Charon 4A噬菌体DNA的制备

由David改造的Charon 4A噬菌体，目前 已普遍作为无性繁殖各种DNA的良好载体。 它具有极好的安全性。Charon 3A, 4A和16A 噬菌体已被确定为EK,级的载体— 宿主系 统^[1,2,4,5]     

Charon 4A噬菌体DNA的制备

由David改造的Charon 4A噬菌体,目前已普遍作为无性繁殖各种DNA的良好载体。它具有极好的安全性。Charon 3A、4A和16A噬菌体已被确定为EK_2级的载体——宿主系统。 Charon 4A噬菌体DNA为46kb碱基对长。经EcoRI酶消化成4个片段,其中19和12kb片段可作为制备真核基因文库的载体,可     

改变寄主细菌长期增殖的噬菌体某些特性的研究

噬菌体在异种寄主细菌增殖后的情况,还缺乏研究。我们选择鼠疫噬菌体和假结核噬菌体在相互寄主细菌内进行增殖,并研究其生物学特性的变化情况。材料和方法(一)菌种     

建兰根状茎增殖条件的研究

研究了建兰两个栽培品种的根状茎在固体及液体两种培养方式,以及培养基中有无激素和不同激素浓度配比对增殖及分化的影响。根状茎在液体培养基上的生长量都大于固体培养基上的生长量。根状茎在无激素的培养基上也能增殖。加入激素有促进作用。合适的激素浓度及配比因品种而异。     

建兰根状茎增殖条件的研究

研究了建兰两个栽培品种的根状茎在固体及液体两种培养方式,以及培养基中有无激素和不同激素浓度配比对增殖及分化的影响。根状茎在液体培养基上的生长量都大于固体培养基上的生长量。根状茎在无激素的培养基上也能增殖。加入激素有促进作用。合适的激素浓度及配比因品种而异。     

苏芸金杆菌噬菌体的形态观察及噬菌体GP-10在寄主细胞内增殖

本文对山东大学生物实验厂几年来从周围环境和发酵裂解液中分离的10株噬菌体进行了寄主范围(包括9个血清型共55株苏芸金杆菌)的测定和电子显微镜观祭和比较。根据其形态,可归纳为三种不同的类型。同时以噬菌体GP一10,在感染寄主细胞后的不同时间进行了电子显微镜观寮。结果表明噬菌体核酸在侵入细胞后,寄主细胞核区明显扩大,并在扩大的核区复制,逐渐出现电子密度较大的噬菌体颗粒,数量逐步增加,至增殖后期,几乎充满了整个扩大了的核区。最后导致寄主细胞壁破裂而释放出成熟的噬菌体。其数置估计每个细胞接近1000个。     

T4噬菌体表面展示技术的研究进展

噬菌体表面展示技术(phage display)是由Smith于1985年首先建立起来的一种新的生物技术[1],它能将表达的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面,保持相对独立的空间构象和原有的生物活性[2].常用的噬菌体表面展示系统主要有丝状噬菌体、λ噬菌体及T4噬菌体展示系统等.虽然它们都具有噬菌体展示系统的优点,但对于丝状噬菌体来说,它不能展示那些难以分泌的肽和蛋白质,而且它的N端可融合外源多肽的容量有限,较大蛋白的融合会造成空间障碍,影响噬菌体的装配,使其失去感染力.而对于λ噬菌体,大分子蛋白的融合会抑制噬菌体的组装,使其生长受到影响,因此这两种噬菌体更适用于构建短肽库和cDNA表达文库[3],而不适于构建重组疫苗和表达分子量大具有完整结构域的蛋白质[4,5].     

噬菌体T4imm基因克隆对超感染免疫的初步研究

细菌对噬菌体超感染的免疫是普遍存在的 现象。大肠杆菌对噬菌体T4超感染的免疫作 用与T4 imm基因有关［u0,111。T4 imm 0 基因在遗 传图上位于基因42与基因43之间L63。细胞被 T4噬菌体感染后,对T4超感染的免疫以及T4 基因imm在其中所起的作用,国外已作了一些 研究［[4,121,但是对于克隆的T4 imm基因独自能 否起作用尚未见报道。     

蛋白磷酸酶4在人肺癌细胞A549增殖中的功能分析

蛋白磷酸酶4(PP4)是PP2A亚家族的重要成员之一.已有研究表明PP4在果蝇与线虫中参与了中心体成熟,但作为一个进化上高度保守的蛋白质,PP4在哺乳动物细胞中的确切功能至今仍知之甚少.选择人肺癌细胞A549为材料,转染发夹型siRNA表达质粒,筛选鉴定获得了PP4表达抑制细胞株,然后对细胞的形态、生长特性及有丝分裂过程进行观察分析.与对照细胞相比,发现其生长速率明显减慢,细胞群体中DNA含量为4N的细胞比率明显增高.这一结果是由细胞群体中出现了高比例的多核细胞造成的,进一步的分析揭示,高比例多核细胞的产生是由于PP4表达下降,致使细胞有丝分裂和胞质分裂受到严重干扰所导致的.由此推测PP4对于保证细胞有丝分裂及胞质分裂的正常进行具有重要作用,PP4受到抑制将会导致多核细胞的产生,进而抑制A549细胞的增殖.     

赤霉素A4、A7的发酵研究

初选藤仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)农大17菌株为赤霉素A_4、A_7(GA_4、GA_7)的生产菌,该菌株GA_(4+7)的积累量,除与营养条件有关外,温度和pH是极为重要的因子,随着发酵温度从28℃上升至32℃,GA_(4+7)的产量由21μg/ml增至81μg/ml,GA_3由702μg/ml降至328μg/ml。pH回调至中性,GA_(4+7)的产量由75μg/ml增至180μg/ml,GA_3由322μg/ml降至211μg/ml。此外,设法延长发酵周期也是增加GA_(4+7)的一个因素。综合上述条件,即发酵过程中,发酵液的pH由48h前的4回调并维持在6.7左右,温度由28℃上调并控制在32℃,摇瓶培养12天,GA_(4+7)的产量达890μg/ml,20—600L发酵罐发酵240h,GA_(4+7)产量达680μg/ml左右。GA_(4+7)浓度的测定亦作了简化处理,发酵液不经提取,可直接用硅胶板G薄层层析(TLC)后进行荧光比色,产品测定宜采用高效液相色谱法(HPLC)。按照上述条件培养的农大17菌株,产生GA_3、GA_7和GA_4的比例为23.131:16.105:31.258,GA_4高于有关报道。     

贴梗海棠组培中继代增殖条件的研究

研究了贴梗海棠组培快繁中,基本培养基、植物生长调节剂、培养温度及光照对芽继代增殖的影响,结果表明:适宜贴梗海棠芽增殖分化的基本培养基为MS;附加6-BA 0.5g/ml,NAA 0.5 g/ml为芽增殖的最佳浓度组合;最佳培养温度为25±2℃。     

Mu噬菌体的研究概况

1963年,Taylor首先在美国《国家科学院院报》上报道了一种能引起寄主突变的噬苗体。此后通过大量研究确证这种噬菌体能将其基因组随机地插入大肠杆菌染色体DNA上,从而引起突变,     

鸡白痢沙门氏菌及其噬菌体vB-SpuS-Spp4的分离鉴定

分离鸡白痢沙门氏菌及其噬菌体,对分离到的噬菌体进行生物学特性分析。采用沙门氏菌选择性培养基进行鸡白痢沙门氏菌的分离,并进行特异性PCR鉴定。以鸡白痢沙门氏菌分离株为宿主菌,采用双层平板法进行噬菌体的分离,通过负染法电镜观察噬菌体的形态和大小,并对噬菌体进行裂解谱、最佳MOI、一步生长曲线、对温度、pH、紫外线以及氯仿的稳定性等生物学特性的研究。分离到噬菌体vB-SpuS-Spp4为长尾噬菌体,对29株鸡白痢沙门氏菌的裂解率为100%;最佳感染复数为0.001时噬菌体的效价可达1.47×10~9 PFU/mL。该噬菌体潜伏期为15min,暴发期为45min,暴发量为127;vB-SpuS-Spp4温度耐受性较强,在pH2～13环境中仍有活性。噬菌体vB-SpuS-Spp4对紫外照射不敏感,对氯仿不敏感。噬菌体vB-SpuS-Spp4作为一株烈性噬菌体,对鸡白痢沙门氏菌具有广泛的裂解作用,为临床鸡白痢的噬菌体控制奠定了基础。     

猪链球菌的烈性噬菌体和前噬菌体

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患病病原,携带有前噬菌体。本文对猪链球菌的烈性噬菌体和前噬菌体的研究现状做了综述,主要包括猪链球菌烈性噬菌体的形态及功能;烈性噬菌体裂解酶的结构及功能;烈性噬菌体末端酶大亚基的活性;前噬菌体的比较基因组学、前噬菌体的裂解酶以及烈性噬菌体和溶原性噬菌体之间的相互转化,并对猪链球菌噬菌体与宿主的相互关系作了展望。     

宿主菌富集空肠弯曲菌噬菌体培养条件的优化

【背景】开发噬菌体产品是一种防控空肠弯曲菌有潜力的策略,但是面临噬菌体分离的挑战。【目的】运用响应面法对宿主菌富集空肠弯曲菌噬菌体的培养条件进行优化。【方法】通过单因素试验分析培养基、培养温度、培养转速、离子添加剂对噬菌体富集效果的影响,以噬菌体回收率为评价指标,采用响应面法优化了空肠弯曲菌噬菌体的富集培养条件。【结果】在37℃条件下进行静置培养时,噬菌体富集培养效果最佳,回收率为354.12%。分离噬菌体的过程包括采样并制备滤液、宿主菌与样品滤液共培养及噬菌体分离与鉴定等环节。应用此方法从鸡粪便中分离空肠弯曲菌噬菌体,与传统的单斑法相比,噬菌体分离率提高了269.23%。【结论】研究优化的宿主菌富集噬菌体培养方法可提高空肠弯曲菌噬菌体的分离效率,为噬菌体的研究提供思路。     

CDK4基因沉默对非小细胞肺癌A549 增殖和代谢的影响

目的:通过特异性小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),使CDK4基因沉默,探讨该基因沉默对肺癌A549细胞增殖和代谢的影响及其可能的作用机制。方法:将靶向CDK4小干扰RNA(si RNA-CDK4)和阴性对照干扰片段(si RNA-control)成功转染A549细胞后,利用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测CDK4在m RNA和蛋白水平的变化;细胞计数法、CCK-8法和软琼脂糖克隆形成实验检测A549增殖的变化和克隆形成能力;FCM法检测A549细胞的细胞周期;18F-FDG摄取实验、乳酸检测试剂盒及海马技术检测A549细胞中葡萄糖、乳酸的量及氧耗的变化;利用RT-PCR检测CDK4基因沉默后A549细胞中糖代谢相关酶m RNA水平的变化。结果:将靶向CDK4小干扰RNA(si RNA-CDK4)转染A549细胞后,可明显抑制CDK4的m RNA和蛋白表达(P0.001,P0.01)。CDK4蛋白抑制后,细胞增殖在48、72和96 h均明显降低(P值均0.05),G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显减少(P值均0.05);18F-FDG摄取量下降(42.21±1.90)%(P0.05),乳酸的生成量减少(29.39±5.35)%(P0.05),而细胞的基础耗氧量增加(67.17±3.58)%(P0.01);糖酵解相关酶PFKFB3、PKM2、LDHA在m RNA水平均明显减低(P0.001,P0.01,P0.001)。结论:抑制CDK4表达可明显降低糖酵解水平,并增加耗氧量;同时可引起细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。其机制可能与CDK4直接或间接调节糖酵解相关酶的表达有关。