作用机制。方法克隆形成法检测放射增敏作用及给药时序、浓度的影响;流式细胞法检测细胞周期分布;DAPI染色镜下观察法检测凋亡;Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 Que与射线单独或联合作用后细胞存活率均较单纯放射组明显降低(P0.05),不同浓度、不同时序处理,细胞存活率也具有显著差异(P0.05);Que与射线均能使Hela细胞阻滞于G2/M期,联用阻滞效果更加显著(P0.01);Que与射线均能破坏细胞核,联用后细胞核皱缩、碎裂更加显著;Que与射线单独及联用均能上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论 Que可通过阻滞Hela细胞周期于G2/M期,下调Bcl-2/Bax的比率来诱导细胞发生凋亡并增强其对放射线的敏感性。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌5637细胞株作用的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人膀胱癌5637细胞株的作用及其作用机制。方法实验分为EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组和空白对照组。采用CCK-8法检测各组人膀胱癌5637细胞活性抑制情况,采用吖啶橙(AO)荧光染色观察各组人膀胱癌5637细胞形态,免疫组化法检测各组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组培养24 h、48 h和EGCG各组培养72 h的细胞存活率均明显低于空白对照组(P均0.05),且呈浓度依赖性明显降低(P0.05)。AO荧光染色显示空白对照组呈均匀绿色荧光,EGCG各组随着药物浓度的增加,呈绿色荧光凋亡细胞逐渐增多。与空白对照组比较,EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2蛋白阳性表达细胞数明显减少而Bax蛋白阳性表达细胞数明显增多。结论 EGCG能抑制人膀胱癌5637细胞活力,其机制可能与调控Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

PUMA介导大蒜素诱导人卵巢癌耐顺铂SKOV-3/DDP细胞凋亡

目的探讨p53上调凋亡调控因子(PUMA)在大蒜素诱导人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)细胞凋亡中的作用。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:正常对照组、大蒜素组(于培养基中加入终质量浓度为20μg/mL大蒜素作用细胞48 h)、顺铂组(5μg/mL)、大蒜素+顺铂组。MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western-blot检测PUMA、bax及bcl-2的基因表达。结果与对照组比较,大蒜素组SKOV-3/DDP细胞凋亡率有明显的增加(P<0.05),且作用呈剂量依赖性,PUMA,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与大蒜素组比较,顺铂+大蒜素组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P<0.05),Bax表达上调及Bcl-2表达下调的程度大于单用组(P<0.05);用特异性SiRNA沉默PUMA后,大蒜素组细胞凋亡率呈显著性下降(P<0.05)。结论 PUMA在介导大蒜素诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡中发挥了关键性作用。     

桔梗皂苷-D诱导肺腺癌A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞

目的:探究桔梗皂苷-D(Platycodin-D,PD)诱导肺腺癌细胞(A549)和A549顺铂耐药细胞(A549/DDP)凋亡和周期抑制的作用机制,为PD治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础。方法:采用MTT法检测细胞的增殖抑制率和耐药指数;流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核形态的变化;Western-blot蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:MTT检测结果显示,PD对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性。Hoechst 33258荧光染色发现,随着PD浓度增加,两种细胞核形态都有明显的改变。进一步流式细胞术结果表明,PD诱导A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞。Westernblot检测结果表明,PD通过上调Bax、Caspase-9、cleaved-Caspase-3和PARP的表达,下调Bcl-2和Caspase-3的表达诱导A549和A549/DDP细胞凋亡。此外,PD通过下调Cyclin-D1、Cyclin-D3、CDK4、CDK6、E2F1和p-Rb及上调P18的蛋白水平诱导A549细胞周期G0/G1阻滞。同时,PD通过下调Cyclin-B1、p-Cdc2、E2F1和p-Rb及上调P27的蛋白表达诱导A549/DDP细胞周期G2/M阻滞。结论:PD通过线粒体途径诱导A549和A549/DDP细胞凋亡诱导,并且引发A549细胞G0/G1周期阻滞和A549/DDP细胞G2/M阻滞周期阻滞。     

熊果酸诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的作用及机制

目的研究熊果酸(Ursolicacid,UA)抑制人食管癌Eca-109细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用及机制。方法MTT比色法检测熊果酸对Eca-109细胞的增殖抑制作用;透射电镜观察经熊果酸处理后Eca-109细胞超微结构的改变;流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Westernblot法检测P27kip1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果20～50μmol/L熊果酸对Eca-109细胞具有显著的抑制作用(P<0.01);电镜下,18.32～36.65μmol/L熊果酸处理过的Eca-109细胞可见典型的凋亡形态及坏死形态;流式细胞检测显示细胞凋亡率及G0/G1期细胞随着熊果酸浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Westernblot检测结果提示熊果酸能使Bcl-2表达下降而Bax、P27kip1增加。结论熊果酸对人食管癌细胞系Eca-109具有显著的增殖抑制、诱导细胞凋亡作用。其作用与提高P27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期,下调Bcl-2的表达和增加Bax的表达有关。     

复方苦参注射液对宫颈癌细胞体外放射增敏作用研究

目的研究复方苦参注射液对人宫颈癌Hela细胞株的体外放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法克隆形成法检测放射增敏作用及给药时序、浓度对细胞存活率的影响;DAPI染色法镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞法检测细胞周期分布情况;Western blot法检测bcl-2、bax蛋白表达情况。结果复方苦参注射液与射线单独或联合作用后细胞存活率均较单纯放射组明显降低(P均0.05),不同浓度、不同时序处理后细胞存活率比较差异有统计学意义,先照射后给药效果优于先给药后照射(P0.05);复方苦参注射液与射线均能使Hela细胞阻滞于G2/M期,联用阻滞效果更加显著(P0.05);复方苦参注射液与射线均能破坏细胞核,联用后细胞核皱缩、碎裂更加显著;复方苦参注射液与射线单独及联用均能上调bax蛋白表达(P均0.05),下调bcl-2蛋白表达(P均0.05)。结论复方苦参注射液可通过阻滞宫颈癌Hela细胞周期于G2/M期,下调bcl-2/bax的比值来诱导细胞发生凋亡并增强其对放射线的敏感性。     

芦荟大黄素联用顺铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芦荟大黄素(AE)单用或联用顺铂(CP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,用5,10,20,30,40,50μmol·L-1AE,2,4,8,12,24,36μmol·L-1CP,或不同浓度AE联用CP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h,另设空白组,MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染和流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;Western blot分析Bcl-2相关X蛋白(Bax),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-x L蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,AE单用显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,半数抑制浓度(IC50)为22.21μmol·L-1,与CP联用时IC50为9.51μmol·L-1。联用指数CI501,表明两药物有协同作用;AE单用使细胞周期阻滞在G1期,并诱导细胞凋亡,联用CP则增强阻滞,凋亡率明显增加;两药联用显著抑制Bcl-2和Bcl-x L的表达,并上调Bax的表达,与空白组比较均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:芦荟大黄素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并通过上调促凋亡蛋白和下调抗凋亡蛋白,诱导凋亡。与顺铂联用能增强其促凋亡作用,两药存在协同作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对体外培养食管癌细胞生物学行为的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养食管癌细胞增殖、凋亡和转移的影响及其分子机制。方法采用CCK-8法和细胞克隆形成法检测EGCG对食管癌细胞增殖的影响;流式细胞法检测细胞凋亡及周期分布;Transwell法检测细胞体外侵袭力的改变;免疫印迹法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平。结果 EGCG处理后,食管癌细胞的增殖和侵袭能力明显受到抑制,凋亡率也显著增高,呈量效关系;随着EGCG浓度升高,GRP78蛋白表达水平明显下降。结论 EGCG可对食管癌细胞产生抑制增殖、诱导凋亡、降低侵袭和转移等作用,可能与其下调细胞内GRP78蛋白有关。     

番茄红素对人肺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨番茄红素对人非小细胞肺癌细胞A549凋亡及对细胞周期的影响。方法:体外培养并取处于对数生长期的A549细胞进行分组,分别给予培养液(空白对照组)、不同浓度番茄红素(20、10、5μg/mL)及顺铂(40μg/m L)进行干预,每组10个复孔。药物干预48小时后,噻唑蓝(MTT)比色法测定各组细胞增值抑制率;流式细胞术(FCM)检测各组细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2 mRNA、Bax m RNA表达;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞周期蛋白(cyclin B1、cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶(CDK1、CDK2)表达。结果:与空白对照组比较,番茄红素各剂量组和顺铂组A549细胞增值抑制率提高,番茄红素(20、10μg/mL)组细胞处于G2-M期的比例提高、凋亡率显著升高,Bcl-2 mRNA表达下调且Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2值显著提高,cyclin B1蛋白和CDK1蛋白表达上调,cyclin D1蛋白和CDK2蛋白表达下调,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:番茄红素具有促进人非小细胞肺癌A549细胞凋亡,阻滞其有丝分裂,从而抑制其增殖的作用,可能与番茄红素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关。     

黄连含药血清联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖与线粒体凋亡途径的影响

目的:观察黄连配方颗粒含药血清单用及与顺铂联用对人肝癌Hep G2细胞增殖与凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:制备含药血清,MTT法筛选黄连血清抑制Hep G2细胞增殖的最佳作用浓度,最佳浓度血清与不同浓度的顺铂配伍,观察抑制增殖的协同作用;在此基础上,采用高内涵分析(high content screening assays,HCS)技术检测两药联合应用后线粒体膜电位(Mitochondrial Membrane Potential,MMP)、细胞膜通透性、细胞核的变化,反映细胞凋亡情况,Western blot法检测线粒体凋亡通路相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果:黄连血清可降低Hep G2细胞存活率,且呈现一定的浓度依赖性,20%血清为最佳浓度血清;配伍顺铂后,抑制增殖作用较单用黄连、顺铂显著增强。0. 6 g/kg 20%黄连血清、96μmol/L顺铂及两药合用均可显著降低MMP、提高细胞膜通透性、并可使核固缩及核荧光强度增强、细胞数量下降,并可显著下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax及Caspase-3蛋白表达;且配伍应用组上述各指标较黄连血清组单用组相比改变更显著,配伍应用组MMP、膜通透性、细胞数量、Bcl-2蛋白表达水平与顺铂组相比改变更显著。结论:黄连血清能抑制Hep G2细胞增殖并且诱导细胞凋亡,与顺铂联用具有协同作用,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响

目的：研究草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响。方法：以凝血酶时间(TT)为指标，用添加法比较不同浓度草酸铵对僵蚕提取液和凝胶分离液抗凝作用的影响。结果：添加草酸铵浓度在1．8～21．3mg／ml范围内，对固形物含量15．8～31．6mg／ml的提取液和14．6～29．1mg／ml的凝胶分离液的TT值增加成正相关。结论：草酸铵对僵蚕提取液、凝胶分离样品的抗凝作用均有增强作用，随提取液浓度降低影响增大，而随凝胶分离液浓度增大影响增大。     

蛇床子素抗凝血作用

目的:研究蛇床子素的抗凝血作用。方法:通过测定小鼠凝血时间(CT)、大鼠的凝血酶原时间(PT)和优球蛋白溶解时间(ELT),观测蛇床子素的抗凝作用。结果:蛇床子素能显著处长CT、PT,缩短ELT。结论:蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

"软系"疗法的中医探讨

从中医角度探讨“软系”疗法的科学性,探求“软系”疗法疗效显著的原因。     

中医药治疗黄褐斑现状

综述了1995－2001年中药内治、外治疗法及针灸治疗黄褐斑的特色和优势。     

大黄素对急性胰腺炎胰腺组织TGFβ1表达的影响

目的通过分析中药大黄素对大鼠急性胰腺炎治疗前后胰腺组织细胞转化因子β1(TGFβ1)的表达、DNA合成及总蛋白含量的影响，从胰腺再生角度探讨大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制。方法以雨蛙肽(caerulein)腹腔注射诱导大鼠急性胰腺炎模型，并于大黄素治疗前后6、24、48、72及96h处死大鼠。同时应用RT-PCR技术检测治疗前后胰腺组织TGFβ1mRNA表达，同位素体外掺入法测定胰腺组织DNA合成以及Lowry′s法测定胰腺组织总蛋白含量。结果大黄素治疗后血清淀粉酶显著下降。正常胰腺组织、胰腺炎诱导后6h未见TGFβ1mRNA表达。TGFβ124h后出现表达，72h时达高峰。大黄素治疗后6h即可检测到TGFβ1mRNA表达，且24、48h时表达均较非治疗组显著增强，并于48h时达最大值。同时胰腺炎诱导后72h，胰腺组织DNA合成显著下降，大黄素治疗后96hDNA合成明显增加，胰腺炎诱导后48h胰腺组织总蛋白含量下降，大黄素治疗后96h显著增加。结论大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制可能是通过诱导细胞因子TGFβ1基因表达增强，调控细胞增殖和分化，刺激多种细胞外基质成分合成，增加胰组织DNA合成和蛋白含量，参与胰腺细胞修复、再塑过程。     

蛇床子素抗凝血作用

目的：研究蛇床子素的抗凝血作用。方法：通过测定小鼠凝血时间（CT）、大鼠的凝血酶原时间（PT）和优球蛋白溶解时间（ELT），观测蛇床子素的抗凝作用。结果：蛇床子素能显著处长CT、PT，缩短ELT。结论：蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

苯唑青霉素对丁胺卡那毒素药动学的影响

 采用微量微生物法对丁胺卡那霉素（AMK）单用及AMK与苯唑青霉素（OXA）合用后，兔体内AMK血药浓度进行测定；药时数据用MCPKP软件经IBM计算机处理，并对两组药动学参数进行了统计学处理，结果表明OXA对AMK的药动学有显著的影响。     

《诸病源候论》对皮肤病学的贡献

对《诸病源候论》在皮肤病方面的成就进行了较为系统的整理总结 ,该书着重讨论了皮肤病的命名、分类、病因病机 ,并阐发了《内经》“邪之所凑 ,其气必虚”理论和预防为主的思想。     

基于细胞自噬探讨左归丸对肾虚仔鼠皮肤发育的影响

目的:研究左归丸对先天肾虚仔鼠发育过程中皮肤内细胞自噬的影响及其机制,探索补肾填精法在生长发育异常中的应用价值.方法:36只雌雄比例为2∶1的大鼠进行配对,复合应激法刺激孕鼠构建先天肾虚仔鼠模型,根据将孕鼠处理方式不同,分为正常组,肾虚组,左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg-1).正常组不造模给予生理盐水灌胃,肾虚组...     

缓冲盐对大孔吸附树脂分离阿魏酸脂质体及游离药物的影响

目的：研究缓冲盐对不同型号大孔吸附树脂分离脂质体及其游离药物能力的影响,并对阿魏酸脂质体进行质量评价。方法：采用缓冲盐（Na₂HPO₃-NaH₂PO₃）平衡的大孔吸附树脂分离脂质体与游离药物,用高效液相色谱检测药物含量,计算包封率。结果：该法在0.56~2.8 μg· mL^-1线性关系良好（r=0.999 6）,精密度小于1.1%。缓冲盐平衡后的大孔吸附树脂对脂质体的吸附作用均有所降低,且不影响大孔吸附树脂对阿魏酸的吸附能力。其中HPD450对空白脂质体的回收率在97.2%~100.8%,平均回收率为98.1%。结论：缓冲盐可提高大孔吸附树脂分离脂质体及游离药物的能力。