当归、川芎和归芎药对中主要芳香酸类成分在血虚大鼠体内的代谢研究

目的:研究当归、川芎和当归-川芎药对(归芎药对)中阿魏酸、绿原酸和咖啡酸在血虚大鼠血浆、尿液和胆汁中的代谢产物。方法:采用乙酰苯肼和环磷酰胺联合复制大鼠血虚模型,血虚大鼠灌胃当归、川芎和归芎药对提取物后,采用UPLC-Q-TOF/MS联用技术,利用碰撞能量梯度(MSE)和质量亏损过滤(MDF)技术,对其血浆、尿液和胆汁中的代谢产物进行分析。结果:根据离子碎片和代谢途径,当归、川芎和归芎药对提取物中阿魏酸、绿原酸和咖啡酸在血虚大鼠血浆、尿液和胆汁中推测出原型、还原、水解、甲基化、羟基化、硫酸酯化、葡萄糖醛酸化、磺酸化、甘氨酸结合、乙酰化、半胱氨酸结合和谷胱甘肽结合等共25个代谢产物。结论:当归、川芎和归芎药对提取物在血虚大鼠体内存在多种Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,为阐明该药对及其组成药味在体内发挥疗效的功效物质基础和作用机制提供依据。     

赤芍化学成分没食子酸丙酯在大鼠体内的代谢研究

为了阐明赤芍化学成分没食子酸丙酯在大鼠体内的代谢情况,归属赤芍代谢产物的原型成分来源,该研究首次对没食子酸丙酯进行了动物体内代谢研究。灌胃给予大鼠没食子酸丙酯混悬液,收集尿液和血液,采用液质联用技术检测、鉴定没食子酸丙酯在大鼠体内的代谢产物。通过对比没食子酸丙酯和赤芍代谢产物的液质数据,归属赤芍代谢产物的来源。最终从大鼠含药尿液中鉴定没食子酸丙酯代谢产物33个,从大鼠含药血浆中鉴定没食子酸丙酯代谢产物20个,除去相同的代谢产物,共从大鼠的含药尿液和血浆中鉴定代谢产物37个,其中17个代谢产物和赤芍的代谢产物相同。它们主要为没食子酸丙酯、没食子酸丙二醇酯、没食子酸和焦没食子酸的二相结合产物。37个代谢产物中35个为没食子酸丙酯的新代谢产物,推测22个为新化合物。本研究明确了赤芍的代谢产物中有17个可以来自于没食子酸丙酯,为阐明赤芍代谢产物的来源及没食子酸丙酯在体内的代谢途径奠定基础,并有助于寻找没食子酸丙酯在体内的显效形式。     

UPLC-Q-TOF/MS法鉴定大鼠体内甘草素的代谢产物

[目的]研究甘草素在大鼠体内的代谢产物。[方法]采用静脉注射(iv)、灌胃(ig)两种给药方式,剂量20 mg/kg,收集大鼠血浆、尿液、粪便、胆汁,应用UPLC-Q-TOF/MS法鉴定甘草素的代谢产物。[结果]血浆、尿液、粪便、胆汁样品中共鉴定15种代谢产物,主要有异甘草素、(异)甘草素葡萄糖醛酸结合物和硫酸结合物、二氢异甘草素、二氢异甘草素硫酸结合物、异甘草素甲基化及甘草素脱氢的代谢产物;其主要代谢途径为异构化、葡萄糖醛酸化、硫酸化、甲基化、脱氢反应。[结论]构建的UPLC-Q-TOF/MS法可用于大鼠体内甘草素代谢产物的研究。     

丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A在大鼠体内的代谢物研究

该文采用UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱技术分析鉴定丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA在大鼠体内的代谢产物。灌药后,收集大鼠血浆和尿液。经固相萃取法处理生物样品后,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7μm）色谱柱和0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）流动相系统进行梯度洗脱;在正离子模式下对含药血浆、尿液及空白组样品进行分析。最终通过分析精确质量数据、多级质谱信息与文献报道结果比对,共从大鼠生物样品中初步检测鉴定出26个代谢产物。其中7个为丹参酮Ⅰ的代谢产物,主要代谢途径为葡萄糖醛酸化、羟基化、还原反应、去甲基化反应、甲基化、硫酸酯化以及它们的复合反应等;19个为丹参酮ⅡA的代谢产物,其主要代谢途径为羟基化、还原反应、甲基化、硫酸酯化、葡萄糖结合、葡萄糖醛酸化以及它们的复合反应。结果表明,应用UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨液质联用技术可以较为全面地阐明丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA在大鼠体内的代谢情况,可为进一步的药效学和毒理学再研究以及药物二次研发提供物质基础。     

基于 UHPLC-Q-TOF-MS 技术的洋川芎内酯A在大鼠体内的代谢产物分析

目的 分析鉴定大鼠灌胃洋川芎内酯A后血浆、尿液、胆汁及粪便内存在的代谢产物并推测其在大鼠体内的代谢途径。方法 SD (sprague dawley, SD)大鼠一次性灌胃给药后,收集不同时间(段)的血浆、尿液、胆汁及粪便,前处理后,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry, UHPLC-Q-TOF-MS)技术,对代谢物进行结构表征。结果 最终在大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中共检测到43个代谢产物,其中38个为首次在洋川芎内酯A代谢产物中分析确认,其体内代谢主要发生氧化、去甲基化、内水解和饱和双键加氢等Ⅰ相代谢,以及硫酸盐结合、谷氨酰胺结合、牛磺酸结合、半胱氨酸结合和葡萄糖醛酸化等Ⅱ相代谢。结论 本研究初步揭示了洋川芎内酯A在大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中的代谢情况,为后期洋川芎内酯A活性代谢物筛选及作用机制研究提供参考。     

桃红四物汤在痛经模型大鼠体内代谢产物研究

目的:分析桃红四物汤在痛经模型大鼠尿液、粪便、胆汁中代谢产物。方法:建立痛经大鼠模型,采用UHPLC-Q-TOFMS技术分析桃红四物汤在痛经大鼠模型中的代谢产物。结果:从桃红四物汤给药后大鼠尿液中发现并鉴定了22个代谢产物成分,粪便中发现并鉴定了4个代谢产物成分,胆汁中发现并鉴定了18个代谢产物成分。在尿液、粪便及胆汁中检测到了酚酸类、苷类、苯酞内酯类、黄酮类成分的原型及代谢物,主要发生水解、硫酸化结合、甲基化和葡萄糖醛酸化等代谢过程,其中尿液及胆汁中代谢产物较多,粪便中较少。结论:本研究为治疗原发性痛经的的桃红四物汤在体内的生物转化特点,体内作用过程、药效作用机理及物质基础提供依据。     

基于MDF的岩黄连水提物在大鼠血浆、尿液、胆汁及粪便中的代谢产物研究

采用UPLC-Q-TOF/MS研究岩黄连水提物在大鼠体内的主要代谢产物,利用质量亏损过滤(MDF)进行分析,鉴定大鼠灌胃岩黄连水提物后血浆、尿液、胆汁、粪便中的代谢产物.岩黄连水提物中脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱在大鼠不同代谢途径中推测出原型、羟基化、去甲基化、还原、去甲基化葡萄糖醛酸化与硫酸结合等多个代谢产物.     

基于UPLC-Q-TOF-MS及数据自动处理技术的 刺五加提取物中异嗪皮啶及其代谢产物分析

目的:分析大鼠灌胃刺五加提取物后血浆、胆汁、尿液和粪便中异嗪皮啶(M0)及其代谢产物。方法:健康雄性wistar大鼠按325 mg.kg-1的剂量灌胃给予刺五加提取物,分别采集给药后1,1.5,2,4,6 h肝门静脉血液并用SPE技术制备血浆;采集0～12 h胆汁并用SPE技术制备;0～12 h,12～24 h分别采集尿液和粪便样品并制备样品,采用UPLC-Q-TOF-MS技术和Metabolynx XS软件联合的方法分析。结果:在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中检测到M0,在血浆和胆汁中检测到代谢物异嗪皮啶葡萄糖醛酸苷(M1)。其中M1是首次报道的异嗪皮啶代谢产物。结论:异嗪皮啶在大鼠体内以葡萄糖醛酸形式代谢,最终又以异嗪皮啶形式排出体外。     

基于UPLC-Q-TOF-MS及数据自动处理技术的刺五加提取物中刺五加苷D及其代谢产物分析

目的:研究大鼠灌胃刺五加提取物后血浆和胆汁中刺五加苷D(M0)及其代谢产物。方法:大鼠灌胃给予刺五加提取物,分别采集给药后1h、1.5h、2h、4h、6h后肝门静脉血液和0～12h胆汁,采用UPLC-Q-TOF-MS技术结合Metabolynx XS软件,对大鼠血浆和胆汁中刺五加苷D及其代谢产物进行分析。结果:基于质谱裂解行为和文献报道,在大鼠血浆和胆汁中未检测到M0,但在血浆中检测到刺五加苷D代谢物(M1),在胆汁中检测到M1的进一步代谢物(M2)。其中M1和M2是作者未见文献报道的刺五加苷D的代谢产物。结论:刺五加苷D在大鼠体内是在去葡萄糖后,以葡萄糖醛酸化和去甲基化的形式被代谢。     

大鼠灌胃毛橘红醇提物血浆中柚皮苷、柚皮素及其代谢产物液质分析

目的:分析大鼠灌胃毛橘红醇提物后血浆中柚皮苷、柚皮素及其代谢产物。方法:健康雄性SD大鼠按50 g.kg-1剂量经口给予毛橘红醇提物,1.0 h后采集眼眶静脉血液制备血浆,采用UPLC-Q-TOF的MSE功能与M etabolynxTM软件联合的方法分析。结果:在大鼠血浆中检测到柚皮苷(M1)、柚皮素(M2)、柚皮苷5-O-葡萄糖醛酸苷(M3)、柚皮苷4′-O-葡萄糖醛酸苷(M4)、柚皮素葡萄糖醛酸苷(M5)、柚皮苷4′-O-硫酸酯(M6)、羟基化柚皮素甲醚(M7)、柚皮素葡萄糖醛酸基和硫酸酯基共价结合物(M8)、羟基化柚皮素葡萄糖醛酸苷(M9)。其中M3,M4,M6为首次报道的柚皮苷代谢物,M7,M9为首次报道的柚皮素代谢物。结论:柚皮苷、柚皮素在大鼠体内以葡萄糖醛酸化、硫酸化的形式被代谢,柚皮素还以氧甲基化、羟化葡萄糖醛酸化的形式被代谢。     

大鼠静脉注射丹酚酸B后代谢产物的鉴定及血浆药动学研究

目的：鉴定丹酚酸B静注后在大鼠体内的代谢产物并对主要代谢物进行定量。方法：应用LC—IT／TOF—MS对大鼠胆汁、血浆和尿液中的代谢产物进行分析鉴定;应用LC—MS／MS对两个主要代谢产物进行定量,得到血浆药时曲线。结果：在大鼠胆汁、血浆和尿液中,共发现了九种代谢产物,包括丹酚酸B的甲基化产物,紫草酸及紫草酸的脱羧和甲基化产物,丹酚酸s及其脱水产物;药动学研究表明紫草酸和单甲基一丹酚酸B的t1,：都较小,单甲基一丹酚酸B与紫草酸相比有较大的AUC。结论：丹酚酸B静注后,在大鼠体内共发现了9种代谢产物,绘制了代谢通路图并对紫草酸和单甲基一丹酚酸B的药物代谢动力学进行了研究,阐明了丹酚酸B在大鼠体内主要的代谢方式是甲基化。     

丹酚酸B大鼠体内代谢产物及途径分析

目的:研究分析丹酚酸B在大鼠体内的代谢产物及途径。方法:取SD大鼠12只,分为两组。用于收集空白血浆、胆汁、尿液样品的大鼠各2只;尾静脉注射丹酚酸B(100 mg·kg-1)后,用于收集血浆、胆汁、尿液中丹酚酸B代谢产物的大鼠各2只;采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF)联用技术,对处理后的各样品进行检测,并对代谢产物进行定性与结构鉴定分析。结果:根据质谱信息,共检测到大鼠体内丹酚酸B相关代谢产物11个,其中血浆样品中检测到丹酚酸B酯键水解等2个代谢产物;胆汁样品中检测到丹参素、紫草酸和紫草酸的甲基化物等5个代谢产物;尿液样品中检测到丹酚酸B甲基化和硫酸化等4个代谢产物。结论:丹酚酸B可在大鼠体内代谢为丹参素等代谢产物;依据检测的代谢产物,推测丹酚酸B代谢反应位置主要在酯键和五元环上,代谢途径主要有酯键水解、分子内脱水、脱羧、羟化、甲基化和硫酸化等。     

Metabolite Characterization of Penta-O-galloyl-??￠-D-glucose in Rat Biofluids by HPLC/QT of MS

Objective: To understand the in vivo metabolic fate of 1,2,3,4,6-Penta-O-galloyl-β-d-glucose(PGG)naturally existed in many medicinal herbs and food plants such as Rhus chinensis,Paeonia suffruticosa,Paeonia lactiflora and Mango.Methods: The metabolites of PGG in rat biofluids were characterized using high performance liquid chromatography combined with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry(HPLC-QTOF-MS).Results: Ten metabolites in urine,five metabolites in feces and two metabolites in plasma,were observed when the rats were administrated with a single intravenous injection of PGG(20 mg/kg).Conclusion: PGG is firstly metabolized to gallic acid,then gallic acid undergoes sulfation,glucuronidation and methylation by rat liver.The determination of metabolites and the proposed metabolic pathway of PGG in vivo will be benefit to gain deeper insights into its pharmacological activities.     

Eleven Absorbed Constituents and 91 Metabolites of Chuanxiong Rhizoma Decoction in Rats

Objective: Chuanxiong Rhizoma (CR, the dried rhizomes of Ligusticum chuanxiong) is a well?known traditional Chinese medicine that promotes qi to activate blood, dispels wind, and relieves pain. To date, more than 118 constituents of CR have been isolated and identified. However, the in vivo mechanism of CR decoction is unclear and needs further investigation. In addition, to clarify the effective forms of CR, it is essential to reveal the absorbed constituents and metabolites of CR. Materials and Methods: The absorbed constituents and metabolites in urine and plasma samples of rats orally administered with CR decoction were screened and characterized using a high?performance liquid chromatography with diode array detector and combined with electrospray ionization ion trap time?of?flight multistage mass spectrometry technique. Results: In total, 102 compounds, including 11 absorbed constituents(eight phthalides and three phthalic acids) and 91 metabolites(71 phthalide-related and 20 phenolic acid-related), were detected in drug-containing rat urine and plasma samples, among which 33 were new metabolites of either CR or its constituents. Based on the structures of these metabolites, six phthalides (ligustilide, senkyunolide I/H, senkyunolide J/N, and butylidenephthalide) and three phenolic acids (ferulic acid, isoferulic acid, and caffeic acid) were proposed as their precursors. They were also deduced to be the main absorbed constituents of CR decoction, which should have closer relationships with its pharmacological effects than other constituents. Phthalide-related metabolites were formed through the metabolic reactions of hydration, hydroxylation, cysteine conjugation, acetylcysteine conjugation, methanethiol conjugation, mercaptomethanol conjugation, glucuronidation, and sulfation, whereas the phenolic acid-related metabolites were mainly formed by glucuronidation and sulfation. Conclusions: Six phthalides and three phenolic acids were shown to be the main precursors of the metabolites of CR, and 33 compounds were new metabolites of either CR or its constituents. These results are helpful for further understanding of the in vivo mechanism and effective forms of CR.     

当归补血丸中阿魏酸溶出度测定

目的:对当归补血丸中阿魏酸进行溶出度测定,以控制其内在质量.方法:选择桨法,采用高效液相色谱法(HPLC)测定当归补血丸在不同取样时间点下的溶出液中阿魏酸含量,计算累积溶出率,SAS软件拟合Weibull分布模型,并提取溶出参数.结果:当归补血丸中的阿魏酸在4h内溶出达到95％,溶出曲线符合Weibull分布模型,阿魏酸的溶出参数T50,Td分别为47,69 min.结论:该溶出度测定方法简便易行,准确可靠,可以用于当归补血丸的质量控制.     

高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量

目的建立测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量的高效液相色谱串联质谱方法。方法药物提取物样品经甲醇-水(1∶1,V/V)溶液溶解、离心、净化后过0.45μm滤膜,血清样品适当稀释、过膜后用高效液相色谱串联质谱法测定。色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm),茯苓酸流动相为乙腈-0.5mmol/L乙酸铵水溶液(9∶1,V/V),阿魏酸和芍药苷以乙腈-5mmol/L乙酸铵水溶液为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,采用电喷雾离子源,负离子模式,干燥气温度350℃,干燥气流速12L/min,检测方式为多反应监测。结果当归芍药散中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸分别在0.1~20.0μg/mL、1~100μg/mL、0.1~20.0μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率高,重复性好。当归芍药散提取物中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸含量分别为(127.6±14.9)μg/g、(6081.8±468.0)μg/g和(14.7±0.75)μg/g,当归芍药散含药血清中阿魏酸和芍药苷含量分别为(0.026±0.004)μg/g和(0.61±0.07)μg/g。结论本研究建立的方法样品处理简单,方法特异性强,精确度高,重复性偏差小,回收率高,可用于当归芍药散提取物和含药血清中活性成分的质量控制。     

基于UPLC-Q-TOF-MSE分析芍枣胶囊在大鼠体内的代谢产物

目的:研究芍枣胶囊在抑郁模型大鼠体内的代谢产物,并归纳和总结其代谢途径。方法:大鼠灌胃芍枣胶囊提取液后,收集血液、尿液、粪便和全脑并进行预处理,采用UPLC-Q-TOF-MS~E分析,流动相0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱,流速0.6m L·min~(-1),柱温45℃,在负离子模式下获得MS/MS~E质谱信息,通过Metabolynx软件处理后对芍枣胶囊中活性化合物在血浆、尿液、粪便和全脑中的代谢产物进行推测。结果:大鼠体内共鉴定得到代谢产物7个,其中芍药苷的2个,斯皮诺素的3个,3,6'-二芥子酰基蔗糖的2个。结论:芍枣胶囊中活性化合物芍药苷,斯皮诺素和3,6'-二芥子酰基蔗糖主要代谢产物存在于血液、尿液和粪便中,代谢途径主要有脱糖水解、甲基化、脱羰基等。     

Simultaneous Quantitative Analysis of Five Components in Angelica sinensis and Angelica acutiloba Acclimatized Growing in Vietnam by High-Performance Liquid Chromatography with Photodiode Array Detector

Background: Chinese Danggui(Angelica sinensis) and Japanese Danggui(Angelica acutiloba) are evaluated as the same in using and critical of quality control in Vietnamese Pharmacopoeia. In Vietnam, Japanese Danggui were acclimatized and cultivated in several regions in recent years. Despite the huge climatic difference between Vietnam and Japan, Japanese Danggui grows very well in Vietnam. However, there are no studies to assess the overall quality of this medicinal herbs. Aims and Objectives: The aim of this study is to develop a method to identify and assay simultaneously 5 component compounds of these crude herbs: chlorogenic acid, ferulic acid, scopoletin, xanthotoxin and ligustilide by high-performance liquid chromatography with photodiode array detector(HPLC-PDA). Materials and Methods: The procedure was optimized by using column Phenomenex Gemini 5 μm PR C18, 15 x 4,6 mm with the detection wavelength set at 321 nm for detector PDA and mobile phase was composed of(A) ACN and(B) aqueous solution 1% of acid acetic using a gradient elution. Analytes were performed at 30°C with a flow rate of 1.0 mL/min. Results: The developped method were fully validated for linearity, accuracy, recovery and met the validation requirements, proved practical applicability for the quality control of these herbs and related products. Conclusion: The method was successfully applied to the quantification of five markers simultaneously from collected samples.     

基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术的洋川芎内酯H在大鼠体内的代谢产物分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术对洋川芎内酯 H 在大鼠体内的代谢产物进行分析鉴定。方法 SD大鼠灌胃给药后,收集其血浆、尿液、胆汁和粪便,并对样品进行前处理。采用ThermoAccucore C₁₈色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6 μm),以体积分数0.1%乙酸-水(A相)-乙腈(B相)作为流动相进行梯度洗脱。根据准分子离子峰和碎片离子信息,结合对照品与文献报道,对大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中的原型成分及其代谢产物进行鉴定。结果 最终在大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中共检测到32个代谢产物,包括24个Ⅰ相和8个Ⅱ相代谢物。结论 洋川芎内酯 H 主要的体内代谢反应包括氧化、氢化、去羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、半胱氨酸结合、谷氨酰胺结合以及相关的复合反应等。本研究应用高分辨液质联用技术阐明了洋川芎内酯 H 在大鼠体内的代谢产物,为今后药效学和药理学研究奠定了基础。