高三尖杉酯碱诱导原代白血病细胞凋亡及临床意义

目的研究高三尖杉酯碱(HHT)对原代急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞的促凋亡作用及临床意义。方法以20例急性白血病(AL)患者(ALL 7例,ANLL 13例)为研究对象,DNA片段原位末端标记(TUNEL)方法检测凋亡细胞。结果HHT体外处理后ANLL和ALL细胞均出现典型凋亡细胞。HHT对ALL和ANLL细胞促凋亡作用差异无显著性[TUNEL阳性率(17.34±9.60)%对(26.64±20.67)%,P>0.05]。与柔红霉素(DNR)比较,HHT对ALL细胞促凋亡作用较弱[TUNEL阳性率(17.34±9.60)%对(31.64±18.84)%,P<0.05]。联合应用HHT和阿糖胞苷(A ra-C)处理原代ALL细胞,TUNEL阳性细胞率高于单用HHT处理(P<0.001)。体外HA联合处理TUNEL阳性细胞率≥39.6%组,CR率80.0%,TUNEL阳性细胞率<39.6%组,CR率25.0%。结论HHT对原代ALL和ANLL细胞均有促凋亡作用。     

环孢毒素A增强羟基喜树碱,三尖杉酯碱对HL—60细胞凋亡的诱导

观察环孢霉素A(CsA)对羟基喜树碱 (HCPT)、三尖杉酯碱 (HT)诱导白血病细胞凋亡的调节作用。方法 :应用细胞形态学检查 ,DNA凝胶电泳及流式细胞术分析检测。结果 :CsA3μg/ml对HL 60细胞生长无明显影响 ,也没有促进凋亡作用。HL 60细胞加上HCPT0 5μg/ml、HT0 1μg/ml作用4h ,细胞凋亡率分别为(35 7±1 3) %和(31 9±0 8) %。先以CsA3μg/ml作用HL 60细胞24h ,洗涤 ,然后再加HCPT0 5μg/ml、HT0 1μg/ml继续作用4h ,细胞凋亡率明显增加 ,达(47 5±0 5) % (P<0 01)和(44 3±0 8) % (P<0 01)。CsA +HCPT及CsA +HT组分别比单独HCPT、HT组诱导的DNA梯状条带亮度增强。CsA3μg/ml对HL 60细胞的bcl 2蛋白表达以及周期分布均无影响。结论 :CsA能提高HL 60细胞对HCPT或HT诱导凋亡敏感性。提示临床上应用CsA联合HCPT或HT治疗白血病 ,可能取得较好疗效     

双向凝胶电泳分析三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡

背景与目的:三尖杉酯碱(harringtonine,HT)作为一种抗肿瘤药,已广泛用于治疗急、慢性髓系白血病,并已获得了良好的疗效。目前的研究表明其抗肿瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关,但具体分子机制不详。本研究主要是分析HT诱导K562细胞凋亡的蛋白谱,寻找凋亡相关蛋白。方法:应用AnnexinⅤ和PI双染法,通过流式细胞术区分HT诱导K562细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段;进一步采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析方法,对HT诱导凋亡的K562细胞与对照K562细胞进行分离和比较。结果:10μg/mlHT作用于K562细胞5h和24h,凋亡早期细胞(AnnexinⅤ+/PI-)分别为28.3%和18.1%(P<0.01),凋亡晚期细胞(AnnexinⅤ+/PI+)分别为9.1%和20.2%(P<0.01)。配比分析对照组细胞和凋亡早期组、晚期组细胞的蛋白图谱,统计分析表明:对照组K562细胞可分离出1300±50个蛋白点,组内蛋白点匹配率为(88.3±2.0)%。凋亡晚期组细胞中有10个蛋白点发生了明显和稳定的质和量的改变(P<0.01),其中8个蛋白点在凋亡后表达量上调,1个蛋白点表达下调,1个蛋白点只在对照细胞内表达。结论:差异表达的蛋白可能是三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的相关蛋白。     

高三尖杉酯碱诱导急性白血病原代细胞凋亡的观察

目的　观察高三尖杉酯碱 (HHar)诱导急性白血病 (AL)原代细胞凋亡的形态、生化特征 ,并分析量效关系 ,以指导临床治疗。方法　经 HHar作用后的 AL 原代细胞由光镜、电镜观察形态特征 ,DNA凝胶电泳、二苯胺法测定生化特征 ,SSPS软件分析量效关系。结果　 HHar作用后 AL原代细胞形态、生化特征均符合典型的细胞凋亡改变 ;其DNA片段化率随 HHar作用时间的延长 ,浓度的增高而增加 ,具有时间——效应及剂量——效应线性趋势。DNA片段化率与坏死率正相关。结论　 HHar确可诱导 AL 原代细胞凋亡。其诱导细胞凋亡的能力因剂量、作用时间的不同而不同     

脉冲磁场对高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡的影响

目的观察脉冲磁场(PMF)对高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞凋亡的影响.方法以人早幼粒白血病细胞(HL-60)为实验对象,采用细胞计数、细胞形态学及流式细胞仪进行分析.结果HHT可诱导HL-60细胞凋亡,PMF能明显增加HHT诱导HL-60细胞凋亡.结论PMF通过对HL-60细胞周期的影响促进HL-60细胞凋亡从而增加对化疗药物的敏感性,表明PMF对治疗白血病具有潜在的应用价值.     

拓扑异构酶I抑制剂诱导白血病HL60/VCR耐药细胞凋亡的研究

目的　研究拓扑异构酶I抑制剂 (topotecan ;TPT)对白血病耐药细胞HL6 0 /VCR诱导凋亡的作用。方法　瑞氏 吉姆萨染色和吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)染色进行形态观察 ,采用TUNNEL、流式细胞仪检测细胞周期和AnnexinV观察TPT对HL6 0 /VCR细胞的抑制效应和促凋亡作用。WesternBlot检测bcl 2、活化的caspase 3和P糖蛋白 (Pgp)的表达变化。 结果　经TPT处理后的HL6 0 /VCR细胞 ,在光镜和AO/EB染色中均可见到典型的凋亡细胞形态学改变 ,并具有时间和剂量依赖性 ;AnnexinV染色后能检测到早期凋亡细胞 (2 6 .8% ) ,细胞周期显示 :G1期细胞比例增高 ,S期减低 ,并有 2 1.8%凋亡峰 ;TUNNEL能检测到 (6 2 .2± 3.5 ) %的阳性细胞 ;伴有活化的caspase 3的表达和bcl 2的下调 ,而Pgp的表达在细胞凋亡前后无变化。结论　TPT能诱导白血病耐药细胞凋亡 ,该过程伴有caspase 3的活化和bcl 2的表达下调。     

高三尖杉酯碱诱导急性白血病原代细胞凋亡和杀伤作用的研究

目的：探讨高三尖杉酯碱（HHar）对AML的疗效明显优于ALL的可能机制。方法：以成人AL原代细胞为研究对象，采用高、中、低三种浓度梯度对HHar进行研究。采用光镜、扫描电镜下观察细胞凋亡的形态变化，透射电镜下观察细胞超微结构改变，DNA凝胶电泳、二苯胺法、流式细胞术等方法，证实HHar确可诱导AL原代细胞凋亡。尔后采用光镜计数细胞凋亡率、二苯胺定量测定凋亡细胞的DNA片段化率及台盼蓝当然光镜下计数坏死率三种方法来观察HHar对ALL及AML原代细胞的诱导凋亡和杀伤，得出相应的时间、剂量、效应关系，并进行对比分析。结果：HHar对AML原代细胞诱导凋亡的敏感性高于ALL原代细胞。结论：Hhar对AML原代细胞诱导凋亡的敏感性高是其临床疗效优于ALL的可能机制。     

高三尖杉酯碱诱导急性白血病原代细胞凋亡和杀伤作用的研究

目的　探讨高三尖杉酯碱 (HHar)对AML的疗效明显优于ALL的可能机制。方法　以成人AL原代细胞为研究对象 ,采用高、中、低三种浓度梯度对HHar进行研究。采用光镜、扫描电镜下观察细胞凋亡的形态变化 ,透射电镜下观察细胞超微结构改变 ,DNA凝胶电泳、二苯胺法、流式细胞术等方法 ,证实HHar确可诱导AL原代细胞凋亡。尔后采用光镜计数细胞凋亡率、二苯胺定量测定凋亡细胞的DNA片段化率及台盼蓝染色光镜下计数坏死率三种方法来观察HHar对ALL及AML原代细胞的诱导凋亡和杀伤 ,得出相应的时间、剂量、效应关系 ,并进行对比分析。结果　HHar对AML原代细胞诱导凋亡的敏感性高于ALL原代细胞。结论　Hhar对AML原代细胞诱导凋亡的敏感性高是其临床疗效优于ALL的可能机制     

环孢霉素A增强羟基喜树碱、三尖杉酯碱对HL-60细胞凋亡的诱导

目的:观察环孢霉素A(CsA)对羟基喜树碱(HCPT)、三尖杉酯碱(HT)诱导白血病细胞凋亡的调节作用.方法:应用细胞形态学检查,DNA凝胶电泳及流式细胞术分析检测.结果:CsA3μg/ml对HL-60细胞生长无明显影响,也没有促进凋亡作用.HL-60细胞加上HCPT0.5μg/ml、HT0.1μg/ml作用4h,细胞凋亡率分别为(35.7±1.3)%和(31.9±0.8)%.先以CsA3μg/ml作用HL-60细胞24h,洗涤,然后再加HCPT0.5μg/ml、HT0.1μg/ml继续作用4h,细胞凋亡率明显增加,达(47.5±0.5)%(P<0.01)和(44.3±0.8)%(P<0.01).CsA+HCPT及CsA+HT组分别比单独HCPT、HT组诱导的DNA梯状条带亮度增强.CsA3μg/ml对HL-60细胞的bcl-2蛋白表达以及周期分布均无影响.结论:CsA能提高HL-60细胞对HCPT或HT诱导凋亡敏感性.提示临床上应用CsA联合HCPT或HT治疗白血病,可能取得较好疗效.     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡的研究

明确化疗药物诱导急性白血病细胞凋亡的规律及在急性白血病化疗中的意义。方法应用光镜、电镜,结合ＤＮＡ电泳及流式细胞仪分析技术,观察阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）诱导的急性髓系白血病细胞系ＨＬ－６０凋亡模式。结果Ａｒａ－ｃ诱导的细胞凋亡在０～３６小时过程中持续存在,逐渐增强,其诱导效率呈剂量性增强。而且,经其他６种化疗药物诱导后,ＨＬ－６０以及经ＤＡ方案化疗的１例急性髓系白血病患者外周血白细胞,均表现典型的ＤＮＡ梯形图谱。进一步分析表明,化疗诱导凋亡与其下调ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达有关。结论化疗药物诱导的细胞凋亡是化疗的关键机制     

康莱特诱导HL60细胞凋亡的实验研究

目的 探讨康莱特诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法 应用形态学、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Annexin V标记等方法检测细胞凋亡的发生,应用RT－PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2、c-myc表达的变化。结果 康莱特对人早幼粒白血病细胞系HL60细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡;细胞固缩,核染色质聚集或断裂;DNA凝胶电泳显示清晰的DAN Ladder;流式细胞术检测在G1期之前出现sud-G1峰,凋亡率最高为12．05％;Annexin V标记的方法检测凋亡时发现坏死和凋亡共存。在HL60凋亡过程中,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强,c-myc和bcl－2含量变化不大。结论 除了坏死,凋亡也是康莱特抑制之一。康莱特诱导HL60细胞凋亡主要与促进Fas基因表达有关。     

羟基喜树碱诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨国产羟基树碱（ＨＣＰＴ）对ＨＬ－６０细胞的作用机制和规律。方法：应用细胞形态学检查，ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果：ＨＣＰＴ１ｍｇ／Ｌ和５ｍｇ／Ｌ作为ＨＬ－６０细胞４ｈ细胞凋亡率分别为５０．６％和６８．６％。光镜检查见细胞核固缩、碎裂；电镜检查见染色质向核周边凝集。ＤＮＡ电泳显示典型的梯状条带。当ＨＣＰＴ浓度超过５ｍｇ／Ｌ或作用超过４ｈ，细胞凋亡率无明显增加，出现饱和现象。ＨＬ     

TNF诱导HL—60细胞凋亡的初步观察

目的为了研究肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的抗肿瘤机制,观察了ＴＮＦ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。方法用流式细胞分析及ＤＮＡ电泳分析检测ＨＬ－６０细胞发生凋亡的情况。结果ＴＮＦ（４０μｇ／Ｌ）处理细胞后,流式细胞仪分别在６０ｈ,８４ｈ出现凋亡特有的ＡＰ峰（分别占６３．５％、８５．６％）;琼脂糖凝胶电泳显现出特征性的ＤＮＡ“梯状”带。结论ＴＮＦ（４０μｇ／Ｌ）具有诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。推测ＴＮＦ的抗肿瘤作用可能与诱导细胞凋亡有关     

HL-60细胞高三尖杉酯碱诱导后CD44表达变化及机制的研究

目的:研究高三尖杉酯碱(homohar-ringtonine,HHT)诱导HL-60细胞分化后CD44表达变化及其与细胞周期调控的关系,探讨HHT的作用机制。方法:建立HHT诱导分化模型,瑞氏染色观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,流式细胞术检测细胞表面CD11b表达及细胞周期变化,RT-PCR检测CD44、p27、p21和Cyclin E基因在mRNA水平的表达变化。结果:MTT实验显示,HHT对HL-60细胞产生增殖抑制作用,HL-60细胞G0/G1期细胞百分比明显上升,S期细胞百分比明显下降,P<0.05。半定量分析PCR扩增产物光密度相对表达量显示,HHT诱导后HL-60细胞中CD44基因表达逐渐减弱,p27和p21基因逐渐增强,Cyclin E基因逐渐减弱。CD44与p27表达呈明显负相关,r=-0.686,P<0.05。结论:HHT可能通过下调CD44基因,进而提高p27和p21表达,抑制Cyclin E活性而对HL60细胞产生诱导分化作用。     

铜皮石斛水提液诱导 HL 60细胞凋亡的研究

目的：探讨铜皮石 斛水提液的抗癌活性及其诱导急性白血病细胞凋亡 的发生机制。方法：运用MTT 方法检测铜皮石斛对体外肿瘤细胞的细胞毒作用;应用光镜、电镜,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪和蛋白印迹免疫法观察它诱导的HL－60细胞的凋亡模式。结果：HL－60细胞在铜皮石斛水提液作用下发生细胞凋亡,凋亡细胞表现为细胞固缩、核染色质凝聚,并出现凋亡小体。铜皮石斛水提液（内含干药6．25mg/ml）作用24－72h,细胞DNA裂解片段呈现典型的梯度条带。凋亡抑制基因bcl－2的表达在药物（6．25mg/ml）作用6－12h时增高,24h后开始下降。结论：铜皮石斛的抗癌活性与诱导细胞凋亡有关。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞的编程性细胞死亡

目的探讨高三尖杉酯碱诱导人白血病细胞系K562细胞编程性细胞死亡的作用。方法将不同浓度高三尖杉酯碱加入K562细胞培养体系，采用光镜、电镜和电泳方法观察药物处理后K562细胞的编程性细胞死亡。结果高三尖杉酯碱（2μg／ml～200μg／ml）能明显诱导K562细胞的编程性细胞死亡，药物处理后24h和36h时死亡细胞所占比例较高。光镜下该类细胞体积变小，核染色质凝聚，核碎裂。电镜下见该类细胞核膜完整，核染色质向边缘集中，形成致密染色质块。DNA电泳示小片段DNA明显增加，微呈梯形外观。结论高三尖杉酯碱能诱导人白血病K562细胞系的编程性细胞死亡。     

多西他赛诱导HL60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨多西他赛诱导HL60细胞凋亡的作用机制。方法：应用形态学方法、流式细胞术、DNA凝胶电泳和Annexin V标记等方法检测细胞凋亡的发生，应用RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2和c-myc表达的变化。结果：多西他赛对HL60细胞的生长有明显的抑制作用。多西他赛使细胞分裂阻滞于G2M期，并诱导肿瘤细胞发生凋亡：具有典型的凋亡形态，细胞固缩，核染色质呈周边凝聚，形成凋亡小体，胞膜完整；DNA凝胶电泳呈凋亡特有的ladder带；FCM检测出现Sub-G1峰，0．1μmol／L多西他赛作用72h的apo％最高为33．46％；凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强，bcl-2和c-myc无明显变化；结论：多西他赛可诱导HL60细胞凋亡，可能主要与促进Fas基因表达有关。