显色原位杂交和免疫组织化学检测乳腺癌HER2/neu基因状况和蛋白表达的对照性研究

目的探讨显色原位杂交（CISH）在检测乳腺癌中HER2／neu基因扩增上的作用。方法挑选乳腺浸润性导管癌患者组织石蜡蜡块（回顾性255例,前瞻性271例）,进行免疫组织化学（IHC）、CISH检测。15例回顾性标本送往德国HERA检测中心进行FISH检测。结果（1）回顾性病例中IHC阳性3＋者CISH基因扩增率为91．6％（120／131）,IHC2＋者CISH基因扩增率为56．5％（39／69）,IHC与CISH检测结果符合率为81．2％（207／255）,两者明显相关（P〈0．01）。（2）前瞻性病例中IHC蛋白过表达率31．7％．CISH基因扩增率27．3％。IHC3＋者CISH基因扩增率为91．4％（53／58）,IHC2＋者CISH基因扩增率为46．4％（13／28）,IHC与CISH检测结果符合率为89．7％（243／271）,两者明显相关（P〈0．01）。（3）经德国检测中心荧光原位杂交（FISH）检测的15例中14例和CISH结果完全一致,1例检测失败,而CISH为无扩增。（4）CISH检测基因扩增与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）表达明显负相关（P值均〈0．01）。结论CISH检测HER2基因扩增结果与IHC检测蛋白过表达及FISH结果高度一致,CISH是检测HER2基因扩增的一项新技术。     

荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因状态

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）,与免疫组织化学（IHC）染色（3＋）和（2＋）检测HER2基因状态的结果的一致性、导致两者差异的可能原因及FISH检测HER2基因状态的必要性和可行性。方法 采用PathVysion^TM探针试剂盒,以FISH方法,对28例IHC EnVision法染色分别为（3＋）、（2＋）、（1＋）和阴性（-）的乳腺癌石蜡切片标本进行HER2基因状态的检测。结果 HER2表达（3＋）的12例标本中,10例HER2基L大1扩增,其中2例为17号染色体多体,另2例无扩增的病例均为多体;IHC为（2＋）的10例标本中,7例为HER2基因扩增,其中1例为多体,另3例无扩增病例中2例为多体;IHC为（1＋）的3例标本均无HER2基因扩增,其中1例为多体;IHC（-）的3例标本均无基因扩增,其中1例为多体。结论 IHC是初步筛查HER2状态的首选方法;因IHC（2＋）与FISH检测结果差异较大,所以这类患者应做FISH确诊;IHC（3＋）存在假阳性,主要原因可能是由于17号染色体非整倍体,必要时这类患者也应做FISH。     

乳腺癌HER2荧光原位杂交基因扩增与HER2免疫组织化学膜完整性表达模式的相关性

目的探讨乳腺癌HER2荧光原位杂交(FISH)基因扩增的病例与免疫组织化学(IHC)HER2完整膜表达模式的相关性, 以提高HER2 IHC判读的准确性和可重复性。方法收集湖南省岳阳市中心医院2019年12月至2022年7月140例按照《乳腺癌HER2检测指南(2014版)》IHC判读为HER2 2+的浸润性乳腺癌病例, 对其按照《乳腺癌HER2检测指南(2019版)》IHC判读标准(是否存在膜完整表达模式)进行重新分组, 分析FISH检测结果与IHC中HER2膜表达完整程度之间的相关性。结果 140例病例中HER2 IHC具有连续膜完整性且FISH检测阳性41例;具有连续膜完整性但FISH检测阴性20例;不具有连续膜完整性而FISH检测阳性2例;不具有连续膜完整性且FISH检测阴性77例。HER2 FISH阳性病例与HER2 IHC连续膜完整表达模式具有相关性(κ=0.669, P<0.001)。HER2 IHC具有异质性且FISH阳性病例10例, 此10例中IHC肿瘤细胞膜完整表达区HER2均扩增, 而肿瘤细胞膜无完整表达区仅有1例HER2扩增。细胞膜完整表达区HER2平均拷...     

显色原位杂交技术在乳腺癌HER-2/neu原癌基因检测上的应用及意义

对于检测常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中HER-2／neu原癌基因的核苷酸序列技术方法而言,荧光原位杂交法（FISH）一直是公认比较敏感和经典的检测方法。而显色原位杂交法（chromogenic in situ hybridization,CISH）作为一种核酸原位分子杂交技术方法,也可用于常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中的HER-2／neu原癌基因的检测。     

HER2免疫组织化学1＋浸润性乳腺癌的基因扩增状态和mRNA表达分析北大核心CSCD

目的探讨HER2免疫组织化学（IHC）1＋乳腺癌患者的基因扩增状态和原位HER2 mRNA表达情况,为精准检测HER2及相关临床策略的修订提供初步参考数据。 方法抽取北京协和医院2011至2013年间手术获取的非特殊型浸润性乳腺癌HER2 IHC 1＋存档蜡块标本65例,制作组织芯片,分别采用荧光原位杂交（FISH）和RNAscope方法检测其HER2基因状态和原位mRNA表达水平。如原发灶HER2的FISH结果不确定或阴性但mRNA高表达,再以FISH复检其淋巴结转移灶的HER2基因状态。结果在65例标本中,FISH阳性4例（6.2%）,其中2例为HER2/CEP17〉2且平均HER2基因拷贝数〉4,另2例为HER2/CEP17〈2但平均HER2基因拷贝数〉6;在此4例FISH阳性标本中,2例为mRNA高表达（RNAscope 3分）,另2例为中度表达（RNAscope 2分）。另外,在全部标本中,3例HER2/CEP17〉2但平均HER2基因拷贝数〈4,其中2例mRNA高表达（RNAscope 3分和4分）,另1例mRNA中度表达（RNAscope 2分）。未见HER2基因状态及mRNA表达与临床病理特征（肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、脉管癌栓）之间存在明显相关性（P均〉0.05）。结论在本组HER2 IHC 1＋乳腺癌中检出了部分FISH阳性的标本,其mRNA也有一定程度的表达,可判断为抗HER2治疗的潜在获益者。鉴于精准分子分型对于乳腺癌临床处理及相关诊疗策略制定具有重要意义,后续有必要进行大样本量的验证。     

乳腺癌HER2蛋白表达阳性者的基因状态分析

目的探索中国大陆女性乳腺癌HER2蛋白过表达人群中HER2基因状态、蛋白表达与基因扩增的一致性、17号染色体非整体性的发生情况及其意义。方法采用PathVysion^TM探针试剂盒,以荧光原位杂交（FISH）方法,分析经免疫组织化学（IHC）方法（HercepTest^TM试剂盒）确认的120例HER2蛋白表达阳性（IHC2＋者42例,IHC3＋者78例）的乳腺癌石蜡切片标本的HER2基因状态和17号染色体非整体性的发生率。结果HER2表达IHC2＋的标本中,基因扩增率76．19％（32／42）,其中低度扩增（比值2～4）26．19％（11／42）,中度扩增（比值4—10）41．62％（20／42）,高度扩增（比值〉10）2．38％（1／42）;IHC3＋的标本中,基因扩增率91．03％（71／78）,其中低度扩增11．54％（9／78）,中度扩增61．54％（48／78）,高度扩增17．95％（14／78）。全部病例中具有17号染色体非整体性者69．17％（83／120）,包括亚二体性（17号染色体平均数≤1．75）11．67％（14／120）、低多体性（17号染色体平均数2．26～3．75）43．33％（52／120）和高多体性（17号染色体平均数≥3.76）14．17％（17／120）。IHC2＋病例中17号染色体非整体性59．52％（25／42）,包括亚二体性7．14％（3／42）、低多体性42．86％（18／42）和高多体性9．52％（4／42）;IHC3＋病例中17号染色体非整体性74．36％（58／78）,包括亚二体性14．10％（11／78）、低多体性43．59％（34／78）和高多体性16．67％（13／78）。IHC2＋者FISH阳性以HER2基因中、低度扩增为主,而IHC3＋者则呈中、高度基因扩增的趋势,两者差异有统计学意义（P=0．0003）。IHC3＋中,7例FISH阴性中6例有17号染色体非整体性;IHC2＋中,10例FISH阴性中5例有17号染色体非整体性。结论在本组中国大陆女性乳腺癌人群中,IHC3＋与FISH阳性的一致性较高;IHC2＋者FISH阳性率高于国外研究者的数据;HER2蛋白阳性乳腺癌中17号染色体非整体性发生比例较高;IHC2＋和3＋者都具亚二体性、低多体性和高多体性特征,且两者均以低多体性为常见;IHC2＋者的HER2基因扩增多为中、低度扩增,而IHC3＋中FISH阳性者则以高比值者居多。IHC3＋而FISH阴性的主要原因为17号染色体非整体性。     

亮视野原位杂交技术在乳腺癌HER2检测中的应用

随着乳腺癌分子发病机制的快速发展,乳腺癌的治疗策略发生了极大变化.个体化治疗,尤其是分子靶向治疗的快速发展使得组织分子靶点的检测成为关键环节.分子检测需求量的增加使得多种原位杂交技术应用于临床实验室.亮视野原位杂交在这方面有很多优势,检测乳腺癌HER2基因状态已成为亮视野原位杂交技术发展的主要推动力.     

亮视野原位杂交技术在乳腺癌HER2检测中的应用

随着乳腺癌分子发病机制的快速发展,乳腺癌的治疗策略发生了极大变化.个体化治疗,尤其是分子靶向治疗的快速发展使得组织分子靶点的检测成为关键环节.分子检测需求量的增加使得多种原位杂交技术应用于临床实验室.亮视野原位杂交在这方面有很多优势,检测乳腺癌HER2基因状态已成为亮视野原位杂交技术发展的主要推动力.     

乳腺癌HER2与TOP2A的表达及其相关性

目的 探讨乳腺癌患者HER2与TOP2A基因及蛋白的表达情况及其表达的相关性。 方法 采用免疫组织化学方法与荧光原位杂交（FISH）方法,检测58例乳腺癌中HER2及TOP2A的基因及蛋白表达情况,并分析其相关性。 结果 58例乳腺癌患者,HER2评分：0分11例（11/58,19.0%）,1⁺19例（19/58,32.8%）,2⁺13例（13/58,22.4%）,3⁺15例（15/58,25.8%）;TopoⅡα评分：0分28例（28/58,48.3%）,1⁺22例（22/58,37.9%）,2⁺8例（8/58,13.8%）。HER2基因扩增19例（19/58,32.8%）,HER2基因无扩增39例（39/58,67.2%）;TOP2A基因扩增11例（11/58,19.0%）,TOP2A基因无扩增47例（47/58,81.0%）。免疫组织化学方法检测HER2与FISH检测HER2的结果明显相关,其相关系数r_s=0.80（P<0.05）;免疫组织化学方法检测TopoⅡα与FISH检测TOP2A结果相关,其相关系数r_s=0.50（P<0.05）;FISH检测HER2与TOP2A的结果明显相关,相关系数r_s=0.69(P<0.05)。 结论 HER2和TOP2A在乳腺癌中的扩增具有高度一致性,TOP2A的扩增及表达可能依赖于HER2的扩增及表达。     

中国人40842例胃腺癌HER2多中心检测结果分析北大核心CSCD

目的分析中国人胃腺癌HER2检测阳性率、其影响因素及意义。方法采用多中。tk,回顾性研究,共收集23家单位2013--2016年胃腺癌手术及活检样本的HER2检测结果．统计实际检测的胃腺癌HER2阳性率,比较HER2表达与临床病理特征之问的关系,同时分析影响实际HER2阳性率的因素。结果共收集胃腺癌HER2检测结果40842例,中位年龄62岁,男女比例为2．6：1．0。实际HER2阳性率为8．8％（3577／40842）;HER2阳性与标本类型、肿瘤部位、Lauren分型和分化程度相关（P值分别为：0．009、0．001、〈0．01、〈0．叭）;同一患者两次检测结果比较,发现HER2表达不一致占7．6％（48／635）;各单位不同年份间HER2阳性率变化幅度在2％-10％之间：HER2免疫组织化学染色2＋病例再进行原位杂交检测比例（10％,810／8156）不高,不同单位的原位杂交检测比例差别大（0—100％）。结论中国人胃腺癌HER2表达与临床病理特征相关．两次检测和原位杂交检测比例是影响实际HER2阳性率的重要因素。该研究数据和结果可以基本反映中国人胃腺癌HER2检测的真实状态。     

实时荧光PCR法检测HER2基因扩增方法的建立

目的探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER2）基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性。方法收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况。选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法。结果检测阳性标本72例,阴性样本419例。该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74。与荧光原位杂交法（FISH）检测结果相比,二者具有较好的一致性。结论双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景。     

双探针显色和荧光原位杂交法检测乳腺癌HER2基因状态和17号染色体的分析

目的 通过与荧光原位杂交(FISH)比较,评估双探针显色原位杂交(双探针CISH)法在诊断女性乳腺浸润性导管癌HER2基因状态中应用的可靠性,同时探讨17号染色体多倍体对原位杂交诊断HER2基因状态时可能产生的影响.方法 收集146例乳腺癌组织的常规石蜡包埋标本,分别用欧盟(CE)认证的FISH(146例)及CISH(73例)HER2/17号染色体着丝粒(CENl7)双探针试剂盒技术,对肿瘤标本的HER2基因状态进行检测,并按照2007年美国临床肿瘤协会及美国病理家协会(ASCO/CAP)标准分别用计算HER2基因拷贝数和(或)计算HER2/CENl7比值的方法对结果进行分析.结果 在同时进行FISH和双探针CISH检测的73例标本中发现,两种技术对HER2阴性和阳性的诊断符合率分别为91.7%(33/36)和97.4%(37/38),两者的总体符合率为95.9%(70/73);在对146例FISH结果的计数分析中,计数HER2基因拷贝数得出不确定诊断的病例量是计数HER2/CENl7得出不确定诊断病例量的1.6倍(13/8);此外,在FISH和CISH结果中按拷贝数计数为阳性的病例与在按比值计数时却为阴性病例的不吻合率分别为4.8%(3/63)和3.O%(1/33);同时在FISH HER2阳性病例(HER2/CENl7)中多倍体发生率为63.5%(40/63,P=0.002),高于阴性者中多倍体的发生率(37.3%,28/75).结论 双探针CISH技术检测乳腺癌HER2基因状态的结果和FISH技术检测的结果非常一致,提示两种技术临床诊断价值相近,并且同步检测并计数HER2和17号染色体有助于明确HER2基因状态.     

不同保存年限乳腺癌石蜡标本中HER-2 FISH检测结果的比较

正乳腺癌HER-2状态在对预后判断及筛选靶向治疗患者方面具有重要意义,因此准确检测和判读HER-2状态显得尤其重要;HER-2状态目前多用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对HER-2基因扩增进行检测,其具有敏感性高、特异性强等优点。乳腺癌HER-2检测指南(2014)[1]对标本类型、标本固定及固定液、组织切片均     

乳腺癌Her-2基因检测方法对比研究

研究表明，Her-2作为肿瘤发生的癌基因，在20％-30％的侵袭性乳腺癌中过度表达，与乳腺癌的侵袭转移及预后密切相关。近年来一种特异性的单克隆抗体药物Her—ceptin已运用于临床，并且用于筛选该类疾病，目前公认的方法有两种：即免疫组化（IHC）法和荧光原位杂交（FISH）法，但其结果之间一致性较差。我们采用美国Zymed公司生产的Her-2显色原位杂交（CISH）检测试剂，以探讨CISH法检测Her-2基因状态的临床应用价值。[第一段]     

乳腺癌HER-2/neu的免疫组织化学检测

筛选乳腺癌患者进行新药Herceptin的辅助化疗必须明确患者肿瘤HER2／neu(c-erbB-2)状态。评价HER-2／neu状态最客观的方法是原位杂交(FISH或者CISH)检测基因扩增水平，但是原位杂交方法试剂昂贵、条件苛刻，国内很难开展。由于基因扩增和蛋白过度表达的实际符合率达90％以上，可以使用免疫组织化学来代替原位杂交达到相应的检测目的，但是影响免疫组织化学的主客观因素很多，     

乳腺癌原发灶与复发/转移灶HER2低表达状态变化

目的探讨乳腺癌原发灶与复发/转移灶HER2阴性患者中HER2低表达状态的变化及临床意义。方法收集河北医科大学第四医院2015年1月至2022年1月出现复发/转移且原发灶肿瘤HER2阴性的259例乳腺癌患者资料及存档切片, 以免疫组织化学(IHC)染色法确定原发灶及复发/转移灶HER2状态, 其中IHC 2+患者均行荧光原位杂交(FISH)法进一步明确HER2状态, 将HER2 IHC 0判定为HER2-0组, IHC 1+及IHC 2+且FISH无扩增患者判定为HER2低表达组, IHC 3+及IHC 2+且FISH扩增为HER2阳性组, 并对患者进行随访。对比乳腺癌原发灶与复发/转移灶中HER2低表达患者HER2状态的变化, 并分析其临床病理特征及预后。结果乳腺癌原发灶与复发/转移灶HER2状态总体一致率60.6%(157/259, κ=0.178), 共102例(102/259, 39.4%)患者原发灶和复发/转移灶HER2状态不一致, 其中56例(56/259, 21.6%)患者原发灶HER2低表达, 复发/转移灶为HER2-0, 37例(37/259, 14.3%)患者原发灶H...     

美国临床肿瘤学会/美国病理学医师学院乳腺癌HER2检测指南简介

美国临床肿瘤学会（ASCO）和美国病理学医师学院（CAP）于2006年12月11日发布了“HER2检测临床实践指南”，目的在于改善HER2检测的准确性，以使接受HER2基因靶向治疗的患者获益，也使其他患者免受该靶向治疗药物潜在的毒性作用之害及承受不必要的经济负担。“HER2检测临床实践指南”的发布是乳腺癌患者的福音。     

荧光原位杂交检测HER2的一些优点

2006年,美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理学医师学院(CAP)联合发布了乳腺痛HEB2临床榆测指南(以下简称ASCO/CAP指南)[1],对HER2检测所涉及的相关问题进行了定义和规范.该指南中指出目前没有评价HER2水平的金标准,对免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)两种检测方法尤意推荐哪一种更好.     

显色原位杂交检测乳腺癌HER2基因扩增的应用价值

目的评估显色原位杂交（CISH）技术在检测乳腺癌标本中HER2基因扩增的应用价值。方法分别采用免疫组织化学（IHC）EnVision和CISH两种方法,检测165例乳腺癌中HER2蛋白表达及HER2基因扩增的情况。结果（1）IHC检测HER2蛋白表达阴性者107例,表达阳性1＋者24例,CISH均未检测到HER2基因扩增;（2）IHC检测HER2表达3＋者22例,CISH检测中21例呈现HER2基因的高倍扩增,仅1例呈低倍扩增,HER2基因高倍扩增及其蛋白表达之间的符合率为95．5％;（3）IHC检测HER2表达2＋者12例,CISH检测有3例HER2基因呈高倍扩增,6例呈低倍扩增,3例无扩增。结论CISH在检测HER2基因扩增与IHC检测的结果具有较高的一致性和敏感性,可以作为一种检测乳腺癌HER2基因状况的方法。     

细胞中同时检测特定标志物蛋白和基因表达方法的建立

目的在同一细胞中通过免疫组化和荧光原位杂交联合检测特定标志物的蛋白和基因水平。方法采用人乳腺癌细胞系JIMT-1作为研究对象,分别采用免疫荧光(IF)和免疫组织化学(IHC)检测JIMT-1细胞中HER2表达情况,并比对两种方法得到的HER2蛋白细胞定位和表达水平是否相同;在JIMT-1细胞中分别采用IF和荧光原位杂交法(FISH)以及两者联合检测法检测HER2蛋白和基因表达水平;在JIMT-1细胞中对HER2、Pan-CK、Ki67蛋白和基因水平进行联合检测。结果JIMT-1细胞中IF和IHC检测HER2蛋白水平和细胞定位相同;IF和FISH单独检测HER2蛋白和基因表达与两种方法联合使用的检测结果一致,IF和FISH联合检测不会影响HER2蛋白的细胞定位和表达水平的判读,同时对于HER2基因拷贝数判读无影响;通过对不同细胞定位的标志物检测,发现细胞膜、细胞浆和细胞核蛋白标志物均可联合FISH检测,并且不会影响标志物蛋白表达和定位的判读以及基因拷贝数的判读。结论采用IF和FISH联合检测可以在同一细胞中对特定标志物蛋白和基因水平同时检测。