CK-19mRNA表达与乳腺癌关系的研究

目的：探讨乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19mRNA（CK-19mRNA）的表达与手术、化疗、临床病理的关系及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR检测60例Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者手术及化疗前后外周静脉血CK-19mRNA的含量。选择20例乳腺良性疾病手术患者做为对照。结果：对照组外周血中未检出CK-19mRNA。术前乳腺癌组外周血CK-19mRNA阳性率为30．0％（18／60），与对照组比较有显著差异（P〈0．05）。术后1周内及术后化疗1周期后CK-19mRNA阳性率分别降至25．0％（15／60）和13．3％（8／60）。Ⅲ期乳腺癌CK-19mRNA的阳性表达率高于Ⅱ期（P〈0．05），CK-19mRNA的表达与激素受体、HER2表达无关（P〉0．05）。有神经及脉管受侵或淋巴结转移者CK-19mRNA的阳性表达率增高，与无神经及脉管受侵或淋巴结转移者有显著差异（P〈0．05）。结论：CK-19mRNA的表达与神经及脉管受侵以及淋巴结转移有关，与激素受体及HER2表达无关。随着肿瘤分期的增高，微转移检出率将升高。     

乳腺癌患者外周血hMAM及SBEM检测及其临床意义

目的研究乳腺癌患者外周血人乳腺珠蛋白（hMAM）及乳腺上皮粘蛋白（SBEM）的表达及临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测58例乳腺癌患者外周血hMAM mRNA及SBEM mRNA的表达，并用健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者各10例作为对照。结果hMAM及SBEM在58例乳腺癌患者外周血的阳性表达率分别为34.5%、25.9%，乳腺良性肿瘤和正常对照均无阳性表达，两者的阳性表达与患者的临床分期显著相关（P〈0.05），两者联合检测的总阳性率为41.4%（24/58），与单一标志物相比缺乏统计学意义。结论hMAM及SBEM特异性表达于乳腺癌外周血，可作为检测乳腺癌外周血肿瘤细胞标志物，并有可能在乳腺癌微转移诊断和预后判断中具有重要意义。     

乳腺癌hMAM mRNA和CD44V6 mRNA表达及临床意义

目的研究人乳腺珠蛋白(human mammoglobin,hMAM)mRNA及CD44V6 mRNA在乳腺癌中的表达,探讨它们作为乳腺癌微转移标志物的可能性.方法采用巢式逆转录聚合酶链反应(nested-RT-PCR)技术,检测乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织、乳腺良性肿瘤中hMAM mRNA及CD44V6 mRNA,检测乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者及健康志愿者外周血hMAM mRNA和CD44V6 mRNA,同时对胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌组织中hMAM mRNA的表达进行检测.结果 hMAM-mRNA在胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌组织中无表达,在乳腺癌、癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织中的阳性表达率分别为96.72%、96.72%和93.75%,3组间差异无显著性(P>0.05);CD44V6 mRNA在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织(P<0.05).乳腺癌患者外周血hMAM mRNA检出率为45.90%,Ⅳ期乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA的阳性表达率明显高于其他各组(P<0.05);而hMAM mRNA在健康人及乳腺良性肿瘤患者外周血中均无表达;CD44V6 mRNA在乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者和健康人外周血中的阳性表达率各组之间无显著性差异(P>0.05).结论 hMAM mRNA相对特异性地表达于乳腺组织,外周血检测出hMAM mRNA提示已有癌细胞进入血流,因此可能作为检测乳腺癌血道微转移的标志物;而CD44V6 mRNA作为血液中乳腺癌细胞的特异性标志物缺乏特异性.     

Pokemon mRNA在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中Pokemon mRNA的表达及其意义。方法采用原位杂交法,检测45例乳腺癌、20例癌旁乳腺组织、20例正常乳腺组织中Pokemon mRNA的表达,并对其与乳腺癌临床病理特征的关系进行分析。结果 Pokemon mRNA主要表达于乳腺癌细胞质。乳腺癌组织中Pokemon mRNA表达率为71.11%（32/45）,显著高于癌旁乳腺组织30.00%（6/20）和正常乳腺组织20.00%（4/20）,P〈0.05。有腋窝淋巴结转移组Pokemon mRNA表达率（90.00%）显著高于无腋窝淋巴结转移组（56.00%）,P〈0.05。组织学分级Ⅲ级组织Pokemon mRNA表达率（100.00%）显著高于Ⅰ级组织（53.33%）,P〈0.05。结论 Pokemon mRNA过度表达可能在乳腺癌发生中起重要作用,且与腋窝淋巴结转移及其组织学分级相关。     

乳腺癌特异性标志物人乳腺小黏蛋白的检测及临床意义

目的通过检测乳腺癌特异性的标志物人乳腺小黏蛋白（hSBEM）在良、恶性乳腺组织及外周血中表达，探讨其作为乳腺癌细胞血行转移标志物的可能性。方法应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested-RT-PCR）技术，对67例乳腺癌、癌旁正常乳腺组织，16例乳腺良性肿瘤组织和患者外周血，以及20位健康志愿者外周血hSBEM的表达进行检测；同时分析胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌和卵巢癌各5例组织中hSBEM的表达情况。结果hSBEM在乳腺癌、乳腺良性疾病及正常乳腺组织中的表达分别为92．54％（62／67）、87．50％（14／16）及88．05％（59／67），3组间差异无统计学意义（P〉0．05）；hSBEM在非乳腺癌的其他癌组织中无表达。67例乳腺癌患者外周血hSBEM检出率为50．75％（34／67），转移性及伴淋巴结转移乳腺癌患者外周血中hSBEM表达率明显高于局限性乳腺癌及无淋巴结转移者（P〈0．05）；hSBEM在健康人及乳腺良性疾病患者外周血中均无表达。hSBEM的表达与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型、ER和PR的状态无关（P〉0．05）。结论hSBEM特异性表达于乳腺组织，乳腺癌患者外周血检测出hSBEM提示已有癌细胞进入血液循环，因此可作为检测乳腺癌血行微转移的标志物。     

早期乳腺癌血清VEGF水平与骨髓微转移的相关性及临床意义

目的：检测早期乳腺癌患者血清中VEGF及骨髓标本中CK19的表达水平,探讨二者的相互关系及临床意义。方法：应用ELISA法分别检测6例乳腺纤维腺瘤及64例乳腺癌患者血清中VEGF的水平,同时抽取相应的骨髓血标本,应用实时定量逆转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测标本中CK-19的表达水平,并进行相关性分析。结果：VEGF在乳腺癌患者血清中的表达水平明显高于乳腺纤维腺瘤患者,二者差异显著（P=0.012）;在HER2阳性患者中,血清VEGF水平明显高于HER2阴性患者（P=0.016）。CK19在乳腺纤维腺瘤患者骨髓标本中未见表达,在乳腺癌患者骨髓血中,阳性表达24例（37.5%）,而骨髓中CK19阳性的乳腺癌患者血清VEGF水平显著高于CK19阴性的患者（110.46±90.65 vs 70.88±77.13,P=0.038）,且二者的表达呈正相关。结论：早期乳腺癌患者血清VEGF水平与骨髓微转移密切相关,提示VEGF可能参与了肿瘤细胞的侵袭和播散,可作为早期乳腺癌微转移的血清学指标。     

VEGF-C在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)在乳腺癌、乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织中的表达,探讨VEGF-C与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。方法选用10例正常乳腺组织、30例乳腺良性肿瘤及60例乳腺恶性肿瘤标本,以免疫组织化学及半定量反转录PCR(RT-PCR)检测VEGF-C的表达。结果在乳腺恶性肿瘤组织中,VEGF-C阳性表达率为46.7%,明显高于正常乳腺(10.0%)和乳腺良性肿瘤组织(13.3%)(P<0.01);乳腺癌中VEGF-C的阳性表达率为48.2%,明显高于乳腺叶状囊肉瘤(25.0%)(P<0.01);在伴有淋巴结转移的乳腺癌组织中,VEGF-C的阳性表达率(55.0%)明显高于没有淋巴结转移的乳腺癌组织(30.0%)(P<0.01)。结论VEGF-C在乳腺癌组织中表达明显增高,并与乳腺癌的淋巴结转移显著相关,可作为乳腺癌转移、复发的预测指标之一。     

Annexin A3 在乳腺癌中的表达及意义

[目的]探讨Annexin A3在乳腺癌中的表达及意义。[方法]通过免疫组化MaxvisionTM法和Western blot法检测50例乳腺正常组织、50例乳腺良性肿瘤、60例乳腺癌组织及50例转移淋巴结中的Annexin A3表达水平,并分析其与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小及不同分期的关系。[结果]免疫组化结果显示Annexin A3在乳腺正常组织、乳腺良性肿瘤、乳腺癌、乳腺癌转移淋巴结中的阳性表达率分别为4.0%、12.0%、65.0%、88.0%,Annexin A3在正常乳腺组织中的表达与其在乳腺良性肿瘤中的表达差异无统计学意义（χ^2=2.174,P=0.14）;Annexin A3在乳腺良性肿瘤中的表达与其在乳腺癌组织中的表达差异具有统计学意义（χ^2=31.691,P=0.000）;Annexin A3在乳腺癌组织中的表达与其在转移淋巴结组织中的表达差异具有统计学意义（χ^2=7.790,P=0.005）。乳腺瘤患者Annexin A3的表达在不同年龄、不同肿瘤大小和不同肿瘤分期中差异均无统计学意义（P〉0.05）。[结论]Annexin A3在乳腺癌及转移淋巴结中高表达,在促进乳腺癌的发生、发展及转移中可能有一定的作用。     

SBEM-mRNA与CEA在乳腺癌患者外周血表达的临床意义

目的：通过检测人类原发性乳腺癌患者外周血中乳腺小粘蛋白（SBEM）mRNA和癌胚抗原（CEA）的表达情况，同时结合患者其他相关临床病理学资料，探讨二者检测在乳腺癌患者中的临床意义。方法：采用逆转录-聚合酶反应（RT—PCR）和酶联免疫反应（ELESA）方法分别检测60例乳腺癌患者外周血中SBEM—mRNA和CEA的表达情况，另抽取20例乳腺纤维腺瘤患者和10例健康人的外周血标本加以检测，作为对照研究纽。采用SPSS 10．0软件进行统计学处理。结果：在60例乳腺癌患者外周血中SBEM—mRNA和CEA的阳性表达率分别为53-3％和31．7％。而在对照组检测中，CEA在纤维腺瘤患者外周血中阳性率为5．0％，在健康人的外周血中为阴性表达；SBEM—mRNA在二者中均为阴性表达。统计学分析发现，乳腺癌患者中SBEM—mRNA和CEA的阳性表达均与腋淋巴结转移情况、肿瘤TNM分期差异有显著性意义（P〈0．05），而与患者的其他临床病理学特征的差异无统计学意义（P〉0．05）。对比研究表明，二者联合检测比单项检测有更高的敏感度和准确性（Pl〈0．05）。结论：乳腺癌患者外周血中SBEM—mRNA和CEA的检测对指导乳腺癌患者的治疗和判断预后具有重要意义，二者联合检测在提高对乳腺癌微转移敏感度和准确性的同时，又保持了较高的特异性，是较为理想的检测组合方式。     

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析

目的：探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白（smallbreastepithelialmucin,SBEM）、乳腺珠蛋白（humanmamma—globin,hMAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法：收集2012-04—13—2012-10—10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果：乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82．98％（39／47）和62．22％（28／45）,χ2=5．005,P=0．021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65．96％（31／47）和42．22％（19／45）,差异有统计学意义,χ2=5．220,P=0．022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89．36％（42／47）和80．00％（36／45）,差异无统计学意义,χ2=1．562,P=0．211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论：SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。     

检测乳腺癌患者骨髓中CK19的表达及其临床意义

背景与目的:乳腺癌早期即可发生播散和转移,远处转移尤其骨转移是影响患者预后的主要因素之一,而骨髓微转移用常规方法又难以检测出来。本研究旨在探讨检测乳腺癌患者骨髓中CK19mRNA的表达及其临床意义。方法:应用RT鄄PCR技术,同时对照检测65例乳腺癌患者、15例乳腺良性病变患者和8例健康人骨髓中的CK19mRNA表达,并分析CK19mRNA表达与临床病理因素的关系。结果:65例乳腺癌患者中,22例CK19mRNA阳性,阳性率为33.8%;乳腺良性病变患者和健康人骨髓中未检测到CK19mRNA表达。CK19mRNA表达与乳腺癌肿瘤大小和分期有关(P<0.05),与年龄和淋巴结转移状况无显著性相关(P>0.05);与外周血中CEA异常增高呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论:CK19mRNA可作为检测乳腺癌患者骨髓微转移的分子指标之一,可为乳腺癌患者的治疗和预后判断提供帮助。     

乳腺癌患者外周血SBEM mRNA的检测及其临床意义

背景与目的乳腺癌患者的死亡原因几乎均为肿瘤远处转移。目前乳腺癌诊断尚无公认的特异性标志物,本文旨在探讨特异性的乳腺癌标志物─乳腺小粘蛋白(smallbreastepithelialmucin,SBEM)在乳腺癌外周血的表达及其意义。方法用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)技术检测67例乳腺癌、16例乳腺良性肿瘤及20例健康志愿者外周静脉血中的SBEMmRNA的表达情况。结果SBEMmRNA在健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者外周血中表达均为阴性;67例乳腺癌患者外周血中SBEMmRNA表达率为50.7%(34/67),在乳腺癌患者的临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期中SBEMmRNA表达率分别为25.0%(2/8)、45.8%(11/24)、43.8%(7/16)和73.7%(14/19),在Ⅳ期乳腺癌患者外周血中SBEMmRNA的检出率明显高于其他各期(P<0.05)。SBEMmRNA的表达与患者年龄、原发癌灶大小、病理类型、ER和PR的状态无关(P>0.05)。结论SBEMmRNA特异表达于乳腺癌患者的外周血,有可能作为判断乳腺癌血道微小转移的指标之一。     

CK20m RNA在大肠癌病人外周血中的表达及其临床意义

目的：以CK20mRNA作为靶产物,检测大肠癌病人外周血中的癌细胞即微转移。并探讨其存在的临床意义。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）。检测20例健康志愿者和47例大肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达。同时检测20例大肠癌新鲜组织标本中CK20mRNA的表达。结果：20例大肠癌组织标本均扩增出370bp的条带。结肠腺癌HT-29细胞系作为阳性对照亦扩增出370bp的条带,20例正常人外周血中CK20mRNA表达均阴性。全组47例大肠癌病人,19例外周血中表达CK20mRNA,总阳性率为40.4%(19/47),CK20mRNA的表达与肿瘤Dukes分期,最大直径,肝转移有关,结论：CK20mRNA可作为检测大肠癌病人外周血中微转移的良好指标;外周血中CK20mRNA的检测有助于识别出具有复发或远处转移倾向的高危大肠癌病人。     

早期乳腺癌CEA mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

[目的]研究早期乳腺癌外周血中CEAmRNA阳性循环肿瘤细胞的临床意义。[方法]检测50例早期乳腺癌患者、24例乳腺良性疾病患者和20例健康志愿者外周血CEAmRNA阳性细胞。[结果]早期乳腺癌患者外周血CEAmRNA阳性率为14．0％,CEAmRNA阳性率与TNM分期（P=0．004）、肿瘤大小（P=0．027）、血清CEA（P=0．000）水平异常升高显著性相关。CEAmRNA阳性患者中位无瘤生存期为18个月,与阴性患者比较差异有统计学意义（P=0．000）。[结论]CEAmRNA阳性循环肿瘤细胞可能是早期乳腺癌患者监测复发转移的重要指标和独立的预后因素。     

乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体mRNA与组织中蛋白表达的相关性及其意义

 目的 本研究旨在检测乳腺癌患者外周血EGFRmRNA的表达，评价其作为循环乳腺癌细胞标志的可能性；结合相应肿瘤组织中EGFR蛋白的检测，分析两者的相关性；并结合临床病理资料综合分析，探讨其在乳腺癌患者外周血中表达的意义。方法 以RT-PCR法，分别对40例乳腺癌患者、25例良性乳腺病患者和30例健康人外用静脉血进行EGFRmRNA检测。免疫组化法检测相应肿瘤组织中EGFR蛋白的表达情况。结果 乳腺癌组外周静脉血中EGFRmRNA检出率（32．5％）与健康人组（0）和良性乳腺病患者组（0）间差异均存在统计学意义（P〈0．01）。免疫组化法检测到乳腺癌患者相应肿瘤组织中有25例（62．5％）EGFR蛋白阳性，组织中EGFR蛋白表达级别高的患者其相应外周血EG—FRmRNA的检出率也高。EGFRmRNA阳性表达与临床分期、组织学分级及ER闰存在明显的相关性，而与病理类型、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、PR和HER-2间无明显相关性。结论 RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血EGFRmRNA有望成为检测循环乳腺癌细胞的有效方法。结合临床病理资料分析，RT—PCR法检测外周血EGFRmRNA有助于判断乳腺癌的预后，有益于乳腺癌微转移的早期诊断、治疗方案的选择及治疗疗效的监测。     

大肠癌患者外周血中细胞角蛋白19和癌胚抗原的表达及临床意义

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested RT-PCR）技术检测大肠癌患者外周血中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达及临床意义,探讨其作为大肠癌微转移检测分子标记物的可能性。方法:应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA的表达。结果:大肠癌组CK19 mRNA和CEA mRNA表达的阳性率为58.89%（53/90）和53.33%（48/90）;20例健康人外周血中无CK19 mRNA和CEA mRNA的表达; 20例大肠腺瘤疾病患者有1例CK19 mRNA的表达,阳性率为5.00%（1/20）,无CEA mRNA的表达。大肠癌患者中CK19 mRNA、CEA mRNA的阳性率与肿瘤分期及肿瘤转移有显著相关性（P＜0.05)。结论:CK19 mRNA和CEA mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性,同时可作为判断大肠癌患者的预后指标。     

早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。