甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品的建立

目的 建立甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品,制订其质量标准,用于该类试剂的质量评价。方法 通过对200多份单采浆站收集到的血浆进行初筛,筛选出16份备选样本。经多家实验室协助标定,分析标定结果,确定参考品的组成及其质量标准,并对参考品稳定性进行评估。结果 本参考品由10份阴性参考品、1份最低检出限参考品和重复性参考品组成。质量标准为10份阴性参考品符合率（-/-）应为10/10,最低检出限参考品要求1:40稀释时检测阳性,重复性参考品要求1:15稀释时连续检测10次,结果应均为阳性,且显色度均一。稀释血浆应均为HCV、HBV和HIV标志物阴性。参考品在4℃放置3、7 d和反复冻融2次条件下相对比较稳定。结论 成功建立甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品,可用于该类试剂的质量控制及评价。     

SARS病毒抗体第一代参考品的研制及初步应用

目的 建立严重急性呼吸综合征(SARS)病毒抗体参考品，用于对SARS病毒抗体诊断试剂的实验室评价。方法 收集临床确诊为SARS病人血清和非SARS人群血清，用不同的SARS病毒抗体诊断试剂进行检测筛查，选择不同样品组成参考品。并用该参考品对不同试剂进行初步评价。结果 SARS病毒ISM抗体的参考品由38份组成，其中包括11份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品6份，精密性样品1份；SARS病毒总抗体(包括IgG)由46份组成，其中包括18份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品7份，精密性样品1份。结论 初步应用结果显示该参考品确实能够反应不同试剂的质量差异。     

人类免疫缺陷病毒1型RNA定量参考品的研制

目的　研制人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)RNA核酸国家参考品及制定相应标准。方法　收集各地HIV感染者阳性血浆和HIV非感染者血浆 ,应用HIV、HCV抗体和HBsAg检测试剂进行筛选 ,对HIV抗体筛查阳性者用新加坡Genelabs公司的HIVBLOT 2 2确证试剂进行确证。以世界卫生组织 (WHO)推荐的HIVRNA标准品对国家HIV核酸参考品中定量样品进行标定 ,并对其稳定性进行研究。结果　经过筛选 ,选出 8份样品为阴性参考品 ,8份样品为阳性参考品 ,3份为定量参考品 ,6份为灵敏度参考品 ,5份为线性参考品。几次独立标定 ,得到定量参考品HIVRNA的国际单位(IU) ,其中b1～b3的国际单位的对数值在 x±s以内 ,表明结果可靠。稳定性实验数据表明 ,该核酸参考品在 4℃以下可存放 4d。结论　初步建立了HIV核酸参考品 ,这将对HIV核酸诊断试剂的质量评价提供重要依据     

用DNA重组法表达HCV部分NS4—NS5基因

为研究丙肝病毒的复制机理,制备检测丙肝抗体的诊断试剂,需要大量纯化的各种丙肝病毒蛋白。我们在国内首次用DNA重组的办法,在大肠杆菌中表达了HCV部分NS4—NS5基因。在SDS—PAGE中,表达产物呈现一条约50kD的电泳带,表达蛋白约占菌体总蛋白的20％。该表达蛋白经分子杂交分析,可与抗-HCV非结构区抗体血浆发生特异反应。用部分提纯的表达蛋白制备的ELISA试剂,可特异地检测出我国抗—HCV诊断试剂参考品全部10个阳性样品,而对全部10个阴性样品均未发生特异反应,显示了该表达产物可用于制备抗—HCV诊断试剂的前景。     

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和丙型肝炎病毒核酸联合检测试剂的评价

目的 了解人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）和丙型肝炎病毒（HCV）核酸联合检测试剂检测的敏感性、特异性以及检测中国不同亚型样品的适应性。方法 用酶联免疫试剂对来自于不同地区的HIV感染者或可疑感染者献血员样品进行HIV抗体和HCV抗体检测。对HIV抗体阳性者进行抗体确证。用HIV-1和HCV核酸联合检测试剂对样品进行检测，对初次检测阳性者，用HIV RNA和HCV RNA鉴别试剂单独检测，区分是HIV RNA阳性或是HCV RNA阳性。结果 74份HIV和HCV抗体均阳性的样品，HIV／HCV RNA检测也为阳性，5份HIV和HCV抗体均阴性的样品，HIV／HCV RNA检测也为阴性；84份HIV抗体确证为阳性的样品，有82份检测为HIVRNA阳性，7份HIV抗体阴性的样品检测均为HIV RNA阴性，12份HIV抗体不确定的样品，有6份检测为HIV RNA阳性；81份HCV抗体阳性样品中有70份检测为HCV RNA阳性，22份HCV抗体阴性样品中有18份检测为HCV RNA阴性，4份检测为HCV RNA阳性。结论 该试剂的灵敏度较高，尤其在HCV抗体阴性样品中检出HCV RNA阳性者。因此，可用于献血员筛查，减少窗口期的传播。     

血清抗—HD—IgM方法的建立及初步应用

本文采用国产试剂建立抗-HD-IgM的EIA检测方法,开采用不同血清稀释度进行研究。结果表明最适宜血清稀释度为10~(-2),按10~(-2)作血清稀释,对45份HDV/HBV感染的患者血清进行抗-HD-IgM检测,阳性23例(51.11％),17份单纯HBV感染者及9份正常人标本均为阴性,表明本方法具有较好的特异性和敏感性。45例HDV/HBV感染者中,血清HDAg(+)32例(71.11％),抗-HD(+)18例(40％)。     

化学发光法和酶联免疫法作为筛选试验测定丙肝抗体的评价

目的比较化学发光法(CLIA)和酶联免疫法(EIA)测抗-HCV对诊断HCV感染的检出率,分析CLIA测定抗-HCV作为HCV感染初筛试验的重要临床意义。方法分别用CLIA、EIA方法检测所有临床标本中的抗-HCV,选取抗-HCV初筛阳性样本进行HCV RNA确认试验。结果 6461例样本中,EIA和CLIA测抗-HCV阳性率分别为2.86%和3.17%;确认试验中,CLIA法抗-HCV阳性与HCV RNA的符合率为97.1%,显著高于EIA组(91.9%)。EIA法测抗-HCV,S:CO>5.0以上,与HCV RNA检测符合率可达100%;弱阳性样本,与HCV RNA符合率为69.7%;CLIA法测抗-HCV,S:CO>2.0以上,与HCV RNA检测符合率可达100%;弱阳性样本,与HCV RNA符合率为92.9%。有31例样本CLIA法抗-HCV和HCV RNA阳性,而EIA法抗-HCV阴性;有4例样本EIA法检测为阳性,而CLIA法和PCR确认试验均为阴性。结论CLIA法测抗-HCV作为HCV感染初筛实验,与传统EIA相比,特异性和阳性预测值更高,有效降低了假阳性率,有利于临床医生对HCV感染患者的早期诊断和治疗。     

HCV非结构基因NS4的基因工程表达

用基因工程法在大肠杆菌中表达丙肝病毒(HCV)的部分非结构NS4基因,经分子杂交分析,表达产物可特异地与抗-HCV非结构区抗体反应。在SDS-PAGE中,表达产物呈现一条约49kD的融合蛋白带,约为菌体总蛋白的20％。用部分纯化的表达产物制备的ELISA试剂,可检测出国家丙肝诊断试剂参考品全部10个阳性样品中的8个,而对全部10个阴性样品均未出现假阳性反应,其检出率和P/C值均高于目前国内所用的5—1—1合成肽。显示了该表达产物用于丙肝诊断试剂及确证试剂的可能性。     

HIV抗体酶联免疫诊断试剂检测不同基因型抗体的研究

目的 分析不同HIV抗体酶联免疫诊断试剂对检测HIV不同基因型抗体的情况。方法 对不同地区的20份HIV抗体阳性样品中HIV核酸进行扩增，对PCR产物进行测序并进行基因型别分析。用不同试剂对系列稀释的不同基因型样品进行检测。结果 20份样品均为HIV RNA阳性，其中9份样品为HIV B亚型，9份样品为：HIV C或BC重组，2份为HIVAE重组。不同试剂对HIV不同基因型抗体的检测灵敏度无明显差异。结论 我国主要的商业化HIV抗体诊断试剂产品检测不同基因型抗体的能力无明显差异。     

肠道病毒71型抗原检测试剂参考品制备及标定

目的制备一套EV71抗原检测试剂盒质量控制用参考品。方法用组织培养法制备的一组肠道病毒原液及EV71病毒液,制备成10份阴性参考品、10份阳性参考品、2份灵敏度参考品及1份精密度参考品;以上样品经多人次标定后确定最终结果。结果阴、阳性参考品各10份标定结果分别为10阴及10阳;2份灵敏度参考品标定结果分别为177.97U/mL和1966.86U/mL;精密度参考品平均CV值9.29%。参考品37℃保存5天及反复冻融6次对检测结果没有影响。结论制备的参考品经标定,并通过反复冻融、37℃热稳定性试验,检测结果稳定,可用于EV71抗原检测试剂的质量控制,保证抗原检测试剂检测结果的特异性、灵敏度及稳定性。