脐血CD3AK细胞诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的　探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2 细胞凋亡的作用。方法　用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖凝胶电泳 ,原位末端标记法检测 2 0例K5 6 2 细胞、2 3例CD3AK细胞诱导的K5 6 2细胞凋亡率。结果　K5 6 2 细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ;经CD3AK细胞诱导的K5 6 2 细胞凋亡率 (2 7.38± 4.91) % ,二者之间具有显著性差异 (t=15 .1　P <0 .0 1)。结论　脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2 细胞凋亡。     

铁剥夺对 DNR诱导 K562细胞多药耐药基因表达的影响

目的 探讨铁剥夺对柔红霉素（DNR）诱导多药耐药基因MDR1表达的影响。方法 以柔红霉素单用或联合应用去铁胺（DFO）或二氯化铁（FeCl3）为处理因素作用于人红白血病细胞株K562,应用RT—PCR法、流式细胞分析技术,检测K562细胞多药耐药基因信使核糖核酸（MDR1mRNA）和P-糖蛋白（Pgp）表达的情况。结果 ①与空白对照组相比,柔红霉素（1μmol／L）作用24h可使MDR1／Pgp表达增加（P〈0．05）;②与单用DNR组相比,DFO可显著抑制柔红霉素诱导的MDR1／Pgp的表达,而FeCl3的作用相反（P〈0．05）。结论 柔红霉素短期作用可诱导MDR1表达,提示化疗药本身的诱导作用在肿瘤多药耐药产生中发挥重要作用。铁剥夺可减少柔红霉素诱导的MDRI／PgP表达,而FeCl3的作用相反,提示铁剥夺有可能成为阻止或降低白血病化疗耐药的新的措施之一,而白血病化疗患者补铁应慎重。     

铁剥夺抗K562细胞的增殖作用及机制

目的观察铁剥夺对白血病细胞增殖的影响。方法以K562细胞作为人类白血病细胞株,台盼蓝染色,光镜下计数活细胞率;用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测A值（570nm）,绘制生长曲线;流式细胞术分析细胞周期变化。结果小剂量去铁胺（DFO）（12.5μmol/L）处理K562细胞时,生长曲线轻微变化,随时间延长和DFO剂量增加（25、50、100μmol/L）,细胞存活率明显下降,生长曲线高峰显著低于对照组。DFO的抗增殖活性为时间-剂量依赖型。用DFO（50、100μmol/L）处理K562细胞48和72h后,G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,与对照组比较均有显著性差异（Pa〈0.001）。上述作用可被等浓度的三氯化铁抵消。结论铁剥夺具有抗白血病细胞增殖作用,剥夺细胞内铁,阻止细胞由G0/G1期进入S期可能是其机制之一。     

铁剥夺对白血病细胞凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨去铁胺 (DFO)对白血病细胞K562凋亡相关基因表达的影响及其可能分子机制。方法　采用RT PCR法分析Rb及c myc基因在RNA水平变化。结果　DFO 50 μmol/L及 1 0 0 μmol/L作用于K562细胞 2 4h及 48h ,Rb及c mycmRNA水平较空白对照组增加 (P <0 .0 5) ,且以 1 0 0 μmol/L组增加明显。 结论　铁剥夺剂使K562细胞Rb及c mycmRNA表达增加可能是其诱导白血病细胞凋亡的机制之一。     

脐血CD3AK细胞诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨脐血CD3AK细胞诱导K562细胞凋亡的作用。 方法用细胞形态学观察,DNA琼脂糖凝胶电泳,原位末端标记法检测20例K562细胞、23例CD3AK细胞诱导的K562细胞凋亡率。 结果K562细胞自然凋亡率(3.50±0.97)％;经CD3AK 细胞诱导的D562细胞凋亡率(27.38±4.91)％,二者之间具有 显著性差异(t=15.1P＜0.01)。 结论脐血CD3AK细胞能诱导K562细胞凋亡。     

脐血CD3AK细胞和其培养上清诱导K562细胞凋亡

目的　探讨脐血CD3 AK细胞和其培养上清 (CS)诱导K562 细胞凋亡。方法　用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖电泳 ,原位末端标记法检测K562 ,CD3 AK细胞诱导的K562 ,CS诱导的K562 细胞凋亡率。结果　K562 细胞自然凋亡率 3.5 0± 0 .97% ;CD3 AK细胞诱导的K562 细胞凋亡率 2 7.38± 4.91% ,P <0 .0 1,CS诱导的K562 细胞凋亡率为 33.0 9± 5 .2 2 % ,P <0 .0 1。结论　脐血CD3 AK细胞和其培养上清能诱导K562 凋亡。     

甲状腺激素T3诱导K562细胞铁蛋白表达与细胞凋亡和生长的关系

目的：探讨甲状腺激素T3对K562细胞铁蛋白表达及其对细胞凋亡和增殖的影响。方法：收集各组细胞胞浆蛋白，用放射免疫法检测铁蛋白含量，并和流细胞术分析各组细胞凋亡百分率及细胞周期变化。结果：中等浓度及高浓度的T3均能增加K562细胞铁蛋白表达。与空白对照相比有显著性差异（P＜0．05），且随T3浓度增加，铁蛋白的表达亦增高。同一浓度T3与K562细胞共培养，随时间延长，铁蛋白表达增加，与空白对照相比具有显著性差异（P＜0．01）。24h培养组细胞凋亡率较空白对照略有下降，差异有统计学意义，72h培养组T3＝200nM时凋亡百分率明显下降。T3各处理组中S＋G2期细胞比例较空白对照组明显减少（P＜0．01），且72h各组G2＋S细胞百分率较24h明显下降。结论：甲状腺激素T3能诱导K562细胞铁蛋白表达增加，且能干预细胞凋亡和细胞增殖周期。     

去铁胺诱导K562细胞凋亡研究

目的：探讨铁螯合剂去铁胺（DFO）诱导白血病细胞凋亡的分子机制。方法：实验分为DFO组(终浓度分别为10、50、100 μM)、DFO+FeCl3（各10 μmol/L）组及空白对照组。用钙黄绿素检测K562细胞可变铁池。锥虫蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪方法检测K562细胞凋亡;比色法检测caspase-3活性。结果：（1）DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性;而DFO+FeCl3组细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义。（2）50 μmo/L、100 μmol/L DFO作用于K562细胞24 h时,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);相关分析结果显示,K562细胞铁池的荧光改变与caspase-3活性变化呈负相关(r=-0.894, P<0.05)。结论：DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与螯合细胞内铁,降低细胞可变铁池,激活caspase-3有关。     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：观察蛋白酶体抑制剂MG-132对人红白血病细胞株K562的致凋亡作用及其对凋亡相关基因NF-κB与caspase-3表达的影响。方法：将蛋白酶体通路特异性阻断剂 MG-132 加入K562细胞,用AO/EB细胞形态和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,逆转录-PCR检测NF-κB的转录水平,免疫组化法检测NF-κB与caspase-3的表达,比色法检测caspase-3活性。结果：流式细胞仪检测15 μmol/ L MG-132作用24 h后,凋亡率为(26.5±0.6)％,与对照组(1.2±0.1)％相比明显增多,差异有显著性(P<0．01),MG-132诱导K562细胞凋亡具有量-效关系; RT-PCR检测发现NF-κB mRNA表达下调;免疫组化法检测发现MG-132可降低 NF-κB的表达,增加caspase-3蛋白的表达, 且表达量与MG-132的作用呈剂量相关。结论：MG-132能诱导K562细胞凋亡,其机制可能与MG-132抑制NF-κB信号转导通路,下调NF-κB表达继而上调caspase-3表达有关。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：255-258］     

地塞米松对脑缺氧缺血新生大鼠细胞凋亡抑制蛋白1 mRNA及Caspase-3活性的影响

目的：探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后细胞凋亡抑制蛋白1（cIAP1）基因表达、Caspase-3活性的变化及地塞米松（DEX）对其影响，阐明DEX预处理对HIBD神经保护的可能机制。方法：7日龄SD大鼠24只，随机分成DEX组、9g／L盐水组（NS组）、HIBD组、健康对照组。DEX、NS、HIBD组大鼠采用Rice方法制备HIBD模型。DEX和NS组在缺氧缺血前12h腹腔内分别注射DEX、等量9g／L盐水。取HIBD动物模型实验侧大脑半球，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测cIAP1基因表达，比色法测定Caspase-3活性。结果：与健康对照组比较，HIBD组大鼠cIAP1基因表达明显下降（P〈O．01），Caspase-3活性明显上升（P〈0．01）。与HIBD组比较，DEX组cIAP1基因表达明显上升，而Caspase-3活性明显下降。结论：脑缺氧缺血可导致cIAP1基因表达下调，Caspaes-3活性升高。DEX能通过上调cIAP基因表达，抑制Caspase-3活性，抑制细胞凋亡，起到神经保护作用。     

Survivin与Caspase-3在肝母细胞瘤中的表达及意义

目的 观察细胞凋亡抑制蛋白Survivin和细胞凋亡蛋白酶Caspase-3在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)中的表达情况,探讨其相互关系及临床意义.方法 运用免疫组织化学S-P法检测20例HB、9例瘤旁组织、4例正常儿童和8例正常成人肝组织中Survivin和Caspase-3的表达,并对其结果进行研究.结果 Survivin在正常儿童、瘤旁组织和HB中阳性表达率分别为25.0%、33.3%和100%,成人肝组织中基本未见表达.Survivin在HB组织中的表达显著高于瘤旁及正常肝组织,但Survivin在正常儿童和正常成人肝组织中的表达无统计学差异.Caspase-3在正常成人肝组织、正常儿童肝组织、瘤旁组织和HB中阳性表达率分别为87.5%、0、55.6%和80%,Caspase-3在正常成人肝组织与HB组织中的表达显著高于正常儿童肝组织.Survivin和Caspase-3在HB组织中的表达无相关性.Survivin与Caspase表达构成比与患儿的年龄有相关性:63.6%的HB病例,其Survivin与Caspase-3的表达强度基本一致,均呈高表达状态,且本组患儿年龄的中位数值较高;仅36.4%病例的Survivin呈强表达而Caspase-3弱表达或不表达,本组患儿年龄的中位数值较小.结论 在HB中,Survivin的高表达与HB的发生发展关系密切.正常儿童与正常成人的肝组织中,其Caspase-3表达有显著性差别.Survivin与Caspase-3在HB中的表达率缺乏相关性.在HB的不同的年龄组中,Survivin与Caspase-3存在不同的表达关系,说明它们间可能存在不同的相互作用机制.     

狼疮性肾炎患儿肾组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白PDCD5、Caspase-3的表达

目的探讨狼疮性肾炎(LN)肾脏细胞凋亡与细胞增殖的关系,加强LN发病机制的认识。方法用原位末端标记法(TUNEL)检测31例LN患儿及9例对照的肾组织细胞凋亡,用免疫组化及图像分析的方法检测PCNA(增殖细胞核抗原)及PDCD5、Caspase3的表达。结果(1)LN患儿肾组织中肾小球和肾小管的凋亡细胞、增殖细胞数、增殖细胞数/凋亡细胞数(P/A值)均明显高于对照组(LN组及对照组凋亡细胞、增殖细胞数、P/A值在肾小球分别为0.86±0.26比0.14±0.09,8.45±2.83比0.47±0.25,10.01±2.96比3.37±1.93,均P<0.01;在肾小管分别为1.16±0.42比0.16±0.07,13.73±3.54比1.32±0.15,12.81±3.91比8.94±1.79,均P<0.05)。(2)PDCD5在LN患儿肾小球的表达强度与对照组相比差异无统计学意义(0.09±0.05比0.08±0.02,P>0.05),在肾小管的表达强度明显低于对照组(0.13±0.05比0.21±0.07,P<0.01)。(3)Caspase3在LN患儿肾小球、肾小管的表达强度明显高于对照组(肾小球0.22±0.07比0.05±0.02,肾小管0.08±0.03比0.05±0.01,均P<0.01)。(4)直线相关分析显示:全部观察标本中肾小球凋亡细胞数与Caspase3的表达强度呈正相关(r=0.718,P<0.01),与PDCD5的表达强度无显著相关性(r=0.054,P>0.05);全部观察标本中肾小球、肾小管PDCD5的表达强度均与肾小球、肾小管Caspase3的表达强度无明显相关性(r=0.061,P>0.05,r=0.049,P>0.05)。多元逐步回归分析显示:在α=0.15水平上,全部观察标本中肾小管凋亡细胞数与PDCD5的表达强度呈负相关(回归系数为-3.686,t=-2.875,P=0.007),与Caspase3的表达强度呈正相关(回归系数为4.761,t=1.772,P=0.085)。结论(1)LN患儿肾组织细胞凋亡虽然比对照组增加,但相对细胞增殖来说表现为不足;(2)Caspase3参与了LN患儿肾组织肾小球、肾小管的细胞凋亡;(3)尚不能证实PDCD5参与了LN患儿肾小球细胞凋亡;但可能参与了肾小管的细胞凋亡。     

核因子κB反义寡核苷酸对肾小球硬化Caspase-3表达的影响

目的探讨核转录因子κB（NF-κB）反义寡核苷酸（ODN）对局灶性节段性肾小球硬化大鼠肾组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase-3）、NF-κB表达影响。方法SD雄性大鼠分成3大组：假手术组（A组）、硬化组（B组）各6只,干预组（C组）9只;C组再分成3小组：正义ODN组（C1组）、无义ODN组（C2组）、反义ODN组（C3组）各3只。采用右肾切除加尾静脉注射多柔比星制成肾小球硬化模型。8周后各组分别予不同的药物干预,应用免疫组织化学检测肾组织Caspase-3、NF-κBp65表达。结果反义ODN干预d7,C3组大鼠尿蛋白、肾小球硬化指数、肾组织Caspase-3、NF-κBp65蛋白表达较B、C1、C2组明显减少,差异有统计学意义（Pa〈0.05）;C3组与A组比较,NF-κBp65蛋白表达无显著差异（P〉0.05）。结论NF-κBODN能抑制肾小球NF-κB活性及Caspase-3表达,从而延缓肾小球硬化及细胞凋亡进程。     

神经生长因子对红藻氨酸致大鼠海马神经细胞半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的观察神经生长因子(NGF)对红藻氨酸(KA)致大鼠海马半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,探讨其对癫大鼠神经细胞的保护作用及其机制。方法将60只日龄21～30 d健康大鼠随机分为9 g.L-1盐水对照组(A组),KA致模型对照组(B组),NGF治疗组(C组),每组20只。KA用9 g.L-1盐水配成2 g.L-1,B组、C组大鼠以4 mg.kg-1腹腔注射。注射完观察记录其性发作的潜伏期和性发作的级别,并进行EEG和病理学检查。C组每只大鼠腹腔注射KA20～30 min予NGF4μg.kg-1腹腔注射。A组用9 g.L-1盐水2 mL.kg-1灌胃和腹腔注射。分别于KA注射6 h、1 d、3 d时将各组大鼠处死5只,常规方法灌注固定,制作冷冻切片。用免疫组织化学染色SP法检测大鼠海马Caspase-3表达,并用HPIAS-2000显微图像定量分析系统进行定量分析。结果B组、C组大鼠注射KA后30 min左右开始出现性发作,EEG和病理学检测均显示癫发作特征。C组大鼠注射3 d后,Caspase-3阳性神经元计数为7.10±2.80,B组为18.40±3.86;A组为0...     

Survivin Caspase-3 mRNA在肾母细胞瘤中的表达及意义

目的：在大多数肿瘤组织中都发现了Survivin异常高表达现象,它直接抑制Caspase-3,这说明Survivin在肿瘤发生中具有重要作用。本文的目的在于探讨Survivin、Caspase-3表达与肾母细胞瘤发生发展的关系。方法：应用RT-PCR技术检测Survivin、Caspase-3 mRNA在48例肾母细胞瘤、24例癌旁组织标本中的表达。结果：48例肾母细胞瘤组织中Survivin阳性表达率为 72.9%(35/48),在24例肾母细胞瘤癌旁组织中未检测到Survivin的表达,肾母细胞瘤组织与癌旁组织之间Survivin表达阳性率差异有非常显著性(P<0.01);48例肾母细胞瘤组织中Caspase-3阳性表达率为 8.3%(4/48),在24例肾母细胞瘤癌旁组织中Caspase-3阳性表达率为 45.8%(11/24),肾母细胞瘤组织与癌旁组织之间Caspase-3表达阳性率差异有显著性(P<0.05)。结论：Survivin在肾母细胞瘤组织中高度表达和Caspase-3在肾母细胞瘤中低表达可能与肾母细胞瘤的发生发展有关,与预后的关系有待进一步的探讨。［中国当代儿科杂志,2004, 6(5): 381-384]     

脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的变化

目的 动态观察脓毒症时心肌细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3表达的变化,初步探讨脓毒症时心肌细胞凋亡的机制.方法 将60只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(n=30)、实验组(n=30),两组又分为3、6、12、24及36 h共5个亚组.实验组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法建立脓毒症模型.对照组行假手术,除不做CLP外,余同实验组.通过TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI),免疫印迹法检测Bcl-2及Caspase-3水平的变化.结果 (1)CLP术后心肌细胞AI呈进行性增加,36 h达高峰(43.742±2.495),与对照组(4.311±0.035)相比,差异有显著性(P<0.01),但24 h和36 h相比,差异无显著性(P>0.05).(2)CLP术后心肌组织Bcl-2呈持续下降,36 h下降最明显,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),但24 h和36 h差异无显著性(P>0.05).术后心肌组织Caspase-3呈持续上升,36 h上升最明显,24 h与36 h差异无显著性(P>0.05).(3)大鼠心肌组织Bcl-2与心肌细胞AJ之间存在负相关(r=-0.753,P<0.001).结论 细胞凋亡可能是脓毒症心肌损害的机制之一,通过干预心肌细胞凋亡有望改善脓毒症的预后.