利用双水相萃取技术分离纯化尿激酶

通过研究双水相萃取系统的各种影响因素：乙醇／（NH4）2SO4的组成比例、pH值、无机盐的加入、粗酶的浓度等,探索以乙醇／（NH4）2SO4组成的双水相萃取体系纯化尿激酶的最佳条件。建立以乙醇／（NH4）2SO4组成的双水相萃取体系分离纯化尿激酶的新途径。结果表明：双水相萃取系统冰乙醇浓度为65％,（NH4）2SO4浓度为10．0％,pH8．0,酶加入量为30％,且不加入任何其他无机盐的条件下,尿激酶的纯化倍数可达到9．2倍,回收率最高达92％。     

双水相萃取法分离竹叶黄酮的工艺研究

以竹叶黄酮水提溶液为原料,采用PEG(聚乙二醇)/(NH4)2SO4双水相体系对竹叶黄酮进行萃取,考察了PEG平均相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值、NaCl质量分数、原液质量分数、萃取温度等对双水相及竹叶黄酮萃取效果的影响。双水相萃取法提取竹叶黄酮的最优条件为:PEG 400 31%,(NH4)2SO411%,pH 3.9,NaCl 0.7%,原液51.5%,萃取温度20℃,在此条件下得到的竹叶黄酮萃取率为97.8%。结果说明,双水相萃取法操作简单方便,成本低,不会引起生物质失活或变性,适合于黄酮类化合物的萃取分离。     

用双水相萃取分离纯化磷酸甘油酸激酶和磷酸甘油醛脱氢酶

用聚乙二醇（ＰＥＧ）／羟丙基淀粉（ＲｅｐｐａｌＰＥＳ）双水相体系两步法从黄豆中分离磷酸甘油酸激酶（ＰＧＫ）和磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）。ＰＧＫ在上相收率及ＧＡＰＤＨ在下相收率均在８０％以上。放大采用离心倾析机（ｄｅｃａｎｔｅｒ）连续处理匀浆液,用离心萃取器（ｓｅｐａｒａｔｏｒ）完成双水相体系的萃取两相分离。整个工艺具有处理量大、接触时间短、酶收率高的优点     

双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的研究

建立了由高分子化合物聚乙二醇(PEG4000)与葡聚糖40000(D40)形成的双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的新方法.考察了萃取体系相图,研究了PEG4000/D40质量分数、样品溶液加入量、pH值和温度等因素对双水相成相及桃叶珊瑚甙萃取率的影响.结果表明:PEG4000的质量分数为11%,D40质量分数为8%、样品溶液加入量为8 g,温度为60℃,溶液pH为7时,双水相体系对桃叶珊瑚甙有较高的萃取率,重复三次可达到66.32%,而且萃取得到的桃叶珊瑚甙产品的纯度达到48.67%,远远高于粗提物中的8.750%.     

双水相体系萃取人参根中人参皂苷的研究

建立稳定的聚乙二醇(PEG)与(NH4)2SO4双水相体系以分离人参根中人参皂苷。通过上下相体积比(R)、分配系数(K)和回收率(Y)分析双水相体系对人参皂苷的萃取效果,研究了PEG分子量、PEG/(NH4)2SO4质量分数、pH值和温度等因素对双水相成相及人参皂苷萃取的影响。结果表明:PEG分子量为3350、PEG3350的质量分数为12%、(NH4)2SO4质量分数为16%、溶液pH为7.0、温度为60℃时,双水相体系对人参皂苷有较高的萃取率,回收率可到达88.94%。     

1-辛基-3-甲基咪唑二氰铵盐/硫酸铵双水相体系分离纯化银杏黄酮

建立了由亲水性离子液体1-辛基-3-甲基咪唑二氰铵盐([C8mim][N(CN)2])和(NH4)2SO4形成的双水相萃取体系并应用于银杏黄酮的分离纯化研究。研究了盐浓度、体系温度、pH值、NaCl量等因素对银杏黄酮萃取效率的影响;并对下相中无机盐进行回收。体系由18.52%[C8mim][N(CN)2],25.93%(NH4)2SO4构成,加入1.5 mmol NaCl,在室温下进行萃取时萃取效率最佳,在最佳的条件下[C8mim][N(CN)2]/(NH4)2SO4体系对银杏黄酮的萃取效率达96.73%。与传统的双水相体系相比,该体系的萃取效率高,粘度低,同时(NH4)2SO4的回收率达90.54%。[C8mim][N(CN)2]/(NH4)2SO4双水相体系是一种很好的分离纯化银杏黄酮的方法。     

双水相萃取技术新进展

本文简要介绍了双水相萃取技术在生物活性物质的纯化及分析上的应用,并且从四个方面总结了双水相萃取技术的新进展和发展方向。     

应用双水相萃取技术提取香菇多糖的研究

利用聚乙二醇(PEG)-硫酸铵双水相体系提取香菇多糖,研究了不同PEG-硫酸铵组成的双水相体系对香菇多糖分配比和收率的影响。结果表明:PEG分子量在6000时对香菇多糖的提取效果较好;PEG6000浓度在24%时、硫酸铵浓度在30%时组成的双水相体系提取香菇多糖的效果最好,此时香菇多糖的分配系数(K)可达到1.90,收率(Y)可达到57.42%。     

绿肉山楂叶中五种黄酮类成分含量动态变化

为充分利用山楂叶用资源,采用反相高效液相色谱法,以ZORBAX Extend-C18色谱柱（250×4.6 mm,5 μm）,乙腈-0.5%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长345 nm,柱温25℃,对不同生长时期的绿肉山楂叶中牡荆苷、牡荆素2″-O-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素含量进行测定。结果表明,在此分析检测条件下牡荆苷、牡荆素 2″-O-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素的精密度、重复性、稳定性及平均加样回收率试验的RSD值均小于3%,方法准确可靠。绿肉山楂叶中含有的黄酮类成分主要以牡荆苷和金丝桃苷为主,且二者含量变化规律与其总黄酮含量变化相似,均在10月初含量达到最高;此时采摘,其质量完全符合《中国药典》的有关规定,故绿肉山楂可作为一种新的药用资源来进一步开发利用。     

白地霉Cryytococcus neoformans脂肪酶的双水相萃取

本文研究了不同无机盐的双水相体系对白地霉脂肪酶的萃取分离效果,对PEG/（NH4）2SO4成相系统进行了系统的研究,通过考察体系PEG分子量、不同的无机盐、PEG浓度、（NH4）2SO4浓度、离子强度、pH值及（NH4）2SO4浓度对反萃取的影响,并通过正交实验进一步优化了实验条件,初步确定在PEG浓度15%,（NH4）2SO4浓度22.5%,pH8.0,不加NaCl的条件下进行双水相萃取,脂肪酶分离系数和纯化倍数分别为6.8和7.5,比活力达到40.3 U/mg蛋白。     

Purification and Characterization of Polyphenol Oxidase From Waste Potato Peel by Aqueous Two-Phase Extraction

Potato peel from food industrial waste is a good source of polyphenol oxidase (PPO). This work illustrates the application of an aqueous two-phase system (ATPS) for the extraction and purification of PPO from potato peel. ATPS was composed of polyethylene glycol (PEG) and potassium phosphate buffer. Effect of different process parameters, namely, PEG, potassium phosphate buffer, NaCl concentration, and pH of the system, on partition coefficient, purification factor, and yield of PPO enzyme were evaluated. Response surface methodology (RSM) was utilized as a statistical tool for the optimization of ATPS. Optimized experimental conditions were found to be PEG1500 17.62% (w/w), potassium phosphate buffer 15.11% (w/w), and NaCl 2.08 mM at pH 7. At optimized condition, maximum partition coefficient, purification factor, and yield were found to be 3.7, 4.5, and 77.8%, respectively. After partial purification of PPO from ATPS, further purification was done by gel chromatography where its purity was increased up to 12.6-fold. The purified PPO enzyme was characterized by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), followed by K_m value 3.3 mM, and V_max value 3333 U/mL, and enzyme stable ranges for temperature and pH of PPO were determined. These results revealed that ATPS would be an attractive option for obtaining purified PPO from waste potato peel.     

白地霉脂肪酶的双水相萃取和反胶团提取

对影响双水相萃取和反胶团提取脂肪酶的各种因素进行了探讨,并通过正交实验进一步优化提取条件,PEG浓度15%,(NH4)2SO4浓度22.5%,pH8.0的条件下进行双水相萃取,脂肪酶纯化倍数达到7.5倍;CTAB浓度150mmol/L,相体积比4/2,水相pH8.0,温度40℃的条件下进行反胶团提取,脂肪酶的比活力达到最大,但其比活力稍有下降,约为原来的0.9倍。     

双水相萃取技术在白藜芦醇提纯工艺中的应用

论文研究了双水相萃取体系在提纯白藜芦醇工艺中的应用,用乙醇-硫酸胺-水双水相体系使虎杖提取液中的各物质按极性不同在油水两相中得到分离。双水相萃取时,白藜芦醇的含量远高于有机溶剂萃取,达34.29%。可见双水相技术可以完全代替有机溶剂萃取技术提纯白藜芦醇,产品纯度高,具有工艺简单,毒性小,成本低等优点。     

乙醇-磷酸氢二钾双水相体系萃取L-精氨酸

采用乙醇-磷酸氢二钾(K2HPO4)双水相体系萃取L-精氨酸。实验考察了乙醇浓度、K2HPO4浓度、pH、萃取温度对萃取分离L-精氨酸的影响。结果表明,L-精氨酸在该双水相体系的分配系数K随体系乙醇浓度、K2HPO4浓度的增大、萃取温度的升高而增大,随着体系pH的增大而减小;L-精氨酸在该双水相体系的萃取率随体系乙醇浓度和pH的增大而减小,随着体系K2HPO4浓度增大、萃取温度的升高而增大。     

双水相同时提取次烟叶中茄尼醇和烟碱的研究

研究新型双水相体系同时从次等烟丝中提取茄尼醇和烟碱的可行性和工艺条件。新型双水相体系为丙酮-磷酸氢二钾双水相体系,主要研究了丙酮与水不同体积比、磷酸氢二钾的加入量、料液比、浸提温度、浸提时间、双水相体系pH值对茄尼醇和烟碱得率的影响,确定了最佳提取条件:丙酮与水的体积为5∶5,磷酸氢二钾的加入量为3.0 g,料液比为0.025 g/mL(0.5 g/20.0 mL),浸提温度为50℃,浸提时间为4 h,pH值为10。     

Purification and characterization of crystallins by aqueous two-phase extraction

Crystallins are a family of water-soluble proteins that constitute up to 90% of the water-soluble proteins in mammalian eye lenses. We present in this paper an alternative purification method for these proteins using polyethylene glycol/dextran aqueous two-phase extraction. Under the appropriate conditions, we were able to recover the γ-crystallin fraction essentially free of the remaining proteins. High concentrations of salt at a neutral pH maximize the recovery of γ-crystallins in the top phase and minimize the contamination by the other proteins present in the lenses. The proposed protocol decreases the separation time by about 50% The complex partition behavior observed for these proteins reflects a delicate balance between protein/phase-forming species (various polymers and salts) and protein/protein interactions. This is evidenced in part, by the role played by the largest proteins in this group as a “pseudo” phase-forming species.     

响应面法优化白头翁总黄酮提取工艺

采用无水乙醇C2H5OH/硫酸铵(NH4)2SO4双水相体系分离白头翁中的黄酮。确定双水相体系组成为21%C2H5OH/22%(NH4)2SO4,通过单因素试验和Box-Benhnken实验设计探讨黄酮粗提液质量分数、NaCl质量分数和pH值对萃取效果的影响。确定最佳萃取条件为:黄酮粗提液质量分数12.5%,NaCl质量分数1.5%,pH 5.99,在此条件下,白头翁总黄酮主要分布在上相,萃取率可达73.6%。