罗格列酮对高糖环境下大鼠肾脏成纤维细胞MMP-1TIMP-1及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的观察罗格列酮(RGZ)对高糖环境下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及Ⅲ型胶原(COLⅢ)基因表达的影响,探讨罗格列酮对糖尿病肾病的保护作用及其机制。方法2005年1月至2005年9月对郑州大学第一附属医院的体外培养NRK细胞,分成正常对照组(NG含1000mg/LD-葡萄糖)、高糖组(HG含4500mg/LD-葡萄糖)、HG RGZ组(5μmol/L)、HG RGZ组(10μmol/L)和HG RGZ组(15μmol/L),作用24h后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测MMP-1、TIMP-1和collagenⅢmRNA表达。结果HG组细胞MMP-1mRNA水平较NG组下降,差异有显著性(P<0·01),罗格列酮可以一定程度上恢复MMP-1的表达。HG组TIMP-1和COLⅢmRNA水平较NG组升高,差异有显著性(P<0·01),罗格列酮可以剂量依赖性抑制这种高表达。结论罗格列酮可以通过调节MMP-1和TIMP-1的基因表达,抑制高糖导致的肾脏成纤维细胞外基质的蓄积。     

姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖诱导的损伤研究

目的：探究姜黄素（curcumin,Cur）通过mi R-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖（high glucose,HG）诱导的损伤。方法：将心肌细胞分为Con组（正常培养细胞）、HG组（30mmol/L葡萄糖培养细胞）、HG+Cur-L组（姜黄素25μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞）、HG+Cur-M组（姜黄素50μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞）、HG+Cur-H组（姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞）、HG+Cur+mi R-NC组（转染mi R-NC,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞）、HG+Cur+mi R-34a（转染mi R-34a,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞）、HG+Cur+mi R-34a+3-MA组（转染mi R-34a,使用姜黄素100μmol/L、葡萄糖30 mmol/L及自噬抑制剂3-MA 10μmol/L培养细胞）。采用q RT-PCR检测mi R-34a表达水平;CCK8检测细胞活性;ELISA检测LDH含量、SOD、GSH-Px活性...     

辛伐他汀调控klotho蛋白改善高糖诱导的大鼠海马神经元细胞损伤的研究

目的 探讨高糖环境下辛伐他汀对大鼠海马神经元细胞的影响，klotho蛋白表达变化及相关机制。方法 大鼠海马神经元细胞持续培养6 d后，分为正常对照组（Con）、辛伐他汀组（Sim）、高糖组（HG）、HG+Sim组。Con组采用25 mmol/L葡萄糖培养，Sim组采用25 mmol/L葡萄糖及10 nmol/L辛伐他汀培养，HG组采用50 mmol/L葡萄糖培养，HG+Sim组采用50 mmol/L葡萄糖及10 nmol/L辛伐他汀培养，培养48 h后检测活性氧簇（ROS）、超氧化酶歧化物（SOD）、丙二醛（MDA）、klotho及半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白。结果 与Con、Sim组比较，HG、HG+Sim组ROS、MDA、caspase-3蛋白表达升高，SOD、klotho蛋白表达降低（P<0.05）。与HG组比较，HG+Sim组ROS、MDA、caspase-3蛋白表达降低，SOD、klotho蛋白表达升高（P<0.05）。结论 10 nmol/L辛伐他汀延缓高糖诱导的大鼠海马神经元细胞氧化应激及细胞凋亡，可能与klotho蛋白表达升高相关。     

芍药苷对高糖环境下雪旺细胞线粒体动力学的影响

目的 观察芍药苷(PF)对高糖环境下雪旺细胞线粒体动力学的影响.方法 选取大鼠雪旺细胞(RSC96细胞株)培养,分为空白对照组(Con,25 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,150 mmol/L葡萄糖)、PF 1μmol/L组(PF 1,150 mmol/L葡萄糖+1μmol/L PF)、PF 10μmol/L组(...     

异鼠李素对高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤保护作用的研究

目的探讨异鼠李素(ISO)对高糖高脂诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞损伤的保护作用及机制。方法不同浓度ISO预处理MIN6细胞后高糖高脂培养48 h,CCK8法筛选ISO最佳干预浓度。细胞分为正常对照(Con)组(11. 1 mmol/L葡萄糖)、高糖高脂损伤模型(M)组(33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)及ISO预处理(ISO+M)组(10μmol/L ISO+33. 3 mmol/L葡萄糖+0. 25 mmol/L棕榈酸)。流式细胞术测定各组细胞凋亡率;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;Western blot法检测磷酸化核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(IκB)激酶β(p-IKKβ)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞凋亡及NO含量M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 01)。IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA,p-IKKβ、p-IκB、iNOS蛋白与NF-κB p65蛋白表达M组高于Con组,ISO+M组低于M组(P0. 05)。结论 ISO可减轻高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,可能与抑制IκB激酶(IKK)/IκB/NF-κB/iNOS通路活性有关。     

白藜芦醇对高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响及其作用机制的研究

目的探讨白黎芦醇(Res)对高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响是否与PI3K/Akt信号通路有关。方法高糖体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并应用Res和PI3K通路特异性抑制剂LY294002进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,免疫组织化学法检测MMP-2、MMP-9表达,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测p-Akt、Akt蛋白表达。结果不同浓度Res(25、50、100μmol/L)和LY294002(10、20、30μmol/L)均可抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖(P0.05),且均呈剂量依赖性,还可抑制高糖诱导的MMP-2、MMP-9表达和活性(P0.05)。NC、HG、HG+LY294002(10、20、30μmol/L)组总Akt表达无明显改变,HG+Res(25、50、100μmol/L)组总Akt表达较HG组下降,但无剂量依赖性;而不同浓度的Res和LY294002可抑制高糖诱导的p-Akt表达(P0.05),且均呈剂量依赖性。结论 (1)高糖上调VSMCs MMP-2、MMP-9表达,加重VSMCs增殖;(2)Res可能通过抑制高糖激活的PI3K/Akt信号通路,下调VSMCs MMP-2、MMP-9表达并降低其活性,减轻高糖引起的VSMCs增殖。     

龙胆苦苷通过调控miR-218表达减轻高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤

目的 探讨龙胆苦苷(GPS)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞(MPC5)损伤的影响及其可能的作用机制。方法 高糖诱导MPC5细胞建立细胞损伤模型(HG组),正常培养的MPC5细胞记为Con组，用不同剂量(8、40、200μg/μl)GPS处理高糖诱导的MPC5细胞(HG+GPS-L组、HG+GPS-M组、HG+GPS-H组),anti-miR-NC、anti-miR-218转染至MPC5细胞后加入30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h(HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-218组),miR-NC、miR-218 mimics分别转染至MPC5细胞后加入200μg/μl GPS与30 mmol/L D-葡萄糖共同处理24 h(HG+GPS+miR-NC组、HG+GPS+miR-218组);流式细胞术检测细胞凋亡率；qRT-PCR法检测miR-218相对表达量；Western印迹法检测肾素(nephrin)、足突蛋白(podocin)、剪切的胱天蛋白酶(cleaved-caspase)3、cleaved-caspase9蛋白相对表达量。结果 HG组nephrin、podo...     

金属蛋白酶组织抑制因子3敲低通过抑制活性氧簇启动的线粒体凋亡通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中的作用机制。方法细胞分为对照组(Con)、高糖组(HG)、22.0 mmol/L葡萄糖+活性氧簇(ROS)清除剂组(NAC)、22.0 mmol/L葡萄糖+caspase 8特异性抑制剂组(IETD)、22.0 mmol/L葡萄糖+caspase 9特异性抑制剂组(LEHD)和22.0 mmol/L葡萄糖+si-TIMP3组(si-TIMP3),各组培养48 h,噻唑蓝实验检测细胞存活率;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCHF-DA染色法检测细胞内ROS的生成水平;Caspase特异性抑制剂预处理以预估细胞凋亡途径,检测线粒体凋亡通路蛋白细胞色素c(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)的蛋白表达;JC-1染色分析细胞膜电位的丢失情况。高糖刺激前予TIMP3敲低以观察其对上述事件的影响。结果高糖浓度依赖性促进TIMP3表达和细胞活力降低(P0.05或P0.01)。与Con组比较,HG组细胞质Cyt c和AIF表达升高,线粒体膜电位降低(P0.01)。与HG组比较,LETD组细胞活性升高(P0.01),IETD组差异无统计学意义(P0.05),NAC、si-TIMP3组细胞活性升高,细胞凋亡降低,细胞质中Cyt c和AIF表达降低,线粒体膜电位升高(P0.01)。结论 TIMP3敲低通过抑制ROS生成,进而抑制高糖诱导的线粒体凋亡通路,以对抗高糖诱导的HUVECs细胞损伤。     

白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ/TLR4/NF-KB调控鼠血管平滑肌细胞炎症和氧化应激损伤作用

目的探讨白藜芦醇(RES)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/TLR4/NF-KB调控大鼠血管平滑肌细胞炎症和氧化应激损伤的作用。方法采用大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞株为主要受试物,分为对照组、RES组(30μmol/L)、AngⅡ组(10-4μmol/L)和实验组(30μmol/L RES预处理2 h+10-4μmol/L AngⅡ)。CCK-8法检测A7r5细胞的存活率;ELISA法检测细胞上清液中TNF-α和IL-6表达;采用试剂盒检测ROS和iNOS活性;Western blot法检测A7r5细胞AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白表达水平。结果与对照组相比,AngⅡ组A7r5细胞株存活率显著升高,RES组和实验组A7r5细胞株存活率显著降低(P0.05);AngⅡ组A7r5细胞株TNF-α和IL-6表达显著升高,ROS和iNOS活性显著升高,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著升高,RES组和实验组TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,RES组和实验组A7r5细胞株存活率显著降低,实验组A7r5细胞株存活率下降更为明显(P0.05);AngⅡ组A7r5细胞株TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著降低,RES组和实验组TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著降低(P0.05)。结论白藜芦醇可有效缓解大鼠血管平滑肌细胞的炎症和氧化应激损伤,主要通过抑制血管紧张素Ⅱ/TLR4/NF-KB信号通路。     

葡萄内脂对PC12神经细胞损伤的保护作用研究

目的探讨葡萄内脂对过氧化氢(H2O2)诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立PC12细胞过氧化氢损伤模型。将处于对数生长期的PC12细胞分为正常对照组、模型组、阳性对照组、5μmol/L葡萄内脂组、25μmol/L葡萄内脂组、50μmol/L葡萄内脂组。采用不同浓度(5μm/L,25μm/L和50μm/L)葡萄内脂对PC12细胞进行干预,通过测定细胞存活率、细胞上清液中乳酸脱氢酶水平和细胞内氧化活性物质(ROS)水平评价干预效果。结果模型组PC12细胞存活率显著低于正常对照组及阳性对照组; 25μmol/L、和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞存活率(与阳性对照组相当)显著高于模型组,随着葡萄内脂浓度的增加,H2O2诱导损伤的PC12细胞的存活率呈升高趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞上清液乳酸脱氢酶水平明显高于正常组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组细胞上清液乳酸脱氢酶水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,乳酸脱氢酶水平呈降低趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞ROS水平显著高于正常对照组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞ROS水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,ROS水平呈降低趋势,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论葡萄内脂对H2O2诱导损伤的PC12神经细胞具有明显的保护作用,可能与其能维持细胞膜的完整性、发挥抗氧化作用有关。     

活性氧与ATP敏感性钾通道的相互作用参与高糖对

目的　研究活性氧（ROS）和ATP敏感性钾通道（K_ATP通道）的相互作用在高糖（HG）引起的心肌细胞损伤中的作用。方法　应用Western　blot检测心肌细胞K_ATP通道蛋白、Cleaved　Caspase-3的表达水平;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测胞内ROS水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;Hoechst　33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位。结果　应用高糖（35　mmol/L葡萄糖）处理H9c2心肌细胞24　h能明显下调K_ATP通道蛋白的表达水平,1000　μmol/L　N-乙酰半胱氨酸（ROS清除剂）预处理心肌细胞60　min可阻断HG对心肌细胞K_ATP通道蛋白表达的下调作用。100　μmol/L二氮嗪（线粒体K_ATP通道开放剂）和50　μmol/L吡拉地尔（非选择性K_ATP通道开放剂）预处理均显著抑制HG引起的心肌细胞ROS的堆积。1000　μmol/L　N-乙酰半胱氨酸、100　μmol/L二氮嗪和50　μmol/L吡拉地尔均能抑制HG引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数量、Cleaved　Caspase-3表达及线粒体膜电位丢失减少。结论　在HG状态下,心肌细胞的ROS和K_ATP通道存在相互作用,两者在HG引起的心肌细胞损伤中发挥重要作用。     

CREB结合蛋白调控组蛋白H4乙酰化修饰参与糖尿病雌鼠诱导胎鼠神经管畸形发生机制的研究

目的探讨CREB结合蛋白(Cbp)调控组蛋白H4赖氨酸位点乙酰化修饰参与DM雌鼠诱发胎鼠神经管缺陷(NTDs)的发生机制。方法体外构建高糖处理小鼠神经干细胞(NE-4C)模型及T1DM雌鼠诱发NTDs模型。建立葡萄糖浓度为5 mmol/L的正常对照组(Con组)和25 mmol/L高糖组(HG组)处理NE-4C细胞,HG组分别以DMSO(HG+DMSO组)、1μmol/L的Cbp/P300抑制剂(C646)(HG+C646+1组)、5μmol/L的C646(HG+C646+5组)、5μmol/L的P300/PCAF抑制剂藤黄酚(HG+Gar+5组)、25μmol/L的藤黄酚(HG+Gar+25组)处理。将NE-4C细胞分为转染对照siRNA组(Con-si组)、转染第1个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1组)、转染第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-2组)、共转染第1及第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1+2组)。雌鼠分为正常对照(NC)组(n=38)和STZ构建的TIDM组(n=54)。采用Western blot、RT-PCR、免疫荧光染色检检测。结果 HG组Cbp的mRNA表达和NE-4C细胞增殖能力较Con组升高(P0.05或P0.01)。HG+C646+5组组蛋白H4K5/8/12/16ac蛋白水平低于HG+DMSO、HG+C646+1组(P0.05或P0.01)。在4 h时,HG+C646+5组NE-4C细胞增殖能力低于HG组(P0.05)。与Con-si组比较,si-Cbp-1、si-Cbp-2、si-Cbp-1+2组H4K5/8/12/16ac蛋白、Cbp mRNA水平降低(P0.05)。与NC组比较,T1DM组Cbp的mRNA、组蛋白H4K5/8/12/16ac修饰水平升高(P0.01)。结论高糖导致Cbp调控组蛋白H4乙酰化修饰异常和NE-4C细胞增殖可能是诱发NTDs的机制之一,Cbp抑制剂可改善组蛋白H4乙酰化水平和NE-4C细胞增殖。     

蛋白激酶Cβ_2通过调控PPARα介导高糖诱导的人内皮细胞损伤

目的 研究蛋白激酶C(PKC)β_2、PPARα在高糖诱导入脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)mRNA中的作用及相互关系.方法 将培养的HUVECs分为以下8组:正常糖(NG,5 mmol/L D-葡萄糖)组、高糖(HG,25 mmol/L D-葡萄糖)组、渗透压对照(L,NG+20 mmol/L L-葡萄糖)组、正常糖卒载体转染(NN,NG+Ad5-null)组、高糖PKCβ_2转染(HB,HG+Ad5-PKCβ_2)组、高糖+非诺贝特(HF,HG+40 μmol/L非诺贝特)组、高糖PKCβ_2转染+非诺贝特(HBF,HB+40μmol/L非诺贝特)组,另以非诺贝特共孵育20 min作为HF20组,以上各组细胞均培养6 d.以RT-PCR 检测VEGF、VCAM-1 mRNA的表达水平,用Western印迹法测定PPARα蛋白表达,采用激光共聚焦检测PKCβ_2蛋白的表达和转位.结果 (1)HG组VEGF、VCAM-1 mRNA表达增加,分别为NG组的1.91倍和1.56倍(均P<0.05);HB组VEGF、VCAM-1 mRNA表达较HG组进一步增加,分别为NG组的2.59倍和2.07倍(均P<0.05).HF组VEGF、VCAM-1 mRNA表达则明显下调,分别为HG组的68%和74%(均P<0.05);与HG组相比,HF20组VEGF、VCAM-1 mRNA表达差异无统计学意义.(2)HG组PPARa蛋白表达较NG组减少了20%,HB组PPARα蛋白水平进一步下降,为HG组的78%,与HG组相比,HF组PPARα蛋白水平上调了13%(P<0.05).(3)HG诱导PKCβ_2核转位激活,定量分析示HG组浆/核荧光强度比值较NC组降低37%(P<0.05),HB组PKCβ_2核转位与HG组相比更加明显.结论 高糖通过诱导HUVECs PKCβ_2核转位,进而调控PPARα表达,增加VEGF、VCAM-1 mRNA的表达.     

柴胡皂苷d对活化的HSC-T6细胞MMP-1、TIMP-1表达的影响及其分子机制

目的:研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd)对活化的HSC-T6细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响及其相关分子机制,探讨植物雌激素对肝纤维化的作用机制,为临床应用植物雌激素提供理论依据.方法:体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板,细胞贴壁后加入雌激素受体阻断剂(1μmol/L)或P38 MAPK阻断剂SB203580(50μmol/L)预处理1h后,加入SSd(5μmol/L)或雌二醇(1μmol/L)孵育24h.采用ELISA法检测细胞培养上清液中的一型胶原(collagen type 1,COL-1)、MMP-1、TIMP-1的含量,Western blot法检测细胞MMP-1、TIMP-1、P38、PP38的表达.结果:与对照组(Control)比较,SSd、E_2单独给药组COL-1(140.95±12.14,143.58±4.81vs 198.98±15.08)、TIMP-1(0.23±0.01,0.21±0.01 vs 0.31±0.01)、P-P38(0.51±0.14,0.52±0.12 vs 1.00+0.11)明显降低(P0.01),MMP-1明显升高(0.0127±0.0008,0.0116±0.0004 vs 0.0049±0.0001,P0.01).抑制剂组COL-1、TIMP-1、P-P38较SSd、E_2单独给药组明显升高(P0.01),MMP-1明显降低(P0.01).我们采用P38阻断剂SB203580处理细胞,药物作用24 h后,SB203580组与对照组相比,MMP-1蛋白表达明显增高(3.58±0.35 vs 1.00±0.15,P0.01),TIMP-1蛋白表达明显降低(0.52±0.14 vs 1.00±0.18,P0.05).结论:SSd能够通过ERβ介导的效应抑制P38MAPK的激活,进而调节其下游的MMP-1、TIMP-1的表达,促进细胞外基质的降解,达到抗纤维化的作用.     

α-亚麻酸对高糖导致的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的观察α-亚麻酸（ALA）对高糖导致的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响,探讨ALA在糖尿病血管并发症防治中的作用。方法采用体外培养的第24代HUVECs,分为6组,即正常对照组、高糖组（HG组）及HG+ALA（ALA浓度分别为10、50、100和200μmol/L）组。各组细胞于不同培养环境中培养72h后收集标本,用MTT比色法测定细胞活力,通过测定细胞上清液中一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）含量评估内皮功能,末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记法（TUNEL法）和流式细胞仪法检测细胞凋亡情况。结果较低浓度（10、50、100μmol/L）的ALA组中,细胞存活率和合成NO浓度均显著高于高糖组（P<0.05）,MDA浓度和细胞凋亡率显著低于高糖组（P<0.05）;尤以50μmol/L时为著。当ALA浓度增至200μmol/L时,细胞存活率和合成NO浓度反而低于高糖组,MDA浓度和细胞凋亡率也较高糖组进一步增加。结论ALA对高糖环境下培养的内皮细胞有着双重效应,既有保护作用也有细胞毒效应,与其浓度有关。     

白藜芦醇对甲醛诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的 探讨白藜芦醇对甲醛诱导PC12细胞损伤干预的可能机制.方法 以甲醛损伤PC12细胞为氧化应激损伤模型,用不同浓度(6.25、12.5、25、50、100 μmol/L)的白藜芦醇预处理PC12细胞2 h后,加入终浓度为80 μmol/L甲醛作用24 h.并设氨基胍100 μmol/L为阳性对照组.采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测细胞活力;分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;硫代巴比妥酸法测定MDA含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;二硫对二硝基苯甲酸(DTNB)比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(iNOS)活性;并收集各组细胞,检测细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(COⅡ)蛋白活性及mRNA的表达;Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞技术检查细胞凋亡情况.结果 白藜芦醇能明显改善甲醛所致PC12细胞损伤,与甲醛处理组相比,细胞存活率随着白黎芦醇浓度的增加而加强,且100 μmol/L白藜芦醇组细胞存活率为(92.66±3.27)%,高于氨基胍阳性对照组[(82.18±2.06)%];在白黎芦醇6.25～100 μmol/L浓度范围内,SOD、GSH-Px活性、COⅡ蛋白及mRNA表达水平随着白藜芦醇浓度增加而逐渐升高;LDH漏出量、NO、MDA含量、iNOS活性随着处理浓度的增加而逐渐降低.结论 白藜芦醇对甲醛诱导PC12细胞损伤具有保护作用,在一定范围内呈剂量-效应关系;能有效改善甲醛所致PC12细胞的氧化损伤,提高细胞存活率;这种抗氧化活性可能与抑制甲醛/ROS、甲醛/NOS/NO氧化应激途径、减轻线粒体损伤有关.     

慢性阻塞性肺疾病患者组织基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1及血管内皮生长因子测定的临床价值

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期及稳定期患者,血清组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度变化及相关性。方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)测定73例COPD患者(急性加重期34例,稳定期39例)及对照组32例受试者血清MMP-9、TIMP-1、VEGF的浓度(ng/m L)。结果:(1)COPD患者血清VEGF、MMP-9及TIMP-1的水平以及MMP-9/TIMP-1比值均明显高于正常对照组,急性加重期COPD患者上述指标升高尤为显著。(2)COPD组中,MMP-9与TIMP-1正相关,VEGF与MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值分别具有正相关性。(3)COPD组患者血浆中MMP-9、TIMP-1浓度、MMP-9/TIMP-1浓度比值、VEGF浓度与FEV1/FVC%、FEV1占预计值%均呈负相关性。结论:COPD患者血清MMP-9浓度、TIMP-1浓度、MMP-9/MMP-1比率及VEGF浓度升高,并且与气流阻塞程度成负相关,可以作为评价患者病情严重程度的指标。     

瑞舒伐他汀对老年收缩性心力衰竭病人基质金属蛋白酶的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对老年心功能Ⅱ～Ⅲ级的收缩性心力衰竭病人基质金属蛋白酶(MMP)-1,MMP-8和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平的影响。方法收集85例NYHAⅡ～Ⅲ级的老年收缩性心力衰竭病人,病情稳定后分为对照组(不接受瑞舒伐他汀治疗)和药物组(接受瑞舒伐他汀10 mg/d)。服药前及4周后检测并比较2组MMP-1、MMP-8和TIMP-1的水平。结果 4周后,药物组MMP-1的水平较对照组明显降低[(11. 3±3. 4)μg/L比(13. 2±3. 9)μg/L,P 0. 05],TIMP-1的水平较对照组明显升高[(568±106)μg/L比(498±111)μg/L,P 0. 01],MMP-8的水平较对照组无明显改变[(16. 6±6. 4)μg/L比(17. 6±6. 3)μg/L,P 0. 05]。结论瑞舒伐他汀可以降低收缩性心力衰竭病人MMP-1水平,升高TIMP-1水平,对MMP-8水平无明显影响。     

茯苓酸对结肠癌细胞增殖凋亡、迁移侵袭及PERK/ATF4信号通路蛋白表达的影响

目的 观察茯苓酸（PA）对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、迁移、侵袭和蛋白激酶RNA样ER激酶（PERK）/转录激活因子4(ATF4)信号通路表达的影响。方法 将SW480细胞分为四组，PA组加入8μmol/L的PA,PA+PERK抑制剂GSK2656157组加入8μmol/L的PA+2μmol/L的GSK2656157, PERK激活剂组加入8μmol/L的CCT020312，对照组用正常培养基培养。培养24 h时采用MTT法测算各组细胞存活率，培养24 h时采用细胞克隆形成实验测算各组细胞克隆数，培养24 h时采用流式细胞仪术测算各组细胞凋亡率，采用Transwell小室观察各组细胞侵袭、迁移情况，采用WESTERN Blotting法检测各组细胞细胞通路相关蛋白（PERK、ATF4）、内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）、上皮间质转化（EMT）相关蛋白[E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]。结果 与PA组比较，PA+GSK组细胞存活率及克隆形成数低、细胞凋亡率低、迁移细胞数及侵袭细胞数多（P均<0.05）；与对照组比较，PA组和...     

瑞舒伐他汀通过抑制AMP活化蛋白激酶/Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3途径减轻高糖诱导的血管内皮功能障碍研究

目的探讨瑞舒伐他汀(RST)在高糖(HG)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中对Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体激活的调节作用及机制。方法建立HG诱导HUVECs体外模型,细胞分为正常葡萄糖+RST 0(Con)、2(RST 2)、5(RST 5)、10(RST 10)、20(RST 20)、30μmol/L(RST 30)组和HG+RST 0(HG)、2(HG+RST 2)、5(HG+RST 5)、10(HG+RST 10)、20(HG+RST 20)、30μmol/L(HG+RST 30)组。细胞转染实验增加HG+RST10+si-MP活化蛋白激酶(AMPK)组。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法检测细胞活力,H2DCFDA荧光探针检测细胞内活性氧水平,Western blot分析AMPK/NLRP3途径蛋白表达,ELISA法测定上清液IL-1β和IL-18水平。结果 HG+RST 5、HG+RST 10组改善HG诱导的细胞损伤,用于后续实验。与HG组比较,HG+RST 5、HG+RST 10组活性氧簇、IL-1β、IL-18水平及NADPH氧化酶4(NOX4)、硫氧还蛋白相互作用蛋白、NLRP3、半胱天冬酶1(Caspase-1)蛋白表达水平降低(P0.05或P0.01),p-AMPK/AMPK水平蛋白表达水平升高(P0.05或P0.01)。与HG+RST 10组比较,HG+RST10+si-AMPK组NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平及IL-1β、IL-18水平升高(P0.05或P0.01),p-AMPK/AMPK蛋白表达水平降低(P0.01)。结论瑞舒伐他汀通过激活AMPK磷酸化和抑制NLRP3炎症小体激活,缓解内皮炎症和氧化应激。