三种花椒抗氧化活性对比研究

以红花椒、青花椒、藤椒的干花椒果皮为研究对象,分别测定其70%甲醇粗提物的总酚、总黄酮含量,并采用不同极性有机溶剂(氯仿、乙酸乙酯、正己烷)对70%甲醇粗提物进行萃取,将粗提物划分为3个极性组分,选用ABTS和DPPH自由基清除活性以及还原能力对粗提物和各萃取物进行抗氧化活性评价,结果表明:红花椒70%甲醇粗提物具有较好的抗氧化活性;青花椒乙酸乙酯萃取物的ABTS自由基清除活性(EC50=44.56g/mL)、DPPH自由基清除活性(EC50=60.32g/mL),还原力(样品浓度为1.5mg/mL时吸光度为1.029)最佳,呈现出和阳性对照相当的抗氧化活性。     

运用HSCCC法分离纯化荷叶中三种黄酮及抗氧化活性

利用高速逆流色谱技术(HSCCC)从荷叶中分离制备高纯度的黄酮类物质,并对所制备的荷叶黄酮进行抗氧化活性研究。结果表明,以正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:6:1:6和正丁醇:甲醇:水=5:1:4作为HSCCC分离的两相溶剂体系,得到三种目标组分C₁、C₂和C₃的质量为12.4、5.9、2.1 mg,经高效液相分析检测其纯度分别为92.67%、90.43%、87.52%。通过标准品对照实验,得到三种目标组分可能为紫云英苷、异槲皮苷及槲皮素。并对目标组分的抗氧化活性进行研究,得到对羟基自由基的半数清除率(IC₅₀)分别为0.94、0.85、0.76 mg/mL,对DPPH自由基的半数清除率(IC₅₀)分别为0.39、0.28、0.06 mg/mL,对ABTS+自由基的半数清除率(IC₅₀)分别为0.56、0.47、0.29 mg/mL,三种目标组分均表现出良好的抗氧化活性。     

蛹虫草子实体中抗氧化活性化合物的分离纯化

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性为指导对蛹虫草子实体中的抗氧化活性化合物进行了分离纯化。对蛹虫草子实体经甲醇浸提后获得的甲醇提取物,再进行硅胶柱色谱分离得到一个具有较强抗氧化活性的组分CM9,组分CM9利用反相高效液相色谱法进行活性指导下的分离得到抗氧化活性化合物CM9-1。该化合物采用薄层色谱和高效液相色谱法进行纯度检测发现此为纯品化合物,液相色谱-质谱分析结果表明该化合物相对分子质量为430,分子式为C22H22O9。该物质在质量浓度为1.0 mg/m L时对0.4 mg/m L的DPPH自由基试剂的清除率为(73.67±0.29)%。     

人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性

以天然蝉花虫草生药为对照,以中国仓鼠卵巢肿瘤（Chinese hamster ovary,CHO）细胞株为模型,采用刃天青染色法检测人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性。结果表明：人工培育蝉花虫草和天然蝉花虫草生药都具有抗肿瘤活性,且活性成分均为中等极性化合物。对人工培育蝉花虫草中的抗肿瘤活性成分进行分离制备,得到两种化合物,命名为化合物1和化合物2。化合物1经鉴定为虫草素,化合物2经纯度验证为纯品,活性验证结果发现当其质量浓度为50 μg/mL时,对CHO细胞抑制率高达（94.55±2.33）%。     

古尼虫草纯化多糖免疫调节活性研究

目的研究古尼虫草多糖的提取纯化及其对小鼠免疫力调节的作用。方法对古尼虫草液体深层发酵菌丝体进行超声提取,经过浓缩、Sevag法除蛋白质、乙醇沉淀得到黄色胞内粗多糖;通过离子交换层析和凝胶色谱层析对粗多糖进行分离纯化,得到CG1和CG2两种主要多糖;采用环磷酰胺建立BALB/c小鼠免疫抑制模型,以胸腺素α1(thymosinα1,Tα1)为阳性对照药,对小鼠自然杀伤(natural killer,NK)细胞的杀伤活性和T淋巴细胞转化活性进行研究,并通过酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定小鼠血浆中免疫相关细胞因子的水平,探讨多糖(CG1和CG2)对小鼠免疫系统的影响。结果 CG1能显著提升NK细胞杀伤活性和T淋巴细胞的增殖,调节免疫相关细胞因子的水平,而CG2作用不明显。结论尼古虫草提取多糖CG1具有提升小鼠免疫力的活性。     

脱脂月见草子中多酚的提取分离及其抗氧化活性研究

以脱脂月见草子为原料,优化以超声波辅助法提取多酚的工艺条件。通过单因素实验考察提取溶剂p H、提取助剂用量、提取溶剂浓度、料液比、提取时间、提取温度对提取效率的影响,进一步采用正交实验法优化提取工艺。结果表明:最佳提取工艺条件为p H3、提取助剂六偏磷酸钠质量浓度0.2%、甲醇体积分数80%、料液比1∶30(g/m L)、提取时间60min、提取温度40℃,在此条件下多酚得率为6.70%。采用大孔吸附树脂法对粗提物进行分离,检测各洗脱组分中多酚含量,并分别采用邻苯三酚自氧化反应法和DPPH法研究其抗氧化活性。结果表明:多酚主要集中在组分Ⅱ,其质量占多酚粗提物的50.09%,其中多酚质量分数为79.49%,组分Ⅱ和组分Ⅲ的抗氧化性能相当,并显著高于其它组分。     

‘巨峰’葡萄皮花色苷的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性

为研究‘巨峰’葡萄皮花色苷分离纯化方法、结构鉴定及抗肿瘤活性,将葡萄皮色素的粗提物依次经过AB-8大孔树脂、聚酰胺树脂、SephadexLH-20葡聚糖凝胶进行分离纯化;利用超高效液相色谱三重四极杆飞行时间质谱联用技术对分离所得的花色苷进行结构鉴定;通过噻唑蓝法、Transwell侵袭实验及Annexin V-FITC/PI双标记染色法分别研究纯化后所得的花色苷组分对HepG2肝癌细胞和A549肺癌细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响。结果表明:紫外-可见光谱扫描发现经AB-8大孔树脂纯化后所得的样品溶液(样品1)在280、520、330 nm波长处均有吸收峰,说明样品1中主要成分为花色苷类,同时可能含有酰化基团;样品1再经聚酰胺树脂纯化后发现聚酰胺树脂对花色苷产生吸附作用,而经Sephadex LH-20凝胶纯化后花色苷得到较好的分离,最终得到3种花色苷组分(色素I、色素III和色素IV),分别为矢车菊-3-芸香糖苷、锦葵素-3,5-双葡萄糖苷-香豆酰和锦葵-3-半乳糖苷,它们所对应的得率和纯度分别为(0.108±0.011)%、(0.053±0.007)%、(0.038±0.005)%和98.52%、96.84%、91.36%;通过3种花色苷组分对抗肿瘤活性分析发现,3种花色苷组分均能显著抑制HepG2肝癌细胞和A549肺癌细胞的增殖和侵袭能力,并且能够显著增加癌细胞的凋亡,其抗肿瘤效果顺序依次为色素III色素I色素IV。     

阳荷花苞降血糖活性及成分研究

目的研究阳荷花苞的降血糖活性及所含的化学成分。方法将阳荷花苞粗提物作用于胰岛素抵抗的Hep G2细胞,用葡萄糖试剂盒检测其降血糖活性,MTT法检测细胞活力,然后通过反复的硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱色谱及重结晶分离、纯化阳荷花苞粗提物,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。结果阳荷花苞粗提物具有显著的降血糖效果,且细胞毒性较小。并从中分离鉴定了7个化合物,分别为:β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、胸腺嘧啶(3)、尿嘧啶(4)、对羟基苯甲酸(5)、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸(6)、蔗糖(7)。其中化合物3,4,5,6为首次从阳荷花苞中分离得到,且化合物3和4为首次从姜科植物中分离得到。结论阳荷花苞降血糖作用显著,有必要对这种药食同源的植物进行研究并开发利用。     

荸荠英抑菌成分活性跟踪方法的研究

本文通过抑菌活性分析，确定敏感菌，运用硅胶板层析技术，研究生物自显影对荸荠英提取物抑菌成分的活性跟踪方法：用200mg／ml荸荠英提取物丙酮溶液点样4μl，以二元溶剂氯仿：甲醇=8．5：1．5展开，贴板10min，37℃培养10h即可得到清晰的抑菌斑色谱图。应用该方法可将荸荠英粗提物乙酸乙酯部分分离得到六个活性组分。     

几种虫草菌发酵提取物的抗菌抗肿瘤活性研究

对4种虫草菌进行液体发酵培养,以乙酸乙酯萃取获得粗提物,采用双层打孔法和体外细胞毒MTT法分别测试其抗菌和抗肿瘤活性.结果表明,深红虫草的发酵提取物兼具有较高的抗菌和抗肿瘤活性,对指示菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿色木霉和黑曲霉均表现出较强的抑制作用,对中枢神经系统癌细胞SF-268的抑制率达97.8%.高活性虫草菌在食品防腐剂和功能食品的研发方面具有开发潜力.     

大白栓菌降糖活性部位筛选

目的:研究大白栓菌提取物的降糖活性,筛选其降血糖的活性部位。方法:用肾上腺素致高血糖小鼠模型评价大白栓菌乙醇提取物不同萃取部位的降糖效果;对活性更好的乙酸乙酯部位采用四氧嘧啶糖尿病高血糖小鼠模型进行验证,测定血糖水平、胰岛素水平,并计算胰岛素敏感性指标ISI,同时测定乙酸乙酯部位的α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果:大白栓菌乙醇提取物不同萃取部位高、低剂量组与模型组血糖值有显著性差异;乙酸乙酯部位高、中、低剂量组与模型组血糖值有显著性差异;乙酸乙酯部位对酵母α-葡萄糖苷酶有抑制活性,但对大鼠α-葡萄糖苷酶无抑制活性。结论:大白栓各萃取部位都具有降糖作用,其中乙酸乙酯部位最好;乙酸乙酯部位对大鼠α-葡萄糖苷酶无抑制活性,其降糖机制可能与提高胰岛素敏感性有关。     

古尼虫草多糖提取分离及初步分析

本文用30%乙醇溶液作提取剂,从古尼虫草菌丝体中提取多糖,提取液经去脂、去蛋白、醇析后得两种粗多糖CPS-50,CPS-70.利用DEAE-Sephadex A-25柱色谱对两种粗多糖进行分离纯化,得纯多糖CPS-1,CPS-2.苯酚-硫酸法测定糖含量,紫外光谱分析证明其纯度,红外光谱显示其具有多糖类的特征吸收峰.多糖降解后经薄层分析表明,降解的虫草多糖由葡萄糖或(和)甘露糖组成.     

五倍子中α-淀粉酶抑制因子的研究

采用甲醇粗提、索氏抽提及pH值梯度提取和聚酰胺柱层析等分离纯化法及酶反应动力学跟踪的方法对五倍子中的α-淀粉酶抑制因子进行系统研究。结果表明：乙醚、乙酸乙酯、丙酮-水(体积比1:1)、甲醇、石油醚组分和甲醇粗提物对α-淀粉酶的抑制率依次为：91.04%、90.38%、80.09%、66.48%、34.14%和23.96%。其中石油醚组分中的α-淀粉酶抑制因子是月桂酸、肉豆蔻酸和棕榈酸,其抑制率分别为34.34%、31.71%和31.01%,而乙醚组分中的抑制因子是鞣酸及没食子酸,其抑制率分别为66.7% 和21.3%。丙酮-水组分中的抑制因子较为复杂,经初步纯化和气质联用得知其为脂肪醇类并部分甲酯化。     

长白山红蚂蚁在体外肿瘤细胞增殖抑制作用研究

对长白山红蚂蚁(Forimica aquilonia)的抗肿瘤进行活性研究。MTT 比色法测定长白山红蚂蚁提取物对大鼠肝癌细胞dRLh84 增殖抑制作用,荧光显微镜观察提取物作用于dRLh84 细胞后的肿瘤细胞的细胞核变化。结果表明：长白山红蚂蚁乙酸乙酯提取物具有抑制dRLh84 细胞增殖作用,且呈剂量- 效应关系。乙酸乙酯提物以乙酸乙酯和水进行液液萃取后,活性成分移动至乙酸乙酯相,证明活性物质为极性较小的物质。荧光显微镜观察结果表明,长白山红蚂蚁乙酸乙酯提取物能引起dRLh84 细胞凋亡。     

基于气相色谱法的含脂羊毛中4种拟除虫菊酯药物残留测定

为了研究建立气相色谱－电子捕获检测器测定含脂羊毛中4种拟除虫菊酯杀虫剂残留的国家标准方法。在空白含脂毛中分别添加4个浓度水平（0.06 μg/g、0.30 μg/g、2.00 μg/g、5.00 μg/g）的4种拟除虫菊酯农药混标,以正己烷+乙醚（体积比2:1）为提取溶剂,中性氧化铝固相萃取柱和弗罗里硅土柱净化,以4 ml正己烷+乙酸乙酯（体积比95:5）进行洗脱,气相色谱－电子捕获检测器测定,外标法定量。结果显示：4种农药的最小检出量分别为0.020 μg/g、0.060 μg/g、0.024 μg/g和0.030 μg/g,平均回收率79.4%~101.2%,相对标准偏差1.20%~3.08%,分离良好,干扰峰少,结果准确,且操作简便、快捷,溶剂使用量小、符合环保要求。     

古尼虫草菌丝体维生素E的初步分析

古尼虫草与传统名贵中药冬虫夏草类似,具有多种活性物质及广泛的药理作用,是一种重要的虫草属真菌.分别用30 %、50 %、80 %乙醇溶液和乙酸乙酯作为提取液,从古尼虫草菌丝体中提取维生素E,并用乙酸乙酯萃取的方法进行初步分离,硅胶薄层层析和紫外分光光度法分析粗产物中的维生素E.结果表明,提取物质的总量与提取液的乙醇含量有关,提取液的有机溶剂比例越高,提取到维生素E量越高,但提取的维生素E的纯度越低.初步确定乙酸乙酯为提取虫草维生素E的最适溶剂.     

钩藤提取物抗氧化作用的研究

对钩藤以正己烷、乙酸乙酯、甲醇在索氏提取器中依次提取4 h,并对乙酸乙酯提取物和甲醇提取物进行了色谱分离,测定了各成分的抗氧化活性,通过显色反应和光谱分析对各成分进行了初步鉴定.结果表明,钩藤中有两种黄酮苷元和一种黄酮苷的抗氧化活性比BHT强,两种黄酮苷与BHT相近,3种酚酸和几种羟基蒽醌甙也有较强的抗氧化能力,但钩藤碱的抗氧化能力较差.     

解淀粉芽孢杆菌抑菌物质粗提取的优化及分析

为探究解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）A13抑菌物质适宜提取方法,分别采用硫酸铵盐析法、酸沉淀法、甲醇抽提法、乙酸乙酯萃取法进行抑菌粗提液的制备,并通过SuperdexTM75凝胶层析柱分离纯化。结果表明,以80%饱和硫酸铵法制备粗提液抑菌效果最佳,抑菌圈直径为23.67 mm,蛋白质量浓度最高,为582.50 μg/mL,其回收率为17.8%;以甲醇抽提法制备粗提液的抑菌圈直径为25.17 mm,其回收率最高,为32.1%,蛋白质量浓度为505.00 μg/mL;以酸沉淀法制备粗提液的抑菌圈直径为22.67 mm,其回收率与蛋白质量浓度分别为13.7%与273.75 μg/mL;以乙酸乙酯法制备粗提液时,乙酸乙酯与发酵液为3∶1（V/V）的抑菌效果最佳,抑菌圈直径为25.5 mm,并且其回收率和蛋白质量浓度分别为23.6%和255.20 μg/mL。因此,硫酸铵盐析法为粗提解淀粉芽孢杆菌A13抑菌物质的适宜方法。     

固相萃取-高效液相色谱法检测油炸猪肉中丙烯酰胺

建立油炸猪肉中丙烯酰胺的固相萃取-高效液相色谱检测方法。油炸猪肉样品经正己烷脱脂,2 mol/L氯化钠溶液提取,乙酸乙酯萃取,固相萃取小柱净化后,以甲醇-水（5∶95,v/v）为流动相,Hypersi10DS2-C18色谱柱分离,内标法定性、定量分析丙烯酰胺。结果表明：丙烯酰胺的定性检出限为6 μg/kg,定量检出限为20 μg/kg,线性定量范围0.05～1.00 μg/mL,线性相关系数（R2）为0.999 8,本方法的加标回收率稳定在90%～92%范围,相对标准偏差小于3.5%。     

基于低毒溶剂的MSPD/HPLC法同时测定鱼肉中8种磺胺类药物残留

本实验以基质固相分散(MSPD)和高效液相色谱(HPLC)为基础,采用低毒的乙酸乙酯为洗脱溶剂,建立了与环境友好的鱼肉组织中8 种磺胺类药物多残留快速分析法。将0.5g 鱼肉与适量C18 填料混合,研磨,制成半固态装柱,磺胺类药物经乙酸乙酯洗脱浓缩,用反相高效液相色谱测定。采用C18 柱,柱温30℃;50mmol/L NaH2PO4-乙腈(70:30,V/V)为流动相,流速0.7ml/min;紫外检测(λ =270nm)。8 种磺胺被有效分离,在0.010～1.000μg/ml范围内线性相关系数在0.9999 以上;添加回收率为76.0%～115.0%,RSD < 6.4%(n=6); 仪器检测限均为0.010μg/ml;方法检测限为0.020μg/g。