重组日本血吸虫SjGT—Sj32蛋白诱导小鼠保护免疫的研究

应用基因工程技术分别表达出ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２,Ｓｊ３２和ＳｊＧＳＴ,用于保护性免疫的动物实验及其体液免疫机制的初步探讨。结果：与对照组相比,重组ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组,Ｓｊ３２组,Ｓｊ３２＋ＳｊＧＳＴ组均有明显的减虫效果。上述三组及ＳｊＧＳＴ组的肝脏虫卵计数的均较对照组为少。提示重组Ｓｊ３２ｋＤ蛋白可诱导小鼠产生明显的抗日本血吸虫攻击感染的保护性免疫及抗生殖免疫效果,而ＳｊＧＳＴ仅表现出一定的抗     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠免疫应答的影响

采用日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫８周时,断头取血,取脾脏,取腹腔巨噬细胞。以淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力,以ＮＯ释放量检测巨噬细胞吞噬活性,以ＥＬＩＳＡ试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的白细胞介素２（ＩＬ－２）和干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）的含量。结果表明,ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗以 １０~６ＣＦＵ剂量经皮下免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞增殖能力明显高于对照组、载体组和ＢＣＧ组（均为Ｐ＜０．０５）;小鼠腹腔巨噬细胞ＮＯ的含量明显高于对照组和载体组（均为Ｐ＜０．０１）;小鼠血清ＩＬ－２的含量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）和载体组（Ｐ＜０．０５）;而小鼠脾淋巴细胞培养上清ＩＬ－２的含量分别高于对照组４４％、载体组４８％和ＢＣＢ组４２％;小鼠血清ＩＦＮ－γ的含量分别高于对照组２０％、载体组１９％和ＢＣＧ组１３％,均有升高趋势、结果提示,ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗能明显增强小鼠的免疫应答反应,其抗感染作用一方面与ＢＣＧ本身的佐剂特性有关,另一方面与机体产生抗Ｓｊ２６－ＧＳＴ特异性抗体有关。     

IL—12对日本血吸虫重组SjGST—Sj32免疫小鼠攻击感染后虫 …

目的 观察白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）对重组日本血吸虫谷胱苷肽－Ｓ－转移酶－３２ｋＤ融合蛋白（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２）蛋白免疫小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小的影响。方法 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３６只随机分别ＩＬ－１２加ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组、ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组和磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）组，第３次免疫后４周，经腹部贴片感染１０条尾蚴，４５天后杀鼠取肝组织，常规染色，光镜下进行组织学观察及单个虫卵肉芽肿大小     

公路养路工生物膜损伤指标检测

以某公路段养路工１７３人为接触组，机关行政人员４０人为对照组，对血清过氧化脂质（ＬＰＯ）、血清唾液酸（ＳＡ）及血清谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）三项生物膜损伤指标进行了检测。结果：养路工血清ＳＡ及ＧＳＴ显著高于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００１），ＬＰＯ未见明显改变。养路工不同工龄间的ＬＰＯ、ＳＡ及ＧＳＴ测定，仅ＧＳＴ随工龄增加而增高（Ｐ＜０．０５）。不同性别间，仅ＧＳＴ男工高于女工（Ｐ＜０．０５）。吸烟对生物膜损伤指标未见明显影响。提示养路工在职业有害因素作用下，生物膜可受到一定损伤。     

HSB,GSTs和TNF血清学指标联合检测对肝癌诊断价值的临床评价

为探讨肝癌特异性ＧＧＴ同工酶区带（ＨＳＢ）、谷胱苷肽－Ｓ－转换酶（ＧＳＴｓ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）３项血清学标志物浓度改变在肝癌诊断与鉴别中的临床价值,分别对肝癌、慢性肝病和肝外肿瘤进行定量检测分析。结果,肝癌组ＨＳＢ和ＧＳＴｓ浓度均明显高于慢性肝病和肝外肿瘤组（Ｐ＜０．０１）;ＴＮＦ浓度肝癌组明显高于慢性肝病组（Ｐ＜０．００１）,但与肝外肿瘤组间无明显差异;肝癌组ＨＳＢ、ＧＳＴｓ和ＴＮＦ的阳性率分别为８８．６％、７８．１％和７４．３％,均显著高于另两组（Ｐ＜０．０１）。研究表明,ＨＳＢ定量检测优于ＧＳＴｓ和ＴＮＦ,多项指标联合分析有助于肝癌的诊断与鉴别。     

佐剂对日本血吸虫31／32kd蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋｄ蛋白（Ｓｊ３１／３２）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｉｅｆｉｎ（ＰＡＯ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２辅以福氏完全佐剂（ＦＣＡ）对小鼠保护性免疫力的影响。Ｓｊ３１／３２＋ＰＡＯ组小鼠减虫率为４３．１７％，肝减卵率为６７．０２％，Ｓｊ３１／３２＋ＦＣＡ组小鼠减虫率为２８．７４％，肝减卵率为６４．２４％，Ｓｊ３１／３２组小鼠减虫率为２６．９９％，肝减卵率为５１．     

抗链球菌壁多糖抗体对风湿性心瓣膜炎的特异

目的：探讨抗Ａ组溶血性链球菌壁多糖抗体（ＡＳＰ）在风湿性心瓣膜炎中的意义及诊断价值。方法：以最具生物活性的多糖部分作包被抗原，采用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法检测患者血清中的ＡＳＰ水平。结果：风湿性心瓣膜炎组（３１例）的ＡＳＰＩｇＧ、ＡＳＰＩｇＭ水平，ＢＩ：３．６５６±２．１９４和２．６０３±０．７４９，阳性率５８．１％和７７．４％，明显高于慢性风湿性心瓣膜病组、风湿性关节炎组、急性肾炎组、链球菌感染后状态组、病毒性心肌炎组、非风湿性瓣膜病组和正常对照组（Ｐ＜００５～Ｐ＜００００１），而后５组之间无显著差异。慢性风湿性心瓣膜病组、风湿性关节炎组的ＡＳＰＩｇＧ、ＡＳＰＩｇＭ水平高于正常对照组（Ｐ＜００５）。结论：ＡＳＰ对风湿性心瓣膜炎具有一定的特异性。     

肝硬化病人红细胞抗氧化能力及免疫功能的研究

检测３０例乙型肝炎后肝硬化失代偿期的病人红细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活力，丙二醛（ＭＤＡ）含量，红细胞Ｃ３ｂ受体及免疫复合物（ＩＣ）受体花环率。结果表明，肝硬化组红细胞ＳＯＤ、ＧＳＨＰｘ活力明显降低（Ｐ＜００１），ＭＤＡ含量明显升高（Ｐ＜００１），红细胞Ｃ３ｂ受体花环率明显降低（Ｐ＜００１），ＩＣ受体花环率明显升高（Ｐ＜００１）；肝硬化病人红细胞ＳＯＤ、ＧＳＨＰｘ活力与ＩＣ受体花环率呈负相关（ｒ１＝－０．６４，Ｐ＜０．０１；ｒ２＝－０．８７，Ｐ２＜０．０１），红细胞ＭＤＡ含量与ＩＣ受体花环率呈正相关（ｒ＝０．６４，Ｐ＜０．０１）。本结果提示，肝硬化病人红细胞抗氧化能力及免疫功能的降低对肝硬化的发展有重要影响     

EXPRESSION OF GASTRIN AND SEROTONIN IN CHRONIC ATROPHIC GASTRITIS AND GASTRIC CANCER IN COMPARISON WITH THE NORMAL

应用ＰＡＰ免疫组织化学技术对胃泌素（ｇａｓｔｒｉｎ，ＧＡＳ）和５羟色胺（ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ，５ＨＴ）在胃癌和慢性萎缩性胃炎（ＧＡＳ）中表达的免疫反应性（ＩＲ）进行了研究。结果：在正常胃粘膜ＧＡＳＩＲ（２６．５±６．２）明显高于５ＨＴＩＲ（９．２±４．３）。ＧＡＳＩＲ和５ＨＴＩＲ在胃癌明显高于正常组织。在ＣＡＧ，ＧＡＳＩＲ和５ＨＴＩＲ均显著高于正常组织（Ｐ均＜０．０１）。ＧＡＳＩＲ在低分化癌中表达增强，而５ＨＴＩＲ与胃癌的分化类型无明显相关性（Ｐ＜０．０５）。结果提示：ＧＡＳ和５ＨＴ均参与胃癌发生发展的内分泌调节，ＧＡＳ在肿瘤细胞分化过程中可能起重要作用。ＧＡＳＩＲ和５ＨＴＩＲ在ＣＡＧ中的高表达，是否与其恶性变有关，值得进一步探讨。     

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种后保护力的观察

为了探讨血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用,采用１０６ＣＦＵ和１０８ＣＦＵ重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗皮下接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠,接种后８周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后６周剖杀小鼠,计算减虫率、减卵率,同时进行虫卵肉芽肿周长和面积测量,以及抗体水平和抗原水平测定,同时设有ＰＢＳ对照组。结果表明重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫小鼠后,１０６ＣＦＵ、１０８ＣＦＵ组与对照组相比,减虫率分别为２７．３４％、１６．６４％,减卵率分别为５５．７５％、６０．５０％,虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积、免疫后血清抗体水平差别均具有非常显著意义;１０８ＣＦＵ与１０６ＣＦＵ组相比,血清抗原水平差别具有显著意义,说明血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗是一种比较理想的新型疫苗,值得进一步深入研究     

核酸疫苗Sj31BIN联合IL-12免疫抗日本血吸虫攻击感染的实验研究

目的 :在证明日本血吸虫重组蛋白酶B核酸疫苗Sj31BIN具有抗生殖免疫作用的基础上 ,联合使用IL 12 ,观察IL 12是否具有佐剂效果。方法 :分别用Sj31BIN +IL 12和IL 12免疫Balb/C小鼠。攻击感染后 6周计数成虫负荷和组织内虫卵数及肝脏表面虫卵结节数。结果 :Sj31BIN +IL 12免疫小鼠可降低成虫发育率。肝组织减卵率为5 9 74% ;肠组织减卵率为 5 9 6 0 % ;肝脏表面虫卵结节减少率为 71 30 % ;单独使用IL 12有一定的免疫保护作用。结论 :Sj31BIN +IL 12能诱导小鼠产生较强的抗生殖免疫作用。     

日本血吸虫(大陆株)26ku谷胱甘肽转移酶基因真核表达载体构建及序列分析

目的　构建日本血吸虫大陆株 2 6ku谷胱甘肽转移酶 (GST)基因真核表达质粒 pBK SjGST并进行序列分析 ,为进一步进行重组蛋白的表达及保护性免疫研究提供条件。方法　根据日本血吸虫菲律宾株 2 6kuGST核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA为模板 ,通过RT PCR合成日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGSTcDNA片段。将其克隆入 pGEM T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒pBK SjGST ,转化到大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,提取重组质粒双酶切鉴定并进行序列分析。结果　PCR、pGEM T SjGST及 pBK SjGST分别经双酶切获得一特异性基因片段 .经测序分析该片段具有一个 670bp的全基因序列 ,而其开放阅读框 (openreadingframe,ORF)为 65 7bp ,编码 2 18个氨基酸 ,并对其基因序列及编码的蛋白质进行了分析。结论　成功地构建了日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGST基因真核表达重组质粒 ,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列蛋白激酶磷酸化位点进行分析     

噬菌体随机肽库筛选日本血吸虫22.6kDa蛋白有效抗原表位的初步研究

目的：从噬菌体随机12肽库中筛选出中国大陆株日本血吸虫22.6kDa蛋白（Sj22.6kDa抗原表达的短肽分子，探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。方法：以纯化的抗日本血吸虫22.6kDa的多克隆抗体IgG为配基，对噬菌体12肽库进行5轮亲和筛选，富集特异性噬菌体，挑取克隆，经序列分析，免疫识别和动物初筛后获得阳性克隆。结果：经过5轮筛选，特异性噬菌体得到有效富集。随机挑选的24个噬菌体克隆中获得4个有效抗原表位。结论：利用噬菌体随机肽库筛选可获得类似日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位的短肽分子，这些短肽分子能诱导抗血肿虫的保护性免疫。     

日本血吸虫未成熟卵对小鼠肝肉芽肿形成的免疫学影响

目的探讨日本血吸虫未成熟卵诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚免疫的效果及其对小鼠肝肉芽肿形成的影响。方法采用未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及其不同组分抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠产生的抗病免疫能力。结果经ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫后，均可明显地降低攻击感染后免疫鼠的肝肉芽肿数目和大小。与对照组比较，上述两者免疫后的小鼠，其肝肉芽肿平均直径分别下降了２９．２６％和４９．６４％，尤以ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原的免疫效果为佳，且感染鼠脾重明显下降（Ｐ＜０．０１）。但是成熟虫卵可溶性抗原以及ＳＩＥＡ－１分部抗原免疫对降低肝卵肉芽肿数量和大小以及脾肿大程度均无明显作用，甚至刺激肉芽肿反应增强。结论ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫可诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的作用，并明显抑制虫卵肉芽肿的形成。     

日本血吸虫Rho GTPaseDNA及重组蛋白免疫保护效果研究

目的研究日本血吸虫中国大陆株Rho家族小分子G蛋白(Sj-Rho GTPase)DNA疫苗及重组蛋白疫苗免疫保护效果.方法将pcDNA3.1-SjRho GTPase DNA疫苗和pGEX-5X-3原核载体所表达的重组蛋白疫苗三次分别或联合免疫昆明鼠,3周后,每鼠感染40条尾蚴,42 d后剖杀小鼠,记数成虫和肝脏虫卵数. 结果与佐剂或空白质粒对照组相比,DNA疫苗、重组蛋白疫苗及联合免疫分别获得22.16%(P<0.01)、18.71%(P<0.05)和39.20%(P<0.001)的减虫率以及34.55%、20.07%和49.55%(P<0.001)的肝组织减卵率.结论 Sj-Rho GTPase DNA疫苗及重组蛋白疫苗均可诱导小鼠产生一定的免疫保护作用,且联合免疫方案保护效果好于单一疫苗.     

Immune responses against Schistosoma japonicum after vaccinating mice with a multivalent DNA vaccine encoding integrated membrane protein Sj23 and cytokine interleukin-12

Background The vaccination of mice with DNA encoding single candidate antigens has failed to induce significant protection against Schistosoma japonicum ( S. japonicum) challenge infections. In this study, we evaluated the feasibility of using a multivalent DNA vaccine which co-expressed S.japonicum integral membrane protein Sj23 and murine cytokine IL-12 to induce protective immune responses.Methods The plasmid pVIVO2-IL12-Sj23, a eukaryotic expression vector expressing Sj23 and murine IL-12 simultaneously, was constructed, identified, and tested for expression in vitro. Its ability to protect against S. japonicum challenge infections was analyed according to worm reduction rate and egg reduction rate after vaccination of BALB/c mice. The serum levels of specific IgG antibody were determined by enzyme-linked-immuno sorbent assay (ELISA) and Western blot analysis. Using cultured spleen cells, IFN-γ and IL-4 post-stimulation were quantified by ELISA. The phenotypes of splenocyte populations were analyzed by flow cytometry (FCM).Results The plasmid DNA pVIVO2-IL12-Sj23 was proven to express well in vitro by transient transfection of HEK-293 cells. Immunization resulted in a worm reduction rate of 45. 53% and egg reduction rate of 58.35%. ELISA and Western blot analysis indicated that immunized mice generated specific IgG against Sj23. Spleen cells showed significant increases in IFN-γ but decreases in IL-4.No significant differences in CD4^ and CD8^ subgroup ratios were observed after the challenges.Conclusions The multivalent DNA vaccine pVIVO2-1L12-Sj23 is sufficient to elicit moderate but highly significant levels of protective immunity against challenge infections. Cytokine IL-12, as a gene adjuvant, was able to enhance the Thl responses and, hence, the protective immunity.     

日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫的研究

为探讨血吸虫ＤＮＡ疫苗保护性免疫效果,首先构建、鉴定和表达日本血吸虫ＤＮＡ疫苗（ｐＣＤ－Ｓｊ３２）。实验结果表明：ｐＣＤ－Ｓｊ３２免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠能诱导产生抗日本血吸虫感染免疫力,减虫率为３５．６％～４４．４％,减卵率为３９．４％～６９．０％;１００μｇＤＮＡ一次肌肉注射,免疫后８周攻击感染组的效果好;ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞、ＩＬ－２、ＴＮＦ和ＩＮＦ－γ可能在血吸虫病免疫功能调控中起重要作用;ｐＣＤ－Ｓｊ３２能诱导宿主产生高滴度特异性抗体,并在体外能介导巨噬细胞产生抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）免疫效应。结果提示,ｐＣＤ－Ｓｊ３２有可能发展为新的预防血吸虫病的亚单位疫苗。     

树突状细胞抗日本血吸虫感染保护性免疫力的研究

目的 探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)致敏树突状细胞抗血吸虫感染的保护性免疫力。方法 利用SEA分别致敏树突状细胞和巨噬细胞，将致敏树突状细胞和巨噬细胞分别免疫BALB／C小鼠3次，攻击感染6周后计数成虫和肝脏虫卵。结果 SEA致敏树突状细胞免疫小鼠诱导27．3％的减虫率和41．5％的减卵率，明显高于SEA致敏巨噬细胞组(22．0％和30．7％)和未致敏树突状细胞及巨噬细胞组(16．3％，27．3％和11．7％，17．0％)，血清抗体水平于第6周达高峰。结论 SEA致敏树突状细胞具有抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用。     

日本血吸虫（大陆株）融合蛋白保护性免疫力的研究

采用日本血吸虫(大陆株)融合蛋白加福氏佐剂免疫小鼠,攻击感染后,不但可减少虫负荷(减虫率为29.2—51.0%),还可降低血吸虫雌虫的产卵量(减卵率为52.1—74.3%),血清抗体在初次免疫后3周即明显升高,并持续维持较高的水平。结果表明,经大肠杆菌表达的日本血吸虫重组融合蛋白能诱导抗攻击感染的保护性免疫力,可望作为混合多价疫苗的候选组份而大规模的生产。