热疗联合奥沙利铂对胃癌MGC803细胞X连锁凋亡抑制蛋白和血管内皮生长因子表达的影响

目的:探索奥沙利铂(OXA)热化疗对人胃癌MGC803细胞血管内皮生长因子(VEGF)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响。方法:将人胃癌MGC803细胞株,密度为5×104个/ml分为正常对照组、单纯热疗组、单纯化疗组、热疗联合化疗组,各组细胞培养48h后,MTT法检测细胞增殖抑制率,确定工作浓度为48h的半数抑制浓度(IC50)。应用流式细胞术(FCM)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测四组细胞对VEGF和XIAP蛋白及mRNA表达变化,并分析影响因素。结果:FCM及RT-PCR分析显示与对照组比,热疗组、化疗组及热化疗组VEGF和XIAP表达下调,热化疗组VEGF与XIAP下调最显著,各组之间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:热疗联合奥沙利铂能抑制人胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,两者联用强于单独使用热疗或奥沙利铂,其作用机制与下调VEGF和XIAP表达有关。     

YWHAE表达沉默对胃癌MGC803细胞增殖的影响

目的 探讨沉默YWHAE表达对胃癌细胞增殖的影响.方法 实验分为三组,未转染组,构建YWHAE短发夹RNA(shRNA)表达载体及相应空载载体,慢病毒包装后分别感染胃癌MGC803细胞(干扰组,对照组),应用Western blot、RT-PCR方法检测YWHAE沉默效率;MTT技术观察YWHAE表达沉默前后细胞增殖变化;流式细胞术、细胞克隆实验检测细胞周期、凋亡及克隆形成变化情况.结果 慢病毒包装YWHAE-shRNA后成功感染胃癌MGC803细胞;RT-PCR、Western blot检测结果显示,与对照组比较,干扰组MGC803细胞YWHAE基因表达明显降低,抑制效率为72.7％.MTT结果显示,干扰组细胞增长速率明显低于对照组细胞,72 h增长倍数分别为1.56、2.43,差异有显著统计学意义(P<0.01);细胞克隆实验结果显示,干扰组及对照组克隆形成率分别为6.24％、31.00％,差异有显著统计学意义(P<0.01).流式细胞术检测显示,YWHAE基因表达沉默后,MGC803细胞凋亡率增加,由未消减前的3.23％增加到9.83％,差异有显著统计学意义(P<0.01);相比对照组细胞在G1期的比例(57.88％),干扰组G1期细胞比例明显增加(72.42％),差异有显著统计学意义(P<0.01).结论 沉默YWHAE表达能抑制胃癌MGC803细胞增殖,可能与诱导细胞周期阻滞,促进细胞凋亡有关.     

姜黄素纳米微粒对体外胃癌MGC803细胞凋亡机制的影响

目的观察姜黄素纳米微粒对人胃癌MGC803细胞凋亡机制的影响。方法 MTT法建立细胞剂量效应曲线,光镜和电镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪分析MGC803细胞周期改变,免疫组化法检测凋亡相关Bcl-2蛋白表达。结果 MTT法显示,姜黄素纳米微粒抑制胃癌MGC803细胞增殖,呈现剂量-时间依赖性;光镜观察姜黄素纳米微粒组细胞损伤较轻,电镜下核周隙清晰,突触小泡较多;流式细胞仪法显示,姜黄素纳米微粒使胃癌MGC803细胞阻滞于G2/M期;免疫组织化学法显示,姜黄素纳米微粒使凋亡相关Bcl-2蛋白表达下调。结论姜黄素纳米微粒诱导人胃癌细胞MGC803凋亡并且延长药物对胃癌MGC803细胞作用时间。     

LY294002对胃癌MGC803细胞生长的影响

目的 观察磷脂酰肌醇-3-激酶的特异性抑制剂(LY294002)对胃癌MGC803细胞生长的影响.方法 选用LY294002处理胃癌MGC803细胞后,利用细胞生长曲线、平皿克隆与流式细胞术观察细胞的生长情况,采用免疫细胞化学染色和Western blot检测AKT蛋白与p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白的表达.结果 LY294002处理后,MGC803细胞生长速度明显减慢,细胞克隆体积变小,数量减少;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例降低.LY294002处理后,MGC803细胞中磷酸化的AKT蛋白与Cyclin E蛋白表达降低,而磷酸化的p27Kip1蛋白表达升高.结论 LY294002抑制胃癌MGC803细胞生长速度,呈现出G1/S期细胞周期阻滞.     

水飞蓟宾抑制缺氧状态下胃癌细胞系MGC803增殖的分子机制

目的 探讨水飞蓟宾抑制缺氧状态下胃癌细胞MGC803细胞的生长增殖的分子机制.方法 体外缺氧条件下体外培养胃癌细胞系MGC803,用不同浓度水飞蓟宾处理后,采用MTT检测水飞蓟宾对MGC803细胞增殖的影响,Western blot检测Akt的磷酸化.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF)的分泌情况.结果 0~250μmol/L蓟宾可显著抑制胃癌细胞MGC803增殖,但0~100μmol/L水飞蓟宾对Akt磷酸化以及VEGF分泌无明显影响,而250μmol/L水飞蓟宾可诱导MGC803细胞磷酸化并抑制VEGF分泌.结论 水飞蓟宾可能通过影响PI3K/Akt磷酸化以及VEGF的分泌而发挥抗肿瘤活性.     

TLR9在胃癌细胞上的表达及其作用的实验研究

目的 探讨TLR9在胃癌细胞MGC803上的表达及其激动剂对MGC803细胞增殖和凋亡的影响.方法 用RT-PCR方法检测MGC803细胞上TLR9的表达;用TLR9的激动剂CpG寡脱氧核苷酸(CpG oligodexynucleotides,CpG-ODN)10μg·mL-1分别作用MGC803细胞24、48 h和72 h后,用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术观察CpG ODN作用MGC803细胞24 h后的细胞凋亡现象.结果 MGC803细胞上有TLR9的表达;TLR 9激动剂CpG ODN作用于MGC803细胞不同时间点,均能明显抑制MGC803细胞生长(P＜0.01),以早期凋亡为主.结论 TLR9激动剂CpG ODN对胃癌细胞的生长具有抑制作用.     

紫杉醇诱导人胃癌MGC803细胞凋亡作用研究

目的:研究胃癌发生过程中原位细胞凋亡活动以及紫杉醇对人胃癌细胞系MGC803诱导细胞凋亡的作用。方法:用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测了胃癌MGC803细胞凋亡,用紫杉醇处理培养胃癌细胞MGC803、显微镜下进行观察并且进行琼脂糖电泳,流式细胞仪检测细胞周期分布和端粒体酶活性检测。结果:癌旁对照组原位凋亡细胞增多,紫杉醇处理胃癌细胞可以诱导细胞产生典型的细胞凋亡变化。DNA发生断裂,琼脂糖电泳产生梯形条带,细胞阻滞于G2/M期,端粒体酶活性下降。结论:在体内肿瘤细胞凋亡降低,细胞分裂可加快,癌旁对照中细胞凋亡增多,体外紫杉醇可以诱导胃癌细胞系MGC803凋亡。     

白藜芦醇纳米微粒对体外人胃肿瘤MGC803细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度白藜芦醇（RES）纳米微粒在不同时间段对人胃肿瘤MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTT法测定不同浓度的RES纳米微粒、RES、5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60 h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变,细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达,检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的RES纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖（60μg/ml作用60h的抑制率达64%）,并且与浓度和时间均呈正相关,流式细胞仪细胞周期分析提示RES纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于S期,细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,端粒酶活性水平下降。结论RES纳米微粒可诱导人胃肿瘤细胞MGC803发生凋亡,延长药物对胃肿瘤细胞的有效作用时间,载药纳米微球没有改变RES成分的生物学活性。     

紫杉醇纳米微粒对人胃癌细胞MGC803增殖和凋亡影响的研究

目的观察不同浓度（紫杉醇）PA纳米微粒在不同时间段对人胃癌MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTF法测定不同浓度的PA纳米微粒、PA和5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60、72h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变，细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达，检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的PA纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖（16μg／mL作用72h时的抑制率达69％），并且与浓度和时间均呈正相关，流式细胞仪细胞周期分析提示PA纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于G2M期，16μg／mL作用48h明显，细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调，端粒酶活性水平下降。结论PA纳米微粒可诱导人胃癌细胞MGC803发生凋亡且具有控释效应，可延长药物对胃癌细胞的有效作用时间，载药纳米微球没有改变PA成分的生物学活性。     

Survivin与VEGF基因反义寡核苷酸联合应用人肺腺癌A549细胞作用研究

目的：探讨脂质体介导的血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）与生存素（Survivin）基因反义寡核苷酸联合应用对人肺腺癌细胞系A549生长的影响。方法：构建 VEGF 与 Survivin基因反义寡核苷酸,以脂质体转染人肺腺癌A549细胞。实验分为对照组、脂质体对照组、VEGF反义转染组（VEGF ASODN组）、Survivin反义转染组（Survivin ASODN组）、联合转染组（VEGF ASODN+Survivin ASODN组）。采用RT-PCR检测VEGF与Survivin基因表达;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡、检测VEGF与Survivin蛋白表达;MTT观测细胞生长;平板集落实验分析细胞增殖克隆能力。结果：脂质体介导的VEGF与Survivin基因反义寡核苷酸联合转染组A549细胞存活率和增殖克隆能力明显低于其余组,差异有统计学意义（P=0.043,P=0.049,P=0.038,P=0.023）。流式细胞仪分析显示联合转染组细胞周期被阻滞,Survivin蛋白表达低于其余组,与对照组差异有统计学意义（P=0.017,P=0.002）,VEGF蛋白表达低于其余组,与对照组差异有统计学意义（P=0.013,P=0.003）。RT-PCR检测结果显示联合转染组VEGF与Survivin基因表达低于其余组。结论：VEGF与Survivin基因反义寡核苷酸联合应用抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,延长细胞周期,抑制 VEGF与Survivin基因表达。为后续的动物实验打下了理论依据。     

紫杉醇与白藜芦醇联合应用对人胃癌MGC803细胞作用的研究

目的 研究紫杉醇(PA)联合白藜芦醇(RES)对人胃癌MGC803细胞株的影响.方法 采用MTT法检测两种药物单用和联合应用对细胞的作用,光镜观察细胞结构的变化,联合应用判断两药合用效果,流式细胞仪检测MGC803细胞周期分布,并且检测端粒酶的活性.结果 PA可抑制MGC803细胞的生长,且呈剂量及时间依赖性(P<0.05);光学显微镜下可见经PA和RES培养的胃癌细胞质内存在异常物质;PA对人胚肺成纤维细胞(HPF)生长起促进作用,且呈剂量依赖性(P<0.05);PA与RES联合应用对MGC803细胞生长的抑制具有协同作用(P<0.05);PA对G0/G1期有阻滞作用,RES有明显的S期阻滞作用,两者可从不同环节抑制细胞增殖,同时端粒酶活性受到抑制.结论 PA对胃癌MGC803细胞有抑制作用,相同剂量对正常细胞无抑制作用,PA与RES对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用RES相比,PA与RES联合应用可减少RES的用药剂量.     

三氧化二砷对人胃癌MGC803细胞FOX03a和VEGF表达的影响

目的观察FOXO3a基因沉默后,三氧二砷（As2O3）对人胃癌MGC803细胞FOX03a和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用脂质体转染小干扰RNA（siRNA）方法降低胃癌MGC803细胞FOX03a的表达。采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测FOX03a和VEGF mRNA的表达;采用Western blot法检测FOX03a和VEGF蛋白的表达。结果与对照组相比,As2O3促进胃癌MGC803细胞内FOX03a蛋白和mRNA的表达,并抑制VEGF蛋白和mRNA的表达,FOXO3 asiRNA处理后明显抑制FOX03a蛋白与mRNA表达且增加VEGF蛋白和mRNA表达。结论As2O3可能是通过促进MGC803细胞中FOXO3a的表达引起VEGF表达的降低。     

血管紧张素转换酶抑制剂联合奈达铂对鼻咽癌CNE2细胞的抑制作用

目的:研究血管紧张素转化酶抑制剂(ACE-I)联合奈达铂(NDP)在体外对鼻咽癌细胞生长的影响。方法:利用MTT比色法、流式细胞仪、RT-PCR、免疫印迹及酶联免疫等方法测定不同组(对照组、NDP组、ACE-I组、NDP+ACE-I组)对人鼻咽癌细胞CNE2生长、细胞周期及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。结果:单独NDP或ACE-I不能抑制CNE2细胞生长,联合应用能明显抑制CNE2细胞生长和VEGF的表达。结论:ACE-I和NDP联合抑制CNE2细胞增殖是通过抑制VEGF的表达实现的。     

二十二碳六烯酸与氟尿嘧啶联合应用对人胃癌细胞株MGC803的影响

目的 评估二十二碳六烯酸(DHA)联合氟尿嘧啶(FU)对人胃癌细胞株MGC-803的作用.方法 采用MTT法检测DHA、FU单用和联合应用对细胞增殖的影响,Chou-Talalay联合指数原理计算药物单用和合用时的中效浓度(Dm)及合用指数(CI),流式细胞仪检测药物对细胞周期及凋亡的影响,Western blot检测bcl-2和caspase-3蛋白的表达.结果 DHA可抑制MGC803细胞生长,低浓度DHA可促进正常细胞生长(P<0.05).DHA能显著增强FU对胃癌细胞生长的抑制作用,将Fu的Dm减少3.6～2.5倍;两者合用抑制效率达30%时呈协同作用(CI<1),并表现为显著的G_0/G_1期阻滞作用(P<0.05).DHA能提高FU的诱发凋亡作用,促进剪切型caspase-3蛋白表达.结论 DHA可抑制胃癌细胞株MGC803生长,与FU对胃癌细胞的抑制具有协同作用,可减少FU用量.     

乳铁蛋白抗菌肽抑制胃癌细胞增殖诱导其凋亡的体外研究

目的 探讨乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)对人胃癌细胞株MGC803细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 用CCK-8法测定不同浓度LfcinB对胃癌细胞株MGC803 24、48和72 h细胞增殖影响.用流式细胞术检测胃癌MGC803细胞凋亡的变化.用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的变化情况.用Western blot检测MGC803细胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果 LfcinB对胃癌细胞株MGC803的增殖具有抑制作用,促进胃癌细胞株MGC803细胞凋亡,并且具有时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);LfcinB能显著抑制胃癌细胞株MGC803 bcl-2 mRNA表达,同时促进bax和caspase-3 mRNA表达,并且随着LfcinB浓度的增高相关基因下降或上升越明显(P<0.05,P<0.01);Western blot结果也显示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3和Bax蛋白表达,其变化规律与mRNA相同(P<0.05,P<0.01).结论 LfcinB通过调控相关基因,抑制胃癌细胞MGC803增殖,并诱导其细胞凋亡.     

5-氟脲嘧啶联合尼美舒利对人食管癌EC109细胞VEGF表达的研究

目的:通过观察5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、尼美舒利(Nimesuhde,NIM)单独或联合作用对人食管癌EC109细胞血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,初步探讨5-FU、NIM抑制食管癌血管生成的机制.方法:培养食管癌EC109细胞,不同浓度5-FU、NIM单独或联合作用24 h后.MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测VEGF mRNA表达情况;Western blot法检测VEGF蛋白表达.结果:NIM与5-Fu联合作用于食管癌EC109细胞株时,其抑制率与凋亡率较两者单独作用时高,且VEGF mRNA及蛋白的表达水平低于两者单独作用时的表达水平.结论:NIM联合:5-FU能有效抑制食管癌EC109细胞增殖,其中抑制VEGF表达可能为其机制之一.     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞JNK、ATR、cyclinB1的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)调节JNK和ATR活性、cyclinB1表达与人胃癌MGC803细胞增殖的关系. 方法 实验分为两组:未处理组和30 mg/L DADS处理组,采用Western blot、免疫细胞化学及图像分析等方法,观察DADS对人胃癌MGC803细胞的JNK、ATR、cyclinB1的影响. 结果 Western blot结果显示:30 mg/L DADS刺激了MGC803细胞中JNK1的活化,刺激后10～20 min作用效果最强,30 min恢复正常(P<0.05);磷酸化ATR在MGC803细胞中DADS处理15 min后被激活,并呈时间依赖性(P<0.05),而ATR总蛋白表达均无改变.免疫细胞化学及图像分析结果显示,未处理组cyclinB1表达呈弱阳性,而DADS处理组表达呈强阳性,阳性率明显高于未处理组,且DADS处理组光密度值显著高于未处理组(P<0.05). 结论 JNK1与ATR活化及cyclinB1表达增强与DADS抗人胃癌MGC803细胞增殖有关.     

血管生成素-1在体外对人胃癌细胞生物学作用的研究

目的:探讨人血管生成素-1(Ang1)及其与血管内皮生长因子165(VEGF165)共同作用对人胃癌细胞的生物学作用,研究其在肿瘤发生中的作用机制。方法:应用复制缺陷型腺病毒(Ad)-绿色荧光蛋白(GFP)、Ad-Ang1、Ad-VEGF165和Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2转染人胃癌细胞株MGC-803,使用MTT比色法分析它们对胃癌细胞增殖的影响;通过流式细胞仪分析血浆饥饿时其对凋亡的影响;使用免疫细胞化学法检测Ki-67的表达;应用RT-PCR方法半定量检测bcl-2 mRNA、bax mRNA的表达情况。结果:MTT结果显示24、48和72 h Ad-Ang1转染组、Ad-VEGF165转染组和Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2转染组吸光度均明显高于Ad-GFP组及对照组(P<0.05);Ad-GFP组与对照组相比无显著差异(P>0.05);Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2转染组吸光度明显高于Ad-Ang1转染组和Ad-VEGF165转染组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示Ad-Ang1、Ad-VEGF165及Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2处理组与对照组及空转染组相比均能够显著抑制细胞凋亡(P<0.01)。免疫细胞化学法显示各转染组Ki-67表达强度均显著高于对照组和Ad-GFP组(P<0.01)。RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA在各转染组中的表达要明显高于对照组(P<0.05);bax mRNA在各转染组中的表达要明显低于对照组(P<0.05)。结论:Ang1、VEGF165和Ang1 VEGF165/2能够明显促进人胃癌细胞MGC-803增殖,抑制血浆饥饿时的凋亡,Ang1 VEGF165/2组的作用要显著强于Ang1组和VEGF165组。     

Caveolin-1基因转染对人胃腺癌细胞生长的影响

目的 探讨外源性Caveolin-1基因在人胃腺癌细胞中的表达作用.方法 将pcl-neo-caveolin-1人全长质粒转染入MGC803细胞中,用G418筛选得到细胞克隆并扩大培养,获得稳定表达caveolin-1的细胞系,通过Western-blot、细胞计数及流式细胞术等方法检测基因表达、细胞增殖分化等情况.结果 与对照组和pcl-neo空质粒转染组相比,转染caveolin-1基因后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显增高,而P-ERK1/2的表达却明显下降;细胞的群体倍增时间明显延长:由46.67或47.32小时延长至65.46小时,差异有显著性(P＜0.01); 细胞周期分布发生明显变化:G0/G1期细胞比例由35.02%增加到51.98%,S期比例由56.97%下降至39.80%,G2、M期无明显变化.结论 Caveolin-1通过抑制MGC803细胞的增殖而导致其发生G0/G1期阻滞,可为肿瘤基因治疗提供实验依据.     

二烯丙基二硫抑制人胃癌MGC803细胞增殖和对G2/M期的阻滞作用

目的研究二烯丙基二硫(DADS)抑制人胃癌MGC803细胞增殖和对G2/M期的阻滞作用。方法采用MTT法测定DADS对MGC803细胞增殖的抑制作用,用流式细胞仪检测DADS对MGC803细胞周期的影响。结果30mg/L、60mg/L、90mg/L的DADS对MGC803细胞的抑制率分别为31.58%±2.20%、53.87%±4.50%、81.58±1.70%,随浓度增高呈上升趋势;对MGC803细胞周期的影响为G0/G1期细胞比率下降,G2/M期逐渐上升。结论DADS对人胃癌MGC803细胞增殖的抑制作用是通过G2/M期阻滞,抑制细胞分裂来完成的。