二肽基肽酶4抑制剂抑制Wnt/β-catenin信号通路改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化

目的探讨二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响及与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法将50只SPF级SD大鼠,体重(200±20)g,随机分为对照组(Control group)、模型组(Model group)、二肽基肽酶4抑制剂组(DPP-4 inhibitor group)、氯化锂组(LiCl group)及氯化锂+DPP-4组(LiCl+DPP-4 inhibitor group),每组10只。利用腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg)的方法构建慢性心力衰竭大鼠模型。利用超声检测各组大鼠心功能;HE及Masson染色检测各组大鼠心脏病理学改变;Western blot检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,α-SMA, GSK-3β,p-GSK-3β及β-catenin蛋白的表达。结果与模型组相比,DPP-4inhibitor组大鼠心功能显著改善,心脏组织病理损伤及心肌纤维化减轻,心脏组织中TGF-β1和α-SMA蛋白表达明显减少,p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达也显著降低(P0.05);LiCl加重慢性心力衰竭大鼠模型的心脏功能、病理损伤及心肌纤维化程度,增加TGF-β1和α-SMA蛋白表达,并显著增加p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达;但是DPP-4抑制剂能够减轻甚至部分逆转LiCl对慢性心力衰竭大鼠的影响。结论二肽基肽酶4抑制剂改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化,与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达相关。     

连翘酯苷A对小鼠压力负荷性心力衰竭的保护作用及潜在机制

目的 探究连翘酯苷A(FTA)对小鼠压力负荷性心力衰竭(HF)的保护作用及其潜在的机制.方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠随机分成Sham组、HF组和HF+FTA组.采用主动脉弓缩窄建立小鼠压力负荷性HF.称取小鼠体重及心脏重量并计算心脏重量指数;HE染色观察组织病理学改变;ELISA检测小鼠血清内炎症因子改变;Western blot技术检测相关蛋白表达.结果 FTA显著降低压力负荷性HF引起的小鼠心脏重量和心脏重量指数增加,减少心肌间质炎症细胞浸润,降低血清内炎症因子TNF-o、IL-6和IL-1β表达水平;心肌Nrf2和HO-1蛋白表达增加,NF-κB蛋白表达降低.结论 FTA对小鼠压力负荷性HF具有保护作用,与激活Nrf2/HO-1信号通路相关.     

姜黄素通过激活Nrf2/Nox4通路调控压力负荷诱导的心力衰竭

目的 探讨姜黄素(CUR)对小鼠压力负荷性心力衰竭(HF)的保护作用及可能机制.方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠随机分成假手术组(Sham)、心力衰竭组(HF)和姜黄素治疗组(HF+CUR).通过主动脉弓缩窄(TAC)建立小鼠压力负荷性心力衰竭模型.实验第4周,收集各组小鼠心肌组织,称取心脏重量,计算心脏重量指数;HE染色观察心脏组织病理学改变;Western blot检测MDA5,IRE-aⅠ、SOD-1、Nrf2和Nox4蛋白的表达.结果 HF组小鼠心脏重量和心脏重量指数显著增加,心肌间质出现明显的炎症细胞浸润,促氧化应激蛋白MDA5和IRE-aⅠ表达升高,而SOD-1蛋白表达降低.CUR处理显著降低小鼠心脏重量和心脏重量指数,减少心肌间质炎症细胞浸润,降低MDA5和IRE-aⅠ蛋白表达,提高SOD-1蛋白表达.此外,CUR处理还能显著增加Nrf2蛋白表达,降低Nox4蛋白表达.结论 CUR处理对小鼠压力负荷性HF有保护作用,其潜在机制可能与激活Nrf2/Nox4信号通路相关.     

前列腺素E1通过抑制内质网应激保护心肌梗死后大鼠的心脏

目的:探讨前列腺素E1(PGE1)对心肌梗死(MI)后大鼠心脏的影响及相关分子机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠分为假手术组、模型组和模型+PGE1组。通过结扎冠状动脉左前降支建立MI大鼠模型。通过超声心动图分析大鼠心功能变化;通过HE和Masson染色分析心肌组织形态学变化;通过TTC染色评估心肌梗死情况;通过TUNEL法检测心肌细胞死亡情况;通过免疫组化和Western blot检测内质网应激(ERS)相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和caspase-12,以及凋亡相关因子Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心功能降低,心肌组织出现病理形态学改变,心肌梗死面积扩大,心肌细胞死亡增多,心肌组织中GRP78、CHOP、caspase-12、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平升高,Bcl-2表达降低(P0. 01)。与模型组比较,模型+PGE1组大鼠心功能明显提高,心肌组织病理损伤明显减轻,心肌梗死的面积显著减小,心肌细胞死亡显著减少,心肌组织中GRP78、CHOP、caspase-12、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平降低,Bcl-2表达升高(P0. 01)。结论:PGE1能通过降低ERS水平而减少胶原沉积、减轻炎症并提高心功能,从而保护心肌细胞免受MI的损伤。     

黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌的保护作用及其机制

目的:探讨黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心脏的保护作用及其机制。方法:将造模成功的2型糖尿病KKAy小鼠随机分为模型组和治疗组(黄芪注射液联合葛根素注射液腹腔注射),同周龄雄性KKAy小鼠作为正常对照组,并于21、24和28周龄时分别处死小鼠。HE染色观察心肌组织形态变化;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡;real-time PCR检测小鼠心脏组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和p53上调凋亡调控因子(PUMA) mRNA的表达;Western blot检测小鼠心脏组织中GRP78、CHOP、PUMA、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、cleaved caspase-9、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和cleaved PARP蛋白的表达。结果:模型组小鼠心肌细胞发生肥大,可见到部分细胞出现肌浆溶解和坏死,治疗组小鼠病变减轻;与对照组比较,模型组小鼠心肌细胞凋亡数显著增加(P0.01),治疗组小鼠心肌细胞凋亡数较模型组显著降低(P0.05);模型组小鼠21、24和28周龄心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平,以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平与正常对照组比较显著增加(P0.01);治疗组小鼠心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平均显著低于模型组(P0.01)。结论:黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激和caspase通路的活化,从而抑制细胞凋亡有关。     

游泳运动通过Sirt1信号减轻小鼠心肌梗死后心脏病理性重塑

目的：探讨游泳运动(Sw)调控沉默信息调节因子1(Sirt1)信号减轻小鼠心肌梗死(MI)后心脏病理性重塑的作用。方法：采用冠状动脉左前降支结扎制备小鼠MI模型，随机分为4组：假手术组、MI组、MI+Sw组和MI+Sw+EX527 (Sirt1抑制剂)组。游泳运动采用无负重游泳9周，检测左室内压最大上升和下降速率(±dp/dt_max),HE和Masson染色观察心肌结构和纤维化程度，TUNEL染色检测细胞凋亡率，RT-qPCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平，Western blot检测cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax、Sirt1、Ac-NF-κB和NF-κB蛋白水平。结果：与假手术组相比，MI组±dp/dt_max显著降低(P<0.01)，心肌纤维排列紊乱、断裂，纤维化程度、TUNEL阳性细胞数以及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平均显著增加(P<0.01)，同时，cleaved caspase-3、Bax和Ac-NF-κB的表达增加，Bcl-2和Sirt1表达降低(P&...     

红景天苷对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的作用及机制研究

目的：观察红景天苷对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨其可能的分子机制。方法：制备Sprague Dawley大鼠急性心肌缺血模型,随机分为红景天苷高、低剂量组(40 mg/kg、10 mg/kg)、急性心肌缺血组和对照组。原位末端转移酶标记染色法检测心肌组织凋亡情况,免疫印迹法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Cytochrome c (Cyt-c)、cleaved caspase-3以及cleaved caspase-9蛋白的表达水平。结果：原位末端转移酶标记染色法显示红景天苷浓度依赖性抑制急性心肌缺血所引起心肌细胞的凋亡;免疫印迹法结果显示,与急性心肌缺血组相比,红景天苷干预后心肌组织中Bcl-2的蛋白表达显著增加,Bax的蛋白表达显著减少,胞浆(cyto)中Cyt-c的蛋白表达水平显著下降,cleaved caspase-3和cleaved caspase-9表达均显著降低。结论：红景天苷具有抗心肌细胞凋亡的作用,其作用机制可能是通过抑制线粒体通路减少细胞的凋亡。本实验为红景天苷可作为临床上治疗缺血性心脏病提供实验依据。     

人参炔醇通过Nrf2/ARE通路调控小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 阐明人参炔醇(Panaxynol,PNN)对小鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及其可能机制.方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠随机分成假手术组(Sham)、MIRI组和MIRI+PNN组,采用结扎冠状动脉方法建立小鼠MIRI模型,术后给予PNN干预,每日一次,连续1周.实验第7天,收集小鼠心肌组织,称取小鼠心脏重量;HE染色观察组织病理学改变;Western blot检测氧化应激和细胞凋亡相关蛋白表达.结果 MIRI组小鼠小鼠心脏重量和心脏重量指数明显升高,心肌间质出现明显的炎症细胞浸润,促氧化应激蛋白MDA5和IRE-α表达升高,而SOD-1蛋白表达降低,同时促细胞凋亡蛋白Bax和Caspase3表达升高,而Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05).PNN处理能显著降低MIRI诱导的小鼠心脏重量和心脏重量指数,减少心肌间质炎症细胞浸润,降低MDA5、IRE-α、Bax和Caspase3蛋白表达,提高SOD1和Bcl-2蛋白表达.此外,PNN处理还能显著增加Nrf2蛋白表达,降低ARE蛋白表达(P＜0.05).结论 NN处理对小鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/ARE信号通路相关.     

硫化氢通过GSK-3β/β-catenin信号途径介导心肌损伤后抗细胞凋亡作用

目的:观察硫化氢对大鼠急性心肌缺血组织细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:健康雄性SD大鼠,随机分成7组:假手术组;心肌缺血组;心肌缺血+Na HS低剂量组;心肌缺血+Na HS中剂量组;心肌缺血+Na HS高剂量组;心肌缺血+SB216763组;心肌缺血+1%DMSO组。结扎大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌缺血模型。记录各组大鼠MAP、LVDP、LVEDP、dp/dt_(max)和dp/dt_(min),测定LDH活性、心肌细胞凋亡率、p-GSK-3β、t-GSK-3β、β-catenin、Bax和Bcl-2蛋白表达以及心肌组织形态学变化。结果:大鼠心肌缺血后MAP、LVDP、dp/dt_(max)和dp/dt_(min)降低,LVEDP升高,血清LDH活性增强,心肌细胞凋亡率和Bax表达增强,Bcl-2表达降低,p-GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β和β-catenin表达降低。心肌纤维横纹不齐或消失,核偏移甚至裂解消失。给予Na HS后,大鼠MAP、LVDP、dp/dt_(max)和dp/dt_(min)均升高,LVEDP降低,血清LDH活性降低,心肌细胞凋亡率和Bax表达降低,Bcl-2表达增强,心肌p-GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β和β-catenin表达均增强,心肌细胞变性程度明显减轻。结论:硫化氢可通过GSK-3β/β-catenin信号途径介导心肌损伤后抗细胞凋亡作用。     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

紫杉醇联合顺铂通过Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌肿瘤干细胞增殖并促进其凋亡北大核心

背景:肿瘤干细胞具有自我更新和分化成新肿瘤的能力,会导致肿瘤放化疗不敏感,是肿瘤发生和复发的根源。目的:探索紫杉醇联合顺铂对鼻咽癌干细胞增殖和凋亡的影响并探索其作用的信号通路。方法:免疫磁珠的方法分离培养鼻咽癌干细胞,紫杉醇和顺铂处理细胞,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、活化的caspase-3、Bcl-2和β-catenin及下游原癌基因c-myc的表达,用RNA干扰技术敲降β-catenin表达或者使用抑制剂XAV939抑制Wnt/β-catenin通路活性,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与结论:(1)紫杉醇或顺铂均会抑制鼻咽癌干细胞的增殖,促进其凋亡,并且凋亡标志蛋白活化caspase-3表达上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下降,联合用药具有协同作用,(2)紫杉醇或顺铂均会抑制Wnt/β-catenin通路的活性及下游靶基因c-myc的表达,抑制Wnt/β-catenin通路活性抑制鼻咽癌干细胞的增殖,促进其凋亡。(3)结果表明,紫杉醇和顺铂可能是通过Wnt/β-catenin信号通路调控鼻咽癌干细胞的增殖和凋亡。     

五味子乙素通过Wnt/β-catenin信号通路调节人胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭

目的 研究五味子乙素对人胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖,凋亡和侵袭的调控作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 不同、浓度的五味子乙素(12、24、48μg/ml)处理胰腺癌Panc-1细胞后,采用CCK8法检测Panc-1细胞增殖变化,Transwell法检测细胞侵袭情况,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达变化.结果 五味子乙素能显著抑制人胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖和侵袭能力,且呈剂量和时间依赖性,促进细胞凋亡,并上调Bax/Bcl-2的表达比例,显著抑制Wnt4、Wnt5a、β-catenin蛋白表达水平.结论 五味子乙素明显抑制Panc-1细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达有关.     

山柰酚通过Wnt/β-catenin信号通路抑制HBx-HepG2细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨山柰酚对HBx-HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并研究其潜在分子作用机制。方法:利用实时荧光定量PCR检测相关基因的表达水平,利用蛋白印迹实验检测相关蛋白的水平,流式细胞术检测细胞的凋亡率,MTT实验和平板集落形成实验检测细胞的增殖,Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭和转移。结果:山柰酚(10~200μmol/L)能够剂量和时间依赖性地抑制HBx-HepG2细胞的增殖。山柰酚(100μmol/L)能显著抑制HBx-HepG2细胞的集落形成数量、细胞侵袭能力以及细胞愈合率,诱导HBx-HepG2细胞凋亡,引起cleaved caspase-3、cleaved caspase-9及Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,降低β-catenin、c-Myc和cyclin D1 mRNA及蛋白的表达水平。山柰酚(100μmol/L)同时能够降低p-GSK-3β蛋白水平以及细胞质和细胞核中的β-catenin蛋白水平,对GSK-3β蛋白水平没有影响。Li Cl处理能够反转山柰酚(100μmol/L)对HBx-HepG2细胞的增殖、侵袭以及迁移抑制作用。结论:山柰酚对HBx-HepG2细胞的增殖、侵袭及转移有显著的抑制作用,这种抑制作用很有可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的。     

白芍总苷对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 :观察白芍总苷对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 :制备大鼠心肌细胞缺血再灌注模型,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组及低、中、高剂量白芍总苷组,比较各组心肌细胞存活率;检测乳酸脱氢酶(LDH)释放;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法检测心肌组织Wnt3a、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin的表达水平。结果 :与缺血再灌注模型组相比,白芍总苷不同浓度各组心肌细胞Wnt3a、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达、LDH释放及细胞凋亡率均显著降低,且白芍总苷呈浓度依赖性效应。结论 :白芍总苷对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制可能与白芍总苷能抑制Wnt3a表达,从而影响Wnt/β-catenin信号通路密切相关。     

葛花解酲方对乙醇性HBV 转基因小鼠肝癌前病变GST-Pi 和PCNA 表达及Wnt / β-catenin 信号通路的影响

目的:探讨葛花解酲方对乙醇性乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠肝癌前病变谷胱甘肽-S转移酶(GST-Pi)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:将100只HBV转基因小鼠根据随机数字法分为对照组、模型组、葛花解酲方组和葛花解酲方+氧化锂(LiCl)组,每组25只。红星二锅头灌胃建立肝癌癌前病变小鼠模型,葛花解酲方水煎剂(40 g/kg)灌胃干预肝癌癌前病变,Wnt/β-catenin激动剂LiCl[1 mEq/(kg·d)]灌胃干预Wnt/β-catenin信号通路,共20周。伊红-苏木素(HE)染色观察肝脏病理学变化,免疫组化染色测定肝脏GST-Pi和PCNA表达,Western blot测定肝脏组织中Wnt-1、β-catenin蛋白水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠肝脏重量、肝脏指数、GST-Pi IDO、PCNA IDO、Wnt-1和β-catenin蛋白升高(P0.05);与模型组比较,葛花解酲方组小鼠肝脏重量、肝脏指数、GST-Pi IDO、PCNA IDO、Wnt-1和β-catenin蛋白降低(P0.05);与葛花解酲方组比较,葛花解酲方+LiCl组小鼠肝脏重量、肝脏指数、GST-Pi IDO、PCNA IDO、Wnt-1和β-catenin蛋白升高(P0.05)。HE染色:对照组小鼠肝脏结构和形态正常;模型组小鼠肝细胞变质和结节性增生明显,可见典型的假小叶,炎症细胞浸润明显,胆管上皮增生并具有异型性;葛花解酲方组小鼠肝细胞变质、结节性增生、炎症细胞浸润、胆管上皮增生及异型性较轻;葛花解酲方+LiCl组小鼠肝细胞变质、结节性增生、炎症细胞浸润、胆管上皮增生及异型性介于模型组和葛花解酲方组之间。结论:葛花解酲方可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低肝组织GST-Pi和PCNA表达逆转乙醇性HBV转基因小鼠肝癌前病变的发生。     

动脉粥样硬化中CARHSP1基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力凋亡及免疫因子的影响

目的:探讨动脉粥样硬化斑块中钙调节热稳定蛋白1(CARHSP1)基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力、凋亡及白细胞介素6(IL-6)和C-反应蛋白(CRP)表达的影响。方法:用Western blot检测动脉粥样硬化斑块中CARHSP1的蛋白表达;缺氧处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),将细胞分为正常培养组、缺氧组、缺氧+CARHSP1-siRNA组和缺氧+pc DNA3. 1-CARHSP1组,用CCK-8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力及凋亡率; RT-PCR检测IL-6和CRP的表达; Western blot检测凋亡蛋白caspase-3、cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中的蛋白表达显著高于对照组(P 0. 05);缺氧可明显增加CARHSP1的表达。缺氧组HUVECs活力及Bcl-2表达显著低于正常培养组,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著高于正常培养组(P 0. 05);与缺氧组比较,缺氧+CARHSP1-siRNA组的活力及Bcl-2表达显著升高,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著降低(P 0. 05),pc DNA3. 1-CARHSP1组的细胞活力及Bcl-2表达显著降低,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax表达显著升高(P 0. 05)。结论:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中表达升高,抑制CARHSP1表达可提高HUVECs的活力,降低细胞凋亡,下调免疫因子IL-6和CRP的表达,而过表达CARHSP1则反之。     

紫草素减轻低氧-复氧致大鼠心肌细胞系H9c2损伤

目的探索紫草素对低氧-复氧(H/R)损害的H9c2心肌细胞的保护作用。方法将心肌细胞系H9c2分为对照组、H/R组、紫草素(0.1、1和10μmol/L)干预组,每组3个平行孔;MTT法检测紫草素对H9c2细胞毒性;流式细胞计量术检测细胞凋亡和周期;DCFH-DA检测细胞活性氧水平;生化检测细胞中MDA、8-OHdG和GSH含量;qPCR检测细胞γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA表达;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Keap1和Nrf2蛋白表达;免疫荧光检测细胞Nrf2蛋白进核情况。结果紫草素呈浓度-时间依赖性抑制H9c2细胞增殖(P<0.05);H/R诱导H9c2细胞凋亡、细胞周期阻滞及促进Bax及cleaved caspase-3蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05),紫草素呈浓度依赖性抑制细胞凋亡、解除细胞周期阻滞及cleaved caspase-3和Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达;紫草素可降低H/R所致活性氧水平、MDA及8-OHdG升高,增高H/R所致GSH含量以及γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA的表达下调,导致Nrf2蛋白的升高及Keap1下调,并促进Nrf2蛋白进核(P<0.05)。结论紫草素减轻低氧-复氧致H9c2心肌细胞的损伤。     

利培酮通过影响Wnt/β-catenin信号通路诱导人成骨细胞系hFob1.19凋亡

目的 探讨利培酮对人成骨细胞系hFob1.19凋亡的影响，并进一步分析其基于Wnt/β-catenin信号通路的分子机制。方法 将hFob1.19细胞分为对照组、利培酮干预组(0、5、20、40、60、80、100和120μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力；流式细胞测量术检测细胞凋亡率；RT-qPCR及Western blot检测细胞BCL-2、MCL-1、BAX以及β-catenin基因及蛋白表达水平。结果 1)与对照组相比，利培酮组细胞活力呈剂量和时间依赖性下降(P<0.05),而细胞凋亡率呈剂量依赖性增加(P<0.05)。2)与对照组相比，利培酮组促凋亡基因BAX水平升高，而抗凋亡基因BCL-2、MCL-1水平降低，同时β-catenin的基因表达降低(P<0.01)。3)与对照组相比，利培酮组促凋亡蛋白BAX、cleaved caspase-3水平升高，而抗凋亡蛋白BCL-2、MCL-1水平降低，同时β-catenin蛋白表达降低(P<0.01)。4)与对照组相比，利培酮组的β-catenin蛋白在细胞核和细胞质表达均降低(P<0.05)。结...     

结直肠癌中FOXO3a表达及其与β-catenin、E-cadherin关系

目的探讨结直肠癌组织中FOXO3a的表达及其与Wnt信号通路中心蛋白β-catenin和该通路间接调节因子E-cadherin的关系。方法应用免疫组化SP法检测112例结直肠癌组织和103例正常肠黏膜组织中FOXO3a、β-catenin及E-cadherin蛋白的表达,分析三者表达与临床病理特征的关系以及FOXO3a与β-catenin、E-cadherin表达的相关性。结果 (1)FOXO3a在结直肠癌组织中的阳性率(57.14%)较正常肠黏膜组织(93.20%)明显降低(P<0.001),β-catenin在结直肠癌组织中的异常表达率(73.21%)较正常肠黏膜组织(2.91%)明显升高(P<0.001),E-cadherin在结直肠癌组织中的阳性率(70.54%)较正常肠黏膜组织(98.06%)明显降低(P<0.001)。(2)结直肠癌组织中FOXO3a、E-cadherin低表达以及β-catenin异常表达与肿瘤深层浸润、差分化、淋巴结转移和TNM高分期密切相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小均无关(P>0.05)。(3)结直肠癌组织中FOXO3a的阳性表达与β-catenin的异常表达呈负相关(rs=-0.361,P<0.001),与E-cadherin的阳性表达呈正相关(rs=0.351,P<0.001)。结论 FOXO3a、E-cadherin表达降低与β-catenin异常表达可能在结直肠癌的发生、侵袭和转移过程中起重要作用,FOXO3a抑制结直肠癌发生、发展的作用机制可能与Wnt信号通路有关。     

Zeste基因增强子同源物2通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:以RT-q PCR和Western blot检测胶质瘤U87、H4和U251细胞及正常人脑星形细胞(NHA)中EZH2的表达水平。在H4细胞中转染EZH2 siRNA和siRNA control,MTT测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,分光光度计法检测caspase-3的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和下游靶分子c-Myc的蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染EZH2 siRNA的H4细胞,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定β-catenin和c-Myc的表达。结果:胶质瘤U87、H4和U251细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平均明显高于NHA(P0.05),并且H4细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平高于U87和U251细胞(P0.05)。EZH2 siRNA可以明显下调H4细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平。EZH2表达下调后的H4细胞从48 h开始细胞活力降低,并且细胞凋亡率也明显升高,细胞中caspase-3活性也明显升高(P0.05),同时EZH2表达下调还可以抑制β-catenin和c-Myc的表达。Wnt/β-catenin信号通路的激活剂可以减少EZH2诱导的H4细胞凋亡,降低细胞中caspase-3的活性。结论:EZH2在脑胶质瘤细胞中过度表达,下调其表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导胶质瘤细胞凋亡。