hOGG1低表达肿瘤细胞对阿霉素的敏感性研究

目的 研究8-羟基鸟嘌呤DNA 糖苷酶1基因(hOGG1)低表达细胞对阿霉素的敏感性,为化疗增敏提供实验依据.方法 用不同剂量的阿霉素处理肺腺癌A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而获得的hOGG1低表达的A549-R细胞,用MTT法测定两种细胞的存活率;体外微核试验及单细胞凝胶电泳检测两种细胞微核率及DNA损伤与修复的差异;流式细胞术检测周期分布、凋亡率和细胞增殖指数.结果 A549-R细胞阿霉素半数抑制浓度(IC50)低于A549细胞 (P＜0.05);阿霉素可诱导两种细胞的微核率增高,而在相同阿霉素剂量作用下A549-R细胞微核率较A549细胞更高(P＜0.05);单细胞凝胶电泳结果显示阿霉素作用下两种细胞均有不同程度DNA损伤,A549-R细胞的拖尾率和DNA迁移长度大于A549细胞(P＜0.05);与A549细胞比较,A549-R细胞更不易修复.流式细胞术检测显示:阿霉素处理使两种细胞都表现为G0/G1期细胞阻滞,细胞凋亡随阿霉素浓度增加而增加,细胞增殖指数随阿霉素浓度增加而降低,这些变化均以A549-R细胞更为明显.结论 hOGG1低表达使细胞DNA修复能力降低,从而使细胞对阿霉素的敏感性增强.     

汽油、甲醇燃烧汽车尾气类雌激素活性研究

目的探讨汽油、甲醇燃烧汽车尾气的雌激素样作用，为甲醇取代汽油作为汽车燃料提供卫生学依据．方法采用环境雌激索基因重组酵母测评系统，分别测定汽油、甲醇燃烧汽车尾气的雌激素活性。结果汽油燃烧汽车尾气在高剂量1000mL／mL时吸光度值（A600）仅为0．081，与二甲亚砜（DMSO）对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05），说明汽油尾气在该剂量下对酵母细胞有毒性作用；汽油燃烧汽车尾气在31．25mL／mL荆量时检出雌激素活性，与DMSO对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05），其他各荆量组均未检出雌激素活性。甲醇燃烧汽车尾气各剂量组与DMSO对照组相比，A600差异均无统计学意义（P〉0．05），也未检出雌激素活性．结论以汽油作为燃料的汽车尾气具有微弱雌激素样作用，以甲醇作为燃料的汽车尾气无雌激素样作用。     

体外代谢活化对香烟烟雾诱导的细胞氧化损伤的影响

目的 探讨香烟烟雾对A549细胞的氧化损伤作用以及体外代谢活化对细胞氧化损伤效应的影响. 方法香烟烟雾染毒A549细胞,在加与不加S9的条件下测定细胞活性氧(ROS)含量,检测细胞染色体、DNA损伤及抗氧化酶活性. 结果随着香烟烟雾浓度的增加,加与不加S9细胞的ROS含量、DNA损伤、染色体损伤均增加,SOD和GSH-Px活性均降低.相同染毒剂量下,加S9细胞ROS含量高于不加S9细胞;加S9细胞微核率、拖尾率、L Tail、OTM值均大于不加S9细胞;加S9细胞抗氧化酶活性的降低趋势较不加S9细胞更为显著. 结论香烟烟雾对A549细胞具有氧化损伤作用,体外代谢活化可以增加细胞的氧化应激,从而加剧香烟烟雾对细胞的遗传毒性.     

单细胞凝胶电泳法检测双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤

目的 采用单细胞凝胶电泳法研究双酚A对小鼠睾丸细胞DNA的影响.方法 制备小鼠生殖细胞悬液,用不同浓度的双酚A染毒1 h后,应用单细胞凝胶电泳法检测睾丸细胞DNA损伤情况.结果 与对照组比较,除10-10 mol/L组外,其他各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P＜0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P＜0.05),在10-5 mol/L和10-6 mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论 双酚A体外染毒可造成小鼠睾丸细胞DNA损伤,且随着剂量的增加有加重的趋势.     

对单细胞凝胶电泳法检测细胞核DNA损伤的影响因素

目的 :探讨对单细胞凝胶电泳法 (SCGE)检测细胞核DNA损伤的影响因素。方法 :结合一氧化氮对食管癌细胞系EC10 9细胞核DNA的损伤作用模型 ,对SCGE实验中的影响因素等进行分析讨论和综合评价。结果 :受试物的浓度及其对细胞的作用时间、细胞周期等是SCGE实验中的主要影响因素。结论 :SCGE中的一些因素对实验结果有显著影响。     

煤焦沥青烟提取物致大鼠肺泡巨噬细胞DNA损伤作用

目的　研究煤焦沥青烟提取物致大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )DNA损伤作用。方法　将大鼠肺泡巨噬细胞分 4组与不同浓度的煤焦沥青烟提取物共育 1h后 ,采用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠肺泡巨噬细胞DNA断裂情况。结果　单细胞凝胶电泳后 ,对照组肺泡巨噬细胞无明显细胞拖尾现象 ,而经不同浓度的煤焦沥青烟提取物处理后 ,AM细胞有明显的拖尾现象 ,且随煤焦沥青烟提取物浓度增加 ,AM细胞彗星率上升 ,各组间差异有高度显著性 (P <0 .0 0 1) ,而且损伤的严重程度与作用物浓度呈相关关系 (Spearman相关系数为 0 .6 73,P <0 .0 0 1)。结论　煤焦沥青烟提取物作用于大鼠肺泡巨噬细胞可引起DNA链的断裂 ,单细胞凝胶电泳适于检测肺泡巨噬细胞的DNA链断裂     

川陈皮素诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的研究

目的：探讨川陈皮素（5，6，7，8，3′4′-hexamethoxyflavone）促非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用。方法：以不同浓度的川陈皮素作用于A549细胞，分别用细胞生长曲线、集落形成抑制实验研究川陈皮素对A549的增殖抑制作用，Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态变化，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，流式细胞术观察细胞周期改变。结果：生长曲线提示川陈皮素对A549细胞的抑制作用呈明显的时效和量效关系；集落形成抑制实验表明：药物浓度10μg/mL～40μg/mL对A549集落形成抑制率为10％～50％。Hoechst33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化；DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型DNA梯状务带。流式细胞仪检测到细胞周期阻滞于G2／M期，G0／G1期细胞明显减少；随着刑量的增加凋亡率明显增高。结论：川陈皮素可以诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡。     

小鼠囊胚细胞DNA损伤与维甲酸的诱导作用

目的观察维甲酸(RA)对小鼠囊胚细胞DNA的损伤,进一步证实RA对囊胚细胞凋亡效应。方法获取妊娠3.5d小鼠囊胚,分别培养在含0、1μmol/l和10μmol/l的RA的M199培养基中24h,用单细胞凝胶电泳技术检测RA对体外培养小鼠囊胚细胞DNA的损伤。结果 RA可破坏囊胚细胞DNA的结构,诱导细胞凋亡,导致囊胚滋养层和内细胞群细胞减少。结论维生素A酸对小鼠胚胎的生长发育具有细胞毒性作用。     

黄芪总苷对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究黄芪总苷(TA)对人肺腺癌A549细胞增值及凋亡的影响.方法:采用不同药物浓度作用于人肺腺癌A549细胞,应用MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术分析药物对细胞的影响.结果:TA对A549细胞有明显的生长抑制及凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性.DNA凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带.结论:在一定条件下,TA可抑制人肺腺癌细胞增殖,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性,同时可诱导其凋亡,凋亡可能与细胞周期阻滞有关.     

5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素诱导肺癌A549细胞生长抑制和凋亡

目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素(ADFMChR)诱导人肺癌细胞(A549)细胞生长抑制和凋亡的作用。方法:体外培养人肺癌A549细胞,平皿集落形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,软琼脂集落形成法测定细胞非锚定依赖性生长能力,流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的基因DNA梯形条带。结果:平皿集落形成法和软琼脂集落形成法结果显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制A549细胞生长,FCM分析发现ADFMChR呈剂量依赖性诱导A549细胞凋亡;ADFMChR(10μg/mL)孵育A549细胞48h后,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带。结论:ADFMChR具有抑制人肺癌A549细胞生长和诱导凋亡作用。     

纳米羟基磷灰石的分子生物相容性研究

目的 通过对纳米羟基磷灰石(nanosize-hydroxyapatite,nHA)的毒性检测,初步探讨生物材料分子生物相容性研究的必要性.方法 通过形态学观察、四甲基偶氮唑蓝(methl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验及彗星电泳检测nHA的毒性.结果 倒置显微镜观察显示不同浓度的 nHA浸提液对体外培养细胞的形态无明显影响;MTT实验表明nHA对细胞生长和增殖无明显抑制作用,不同浓度浸提液的细胞毒性均为1级,无毒,与生长良好的L-929细胞形态观察结果相符合;彗星电泳结果显示随 nHA浸提液浓度和时间的递增彗星率逐渐增大.结论 nHA具有良好的细胞相容性,但对L-929细胞DNA可能有损伤作用,提示可能有遗传毒性作用,因此检测纳米材料分子生物相容性非常必要.     

川陈皮素对肺癌的增殖抑制作用及其机制

目的 观察川陈皮素对肺癌的体内外抑瘤作用并初步探讨其机制.方法 应用MTT法检测不同浓度川陈皮素作用对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用.Western blot检测川陈皮素处理后A549细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.彗星电泳检测川陈皮素作用后A549细胞DNA损伤情况.通过C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型进行体内抗瘤实验,TUNEL法观察药物作用后的肿瘤细胞凋亡情况,并用免疫组化法检测瘤组织中Bax、Bcl-2和Caspase-9蛋白表达情况.结果 体外实验显示,川陈皮素作用对A549细胞有明显的增殖抑制作用,并且抑制效应随浓度增加而增强;川陈皮素作用A549细胞24 h后,随着作用剂量的加大,Bcl-2蛋白表达下调,而Bax蛋白则表达上调;对细胞DNA具有损伤作用,当达到一定作用剂量和作用时间时可以使A549细胞发生凋亡.体内抑瘤实验表明,川陈皮素高(300 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)浓度组对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率分别为43.70%、27.59%和20.14%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);川陈皮素能使Lewis肺癌细胞发生凋亡;使Lewis肺癌组织内Bax和Caspase-9表达上调,Bcl-2表达下调.结论 川陈皮素在体内外均有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制可能与改变Bcl-2/Bax的比值,启动Caspase级联反应相关.     

汽油尾气致大鼠肺组织氧化损伤机制的研究

目的 探讨汽油尾气对大鼠肺DNA损伤、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶-1(OGG1)表达和细胞超微结构的影响.方法 将汽油尾气的颗粒物、冷凝物和半挥发性有机物的二氯甲烷提取物以0、5.6、16.7和50.0 L/kg的剂量经气管滴注染毒SD大鼠,每周一次,共4次,末次染毒24 h后处死动物,用彗星实验检测肺组织细胞中DNA单链断裂水平,免疫组化检测肺组织中OGG1的含量,并在电镜下观察各型肺细胞超微结构的变化.结果 在汽油尾气16.7和50.0 L/kg组,肺组织细胞的拖尾率明显高于溶剂对照组(P<0.05),并有随剂量增加而增加的趋势,但各剂量组尾长的增加均无统计学意义;而汽油尾气中、高剂量组OGGI蛋白水平明显增加(P<0.05);在汽油尾气50.0 L/kg组,肺组织各型细胞中的线粒体发生肿胀和空泡化,且线粒体数量明显减少.结论 汽油尾气可诱导大鼠肺组织DNA单链断裂、OGG1蛋白含量增加和线粒体的损伤.     

碱基切除修复基因HOGG1特异性锤头状核酶表达载体的构建及其功能的初步研究

目的阿霉素是一种临床上广泛使用的抗肿瘤药物，但其治疗作用的发挥受到耐药性的限制。目前研究显示阿霉索主要通过诱导活性氧自由基的产生而杀死肿瘤细胞。人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶（HOGG1）是一种DNA氧化损伤的修复酶，可特异性的切除由活性氧产生的8-羟基鸟嘌呤。针对这一机制，设计并合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因，构建其真核表达载体并初步探讨在该基因作用下，人肺腺癌A549细胞株对阿霉素的药物敏感性的影响。方法人工设计并合成核酶基因（RZ），将其克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，阳性重组子由BamH Ⅰ和EcoRⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE6的介导下引人A549细胞株，RT-PCR（逆转录多聚酶链反应）法鉴定转染，并半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。MTT法检测细胞转染前后对阿霉素敏感性的变化；彗星试验检测细胞转染前后DNA氧化损伤修复能力的改变。结果经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列成功克隆入pcDNA3．1（＋）中，命名为pcDNA3．1（＋）．RZ。经RT-PCR法鉴定质粒成功导入靶细胞中，并检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降36％，与空白细胞组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。MTT法检测显示转染细胞组对阿霉素的药物敏感性增加，与未转染细胞组之间差异具有统计学意义（P〈0．05）；彗星试验表明在1．0μg／mL阿霉素作用下，转染细胞组较未转染细胞组DNA损伤程度增加（P〈0．05），但无时效关系。结论成功构建HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体。核酶在A549细胞内有效抑制靶基因HOGG1的表达。增加了该细胞对抗肿瘤药物阿霉素的敏感性。为进一步研究HOGG1基因的功能莫定了基础。     

Cytotoxicity and genotoxicity assessment of Euphorbia hirta in MCF-7 cell line model using comet assay

Objective

To evaluate the cytotoxicity and genotoxicity activity of Euphorbia hirta (E. hirta) in MCF-7 cell line model using comet assay.

Methods

The cytotoxicity of E. hirta extract was investigated by employing brine shrimp lethality assay and the genotoxicity of E. hirta was assessed by using Comet assay.

Results

Both toxicity tests exhibited significant toxicity result. In the comet assay, the E. hirta extract exhibited genotoxicity effects against MCF-7 DNA in a time-dependent manner by increasing mean percentage of DNA damage. The extract of E. hirta showed significant toxicity against brine shrimp with an LC₅₀ value of 620.382 µg/mL (24 h). Comparison with positive control potassium dichromate signifies that cytotoxicity exhibited by the methanol extract might have moderate activity.

Conclusion

The present work confirmed the cytotoxicity and genotoxicity of E. hirta. However, the observed toxicity of E. hirta extracts needs to be confirmed in additional studies.     

Comparison of the mutagenicity of exhaust emissions from motor vehicles using leaded and unleaded gasoline as fuel

lNTRODUCTIONInShanghai,therearenowabout7(X)oOomotorvehiclesandthefigUrewillgouptoaboutl(XX)(XX)bytheyear2(XX)-Mostofthevehicleswereoldandbuiltwithoutdatedmanufacturingtechnology.About5o%vehiclesexceededtheexhaustemissionstandani.Inadditiontocrowdedroadsandabsenceofcompulsoryrequirementsforcatalyticconverters,thepollutionofvehicleexhaustposesaveryseriousairpollutionproblem.Thel996datafromtheShanghaiEnvironmentalProtectionBureau(EPB)showedthatabout86%ofcar-bonmonoxides(CO),96%ofhydro…     

烹调油烟对大鼠肺细胞的DNA损伤机制

目的：以大鼠肺Ⅱ型细胞为靶细胞,检测烹调油烟的细胞毒作用和对细胞ＤＮＡ的损伤。方法：烹调油烟颗粒提取物对大鼠肺Ⅱ型细胞染毒２４ｈ后,应用ＭＴＴ法、溴乙锭荧光法以及单细胞凝胶电泳技术检测烹调油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞的细胞毒性和ＤＮＡ的损伤。结果：在受试剂量范围内,烹调油烟颗粒提取物具有细胞毒性,可致ＤＮＡ交联及断裂的作用随染毒剂量的增加而增强,并存在剂量－反应关系（ｒ细胞毒性＝－０．９４８,Ｐ＜０．０１;ｒ交联＝０．９７６,Ｐ＜０．０１;ｒ断裂＝０．９５７,Ｐ＜０．０１）。结论：烹调油烟颗粒提取物对大鼠肺Ⅱ型细胞具有细胞毒性作用和ＤＮＡ损伤作用,可使ＤＮＡ链间交联和ＤＮＡ单链断裂。     

小牛脾提取物注射液对人肺癌细胞增殖 及放射敏感性的影响

目的 探讨小牛脾提取物注射液（CSEI）对人肺癌细胞A549 增殖及放射敏感性的影响。 方法 分别采用不同浓度的CSEI 及不同放射剂量处理A549 细胞48 h 后,用MTT 法和平板克隆实验检测 细胞增殖抑制率、增敏比（SER）及细胞集落形成率;PI 单染和Annexin V-FITC/PI 双染法检测CSEI 和 放射线对细胞周期和凋亡的影响;彗星实验检测细胞核DNA双链损伤;Western blotting检测Bcl-2、Bax、MDR1 及Survivin 的表达。结果 经MTT 法检测,1.0 mg/ml 是CESI 的无毒最高剂量。1.0 mg/ml CESI 预处理后, 可增加不同剂量（2、4、6、8 及10 Gy）放射线对A549 细胞增殖的抑制作用（P <0.05）,SER 为（1.42±0.06）。 克隆形成实验显示,放射线（5 Gy）+CSEI（1.0 mg/ml）组集落形成能力最弱（P <0.05）。彗星实验和流式 细胞术结果显示,放射线（5 Gy）+CSEI（1.0 mg/ml）组细胞核拖尾细胞数、尾长、尾距及凋亡率多于空白 对照组、放射线组及CSEI 组细胞（P <0.05）,而且与空白对照组比较,放射线（5 Gy）+CSEI（1.0 mg/ml） 组G1 期细胞和S 期细胞减少,而G2/M 期细胞增多;同时放射线（5 Gy）+CSEI（1.0 mg/ml）组Bcl-2 和 Survivin 蛋白表达下降,Bax 蛋白表达升高（P <0.05）。结论 1.0 mg/ml CSEI 可增强人肺腺癌细胞系A549 对放射线的敏感性,其作用机制可能与影响肿瘤细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡及细胞核DNA 双链损伤等 有关。