人胃癌组织块裸鼠原位移植/转移模型的建立

 目的　用肿瘤组织块原位移植 ,建立人胃癌裸小鼠原位移植 /转移模型。方法　以人胃低分化腺癌细胞系接种于裸小鼠皮下 ,形成稳定传代的皮下移植瘤 ,再取该肿瘤组织块原位移植于裸鼠胃壁 ,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率。结果　原位移植成功率 (成瘤率 )为 1 0 0 %、局部淋巴结转移率 1 0 0 %、远处淋巴结转移率 90 %、肝转移发生率为 75%。荷瘤鼠的中位生存期为 1 4周 ,晚期出现消瘦和全身衰竭。结论　该裸小鼠原位移植 /转移模型的生物学行为与人胃癌自然生长和转移过程相似 ,可作为一种有价值的工具用于胃癌转移机理和抗转移实验治疗的研究。     

人类胃癌裸鼠原位移植模型的建立

 目的：探讨建立人胃癌裸鼠原位移植转移模型简便易行的方法，比较三种方法的成瘤率。方法：用人胃癌细胞SGC7901悬液接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下移植瘤，连续传八代。15只裸鼠随机分为三组，以第八代裸鼠皮下移植瘤组织为移植材料，分别用困扎法、医用OB胶法以及两种联合的方法把皮下肿瘤组织移植裸鼠胃浆膜下形成原位移植肿瘤。结果：6～7周后，处死全部裸鼠，捆扎组、医用OB胶组和联合组成瘤率分别为4／5、3／5和5／5，捆扎联合医用OB组成瘤率最高。结论：应用缝线困扎联合OB胶建立人胃癌裸鼠原位移植模型是一种简便易行的方法，值得推广和应用。     

胃癌细胞和组织块原位移植模型的建立及评价

[目的]采用两种方法建立胃癌裸鼠原位移植模型，并对两种模型进行评价。[方法]将胃癌肿瘤细胞悬液、胃癌裸鼠皮下瘤块采用OB胶粘贴法种植于裸鼠胃壁，形成原位移植瘤，观察和比较两种方法所建立的模型肿瘤移植成功率和自发转移的发生率。常规HE染色，观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移的病理切片。免疫组化法检测胃癌原位移植瘤的MVD和VEGF的表达。[结果]细胞悬液种植的原位胃癌成瘤率为60％，淋巴结转移率和肝转移发生率仅为55．6％和33．3％；皮下组织块移植OB胶粘贴法的原位成瘤率100％，淋巴结转移率和肝转移发生率为93.3％和80％。皮下瘤块的原位移植瘤中MVD值和VEGF的表达高于细胞悬液法鼠移植瘤中MVD和VEGF的表达。[结论]两种原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，以胃癌裸鼠皮下组织块OB胶粘贴法为优，且肿瘤血管新生的能力较强。     

益气解毒复方中药对人胃癌移植瘤裸鼠肿瘤生长及胃癌组织Ki-67表达影响的实验研究

目的:探讨益气解毒复方中药对SGC-7901荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对肿瘤组织Ki-67表达的影响,为其临床应用提供实验依据.方法:胃癌细胞株SGC-7901接种于裸鼠右后肢皮下.对照组灌胃生理盐水10 mL/kg,5-FU组肌肉注射30 mg/kg,益气解毒复方中药大、中、小剂量组分别灌胃1 500、750和375 mg/mL的药液,各组连续给药14 d,各鼠脱臼处死,计算瘤质量系数,肿瘤组织用于免疫组织化学染色检测肿瘤组织Ki-67表达.结果:对照组的瘤质量系数为3.060±2.426,显著高于5-FU组和益气解毒复方中药大、中剂量组(0.273±0.146,P<0.01;0.696±0.585, P<0.01;1.197±1.271,P<0.05),与益气解毒复方中药小剂量组(1.727±1.721)相比差异无统计学意义,P>0.05.免疫组织化学结果显示,5-FU组、中剂量的益气解毒复方中药组的肿瘤组织Ki-67过度表达率(36.8±10.3)%,(32.5±20.4)%显著低于对照组(59.5±13.9)%,P<0.05.结论:益气解毒复方中药对胃癌细胞增殖和Ki-67表达具有较好的抑制作用.     

人类胃癌裸鼠淋巴结转移模型的建立

 目的　研究胃癌淋巴结转移动物模型的建立方法。方法　人类胃癌低分化细胞系SGC-7901体外培养、传代并扩增后，收集细胞行皮下种植成瘤，鼠间传代至第6代，以皮下肿瘤组织块原位种植于裸鼠胃壁建立动物模型。种植后第9周处死裸鼠，观察原位种植瘤生长、淋巴结转移及其他脏器转移情况，测定荷瘤裸鼠血清癌胚抗原（CEA）值。结果　原位移植瘤种植成功率100 ％，胃周淋巴结转移率93.3 ％，移植瘤可发生局部浸润及远处脏器转移，荷瘤裸鼠CEA值明显高于正常裸鼠（P＜0.01）。结论　应用SGC-7901细胞系可成功建立胃癌的淋巴结转移动物模型。     

裸鼠人胃癌原位移植模型的建立

目的：建立裸鼠人胃癌原位移植模型。方法：将ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株细胞接种至裸鼠皮下，建立皮下模型并反复传代，再以第八代移植瘤组织为材料，通过剖腹手术将其移植到裸鼠胃壁，待动物自然死亡后尸检。结果：该模型原位瘤沿胃壁呈浸润性生长，潜伏期为３￣４周，以后迅速增长并与腹膜粘连，约１２周以后逐渐消瘦，生存期为１６￣２４周，原位成瘤率及局部浸润率均为１００％，部分运动（２／６）出现肝脏转移。结论：裸鼠     

靶向RECK基因的miR-374b-5p对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响

目的 :探讨微RNA-374b-5p(micro RNA-374b-5p,miR-374b-5p)及其靶基因反转录富含半胱氨酸蛋白(reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs,RECK)在胃癌发生和发展中的作用。方法 :采用人胃癌MGC-803细胞建立BABL/c裸鼠移植瘤模型,当移植瘤体积达到60 mm3左右时,将小鼠随机分为3组(每组5只),即空白对照组、阴性对照组[体内转染无意义微RNA序列(miR-374b-5p negative control inhibitor)]和miR-374b-5p抑制组(体内转染miR-374b-5p inhibitor),并观察各组移植瘤的生长情况。在接种MGC-803细胞后第35天时(最后一次治疗3 d后)处死各组小鼠,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察移植瘤标本的病理学特征;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测移植瘤组织中miR-374b-5p的表达水平;荧光素酶活性检测验证miR-374b-5p是否靶向作用于RECK基因;分别采用RFQPCR和免疫组织化学法检测移植瘤中RECK mRNA和蛋白的表达情况。结果 :miR-374b-5p抑制组移植瘤体积在转染miR-374b-5p inhibitor 9 d后(即接种细胞的第23天后),开始明显小于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组小鼠的移植瘤体积差异无统计学意义。病理学检测结果提示,miR-374b-5p抑制组移植瘤的恶性程度较空白对照组和阴性对照组明显下降。miR-374b-5p抑制组移植瘤中miR-374b-5p的表达水平均较空白对照组和阴性对照组明显下调(P<0.05)。荧光素酶报告载体系统证实,RECK是miR-374b-5p直接调控的靶基因;miR-374b-5p抑制组移植瘤中RECK m RNA及蛋白的表达水平均显著高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05)。结论 :miR-374b-5p可能通过RECK通路在胃癌的发生和发展中扮演着癌基因的角色。     

金龙蛇方对人胃癌MKN-45裸小鼠原位移植瘤生长转移及多种粘附分子蛋白表达的影响

目的:通过观察金龙蛇方及拆方对裸鼠人胃癌模型中转移和多种相关粘附分子表达的影响,探讨其抗胃癌转移的机制。方法:50只动物随机分为消痰组、散结组、金龙蛇组、5Fu组和对照组,建立人胃癌MKN45裸鼠原位种植模型,造模后第3天开始给药,对照组给予生理盐水0.2mL/d,腹腔注射,5Fu组给予5Fu稀释液0.2mL/周,腹腔注射,中药组分别给予消痰方、散结方、金龙蛇方0.2mL/d灌胃。第6周实验结束,观察肿瘤生长及转移情况,肝脏称质量。瘤组织及转移脏器行免疫组化检测Ecad、CD44v6、GMP140、ICAM1等蛋白的表达。结果:金龙蛇方及拆方可以明显抑制裸鼠人胃癌MKN45原位种植瘤的生长,减少肝脏转移,不同程度下调肿瘤细胞CD44v6、GMP140蛋白的表达。结论:金龙蛇方可以下调多种异质性粘附分子蛋白的表达,可能是其抗胃癌转移的机制之一。     

裸小鼠原位移植建立人肝癌高转移模型

采用组织学完整的病人标本，以裸小鼠肝被膜下植入方法，从３０例人肝癌标本中筛选出一株人肝癌高转移瘤株，在裸小鼠体内成功地建立了人肝癌高转移模型ＬＣＩ－Ｄ２０。目前该瘤株在裸鼠体内生长１年，传代１６次，其移植生长率与自发转移率达１００％，表现为区域侵犯、肝内、淋巴结和肺转移、腹腔种植与血性腹水，并保持分泌甲胎蛋白的特性。组织病理学和电镜观察，流式细胞仪ＤＮＡ相对含量分析及染色体核型分析结果表明，移植瘤细胞与来源人肝癌细胞相似。本模型为原位移植模型，移植瘤的生长与转移，完全模拟了人肝癌的自然过程，为研究人肝癌转移机制和抗转移治疗提供了一个理想模型。     

人乳腺癌裸鼠移植瘤组织Duffy抗原趋化因子受体与Her-2蛋白表达相关性的探讨

目的:探讨人乳腺癌裸鼠移植瘤组织Duffy抗原趋化因子受体(DARC)与Her-2蛋白表达的相关性.方法:建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,按细胞类型分为DARC低表达的MDA-MB-231裸鼠移植瘤、转染空质粒的MDA-MB-231(MDA-MB-231-vect)裸鼠移植瘤及转染DARC cDNA的MDA-MB-231(MDA-MB-231-DARC)裸鼠移植瘤.隔天观察裸小鼠的健康状况和肿瘤细胞的成瘤性,成瘤后每周测量1次各移植瘤的体积,至第2周及第4周时,分别处死各组实验动物8只,获取移植瘤,免疫组化检测原位移植瘤组织中DARC及Her-2蛋白表达;选取中国福利会国际和平妇幼保健院乳腺癌临床组织标本80例,通过免疫组化技术检测DARC和Her-2蛋白表达,并对其相关性进行分析.结果:虽然各组动物的成瘤率均为100%,但DARC转染后的 MDA-MB-231移植瘤(MDA-MB-231-DARC移植瘤)生长明显减慢(P=0.007),且裸鼠移植瘤组织中Her-2蛋白呈低表达,转染与未转染DARC的裸鼠移植瘤组织中Her-2蛋白表达差异有统计学意义,χ2=69.83,P=0.045;对人乳腺癌临床组织标本免疫组化检测结果显示,Her-2蛋白表达与DARC蛋白呈负相关,r=-0.464,P=0.026.结论:人乳腺癌裸鼠移植瘤组织中DARC的过表达抑制Her-2蛋白表达.     

Effect of Fraxiparine and heparin on experimental tumor metastasis in mice

BACKGROUND: Low molecular weight heparins (LMWH) have become increasingly important in anticoagulant therapy. Antitumor and antimetastatic activity of heparin and LMWH-s have also been reported. MATERIALS AND METHODS: Fraxiparine, a new modified LMW-H, was tested for antimetastatic effect using 3LL-HH intravenous, B16 intra-foot pad and 3LL-HH intrasplenic models in C57 Bl/6 mice. The dose of Fraxiparine was 38, 57 and 172 IU/kg, respectively. Heparin (100 IU/kg) was used as a positive control. Both pre-treatment (starting 6 hours before tumor inoculation) and post-treatment (starting 24 hours after tumor inoculation), followed by daily injections, were applied in the intra-foot pad and intrasplenic models. In the intravenous model, only a single dose was administered one hour after tumor cell injection. RESULTS: Fraxiparine at the dose of 57 IU/kg was significantly antimetastatic in the intravenous model. Continuous treatment, starting 6 hours before tumor inoculation, with 173 IU/kg Fraxiparine resulted in a strong inhibition of lung metastases in the intra-foot pad model, but was ineffective in the intrasplenic model. Heparin did not influence the metastasis number in any of the metastasis models. CONCLUSION: These data may be of importance in the anticoagulant treatment of human cancer patients.     

溶血磷脂酸对卵巢癌细胞在移植瘤动物模型中生长转移和相关因子表达的影响

目的:观察溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对卵巢癌细胞在裸鼠腹腔移植瘤模型中生长转移和相关因子表达的影响,分析其促转移机制。方法:将6×10~6个未经处理的卵巢癌细胞株SKOV3(对照组)和用LPA刺激后的SKOV3细胞(LPA处理组)分别注入裸鼠腹腔,建立人卵巢癌腹腔移植瘤裸鼠动物模型,待裸鼠自然死亡后,测定移植瘤大小和质量,观察腹腔转移灶转移情况。用免疫组化法和流式细胞技术分析两组移植瘤组织中VEGF、MMP2和COX-2的蛋白表达。结果:经LPA处理和未经处理的SKOV3细胞在裸鼠体内的成瘤率均是100%,但LPA组移植瘤的生长速度、质量和腹腔转移灶数目均高于对照组,有统计学意义(P＜0．05)。LPA处理组的移植瘤组织中VEGF、MMP2和COX-2蛋白表达水平均高于对照组,有统计学意义(P＜0．01)。结论:溶血磷脂酸具有促进卵巢癌细胞在腹腔内增殖和浸润转移的作用,该作用可能与促进癌组织表达肿瘤生长和转移的相关因子有关。     

Epidermal growth factor suppresses the tumor growth of human breast cancer transplanted in nude mice

The present work was performed in order to clarify the effects of epidermal growth factor (EGF) and transforming growth factor-beta (TGF-beta) on the tumor growth of human breast cancer transplanted in nude mice. A local injection of 2 micrograms EGF significantly suppressed the tumor growth of human breast cancer MX-1 and primary breast tumor (UM-1) which was first isolated from a human female breast cancer patient in our laboratory. On the other hand, TGF-beta did not suppress the growth of those tumors. Our result indicates that human EGF may be useful as a therapeutic agent for some human breast cancers. Human EGF may lead to a new trend of therapy in the treatment of cancer.     

奥曲肽对裸鼠皮下胃癌种植瘤生长及侵袭转移的影响

近年来研究表明胃癌的生长分化受多种胃肠肽类激素的调控，生长抑素（somatostatin，SST）可能起重要的作用。本研究旨在探讨SST类似物奥曲肽（octreotide，OCT）对胃癌裸鼠种植瘤生长及侵袭转移的影响。     

放疗对胰腺癌细胞种植瘤血管生成的影响

Objective

The aim of this study was to observe the effect of radiation on micro-vessel density (MVD) and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in an transplanted tumor of human pancreatic cancer in nude mice and to explore the role of radiotherapy on pancreatic cancer angiogenesis.

Methods

After vaccinated pancreatic cancer PANC-1 cells, 20 nude mice were randomly divided into radiation group and control group. Radiation group received the radiation (dose of 20 Gy) and were killed 5 days later. The MVD and VEGF expression were determined by immunohistochemistry and then compared with the control group.

Results

The number of MVD in the radiation group was significantly lower than that of the control group (8.30 ± 4.55 vs. 13.60 ± 4.28, P < 0.01). The optical density (OD) of VEGF in the radiation group was higher (2.11 ± 0.54 vs. 1.32 ± 0.61, P < 0.05) compared with the control group.

Conclusion

The radiotherapy can reduce the number of vessels and increase the VEGF expression of human pancreatic cancer transplanted tumor in nude mice.     

三肽化合物酪丝缬肽对人肝癌裸鼠移植瘤基因表达谱的影响

目的：观察小分子三肽化合物酪丝缬肽(tyroservatide,YSV)的抗肿瘤作用,分析YSV对肿瘤细胞基因表达情况的影响。方法：建立人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤模型,应用基因芯片技术分析YSV对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤肿瘤组织基因表达的影响,应用RT-PCR方法验证相关基因的表达情况。结果：给药剂量为320μg·kg~(-1)·d~(-1)时,YSV能显著抑制裸鼠人肝癌BEL-7402移植瘤的生长,抑瘤率为52.37%,与生理盐水组比较均有统计学意义(P＜0.05)。YSV组与生理盐水组比较有781个基因存在统计学差异,其中52个基因与抑瘤效果密切相关,37个促进肿瘤增殖的基因表达下调,15个抑制肿瘤增殖的基因表达上调。RT-PCR检测证实YSV能够明显抑制肿瘤细胞癌基因Akt与上调抑癌基因PTEN的表达。结论：YSV具有显著的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤增殖相关基因的表达,增强抑制肿瘤生长相关基因的表达水平,以恢复它们之间的平衡关系,达到抗肿瘤细胞效应。     

内皮抑素抑制裸鼠肺癌生长转移的实验研究

背景与目的:内皮抑素(endostatin,ES)可以有效抑制血管发生.系统给予ES可引起多种肿瘤异种移植模型生长减缓.本实验通过建立裸鼠肺癌胸腔移植模型,观察ES对裸鼠肺癌生长和转移的抑制作用.方法:将大细胞肺癌H460细胞接种于裸鼠左侧胸腔,并随机分成内皮抑素组(ES组)和对照组.ES组和对照组裸鼠自接种肿瘤的当天开始,每天分别给予ES 20mg/kg和等体积PBS皮下注射,共20 d.每日称量动物体重,记录动物生存时间,处死后称瘤重,测定动物血液中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP2)的表达.结果:裸鼠肺癌胸腔内接种成瘤率为100%,并出现远处转移.对照组移植瘤重量(1.54±0.14)g明显高于ES组(0.9±0.3)g,差异有显著性(t=-3.163,P=0.005),且第1天和第21天体重差值(1.9±2.8)g与ES组(-0.8±2.8)g比较,差异有显著性(t=-2.156,P=0.045).而ES组的MMP2表达明显低于对照组.结论:ES可抑制肺肿瘤生长和转移,其作用机制之一与抑制MMP2的表达活性有关.裸鼠肺癌胸腔移植模型更容易形成肺癌转移模型,是研究肺癌生长和转移的理想模型.     

Establishment of a CXCR4-expressing gastric cancer cell line in nude mice and the effect of AMD 3100 on tumor regression

BACKGROUND AND OBJECTIVE: CXCR4 plays a central role in cell migration in metastasis and dissemination of cancer. We have recently established a CXCR4-expressing gastric cancer cell line. Then we have prepared a therapeutic model for it, and assessed its usefulness in the in vivo system. METHODS: Tumors from gastric cancer patients were transplanted into BALB/C (nu/nu) nude mice. After several subcultures in vivo, the tumor cell line was successfully established. In addition, this cell line expressed the CXCR4 receptor. The nude mice bearing these cell line tumors were administered AMD 3100, an inhibitor of the CXCR4 receptor, and its anti-tumor activity was assessed. RESULTS AND DISCUSSION: The tumor volume was reduced by 27.6% in mice administered AMD 3100 compared with the control group (p < 0.02). None of the nude mice showed toxic signs of toxicity. Establishment of a CXCR4 expressing human gastric cancer cell line transplantable into nude mice seems to be important in discussing the possibility of an in vivo model of treatment with AMD 3100 in the in vivo system.