澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

雀嘴茶中三大酚类成分的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性分析

为深入挖掘雀嘴茶的利用价值,本文以其中含量丰富的6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸三大酚类成分为研究对象,对其抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性进行分析。结果表明,雀嘴茶三大酚类成分均表现出较好的抗氧化活性,6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸清除DPPH自由基的IC₅₀值分别为13.56±0.14、104.41±6.52和8.42±0.21μg/mL,清除ABTS⁺自由基的IC₅₀值分别为18.01±0.06、50.60±1.25和26.93±0.38μg/mL,清除OH自由基的IC₅₀值为2.64±0.06、>10.00和<1.00 mg/mL,对铁离子总还原能力的强度依次为绿原酸>CA>β-熊果苷;雀嘴茶三大酚类成分对酪氨酸酶的抑制活性差异较大,CA对酪氨酸酶兼具单酚酶和二酚酶抑制作用,其IC₅₀值分别为1.114±0.035和95.198±1.117μmol/L,β-熊果苷仅有单酚酶抑制作用,IC₅₀...     

核桃多肽结构表征及抗氧化活性

以核桃粕为原料,复合酶酶解制备核桃多肽,并通过超滤分离获得不同分子质量的核桃多肽,进行结构表征和实验分析,探究核桃多肽的抗氧化活性及其对氧化损伤HepG2细胞的保护作用。结果表明,分子质量<1 kDa核桃蛋白水解产物抗氧化活性最强,其羟自由基清除能力的半抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC₅₀)值为11.47 mg/mL、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力的IC₅₀值为35.67μg/mL、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力的IC₅₀值为49.72μg/m L。同时,<1 kDa核桃多肽组分能够减少Hep G2细胞内活性氧含量,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力。核桃多肽在225 nm波长处有最大吸收峰。核桃多肽形状不规则、表面光滑、结构致密,有大量粗糙纹路和孔隙。核桃多肽的二级结构中无规卷曲(36.5%)和β-折叠(36.6%)相对含量最高。综上,<1 kDa核桃多肽对...     

蜂王浆蛋白肽的制备及其降血糖和抗氧化活性研究

目的:研究蜂王浆蛋白的最佳酶解工艺条件,并分析所制备酶解肽的氨基酸组成、分子量分布、降血糖及抗氧化活性。方法:以蜂王浆为原料,采用碱提酸沉法提取蜂王浆粗蛋白,以α-葡萄糖苷酶抑制率和ABTS自由基清除率为评价指标,筛选出酶解蜂王浆蛋白制备降血糖及抗氧化活性肽的最佳蛋白酶,并研究蜂王浆酶解肽的体外降血糖和抗氧化活性。结果:蜂王浆降血糖及抗氧化活性肽的最佳制备工艺为:以酸性蛋白酶为酶制剂,酶添加量为6000 U/g,酶解温度为43℃,酶解pH为4.0,酶解时间为4 h,料液比为1:10。在上述条件下,制备的蜂王浆蛋白肽的氨基酸总量为82.19%,相对分子质量集中在1000 Da以下。蜂王浆蛋白肽对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC₅₀)为6.94 mg/mL,清除ABTS自由基、羟自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基及超氧阴离子自由基的半抑制浓度(IC₅₀)分别为14.18、0.45、11.02和18.38 mg/mL。试验结果表明,蜂王浆蛋白肽具有一定的降血糖和抗氧化活性,可为蜂王浆高值化利用及活性肽产品开发提供理论依据。     

基于膜技术的桑葚多糖分级分离及生物活性组分筛选

采用了膜技术分级分离桑葚多糖（Mori fructus polysaccharide,MFP）,并探究了不同分子量桑葚多糖的抗氧化、降血糖、抗过敏和体外乙醇脱氢酶活性。以桑葚为原料,通过热水浸提后采用300、50、5和1 kDa超滤膜对桑葚多糖进行分级分离,分别记为MFP300、MFP50、MFP5和MFP1。比较4种孔径的超滤膜分离的桑葚多糖组分主要成分、抗氧化活性、降血糖活性、抗过敏活性和体外乙醇脱氢酶活性的差异。结果表明,4种多糖的主要成分和生物活性表现出一定的差异。MFP1、MFP5、MFP50和MFP300的总糖含量分别为46.34%、68.45%、48.60%和66.32%,糖醛酸含量分别为3.34%、22.78%、16.11%和21.48%,还原糖含量分别为16.51%、6.03%、7.90%和6.67%。生物活性筛选表明,MFP300清除DPPH自由基和ABTS+自由基的IC₅₀值分别为0.2235和0.2979 mg·mL?1,抑制透明质酸酶能力的IC₅₀值为0.6634 mg·mL?1,激活体外乙醇脱氢酶能力的IC₅₀值为10.2646 mg·mL?1,表现出最好的抗氧化、抗过敏和体外乙醇脱氢酶活性。MFP1抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶能力的IC₅₀值分别为0.7944和4.6419 mg·mL?1,表现出最好的降血糖活性。综上所述,经膜技术分级分离得到的不同分子量范围的桑葚多糖在主要成分和生物活性方面有一定差异,为桑葚多糖分级技术的改进升级和桑葚多糖“构-效”关系研究提供理论基础。     

康定灵芝功效成分分析及体外抗氧化、降血糖活性评价

本文采用药典方法和高效液相色谱法分析了康定灵芝多糖、三萜及灵芝酸A、灵芝酸C1、灵芝酸F的含量。通过对DPPH、ABTS+自由基清除能力和总抗氧化能力的考察以及对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果评价了其体外抗氧化和降血糖活性。结果显示,康定灵芝多糖和三萜含量分别为1.15%和1.50%,灵芝酸A、灵芝酸C1和灵芝酸F含量分别为0.052%、0.020%和0.064%。体外抗氧化和降血糖活性评价结果表明康定灵芝多糖提取物对DPPH和ABTS⁺自由基清除的IC₅₀值分别为0.75 mg/mL和1.24 mg/mL,对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制的IC₅₀值分别为1.45 mg/mL和1.97 mg/mL。三萜提取物对DPPH和ABTS⁺自由基清除的IC₅₀值分别为0.65 mg/mL和1.06 mg/mL,对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制的IC₅₀值分别为1.44 mg/mL和1.09 mg/mL。本文研究结果表明康定灵芝功效成分含量高,同时具有良好...     

海蒿子多酚组分的化学成分、抗氧化和降血糖活性分析

以海蒿子为研究对象，首先从中提取游离酚(free phenolics,FP)、酯(esterified-bound phenolics,EP)和糖苷结合酚(glycoside-bound phenolics,GP)3种不同存在形式的可溶性多酚，并采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法分析各多酚组分的化学成分；其次，评价各多酚组分的体外抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果发现海蒿子中可溶性多酚以结合态为主，GP的总酚含量(68.30 mg/g)最高，EP的总黄酮含量(83.49 mg/g)最高。从3个多酚组分中共鉴定出22个化合物，其中包括3种酚类化合物、4种黄酮和2种酚酸。生物活性研究表明：GP的细胞抗氧化活性(细胞抗氧化值为18.18μmol/g)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(IC₅₀=84.6μg/mL)和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基(IC₅₀=127.01μg/mL)清除能力最强。EP的氧自由基吸收能力(5 322.85μmol/g)和α-葡萄糖苷酶抑制活性(IC₅₀     

体外消化对三文鱼皮胶原低聚肽抗氧化活性的影响

本研究以三文鱼皮为原料通过酶解法制备三文鱼皮胶原低聚肽,并进行体外模拟消化实验,通过分子量分布分析、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、总抗氧化能力（ABTS法）以及活性氧ROS实验,探究三文鱼皮胶原低聚肽经模拟胃、肠道消化后抗氧化活性的变化。结果表明:经模拟消化实验后,三文鱼皮胶原低聚肽的重均分子量轻微减少,变化不超过4%;胃蛋白酶消化前后,DPPH自由基清除能力IC₅₀值分别为11.1、12.3 mg/mL,胰蛋白酶消化前后,IC₅₀值分别为12.5、14.6 mg/mL;胃蛋白酶消化前后,羟自由基清除能力IC₅₀值分别为12.2、13.2 mg/mL,胰蛋白酶消化前后,IC₅₀值分别为10.7、11.5 mg/mL;胃蛋白酶消化后,总抗氧化能力下降不超过13%,胰蛋白酶消化后,总抗氧化能力下降不超过19%;胃蛋白酶消化后,ROS清除能力提高不超过3%,胰蛋白酶消化后,ROS清除能力提高不超过5%。这表明三文鱼皮胶原低聚肽具有良好的消化稳定性和抗氧化活性,为其在抗氧化功能性食品的开发提供了理论基础。     

响应面法优化珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及酶解产物的抗氧化活性

以珍珠龙胆石斑鱼肉为原料,利用蛋白酶酶解制备生物活性肽。以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验的基础上采用响应面分析法优化制备工艺。并采用超滤法对酶解产物进行分离纯化,同时进行抗氧化活性探究。结果表明:珍珠龙胆石斑鱼肉酶解工艺条件为:采用风味蛋白酶,酶添加量1050 U/g,在pH7.0、53℃、料水比1:3.5条件下酶解5.5 h,水解度为9.99%±0.39%。酶解产物与超滤组分均具有较强DPPH自由基清除能力,其IC₅₀值在0.63~0.88 mg/mL之间;EH-2(5~8 kDa)和EH-3(3~5 kDa)有较强的羟基自由基清除能力,其IC₅₀值分别为16.94和16.38 mg/mL;酶解产物与超滤组分均具有还原能力,且酶解产物还原能力最佳。优化的珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺合理且可行,其酶解产物与超滤组分具有较强的抗氧化性,可作为功能食品的基料应用。     

辐照红景天乙醇提取物的抗氧化作用及美白作用研究

目的:探讨60Co-γ射线辐照处理对红景天乙醇提取物抗氧化及美白作用的影响。方法:本试验所用红景天经不同剂量(5、10、20、30 kGy)的60Co-γ射线辐照处理后,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、2,2'-联氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基清除率及铁离子还原能力(FRAP)、酪氨酸酶抑制实验、小鼠B16黑色素瘤细胞实验,评价辐照红景天提取物的抗氧化活性及美白活性。结果:与未辐照组相比,辐照组红景天提取物的抗氧化活性及美白活性均增加,其中20 kGy辐照组红景天提取物效果最佳,清除DPPH自由基的IC₅₀值为3.75 μg/mL、清除ABTS自由基的IC₅₀值为44.88 μg/mL、铁离子还原能力FRAP值为(1.90±0.05) mmol/mg、抑制酪氨酸酶的IC₅₀值为244.10 μg/mL、能够有效降低小鼠黑色素瘤细胞中黑色素的合成,并在浓度为0.50%以下时无细胞毒性。结论:20 kGy的60Co-γ射线辐照处理红景天乙醇提取物的抗氧化活性最强,并具有良好的美白功效。     

铜藻主要化学成分分析及抗氧化活性评价

对江苏海域"金潮"爆发产生的铜藻进行多成分测定以评价该铜藻的品质和优势成分,同时对铜藻可溶性多糖、褐藻多酚、岩藻黄质三种抗氧化活性成分所在的不同乙醇提取部位进行抗氧化活性研究。采用常规理化方法对铜藻与其他六种常见褐藻进行常规营养成分及其他活性成分对比分析;对铜藻的不同乙醇提取物进行DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力的抗氧化活性初步研究。结果显示,铜藻与其他褐藻中各营养成分含量差异较大。与其他褐藻相比,铜藻中蛋白质品质较佳且蛋白氨基酸组成符合FAO/WTO推荐的理想蛋白氨基酸组成模式;铜藻中岩藻黄质含量显著(P<0.05)高于其他六种褐藻,为优势成分;铜藻中饱和脂肪酸略高于不饱和脂肪酸,饱和脂肪酸以棕榈酸相对含量最高,单不饱和脂肪酸以油酸相对含量最高,多不饱和脂肪酸以花生四烯酸相对含量最高;10种微量元素中Zn、Fe较高;根据自由基的半数清除率(IC₅₀值)判断各提取物抗氧化能力大小,DPPH体系中抗氧化大小为:30%乙醇提取物(IC₅₀=0.097 mg/mL)>50%乙醇提取物(IC₅₀=0.102 mg/mL) > 90%乙醇提取物(IC₅₀=0.136 mg/mL) > 水提取物(IC₅₀=0.160 mg/mL) > 70%乙醇提取物(IC₅₀=0.162 mg/mL);在ABTS体系中抗氧化大小为30%乙醇提取物(IC₅₀=0.028 mg/mL) > 50%乙醇提取物(IC₅₀=0.033 mg/mL) > 70%乙醇提取物(IC₅₀=0.044 mg/mL) > 水提取物(IC₅₀=0.055 mg/mL) > 90%乙醇提取物(IC₅₀=0.066 mg/mL);可知以30%乙醇提取物具有较好的DPPH自由基和ABTS自由基清除能力,且与可溶性多糖成分相关性最高,呈负相关。综上,"金潮"灾害所产生的大量铜藻资源蛋白质品质较佳,铜藻可作为岩藻黄质开发来源,且将其作抗氧化功能产品开发时以30%乙醇提取物最佳。     

牡蛎蛋白酶解多肽降糖及抗氧化活性评价

目的:利用化学方法评价9种酶对牡蛎蛋白酶解所得多肽降血糖和抗氧化活性的影响,筛选最佳酶的种类。方法:以牡蛎蛋白酶解多肽对α-淀粉酶抑制率为指标评价其体外辅助降血糖活性,以DPPH·清除率、超氧阴离子抑制率为指标评价牡蛎蛋白酶解多肽的体外抗氧化活性,筛选出最佳用酶。结果:风味蛋白酶得到的多肽对α-淀粉酶的抑制效果最好,5 mg/mL时抑制率达到67.13%,IC₅₀值为3.806 mg/mL;糜蛋白酶酶解得到的多肽对DPPH·的清除率最高,2 mg/mL时清除率为58.09%,IC₅₀值为1.16 mg/mL;同时,糜蛋白酶酶解得到的多肽对超氧阴离子的抑制率也最高,2 mg/mL时抑制率为53.64%,IC₅₀值为1.75 mg/mL。结论:风味蛋白酶和糜蛋白酶酶解所得牡蛎多肽在降糖和抗氧化方面具有较大的潜力,为进一步开展牡蛎蛋白酶解多肽的研究提供参考。     

多肽类ACE抑制剂的设计合成及生物活性

本研究以血管紧张素I转化酶（angiotensin converting enzyme, ACE）抑制肽PHP1和PHP2为研究母肽,通过替换氨基酸残基改变目标多肽的疏水性、带电性等因素,利用生物信息学工具评估多肽潜在的生物活性,设计了19个多肽类似物。采用多肽固相合成法合成目的多肽类似物,并进行体外生物活性检测。结果显示多肽类似物均具有较高的ACE抑制活性,其中,PHP1A-6（IC₅₀=3.87 μmol/L）、PHP2A-3（IC₅₀=3.33 μmol/L）、PHP2A-4（IC₅₀=2.86 μmol/L）和PHP2A-7（IC₅₀=4.58 μmol/L）的ACE抑制活性最高,较母肽有显著提高（P<0.05）,PHP1A-3、PHP1A-4、PHP1A-7、PHP2A-1和PHP2A-10具有同母肽相当的抑制活性,IC₅₀<10 μmol/L。绝大部分多肽类似物的α-葡萄糖苷酶抑制活性与母肽相比均有明显提高,PHP1A-3（IC₅₀=3.09 μmol/L）、PHP1A-7（IC₅₀=9.51 μmol/L）、PHP2A-6（IC₅₀=5.58 μmol/L）、PHP2A-11（IC₅₀=2.35 μmol/L）和PHP2A-12（IC₅₀=3.98 μmol/L）的活性最高。其中,PHP1A-3和PHP1A-7具备较强的ACE抑制和α-葡萄糖苷酶抑制双重活性。含Cys的多肽类似物在1 mg/mL浓度下,ABTS + · 清除率均在85%以上,具备潜在的抗氧化活性。分子对接研究了ACE抑制肽与ACE的构效关系,表明抑制肽可以与ACE的氨基酸残基产生多个稳定的氢键、疏水相互作用、π-π堆积及盐桥,增加了对ACE的抑制作用。     

运用HSCCC法分离纯化荷叶中三种黄酮及抗氧化活性

利用高速逆流色谱技术(HSCCC)从荷叶中分离制备高纯度的黄酮类物质,并对所制备的荷叶黄酮进行抗氧化活性研究。结果表明,以正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:6:1:6和正丁醇:甲醇:水=5:1:4作为HSCCC分离的两相溶剂体系,得到三种目标组分C₁、C₂和C₃的质量为12.4、5.9、2.1 mg,经高效液相分析检测其纯度分别为92.67%、90.43%、87.52%。通过标准品对照实验,得到三种目标组分可能为紫云英苷、异槲皮苷及槲皮素。并对目标组分的抗氧化活性进行研究,得到对羟基自由基的半数清除率(IC₅₀)分别为0.94、0.85、0.76 mg/mL,对DPPH自由基的半数清除率(IC₅₀)分别为0.39、0.28、0.06 mg/mL,对ABTS+自由基的半数清除率(IC₅₀)分别为0.56、0.47、0.29 mg/mL,三种目标组分均表现出良好的抗氧化活性。     

硫酸化修饰对小球藻胞内多糖抗氧化及抗肿瘤活性的影响

为探究小球藻多糖硫酸化修饰对生物活性影响,本研究采用小球藻(Chlorella sp.22)为实验材料,提取胞内多糖经DEAE-52纤维素阴离子交换柱分离纯化得到纯化多糖HDB-1,对纯化多糖HDB-1进行硫酸化修饰得SHDB-1,对硫酸化修饰前后多糖进行抗氧化活性和抗肿瘤活性研究。结果表明,纯化组分HDB-1以α-呋喃糖为主。用三氧化硫-吡啶法对HDB-1进行硫酸化修饰得到SHDB-1,其取代度为1.046。抗氧化活性结果表明,HDB-1与SHDB-1的DPPH自由基清除率IC₅₀(半抑制浓度)值分别为29.28 mg/mL和14.49 mg/mL,羟自由基清除率IC₅₀值分别为36.75 mg/mL和28.59 mg/mL,可知SHDB-1抗氧化效果优于HDB-1。抗肿瘤结果表明,HDB-1及SHDB-1在1 mg/mL浓度下对细胞无毒性,HDB-1与SHDB-1的IC₅₀值分别为960.16μg/mL及658.19μg/mL,可知SHDB-1抑制宫颈癌细胞Hela增殖效果优于HDB-1。以上结果表明,硫酸化修饰的小...     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

三种香茅精油的化学成分及体外抗氧化和抗炎活性评价

采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）测定爪哇香茅（Cymbopogon winteranus）、柠檬草（C. citratus）和芸香草（C. distans）三种植物精油的化学成分,并通过DPPH法及炎症因子NO生成量检测法评价这三种植物精油的抗氧化活性和抗炎活性。结果表明,三种香茅属植物精油化学成分以萜类物质为主,含量为76.35%~90.52%,其中萜醛、萜醇类物质含量最高。爪哇香茅、柠檬草和芸香草的主要成分分别为（+）-香茅醛（37.85%）、反式柠檬醛（36.12%）和香叶醇（34.76%）;三种香茅属植物精油的DPPH自由基清除能力呈一定的剂量依赖性,但与阳性对照抗坏血酸(IC₅₀值为(0.005±0.002) mg/mL)相比,抗氧化活性较差;在较低浓度（2~4 μg/mL）时,香茅属植物精油减少LPS致炎模型的NO生成能力与10 μmol/L地塞米松（Dexamethasone,Dex）相当,表明这三种香茅属植物精油具有良好的抗炎活性,其中柠檬草（IC₅₀值为（0.472±0.121） μg/mL）的抗炎活性最好,其次为爪哇香茅（IC₅₀值为（0.632±0.147） μg/mL）和芸香草（IC₅₀值为（0.669±0.131） μg/mL）。因此,三种香茅属植物精油具有较大的开发潜力开发成抗炎药物和抗炎功能产品。