蛋白桑叶中蛋白质提取工艺优化及6种蛋白酶酶解物体外降血糖活性分析

为开发利用蛋白桑叶中蛋白质资源,对其蛋白质提取工艺及酶解物体外降血糖活性进行研究。本研究以蛋白桑叶为原料,采用超声辅助碱提酸沉法提取蛋白桑叶蛋白质。通过单因素实验和响应面法优化提取工艺,以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,分析不同蛋白桑叶蛋白酶解产物体外降血糖活性。结果表明,蛋白桑叶中蛋白质的最佳提取工艺为：氢氧化钠浓度0.125 mol/L、提取温度40℃、提取时间40 min和液料比37:1 mL/g。在此优化条件下,得到蛋白质提取率实际值为49.59%±0.45%,所得蛋白质等电点为pH3.5,吸水性为6.49±0.49 g/g,吸油性为2.59±0.06 g/g,乳化活性为7.40±0.17 m2/g,乳化稳定性为72.48%±3.03%。研究考察了蛋白桑叶蛋白质的复合蛋白酶酶解物、风味蛋白酶酶解物、碱性蛋白酶酶解物、胰蛋白酶酶解物、中性蛋白酶酶解物、木瓜蛋白酶酶解物体外降血糖活性,其中中性蛋白酶酶解物对α-葡萄糖苷酶抑制效果最佳,其IC₅₀=3.52 mg/mL。本研究认为,此蛋白桑叶蛋白质提取工艺稳定,中性蛋白酶解肽具有较高的体外降血糖活性,为进一步开发...     

羊肚菌胞外多糖液态发酵培养基配方优化及其体外降血糖活性

本研究以甘肃省野生三地羊肚菌为研究对象,探究羊肚菌胞外多糖液态发酵培养基最佳方案与体外降血糖活性。采用单因素实验比较红糖、玉米粉等7种添加物对羊肚菌液态发酵过程中胞外多糖含量的影响,在此基础上采用响应面分析法优化羊肚菌胞外多糖液态发酵培养基配方。通过测定羊肚菌胞外多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制率检测其体外降血糖活性。结果表明:当红糖添加量2.20 g/L、尿素添加量3.18 g/L、玉米粉添加量2.40 g/L时,实际得到羊肚菌胞外多糖的含量可达到1.20 g/L。羊肚菌胞外多糖在浓度为1.0 mg/mL时对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率则分别达到73.46%和36.37%,羊肚菌胞外多糖具有较好的降血糖活性。     

普鲁兰酶协同α-葡萄糖苷酶降低青稞快消化淀粉含量酶解工艺优化

以青稞粉为原料,通过普鲁兰酶协同α-葡萄糖苷酶降低青稞快消化淀粉（RDS）含量。通过单因素试验和响应面试验确定降低青稞快消化淀粉含量的最优酶解工艺条件,并测定α-葡萄糖苷酶的抑制率评价其体外降糖活性。结果表明,最佳酶解工艺条件为：普鲁兰酶添加量200 U/g、α-葡萄糖苷酶添加量80 U/g、料液比1∶15(g∶mL)、酶解时间3 h、酶解温度55℃。在此优化条件下,青稞粉快消化淀粉含量为54.95%,比未处理过的青稞快消化淀粉含量降低了20.22%。体外降糖活性测定结果表明,与原粉相比,酶解粉的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率分别增加了68.1%和50.4%,表明经过双酶协同酶解后,青稞淀粉的体外降血糖活性明显提高。     

药桑叶多糖提取工艺优化及其降血糖活性研究

采用Box-Behnken试验设计对药桑叶多糖提取条件（液料比、提取温度、提取时间）进行优化,并用对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（p-NPG）法对药桑叶多糖进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测定。结果显示,药桑叶粗多糖提取最佳工艺为：在液料比25∶1（mL∶g）,提取温度90 ℃、提取时间3 h条件下,药桑叶粗多糖提取率最高为（13.39±0.53）%。降血糖初步研究结果为：药桑叶粗多糖对α-葡萄糖苷酶有较好的抑制活性,其半抑制浓度（IC50）为0.96 mg/mL。     

山楂多糖提取工艺优化及其降血糖、降血脂活性

本文优化了山楂多糖的微波辅助提取工艺,并对其降血糖降血脂活性进行了研究。在考察固液比、提取温度、微波功率、提取时间对山楂多糖提取量影响的基础上,采用Box-Behnken响应面法对提取工艺进行优化。通过测定初步纯化的山楂粗多糖对α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶抑制率和DPPH·清除率,评价山楂多糖的降血糖、降血脂活性。结果表明,山楂多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度63 ℃,微波功率500 W,提取时间7 min,在此条件下山楂多糖提取量为(147.10±0.32) mg/g。山楂粗多糖对α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶抑制率和DPPH·清除率的IC₅₀分别为(99.22±0.89) μg/mL、(22.50±0.79) mg/mL、(185.80±0.64) μg/mL,表明山楂粗多糖具有一定的降血糖、降血脂作用。     

南瓜多糖对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究

实验目的:通过南瓜多糖(Pumpkin Polysaccharide,PP)对α-葡萄糖苷酶活性的影响,探讨南瓜多糖降血糖作用的可能机制.实验方法:实验依次采用加热浸提、有机溶剂分步萃取、减压浓缩、冷冻干燥等工艺方法制备南瓜多糖;提取正常大鼠小肠上段-α葡萄糖苷酶,酶活力采用P-硝基苯麦芽庚糖(PNPG)比色法进行测定,优化α-葡萄糖苷酶作用的最佳实验条件,考察南瓜多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响.实验结果:在实验优化的α-葡萄糖苷酶作用的反应条件下,即在反应时间2h、反应温度49℃、缓冲液pH6.0、底物PNPG浓度为10mmol/L的实验条件下,南瓜多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较弱.结论:南瓜多糖的降血糖作用不是通过抑制α-葡萄糖苷酶的活性实现的,而是通过其它途径实现的.     

超声-微波辅助提取酸浆宿萼多糖及其体外降糖活性

该文以酸浆宿萼为试材,研究料液比、超声功率、微波功率、协同时间对酸浆宿萼多糖提取量的影响,在单因素试验的基础上,采用四因素三水平的响应面法优选提取工艺参数,通过对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制能力测定检测酸浆宿萼多糖体外降糖活性。结果表明：最佳提取工艺为料液比1∶17（g/mL）、超声功率160 W、微波功率320 W、协同时间4 min;在该条件下,酸浆宿萼多糖提取量为（26.13±0.11）mg/g;体外降糖试验表明,酸浆宿萼多糖有降糖活性。     

双酶协同增加青稞慢消化淀粉含量的工艺优化

以萌芽黑青稞粉为原料,研究β-淀粉酶协同α-葡萄糖苷酶增加青稞慢消化淀粉含量及其体外降糖活性。通过单因素试验、体外模拟消化法和Box-Behnken响应面试验,确定最优工艺条件,并通过α-淀粉酶和α-葡糖苷酶抑制率的测定,评价其体外降糖活性。结果表明,双酶协同增加青稞慢消化淀粉含量的酶解最优条件为β-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶添加量150 U/g青稞粉、酶解时间8 h、酶解温度50℃、青稞粉浓度10%。此条件下青稞慢消化淀粉含量达到最高,为33.62%。体外降糖活性测定结果显示,与原粉相比酶改性青稞粉的α-淀粉酶抑制率增加了62.97%,α-葡萄糖苷酶的抑制率增加了52.46%,表明酶解粉的体外降糖活性明显提高。     

昆布多糖的复合酶法提取工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

优化复合酶提取昆布多糖的工艺参数,并考察其抑制α-葡萄糖苷酶的能力。以昆布多糖得率为评价指标,通过正交试验确定复合酶配比,采用响应面法评价酶解时间、pH、液料比和温度对昆布多糖得率的影响。采用体外酶抑制实验测定昆布多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,复合酶最佳添加量为纤维素酶100 mg、果胶酶90 mg、木瓜蛋白酶55 mg,最佳酶法提取工艺为酶解时间1.8 h、酶解温度49.4℃、pH6.1、液料比59:1 mL/g,最佳工艺条件下昆布多糖预测得率18.183%,实测多糖得率18.19%±1.04%,其中性糖、酸性糖、蛋白质及硫酸根含量分别52.72%、11.76%、2.66%、19.49%;在1～5 mg/mL范围内其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用随浓度增加而升高,最大抑制率为79.04%±3.17%,IC₅₀为1.443 mg/mL。复合酶法提取的昆布多糖得率高,其对α-葡萄糖苷酶具有明显的抑制作用。     

药桑叶中活性物质的提取及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

以药桑叶为实验原料,通过集成提取工艺,获得3 种含量稳定的粗提物成分,研究其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并进行不同粗提物间组合物对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究。采用乙醇提取、柱色谱分离纯化等方法,获得桑叶中具有潜在降血糖活性的黄酮、多糖和生物碱粗提物;利用α-葡萄糖苷酶抑制模型评价3 种粗提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并进一步采用CompuSyn软件对不同粗提物间的相互作用进行统计学分析。结果表明：桑叶中黄酮、生物碱、多糖粗提物对α-葡萄糖苷酶均具有抑制活性,且生物碱粗提物的抑制活性显著高于阳性对照（阿卡波糖）,多糖粗提物在高质量浓度作用下具有α-葡萄糖苷酶抑制作用,表现为抑制作用与多糖质量浓度成正比;在本实验所使用的质量浓度与剂量配比内3 种粗提物相互组合时,黄酮＋生物碱组合、多糖＋生物碱组合表现为拮抗作用;黄酮＋多糖组合、黄酮＋多糖＋生物碱组合在高质量浓度下对抑制α-葡萄糖苷酶表现为协同作用。     

桑叶茯砖茶多糖的响应面提取工艺优化及其体外抗氧化降血脂作用

以桑叶茯砖茶为原料,研究水提取法对其中的多糖提取效果的影响以及桑叶茯砖茶多糖的抗氧化和降血脂作用。通过单因素实验考察了提取时间、提取温度、液料比以及提取次数等对多糖得率的影响,在此基础上,采用响应面分析法优化提取工艺,确定了桑叶茯砖茶多糖最佳提取工艺为:提取时间1.6 h,液料比16:1 mL/g,提取温度51 ℃,提取次数1次,在该最佳条件下,桑叶茯砖茶多糖得率为10.43%,与模型预测值基本吻合,表明该提取工艺稳定可行。体外抗氧化和降血脂实验发现,当桑叶茯砖茶多糖质量浓度为80 μg/mL时,对DPPH自由基的清除率达84.35%,当质量浓度达到130 μg/mL时,其对ABTS+·的清除率可达72.30%,当桑叶茯砖茶多糖浓度为1.75 mg/mL时,对·OH的清除率为74.08%,表明抗氧化效果较好。当桑叶茯砖茶多糖质量浓度为3.50 mg/mL时,其对牛磺胆酸盐和甘氨胆酸盐的结合率分别达到59.96%和41.97%,表明具有较好的降血脂作用。     

五味子多糖提取工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶抑制活性分析

以五味子为原料,采用单因素实验探究超声功率、提取温度、复合酶添加量和提取时间对五味子多糖得率的影响。在此基础上,通过正交试验优化超声辅助复合酶提取五味子多糖工艺。随后,基于酶抑制和荧光光谱探索五味子多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,超声辅助复合酶提取五味子多糖最优工艺参数组合为:超声功率200 W、提取温度30 ℃、复合酶添加量0.20%、提取时间40 min,五味子多糖得率为（8.12%±0.10%）。五味子多糖对α-葡萄糖苷酶抑制率的IC₅₀为27.15 μg/mL,并以竞争性与非竞争性相混合的方式抑制α-葡萄糖苷酶的活性,并能同时引起α-葡萄糖苷酶发生荧光猝灭,该研究结果为五味子的进一步开发提供理论依据。     

流苏子多糖的提取分离、理化性质及体外α葡萄糖苷酶抑制活性

采用水提醇沉法从流苏子中提取多糖,Sevage法除蛋白,利用DEAE-52纤维和Sephadex G-100凝胶柱色谱进行分离纯化,得到多糖CRp-1,采用化学和仪器分析方法研究了多糖的总糖和蛋白质含量、单糖组成、官能团特征、空间构像等理化性质,并通过体外实验研究CRp-1对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果显示,从流苏子中分离的多糖CRp-1为白色粉末,溶于水,不溶于有机溶剂;总糖含量为97.12%,蛋白质含量为1.65%,不含单糖和多酚,不属于淀粉多糖;主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为1:5.381:1.146:10.804:6.953:11.908,相对分子质量分别为223200 g/mol;紫外和红外光谱显示具有多糖的特征吸收峰,且含有吡喃糖苷。CRp-1具有三股螺旋结构,且表面为三维多孔结构,并带有一定的圆形颗粒。体外α-葡萄糖苷酶抑制活性实验表明,CRp-1具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,具有浓度依赖性。     

Development of high 1-deoxynojirimycin (DNJ) content mulberry tea and use of response surface methodology to optimize tea-making conditions for highest DNJ extraction

Mulberry 1-deoxynojirimycin (DNJ), a potent α-glucosidase inhibitor, suppresses postprandial blood glucose, thereby possibly preventing diabetes mellitus. At present, mulberry dry teas are commercially supplied as functional foods in many countries, but these products may not provide an effective dose (6 mg DNJ/60 kg human wt) due to their low DNJ content (about 100 mg/100 g of dry wt). Therefore, development of tea with higher DNJ content is desirable. To do this, we investigated distribution of DNJ content and α-glucosidase inhibitory activity in 35 Thai mulberry varieties. DNJ content in young leaves varied among mulberry varieties from 30 to 170 mg/100 g of dry leaves. Varieties having highest DNJ content were Kam, Burirum 60 and Burirum 51. Leaf position affected DNJ content: shoots > young leaves > mature leaves. DNJ concentration and α-glucosidase inhibitory activity were highly correlated (r = 0.84), suggesting that α-glucosidase inhibitory activity of mulberry leaves is mainly due to DNJ. Consequently, high DNJ content mulberry tea was produced from shoots of varieties such as Burirum 60, which contains 300 mg/100 g of dry wt. Tea-making conditions were optimized for highest DNJ extraction using response surface methodology. Approximate 95% of total DNJ in high DNJ content dry tea was extracted when temperature was maintained at 98 °C for 400 s; these conditions could be applicable for preparation of commercial products with high DNJ content. One cup (230 ml, a normal serving) of DNJ-enriched mulberry tea contained enough DNJ (6.5 mg) to effectively suppress postprandial blood glucose.     

离子液体及其双水相体系在萃取分离桑叶多糖中的应用

该文筛选能够应用在桑叶多糖提取中可形成双水相现象较好的离子液体和无机盐体系,并研究含离子液体萃取体系中桑叶多糖的最佳提取工艺。研究1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐、谷氨酸双三氟甲磺酰亚胺盐等15种离子液体分别加入磷酸二氢钾、无水碳酸钠、硫代硫酸钠等13种无机盐中形成双水相现象的难易程度,筛选出形成双水相现象较好的离子液体。采用溶剂浸提法对桑叶进行提取,采用单因素试验研究离子液体浓度、提取温度、提取时间和料液比对桑叶中多糖化合物提取的影响,并根据响应面设计试验和验证试验获得桑叶多糖的最优提取工艺条件为离子液体浓度0.000 3 mol/L、提取温度76℃、料液比1∶20(g/mL)、提取时间109 min。     

Fatty Acid Composition,Total Sugar Content and Anti-Diabetic Activity of Methanol and Water Extracts of Nine Different Fruit Tree Leaves Collected from Mediterranean Region of Turkey

In this research, the total sugar content, fatty acid compositions, and α-amylase and α-glucosidase inhibitory activity of methanolic and water extracts of nine different fruit tree leaves were determined. α-amylase and α-glycosidase inhibitory activity were determined by using Caraway-Somogyi iodine/potassium iodide and 4-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside as substrate, respectively. The total sugar content of the nine different fruit tree leaves varies from 281.02 mg GE/g (glucose equivalents) to 643.96 mg GE/g. Methanolic extract from avocado leaves had the strongest in α-amylase and α-glucosidase inhibitory activity, 69.21 and 96.26%, respectively. Fatty acid composition of nine fruit tree leaves was characterized by gas chromatography and 24 components were identified. Among the tested fruit tree leaves, the main component was linolenic acid (49.09%). The level of essential fatty acids are over 50% in mulberry, grape, and loquat leaves. Polyunsaturated fatty acids were the major group of fatty acids present in oils of mulberry, fig, pomegranate, grape, and loquat leaves. Therefore, these oils can be considered as a good source of polyunsaturated fatty acids. Furthermore, avocado can be regarded as a new source for diabetic therapies.     

瘤背石磺多糖的提取工艺优化、理化性质及其α-葡萄糖苷酶抑制活性

以瘤背石磺为研究对象,采用超声辅助提取法,以单因素实验结合响应面法优化瘤背石磺多糖提取工艺。对比三种脱蛋白方法(Sevage试剂法、酶法及酶-Sevage法),探究纯化瘤背石磺多糖的最佳脱蛋白条件。对瘤背石磺多糖进行紫外光谱、红外光谱、单糖组成及相对分子质量等结构测定并考察其α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明:瘤背石磺多糖在提取温度90℃,提取时间76 min,超声功率753 W条件下,得率最高,为10.19%;酶-Sevage法蛋白脱除率98.52%,多糖保留率96.50%,是三种脱蛋白中效果最好的方法。瘤背石磺多糖具有多糖的特征吸收峰和特征紫外谱线,由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖和岩藻糖组成;平均相对分子质量为1.34×106 Da。在浓度为50 μg/mL时,瘤背石磺多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率达81.9%,高于阿卡波糖。本研究为瘤背石磺多糖的高值化利用提供一定的理论依据。     

北沙参多糖铁配合物的制备、结构特征及生物活性

目的：制备北沙参多糖及其铁配合物,对其理化性质、结构特征和生物活性进行研究。方法：采用水提醇沉法制备北沙参多糖,经三氯化铁共热合成得到多糖铁配合物,利用紫外-可见光谱、红外光谱、高效阴离子交换色谱、透射电镜、差热-热重联用热分析仪等对多糖及其铁配合物的理化性质和结构特征进行测定,并考察其清除羟自由基和对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果：北沙参多糖的提取率为18.4%,是由葡萄糖和甘露糖组成,其物质的量比为1.00∶4.25,制备得到的多糖铁配合物中铁离子质量分数为19.31%,是以聚合的β-FeOOH微核为核心,多糖在其表面配合形成的多糖铁（Fe3＋）表面配合物。结果表明,北沙参多糖及其铁配合物均具有清除羟自由基和对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,且经铁修饰后的多糖对羟自由基清除作用和对α-葡萄糖苷酶的抑制能力明显增强。结论：北沙参多糖经铁修饰后,对羟自由基清除作用和对α-葡萄糖苷酶的抑制能力均得到提高。