散发性肝外胆管癌中RASSF1A基因启动子甲基化状态的研究

目的　检测肝外胆管癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化及各CpG位点甲基化发生率。方法　采用甲基化特异性聚合酶链反应 (MS PCR)和半巢式PCR对RASSF1A基因启动子区域进行扩增 ,并对扩增产物克隆测序。结果　在全部 48例肝外胆管癌组织中 ,RASSF1A基因启动子区域存在CpG位点甲基化现象的共 2 8例 ,16个CpG位点甲基化平均发生率为 42 .45 % ,明显高于对照组 (χ2 =11.77,P <0 .0 1)。结论　RASSF1A基因启动子区域CpG岛甲基化是RASSF1A失活的主要机制 ,在肝外胆管癌的发生过程中发挥重要作用。     

膀胱移行细胞癌患者RASSF1A蛋白表达和启动子区甲基化的研究

目的:探讨RASSFlA(RAS association domain family1A)蛋白表达水平与启动子甲基化的关系.方法:应用免疫印迹技术(western-blot)检测10例正常膀胱组织和23例膀胱移行细胞癌(Badder transitional cell carcinoma,BTCC)组织中RASSFlA蛋白表达水平;用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)方法检测正常膀胱组织,BTCC组织中RASSF1A基因启动子CPG岛甲基化状态.结果:RASSF1A蛋白在正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中表达率为30.4%(7/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05),但各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).在正常膀胱组织中,RASSF1A基因启动子未发生甲基化;在BTCC组织中,RASSF1A基因启动子甲基化频率为60.9%(14/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05).在14份启动子异常甲基化的BTCC标本中,13份同时伴有RASSFIA蛋白表达缺失或下调,两者存在明显相关性(P＜0.05).结论:RASSFlA基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化,使RASSF1A蛋白表达缺失,推测RASSFIA基因启动子CPG岛异常甲基化导致RASSF1A基因失活从而引起肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

原发性肝癌RASSF1A基因启动子区甲基化及其临床意义

目的 探讨原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及其与临床病理特征的关系.方法 采用MSP测定100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、6株肝癌细胞株及10例正常肝组织RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床病理特征的关系.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,用RT-PCR检测RASSF1A的重新表达情况.结果 100例肝癌组织中有69例(69％)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15％),6株肝癌细胞株有4株(4/6)发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因异常甲基化在3种组织中的发生率差异有统计学意义(x2=67.75,P＜0.001).RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原及组织分化存在一定相关性.发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,全部重新恢复表达.结论 原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关.经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一.     

膀胱癌和肾癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变

目的研究RASSF1A基因启动子的甲基化状态及在膀胱癌和肾癌发生中的作用。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测45例手术切除的膀胱癌组织和相应癌旁正常组织标本、9例电切膀胱癌组织、3例非肿瘤患者正常膀胱组织、12例肾癌组织和相应癌旁正常组织标本中RASSF1A基因的甲基化情况。结果膀胱癌组织中RASSF1A基因异常甲基化55.6%(30/54),其中手术切除组57.8%(26/45),电切癌组织异常甲基化4例,癌旁正常组织基因异常甲基化1例;肾癌组织中基因异常甲基化66.7%(8/12),相应癌旁正常组织中未发现基因甲基化。3例正常膀胱组织标本中未发现基因异常甲基化。膀胱癌组织中RASSF1A基因甲基化率有随组织分期升高的趋势,但与临床病理参数间无明显相关性。结论膀胱癌和肾癌组织中RASSF1A基因启动子高度甲基化,表明该基因甲基化可能与2种肿瘤的发生相关。     

肝细胞癌中抑癌基因的甲基化现象

目的 了解肝细胞癌(HCC)中RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化状况.方法 应用甲基化特异性PCR技术,检测40例HCC和4例正常肝组织中5种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系.结果 正常肝组织中无基因甲基化.癌组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化率分别是:90%、77.5%、70%、30%和5%.相应癌旁组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73的甲基化率分别为77.5%、77.5%、62.5%、5%和0%.结论 HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件.     

RASSF1A在胃癌中的表达及其甲基化状态的研究

目的：研究胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化及其蛋白表达情况,分析两者之间的关系及其在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化SP法检测39例胃癌组织,39例相应癌旁组织及30例对照组织中RASSF1A蛋白表达,应用甲基化特异性PCR法检测上述组织RASSF1A启动子CpG岛甲基化状态。结果：1）胃癌组RASSF1A蛋白表达阳性率53.8%明显低于癌旁组97.4%及正常对照组100%（P〈0.05）;2）胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化率为64.1%,显著高于癌旁组织甲基化率7.7%及对照组0%（P〈0.05）;3）在胃癌组织中,甲基化组RASSF1A蛋白表达明显低于非甲基化组（P〈0.05）。结论：胃癌组织RASSF1A蛋白表达缺失或低下,与其启动子甲基化程度增高显著相关,RASSF1A启动子甲基化在胃癌发生、发展中起一定作用。     

乳腺癌组织Ras相关区域家族1A基因启动子甲基化状态及临床意义

目的 探讨Ras相关区域家族1A基因(RASSF1 A)启动子甲基化在乳腺癌发生发展中的作用.方法 甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)法分析44例乳腺癌石蜡包埋切片组织中RASSF 1A基因启动子甲基化状况,分析甲基化与临床病理特征之间的关系.结果 44例乳腺癌组织切片中有25例RASSF1A基因启动子发生了超甲基化,甲基化率为56.8％,启动子甲基化与患者年龄明显相关(P＜0.05),与患者月经初潮年龄和生育次数无相关,与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)之间无相关.结论 RASSF1A启动子甲基化为乳腺癌中的频发事件,其发生率随着年龄增长而升高,在乳腺癌发生中起重要作用.     

肝细胞癌组织中Ras相关区域家族蛋白1A、肿瘤高甲基化基因1和p73基因的异常甲基化

目的探讨肝细胞癌中RAS相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、肿瘤高甲基化基因1(H IC1)和P73基因启动子异常甲基化状况及其与患者临床和病理因素之间的关系。方法收集肝细胞癌组织标本和对应的远癌组织标本各40例及2例健康人的肝组织标本;通过甲基化特异的聚合酶链反应方法检测这些标本中RASSF1A、H IC1和P73基因启动子区的甲基化状况。结果RASSF1A基因在癌和远癌组织中启动子区的甲基化率分别为90.0%和72.5%,癌组织中的甲基化率高于远癌组织(P<0.05)。H IC1基因在癌和远癌组织中的甲基化率分别为77.5%和70.0%。P73基因在癌组织中甲基化率为5.0%,在远癌组织没有发现甲基化。健康人肝组织中未发现任何上述基因的异常甲基化。远癌组织中H IC1基因甲基化患者的年龄[(48±14)岁]比无甲基化患者[(57±11)岁]小(T=2.049,P=0.047)。3个基因甲基化发生情况与患者性别、是否合并乙型肝炎、肝硬化、甲胎蛋白水平、肿瘤大小、有无包膜和门静脉癌栓以及TNM分期之间未发现有统计学相关性。结论肝细胞癌中RASSF1A和H IC1基因启动子的高甲基化是普遍现象,年轻肝细胞癌患者H IC1甲基化现象更常见。     

原发性肝癌组织RASSF1A异常甲基化与DNMTs及HBV的关系

目的探讨原发性肝癌ras相关结构域家族1A（ras association domain family 1A,RASSF1A）异常甲基化与肿瘤组织中DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）转录水平变化及HBV感染的关系.方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）技术检测61例原发性肝癌组织RASSF1A基因异常甲基化情况,RT-PCR法检测其中三种主要DNA甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B）水平的变化.结果61例肝癌标本中RASSF1A基因启动子区异常甲基化45例（73.8%）;HBV感染者47例（77.1%）,其中MSP阳性32例;无HBV感染者14例,其中MSP阳性13例,RASSF1A基因异常甲基化与HBV感染之间的关系无统计学意义（x2=2.260,P=0.133）.肝癌组、肝癌细胞系组及HBV感染组DNMTs表达水平与正常对照组相比均显著升高;组内比较显示肝癌组中DNMT3A、DNMT3B在MSP阳性患者中较阴性患者升高（分别为t=3.494,P＜0.01;t=4.258,P＜0.01）,而DNMT1下降（t=3.221,P＜0.05）;HBV感染组中,MSP阳性组织其DNMT3B较阴性者升高（t=12.171,P＜0.01）.结论肝癌组织DNMTs水平变化与RASSF1A异常甲基化有密切关系;HBV感染与DNMT3B转录水平变化相关.     

RASSF1A promoter hypermethylatlon in plasma and tumor tissue of patients with hepatocellular carcinoma

目的 探讨肝细胞癌( hepatocellular carcimona,HCC)患者外周血浆和肿瘤组织中RASSF1A基因甲基化及其临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)检测36例HCC患者血浆及其对应癌组织中的RASSF 1A基因启动子甲基化状态,并分析其与临床参数的关系.结果 癌组织和外周血浆中RASSF1A基因甲基化率分别为83.3％ (30/36)和61.1％ (22/36),二者相关系数为r=0.561(P =0.0004).外周血浆和肿瘤组织中RASSF1A基因甲基化率与患者性别、年龄、HBV/HCV感染、肝硬化、肿瘤大小、AFP水平、肿瘤病理分级及临床分期、有无癌栓及是否为复发病例等之间无统计学相关性.以AFP≥400 ug/L为阳性,本组病例AFP阳性率为44.4％;以AFP≥20 ug/L为阳性,本组病例阳性率为69.4％.全部患者中,血浆RASSF1A基因甲基化检出率为61.1％,AFP联合血浆RASSF1A基因甲基化检测HCC的检出率为75％ (27/36).结论 HCC患者血浆和肿瘤组织中RASSF1A基因甲基化率有良好的一致性.血浆DNA甲基化联合AFP检测对HCC早期诊断具有一定意义.癌组织和血浆中基因甲基化改变与各临床参数无相关性.     

肝癌抑癌基因GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A异常甲基化检测及其临床意义

目的 研究肝细胞癌中的GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A 4种基因启动子区域甲基化状态的表达差异,并探讨其在肝癌发生中的作用.方法运用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific PCR,MSP）技术,分别检测35例肝癌组织及其相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中4种候选抑癌基因（GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A）启动子区域的甲基化表达情况,并结合临床病理资料进行分析.结果在肝细胞癌、癌旁及正常对照肝组织中检测到GSTP1基因启动子区的甲基化率分别是57.1 （20/35）,25.7％（9/35）,0％ （0/20）;p16基因启动子区甲基化率分别是54.3％ （19/35）,37.1％ （13/35）,0％ （0/20）; RIZ1基因启动子区甲基化率分别是68.6％ （24/35）,14.3％ （5/35）,0％ （0/20）;RASSF1A基因启动子区甲基化率分别是88.6％ （31/35）,74.3％（26/35）,10％ （2/20）,其中癌组织中GSTP1和RIZ1基因甲基化率均显著高于相应的癌旁组（P＜0.01）和正常对照肝组织（P＜0.01）,癌组织中p16、RASSF1A启动子区甲基化率高于癌旁组织,但二者无统计学意义（P＞0.05）,但明显高于正常对照肝组织（P＜ 0.01）.在肝癌组织中肿瘤有包膜侵犯者GSTP1基因甲基化阳性率明显高于无包膜侵犯者（P＜0.05）;乙肝表面抗原（HbsAg）阳性的肝癌患者p16基因甲基化阳性的比率要显著高于HbsAg阴性者（P＜0.05）;而RIZ1、RASSF1A与临床病理资料间均没有统计学意义（P＞ 0.05）.结论RIZ1、GSTP1基因甲基化状态具有肝癌特异性,或可作为临床肝癌辅助诊断的分子标记物.慢性HBV感染可能是导致p16甲基化而失活的原因,GSTP1基因启动子甲基化可能与肝细胞癌的侵袭性有关.     

抑癌基因RASSF1A在结肠癌中的表达研究

目的探讨抑癌基因Ras相关区域家族1A（RASSFlA）基因在结肠癌组织以及相应正常结肠组织中的表达并分析其表达与结肠癌临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测34例结肠癌手术标本和相应的正常结肠组织中RASSFlA蛋白的表达水平,应用RT-PCR法检测RASSFlAmRNA在结肠癌和正常结肠组织中的表达情况。结果①免疫组织化学法结果：结肠癌组织中RASSFlA蛋白表达阳性率明显低于其在正常结肠组织中的表达阳性率[35．3％（12／34）比97．1％（33／34）,P〈0．05]。结肠癌组织中RASSFlA蛋白的表达与肿瘤分化程度和TNM分期均有关（P〈0．05）,即高、中分化及TNM分期较低（Ⅰ＋Ⅱ期）者的RASSFlA蛋白表达阳性率较高P〈0．05）。②Western blot法结果：在34例结肠癌患者中RASSFlA蛋白表达水平明显低于其在相应的正常结肠组织中的表达水平[0．3168＋0．0196比0．9144±0．1776,P〈0．05];该结果与RT-PCR法检测到的RASSFlAmRNA表达情况基本一致[0．1589±O．2237和0．5723±0．1939,P〈0．05]。结论RASSFlA基因的失表达可能在原发性结肠癌的发生、发展中起重要作用,检测RASSFlA的表达情况可为结肠癌的早期诊断提供帮助。     

散发性结直肠癌患者血RASSF2和sFRP1启动子区甲基化检测

目的检测散发性结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1启动子区甲基化情况．从而为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。方法使用甲基化特异性PCR检测59例散发性直结肠癌患者和59例健康对照血清sFRP1和RASSF2基因启动子区甲基化的情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。结果59例结直肠癌患者中RASSF2和sFRP1甲基化者分别为16例（27．1％）和18例（30．5％）;而59例健康对照无一例发现RASSF2或sFRP1基因甲基化,差异有统计学意义（均P〈0．01）。29例（49．2％）结直肠癌患者有至少1个基因甲基化,其甲基化率明显高于RASSF2和sFRP1单-基因甲基化率（均P〈0．05）。结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1基因甲基化率与结直肠癌临床病理特征均无明显关系（均P〉0．05）。结论血清RASSF2和sFRP1基因启动子区甲基化水平在结直肠癌组织异常升高,联合两基因的血清甲基化检测可为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。     

大肠癌组织中LYVE-1、HIF-1α和VEGF的表达及其临床意义

为探讨淋巴管内皮细胞透明质酸受体1（LYVE-1）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系,本研究应用免疫组化法检测78例大肠癌组织中LYVE-1、HIF-1α和VEGF蛋白的表达,并与38例正常大肠组织进行比较。结果显示,LYVE-1、HIF-1α和VEGF在大肠癌组织中的表达率分别为64．10％、56．41％和61．54％,均明显高于正常对照组21．05％、0和31．57％（P〈0．05）。三者表达与大肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、远处转移均无关（P〉0．05）,与淋巴结是否转移和Dukes分期有关（P〈O．05）。HIF-1α与LYVE-1和VEGF均显著相关（P〈0．01）。结果表明,LYVE-1、HIF-1α及VEGF在肿瘤淋巴管、血管生成和转移过程中起重要作用,联合检测LYVE-1、HIF-1α和VEGF可作为判断大肠癌转移和预后的重要指标。     

结直肠癌与其癌旁组织、黏膜慢性炎CD46的表达及临床意义研究

目的检测CD46（membrane cofactor protein,MCP）在结直肠癌组织的表达情况,探讨其临床研究意义。方法采用免疫组化两步法检测结直肠癌与其癌旁组织、黏膜慢性炎组织中CD46表达强度和分布。结果CD46在三者阳性率分别为92.45%,50.00%,35.00%;CD46在结直肠癌组的表达明显高于对照组（P〈0.01）;淋巴结转移、分化程度和Dukes分期各组间与CD46表达强度的比较其差异有统计学意义（P〈0.05）;淋巴结转移,分化程度和Dukes分期与结直肠癌表达CD46均呈负相关（P〈0.05）。结论CD46在肿瘤发生和进展早期可能起了非常重要作用,可能是影响结直肠癌术后复发转移的重要危险因素之一,可能成为肿瘤早期诊断、预后及分子靶向治疗的重要分子之一。     

MTSS1蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制因子1（MTSS1）基因的表达与结直肠癌生物学行为及预后之间的关系。方法应用免疫组织化学的方法分析MTSS1蛋白在60例结直肠癌患者组织,以及60例同一患者癌旁10cm正常黏膜组织标本中的表达情况,并应用SPSS13．0软件对实验数据进行统计学分析,MTSS1在癌旁正常黏膜和结直肠癌组织中的表达采用卡方检验四格表,MTSS1蛋白的表达与结直肠癌患者临床病理参数的数据采用RxC表的x2检验,校正使用Fisher确切概率法,以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果MTSS1在癌旁10cm正常黏膜和结直肠癌组织中的表达率分别为：100％（60／60）和28．3％（17／60）,在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁10em正常黏膜,其差异有显著统计学意义x2=67．013,P〈O．01）;MTSS1的表达与性别、年龄、病灶位置、癌组织大体分型和远处转移等因素均无明显关系钟=0．134、0．019、0．002、0．334、1．433、P〉0．05）;MTSS1表达下调与结直肠癌浸润深度、分化程度、淋巴结转移以及Dukes分期等因素相关（x2=9．520、13．849、7．171、8．026、P〈0．05）。结论MTSS1蛋白异常表达可能在结直肠癌的发生发展及其浸润转移中起着重要作用。     

survivin和环氧化酶-2在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其相关性

目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中凋亡抑制蛋白survivin和环氧化酶-2（cox-2）的表达与肿瘤生物学行为之间的关系及其二者的相关性。方法应用免疫组化Envision法，检测42例膀胱移行细胞癌组织标本和10例非肿瘤正常膀胱组织（正常对照组）中survivin和cox-2的表达。结杲42例膀胱移行细胞癌组织中survivin和COX-2表达的阳性率分别为78．6％和81．0％，正常对照组中均未见表达；survivin表达强度与肿瘤分期及复发呈正相关关系（P〈O．05），而与肿瘤分级无关（P〉O．05）；cox-2表达强度与肿瘤分级和分期呈正相关关系（P〈0．05），而与肿瘤复发无关（P〉0．05）；survivin和cox-2在膀胱移行细胞癌中的表达密切相关（rs=0．327，P〈0．05）。二者的表达与患者的性别、年龄、术时肿瘤的大小、数目及部位无关（P〉0．05）。结论Survivin和cox-2在膀胱移行细胞癌组织中普遍表达，且表达密切相关，二者可能在膀胱癌的发生、发展过程中起重要作用，并与浸润关系密切。     

RASSF1A启动子甲基化与非小细胞肺癌TNM分期关系的Meta分析

目的探讨RASSF1A启动子甲基化与非小细胞肺癌TNM分期的关系。方法在中外数据库中收集研究非小细胞肺癌组织RASSF1A启动子甲基化的文献,制定严格的入选和剔除标准．最后入选的文献用META分析软件Review Manager 5．0对甲基化与TNM分期进行分析,计算合并的OR值。结果共有5篇文献入选,NSCLC中Ⅰ期与Ⅱ-Ⅳ期差异分析显示在95％CI时,合并OR值为1．24（范围在0．90—1．72）,Z=1．30,P=0．47〉0．05,表明RASSF1A启动子甲基化在各期肺癌均可出现,在早期和中晚期肺癌组织中RASSF1A甲基化程度不存在差别（P〉0．05）。结论RASSF1A启动子甲基化是非小细胞肺癌发生发展过程中的一个分子事件,与非小细胞肺癌TNM分期无明显相关性,可以作为非小细胞肺癌的早期分子诊断候选指标。     

pSi2.1-G9a-siRNA 诱导人胆管癌细胞RASSF1A 基因脱甲基化

目的 分析组蛋白甲基转移酶Gga特异性siRNA真核表达质粒pSi2.1-G9a-siRNA对人胆管癌细胞株QBC939中RASSF1A基因启动子甲基化及其表达的影响,探讨组蛋白甲基化和DNA甲基化的关系.方法 构建pSi2.1-G9a-siRNA真核表达质粒并转染QBC939细胞,甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测RASSF1A启动子甲基化状态的改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察RASSF1A mRNA水平变化,Western blot检测RASSF1A蛋白表达.结果 转染pSi2.1-G9a-siRNA后,QBC939细胞中RASSF1A启动子由甲基化状态转变为非甲基化状态;RT-PCR和Western blot结果 显示转染组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(280 bp)和蛋白质条带(40×103),而转染前没有相应条带出现.结论 pSi2.1-G9a-siRNA质粒能够诱导QBC939中RASSF1A启动子去甲基化并恢复表达,提示DNA甲基化在一定程度上受组蛋白甲基化的调控.