铁剥夺对 DNR诱导 K562细胞多药耐药基因表达的影响

目的 探讨铁剥夺对柔红霉素（DNR）诱导多药耐药基因MDR1表达的影响。方法 以柔红霉素单用或联合应用去铁胺（DFO）或二氯化铁（FeCl3）为处理因素作用于人红白血病细胞株K562,应用RT—PCR法、流式细胞分析技术,检测K562细胞多药耐药基因信使核糖核酸（MDR1mRNA）和P-糖蛋白（Pgp）表达的情况。结果 ①与空白对照组相比,柔红霉素（1μmol／L）作用24h可使MDR1／Pgp表达增加（P〈0．05）;②与单用DNR组相比,DFO可显著抑制柔红霉素诱导的MDR1／Pgp的表达,而FeCl3的作用相反（P〈0．05）。结论 柔红霉素短期作用可诱导MDR1表达,提示化疗药本身的诱导作用在肿瘤多药耐药产生中发挥重要作用。铁剥夺可减少柔红霉素诱导的MDRI／PgP表达,而FeCl3的作用相反,提示铁剥夺有可能成为阻止或降低白血病化疗耐药的新的措施之一,而白血病化疗患者补铁应慎重。     

柔红霉素对K562细胞核因子-κBp65活性的影响

目的 探讨柔红霉素(DNR)对白血病K562细胞核因子-κBp65(NF-κBp65)活性的影响.方法 对数生长期K562细胞随机分为A、B二组,A组(对照组)加RPMI-1640培养液;B组(DNR组)分别加DNR 0.2、2.0、20.0 μmol/L作用1、2、 6、24 h后,用免疫组织化学法检测K562细胞NF-κBp65活性阳性率.结果 DNR 0.2 μmol/L作用1、2、 6 h,NF-κBp65阳性率与对照组比较无显著性差异(Pa＞0.05);作用24 h,其阳性率与对照组比较有显著性差异(P＜0.001).DNR 2.0 μmol/L作用于K562细胞1 h,其阳性率与对照组比较无显著性差异(P＞0.05);作用2、6、24 h,与对照组比较均有显著性差异(Pa＜0.05).DNR 20.0 μmol/L作用1、2、6、24 h,其阳性率与对照组相比均有显著性差异(Pa＜0.001).结论 DNR能促进K562细胞NF-κBp65蛋白活化,且存在剂量时间依赖性.     

四株人白血病多药耐药细胞系的建立及其生物学特性的初步研究

我们对人红白血病细胞株K562和人早幼粒细胞白血病细胞株HL－60应用高三尖杉酯破（HHT）或长春新碱（VCR），采用反复短期暴露法，并逐渐增加HHT和VCR的浓度，成功地建立了K562／VCR、K562／HHT、HL－60／VCR和HL－60／HHT四株具有高度耐药性的多药耐药（MDR）细胞系。免疫组织化学染色显示，K562／VCR、K562／HHT及HL60／VCR三株MDR细胞系有卜糖蛋白（Pgp）的高度表达，而HL－60／HHT细胞系没有pgP的表达。四株MDR细胞系均未见有多药耐药相关蛋白（MRP）的表达。5μg／ml异搏定和50μg／ml红霉素都能部分逆转K562／VCR、K562／HHT和HL－60／VCR三株MDR细胞系的耐药性，但其对HL－60／HHT细胞系的耐药性几乎无逆转作用。四株MDR细胞系与其相应敏感细胞系相比，前者对DNR的摄取均减少，外排均增加。2．5～10μg／ml异搏定能增加K562／VCR、K562／HHT和HL－60／VCR三株MDR细胞系对DNR的摄取量和滞留量，且其作用随异搏定浓度的增加而增强，但50～200μgn／ml红霉素不能增加它们对DNR的摄取量和滞留量。上述浓度异搏定或红霉素均不能增加HL－60／HHT细胞系对DNR的摄取量和滞留量。     

铁剥夺对白血病细胞凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨去铁胺 (DFO)对白血病细胞K562凋亡相关基因表达的影响及其可能分子机制。方法　采用RT PCR法分析Rb及c myc基因在RNA水平变化。结果　DFO 50 μmol/L及 1 0 0 μmol/L作用于K562细胞 2 4h及 48h ,Rb及c mycmRNA水平较空白对照组增加 (P <0 .0 5) ,且以 1 0 0 μmol/L组增加明显。 结论　铁剥夺剂使K562细胞Rb及c mycmRNA表达增加可能是其诱导白血病细胞凋亡的机制之一。     

去铁胺诱导K562细胞凋亡研究

目的：探讨铁螯合剂去铁胺（DFO）诱导白血病细胞凋亡的分子机制。方法：实验分为DFO组(终浓度分别为10、50、100 μM)、DFO+FeCl3（各10 μmol/L）组及空白对照组。用钙黄绿素检测K562细胞可变铁池。锥虫蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪方法检测K562细胞凋亡;比色法检测caspase-3活性。结果：（1）DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性;而DFO+FeCl3组细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义。（2）50 μmo/L、100 μmol/L DFO作用于K562细胞24 h时,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);相关分析结果显示,K562细胞铁池的荧光改变与caspase-3活性变化呈负相关(r=-0.894, P<0.05)。结论：DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与螯合细胞内铁,降低细胞可变铁池,激活caspase-3有关。     

铁剥夺对K562细胞动态铁池的改变及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨去铁胺(DFO)对白血病细胞K562动态铁池(LIP)、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法实验分为DFO组、DFO 三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测K562细胞LIP改变、流式细胞术观察K562细胞凋亡和RT-PCR测定K562细胞c-myc、Rbb、ax mRNA表达。结果1.不同浓度的DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度增加,LIP降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性。2.不同浓度的DFO作用于K562不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P<0.05);3.RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、Rb和bax mRNA表达(P<0.05)。结论DFO可诱导K562细胞凋亡;其诱导K562细胞凋亡作用可能与其螯合细胞内铁,降低细胞LIP,上调细胞凋亡相关基因c-myc、Rb、bax mRNA表达密切相关。     

铁剥夺抗K562细胞的增殖作用及机制

目的观察铁剥夺对白血病细胞增殖的影响。方法以K562细胞作为人类白血病细胞株,台盼蓝染色,光镜下计数活细胞率;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测A值（570nm）,绘制生长曲线;流式细胞术分析细胞周期变化。结果小剂量去铁胺（DFO）（12.5μmol/L）处理K562细胞时,生长曲线轻微变化,随时间延长和DFO剂量增加（25、50、100μmol/L）,细胞存活率明显下降,生长曲线高峰显著低于对照组。DFO的抗增殖活性为时间-剂量依赖型。用DFO（50、100μmol/L）处理K562细胞48和72h后,G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,与对照组比较均有显著性差异（Pa〈0.001）。上述作用可被等浓度的三氯化铁抵消。结论铁剥夺具有抗白血病细胞增殖作用,剥夺细胞内铁,阻止细胞由G0/G1期进入S期可能是其机制之一。     

铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活的实验研究

目的观察铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活间的关系。方法以不同水平的去铁胺(DFO)处理K562细胞。1.用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)对K562细胞进行双标记后,在流式细胞仪下检测细胞凋亡率。2.采用肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测Caspase-3活性。3.用Western blot分析Caspase-3活性蛋白的激活。结果K562细胞经不同浓度DFO处理后,细胞发生明显凋亡,Caspase-3活性渐升高。50、100μmol/L DFO作用于K562细胞24 h后,Caspase-3酶活性升高明显;与对照组比较,有显著性差异(P<0.001);在100μmol/L浓度下14 h可见活性Caspase-3,Caspase-3活性和量为时间-剂量依赖性;10、12 h各浓度组间Caspase-3活性水平比较,差异均无显著性(P均>0.05)。上述作用可被等摩尔浓度的氯化铁(FeCl3)抵消。结论铁剥夺可能通过螯合细胞内铁,激活Caspase-3,诱导K562细胞凋亡。     

氯丙嗪对白血病细胞株K562/AO2多药耐药逆转作用的实验研究

目的研究氯丙嗪对阿霉素诱导的K562耐药细胞株(K562/AO2)多药耐药的逆转作用及机制,以便为临床应用提供实验依据.方法 (1)以四氮甲基唑蓝(MTT)法检测氯丙嗪的细胞毒性及其对K562/AO2细胞的耐药逆转作用;(2)以流式细胞术检测氯丙嗪处理前后K562/AO2细胞内柔红霉素(DNR)的蓄积量;(3)以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测氯丙嗪处理前后后K562/AO2细胞中mdr-1 mRNA的表达水平.结果 (1)氯丙嗪在3 μg/ml时对K562/AO2增殖的抑制作用小,抑制率＜5%;(2)氯丙嗪明显增加DNR对K562/AO2的毒性作用(P＜0.05),耐药逆转倍数为1.901;(3)氯丙嗪可明显增强DNR在K562/AO2细胞内的蓄积(P＜0.05);(4)氯丙嗪对K562/AO2细胞mdr-1 mRNA的表达水平无影响.结论氯丙嗪通过增加K562/AO2细胞内DNR的蓄积显著提高 K562/AO2细胞对DNR的敏感性,其逆转白血病细胞多药耐药的机制与mdr-1基因无关,还有待进一步探讨.     

去铁胺对HL-60细胞Nix蛋白表达的影响

目的探讨去铁胺(DFO)对HL-60细胞Mix蛋白表达的影响。方法应用不同浓度的DFO刺激HL-60细胞系12 h后采用western blot方法检测处理后细胞中Nix蛋白的表达水平。结果与对照组(0μmol/L)相比,20μmol/L DFO组Nix蛋白表达水平无明显改变(P0.05),100μmol/L DFO组Nix蛋白表达量明显增加(P0.01)。结论 DFO可能通过诱导Nix蛋白的表达来实现HL-60细胞的凋亡。     

槲皮素对柔红霉素致大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨槲皮素（QUE）对柔红霉素（DNR）诱导心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外分离培养心肌细胞，分为空白对照组、DNR组、DNR＋QUE组、QUE组；孵育24h，显微镜下观察心肌细胞形态，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率．检测培养介质中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量。结果与DNR组比，DNR＋QUE组脱落细胞减少，细胞碎片减少，细胞凋亡率降低（P〈0．05），LDH和MDA含量降低（P〈0．05），SOD活性增高（P〈0．05），且有剂量效应关系。结论25～100μmol／L槲皮素能减轻柔红霉素对心肌细胞损伤，具有细胞保护作用，机制可能与其抗氧化作用有关。     

新生鼠败血症脾脏核因子-κB P65表达

目的了解金黄色葡萄球菌败血症新生鼠脾脏核因子-κB(NF-κB)P65的活化情况及NF—κB信号途径在新生儿败血症中的作用，为临床寻求以NF—κB为靶点的治疗手段提供实验依据。方法应用出生10d新生大鼠及金黄色葡萄球菌制作新生鼠败血症模型。采用免疫组织化学方法检测金黄色葡萄球菌败血症新生鼠脾脏NF—κB P65活化表达水平，应用吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)后脾脏NF-κB活性变化情况。结果新生鼠败血症模型中脾脏NF—κB P65活化阳性表达从1h开始增强，3h最强，24h与对照组无明显差别。应用PDTC对脾脏NF—κB P65活化阳性表达有抑制作用，且剂量越大，抑制作用越强，存在量-效关系。结论NF—κB在新生儿败血症中发挥重要作用，应用抗氧化剂对NF—κB活性进行抑制可能是减少新生儿败血症危害性的一种较为有效的方法。     

新生鼠高浓度氧肺损伤肺组织中核因子-κB表达的动态变化

目的探讨持续吸入高浓度氧（高氧）后，新生大鼠肺组织病理和核因子（NF）-κB与κB抑制蛋白（IκB）。表达的动态变化。方法足月新生SD大鼠生后12h内分别持续吸入90％的高氧（实验组）和空气（对照组），于1、3、7、14和21d动态观察其肺组织病理学改变以及NF-κB p65与IκBα的定位与表达。结果吸高氧3d时肺组织出现炎性细胞渗出，7d时肺间隔增宽，小肺泡数量减少，14和21d正常肺泡结构消失，纤维化形成；实验组1、3、7、14和21d肺组织内NF-κB p65的蛋白表达水平较对照组显著增高（P〈0．01，P〈0．05），而各时间点IκBa的蛋白表达水平较对照组明显降低（P〈0．01，P〈0．05）。结论持续吸入高氧可致新生大鼠发生与慢性肺疾病类似的病理改变；IκBα降解诱导的NF—κB活化可能在疾病发生、发展过程中发挥重要作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠核因子κB表达与脑细胞凋亡的关系

目的观察核因子κB（NF—κB）在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑细胞凋亡中的表达，探讨其HIBD后NF—κB与细胞凋亡的关系。方法新生7日龄SD大鼠48只，随机分为2组：假手术组和缺氧缺血（HI）模型组，各24只。HI组大鼠采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型，分别于手术后6、24、48、72h取脑组织切片，用免疫组织化学方法检测NF—κB在海马区的表达、TUNEL方法检测神经细胞凋亡。假手术组不作缺氧缺血处理，采用同样方法检测NF—κB。结果假手术组海马区有少量NF—κB表达，且有少量凋亡细胞，各时间点无明显变化（Pa〉0．05）；HI组NF—κB的表达在6h后开始增加，48h达高峰，并持续至72h（P〈0．05），与假手术组相比较差异有统计学意义（Pa〈0．05）；细胞凋亡在6h即开始增加，在24、48、72h逐渐增加，随时间变化差异有统计学意义（Pa〈0．05），与假手术组相比差异有统计学意义（Pa〈0．05）；直线相关回归分析HI组NF—κB表达与细胞凋亡呈显著正相关（各时点的r=0.478，0.552，0.641，0.627 Pa〈005．缩诊HTBn后NF—κB在海马区的持续活化对促进神经细胞凋亡起重要作用。     

去铁胺诱导HL—60细胞凋亡及对c—myc基因表达的影响

目的 探讨去铁胺（DFO）对HL－60细胞凋亡的诱导作用及对c-myc基因表达的影响。方法 HL－60细胞与不同浓度的去铁胺培养6、12、24、48h。分别测定细胞活力,观察形态学变化,用流式细胞学检测和DNA凝胶电泳等观察细胞凋亡及免疫组化方法检测c-myc基因表达等指标。结果 DFO可降低HL－60细胞活力、抑制HL－60细胞增殖、诱导其凋亡,并使c-myc基因表达增加,其作用随培养时间延长及DFO浓度增加而明显。结论 DFO可影响HL－60细胞DNA的合成,诱导其凋亡,c-myc的表达增加可能是铁剥夺诱导HL－60细胞凋亡的机制之一。DFO可作为治疗或辅助治疗白血病的药物用于临床,将有重要的临床实用价值。     

胆红素对大鼠星形胶质细胞和神经元核因子-κB/IκBα表达的影响

目的探讨胆红素是否影响大鼠星形胶质细胞和神经元核因子(NF)-κB的活化.方法 100μmol/L胆红素分别作用于原代培养大鼠星形胶质细胞和神经元,于0、30、60及120min收集标本,免疫细胞化学染色检测NF-κB亚基P65核移位、Western Blot检测NF-κB抑制因子IκBα蛋白表达.结果胆红素干预星形胶质细胞30 min时,出现P65大量核移位(91.0±5.9)%,至60 min核移位率显著下降(50.03±9.69)%,120 min时核移位恢复至干预前水平.30 min时IκBα蛋白表达消失,至30 min、60 min均有蛋白明显表达;神经元各组间P65核移位和IκBα蛋白表达差异均无显著性.结论胆红素可诱导星形胶质细胞NF-κB活化.     

综合方案治疗白血病35例

近几年来,对急性淋巴细胞白血病（急淋）患儿采取了诱导期用V（VCR,长春新碱）、D（DNR,柔红霉素）、P（Pred,泼尼松）+中剂量MTX-CF（氨甲喋呤-四氢叶酸）、诱导分化剂维生素D3（VitD3）,缓解后用小牛胸腺素调节机体免疫功能     

蛋白激酶C对急性特发性血小板减少性紫癜患儿T细胞核因子-κB活化的调控作用

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）对急性特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿T淋巴细胞核因子-κK（NF-κB）的活化调控作用。方法 分别从急性ITP患儿及正常健康儿童各30例外周血中分离出T淋巴细胞，并分成3组培养，即空白对照组，加入PKC激活剂佛波酯（PMA）的PMA组，同时加入PKC激活剂PMA与抑制剂H-7的PMA＋H-7组。分别用免疫组织化学法和Western blot法检测NF-κB P65和抑制蛋白-κB（Ⅰ-κB）表达。结果 急性ITP患儿的PMA组NF-κB活化的细胞百分比显著高于空白对照组和正常儿童的PMA组（P〈0．05），且Ⅰ-κB水平显著低于上述两组（P〈0．05），而ITP的PMA＋H-7组NF-κB活化的细胞百分比显著低于ITP的PMA组，且I-κB水平显著高于该组（P〈0．05）。结论 ITP患儿T淋巴细胞NF-κB活化可能受PKC信号传导调控。T淋巴细胞PKC-NF-κB信号传导途径激活可能是急性ITP的发病机制之一。     

4─去甲氧柔红霉素联合方案治疗小儿急性白血病

4-去甲氧柔红霉素（IDA）为柔红霉素（DNR）的衍生物，与DNR不同点是C4位上没有甲氧基［１］，这一微小的变化使其抗肿瘤活性优于DNR［2］，且心脏毒性低。目前国内7有关文献报道多用于治疗难治及复发性小儿急性白血病，并取得了较好的疗效。我院自1994年6月-1996年5月试用IDA为主的联合方案对11例初治小儿急性白血病诱导治疗，其中8例完成了诱导方案（其余3例诱导初期自动出院），并取得了较好的疗效。现报告如下：材料和方法1．病例8例患儿均为初治急性白血病，男5例，女3例。年龄2．5岁一12岁，平均年龄8．2岁。其中急性淋巴细胞…     

胆红素对大鼠星形胶质细胞和神经元核因子-κB／IκBα表达的影响

目的探讨胆红素是否影响大鼠星形胶质细胞和神经元核因子(NF)-κB的活化。方法 100μmol／L胆红素分别作用于原代培养大鼠星形胶质细胞和神经元,于0、30、60及120min收集标本,免疫细胞化学染色检测NF-κB亚基P65核移位、western Blot检测NF-κB抑制因子IκBα蛋白表达。结果胆红素干预星形胶质细胞30 min时,出现P65大量核移位(91.0±5.9)％,至60 min核移位率显著下降(50.03±9.69)％,120 min时核移位恢复至干预前水平。30 min时IκBα蛋白表达消失,至30 min、60 min均有蛋白明显表达；神经元各组间P65核移位和IκBα蛋白表达差异均无显著性。结论胆红素可诱导星形胶质细胞NF-κB活化。