高胆固醇血症小鼠主动脉壁VEGF蛋白的表达

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在动脉粥样硬化形成过程中的作用。方法　用免疫组化SABC法观察C5 7BL/ 6J纯系小鼠经脂肪乳灌胃 8周后 ,其主动脉壁的VEGF蛋白表达。结果　正常组主动脉壁VEGF蛋白表达均为阴性 ,仅外膜残存脂质VEGF阳性。脂肪乳组血栓中、局部增生的新内膜均有VEGF蛋白表达。结论　高脂血症状态下 ,内源性VEGF可能参与血栓形成及内膜增生 ,促进动脉粥样硬化发生发展。     

生殖周期中小鼠子宫NOS定位及血清NO水平变化

目的　系统研究 3种一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)在生殖周期中小鼠子宫分布变化 ,探讨内源性一氧化氮 (nitricoxide,NO)在生殖周期中可能的生理作用。　方法　免疫组织化学LSAB法 ,比色法。　结果　神经型一氧化氮合酶 (nNOS ,NOS1)在生殖周期小鼠子宫有较为稳定的表达 ,大量的阳性细胞主要分布在子宫内膜上皮 ,内膜基质 ,血管内皮 ,腺上皮及肌层 ;内皮型一氧化氮合酶 (eNOS ,NOS3)在妊娠中期小鼠子宫表达明显增强 ,蜕膜上皮 ,腺上皮和血管内皮呈强阳性标记 ;诱导型一氧化氮合酶 (iNOS ,NOS2 )在妊娠早期表达最强 ,妊娠中、晚期表达稍下降。阳性标记主要分布在肌层 ,血管内皮 ,腺上皮 ,内膜上皮及内膜基质 ;然而动情期小鼠子宫未见iNOS阳性标记。此外 ,还测定了生殖周期小鼠血清NO水平变化。　结论　 3种NOS同工酶在生殖周期小鼠子宫可能既协作又分工 ,由其产生的内源性NO对雌鼠动情、胚胎植入、分娩前子宫静息状态的维持、分娩始动以及产后子宫修复等生理过程可能均有调节作用。     

冠心病患者外周血中的氧化低密度脂蛋白免疫复合物与细胞因子的检测

为探讨OX LDL引发的免疫反应在动脉粥样硬化发生发展中的作用 ,选择 90例各种冠心病患者 ,用ELISA法对其血清中OX LDL免疫复合物及肿瘤坏死因子α (TNF α )、可溶性血管细胞间粘附分子 1(sVCAM 1)、白细胞介素 1β (IL 1β )水平进行了测定。冠心病各组患者血清OX LDL IC水平均明显高于对照组 ,表现出随病情严重程度逐渐增加的趋势 ,IL 1β、TNF α及sVCAM 1浓度明显升高 ,表现出随OX LDL IC水平增高而升高的趋势。OX LDL IC及其激活的细胞因子通过复杂的免疫调控网络改变了OX LDL原来的作用范围和作用方式 ,参与动脉粥样硬化的发展过程。     

SA-30诱导的小鼠子宫内诱导型一氧化氮合酶的变化

目的　检测精子膜抗原 SA- 30对小鼠子宫内诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)含量及分布的影响 ,从而了解 SA - 30的抗生育机制。　方法　 SA- 30免疫雌性昆明小鼠后 ,应用免疫组织化学方法 ,对子宫内的 i NOS进行了检测。结果　 SA - 30免疫后对间情期小鼠子宫内的 i NOS没有明显影响 ,无论是免疫组还是对照组 ,在子宫内膜基质中均有大量阳性细胞分布 ,两者无明显差异 ;在妊娠第 3d时 ,对照组的小鼠子宫中有较多 i NOS表达 ,阳性标记主要集中在内膜上皮及固有膜中的子宫腺上 ,经 SA- 30免疫的小鼠子宫中 ,i NOS表达则显著减少 ,整个内膜标记极弱 ,只在子宫肌层内有少量 i NOS阳性细胞分布。　结论　 SA - 30可能通过使妊娠早期小鼠子宫内 i NOS表达显著减少 ,而影响小鼠胚胎植入及早期胚胎的发育     

不同条件下NOS阳性神经元在脊髓中央管周围灰质的表达

目的　探讨不同条件下一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)阳性神经元在脊髓中央管周围灰质的分布及数量变化 ,分析脊髓中央管周围灰质与针刺镇痛的关系。方法　应用NADPH d法 ,观察在正常情况下、疼痛刺激下、电针刺激下、疼痛加电针刺激下NOS阳性神经元在脊髓中央管周围灰质的表达。结果　正常情况下 ,脊髓中央管周围灰质有少量NOS阳性细胞 ;疼痛刺激后 ,NOS阳性细胞数目增多 (P <0 .0 1) ;单纯电针刺激下 ,NOS阳性细胞较正常组无明显变化 (P >0 .0 5 ) ;疼痛刺激加电针刺激后 ,NOS阳性细胞数较疼痛刺激组明显减少 (P <0 .0 1) ,而与正常组相比无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论　抑制疼痛刺激引起的NOS阳性细胞数目增多 ,可能是电针镇痛的机制之一     

胰岛素对THP—1细胞脂蛋白脂酶mMA表达及细胞泡沫化的影响

目的：观察胰岛素在氧化低密度脂蛋白(ox—LDL)致人髓系白血病单核细胞株THP—1细胞泡沫化过程中的作用，并探讨其机理。方法：用不同浓度胰岛素及ox—LDL与THP-1细胞一起共同孵育，观察：THP—1细胞脂蛋白脂酶(LPL)mRNA RT—PCR产物、非特异性脂酶染色THP—1细胞所得脂酶阳性细胞数、细胞大小变化、油红O染色所得含脂滴细胞数、细胞内胆固醇含量。结果：100mU/L以上浓度胰岛素各组：THP—1细胞LPL mRNA表达与oox—LDL对照组比较上调2倍；细胞周长、脂滴阳性细胞百分率及细胞内胆固醇含量均明显高于ox—LDL对照组(P＜0．05)。结论：高浓度胰岛素在ox—LDL存在条件下有促进THP—1细胞向泡沫细胞转化的作用，其机理可能与细胞LPL mRNA表达上调有关。     

长期单纯高尿酸血症大鼠主动脉病理变化

目的探索长期单纯高尿酸血症(HU)能否造成大鼠主动脉的病理变化。方法将大鼠随机分为对照组和HU模型组,模型组使用2%的氧嗪酸钾饲料和100μmol/L的尿酸水饲养,后期增加氧嗪酸钾灌胃建立长期HU动物模型,使用HE染色观察大鼠主动脉内膜-中膜厚度、内皮炎性细胞浸润以及脂纹、脂斑的形成,使用免疫组化检测大鼠主动脉e NOS、ET-1、ICAM的表达,使用ELISA检测ET-1、ICAM的含量、酶法检测血清NO含量。结果 HU组大鼠可见动脉壁内膜-中膜厚度轻度增加;浸润于内膜的炎性细胞数轻度增多。HU组主动脉内膜e NOS表达较对照组明显减少,ET-1、ICAM表达显著高于对照组(P0.05),HU组大鼠血清ET-1(P0.05)、ICAM(P0.01)均较对照组显著升高,NO(P0.01)较对照组显著降低。结论长期单纯高尿酸血症(12周)可以造成S-D大鼠主动脉早期内皮损伤,但不能形成典型动脉粥样硬化。     

血管树突状细胞在人主动脉粥样硬化早期病变中的分布

目的：探讨血管树突状细胞在人早期动脉粥样硬化(AS)病变中的分布模式。方法：人主动脉标本15例主要取自尸检和外科手术，常规连续切片，分别行HE及S100／CD1a免疫细胞化学染色，光镜下观察S100／CD1a阳性细胞分布情况。结果：15例HE染色标本中，2例正常，13例人动脉血管可见内膜的增厚及泡沫细胞等AS早期病理表现。9例S100／CD1a染色阳性，阳性率为69．2％。S100／CD1a阳性细胞分布在病变的内膜和外膜，外膜的S100／CD1a阳性细胞主要分布在滋养血管的周围。结论：在AS早期病变部位有血管树突状细胞的聚集，主要分布在病变血管的内膜和外膜，提示血管树突状细胞可能参与了AS早期的免疫反应。     

败血症休克大鼠血管L-精氨酸/一氧化氮途径的变化

目的:观察败血症休克大鼠主动脉内膜、中膜和外膜一氧化氮合成途径的改变。方法:雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型,分别测定假手术组、早期休克组和晚期休克组大鼠主动脉内膜、中膜和外膜的亚硝酸盐(NO^-₂)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及L-精氨酸(L-Arg)转运;免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在主动脉各层的分布。结果:早期及晚期败血症休克大鼠主动脉内膜产生的NO^-₂含量、NOS活性及L-Arg转运速率均低于假手术组,而中膜和外膜的NO^-₂、NOS活性及L-Arg转运速率则显著高于假手术组,外膜增加的程度尤为显著。免疫组织化学染色显示,败血症休克时血管中膜和外膜尤其是外膜iNOS阳性染色明显较强。结论:败血症休克时血管内膜NO合成受到抑制,而中膜和外膜NO合成显著增强,这一改变与休克状态下血管中L-Arg转运、iNOS表达及其活性的变化有关。     

一氧化氮合酶在大鼠附睾内的表达及其可能的作用

目的　为了阐明一氧化氮合酶 (NOS)在附睾内的表达 ,同时探讨NO在男性生殖功能中的作用。方法　本研究采用正常大鼠附睾组织 ,用免疫组织化学ABC法研究两种NOS(iNOS、eNOS)的表达。结果　在附睾上皮细胞内eNOS及iNOS均为免疫反应阳性 ,其中eNOS表达强 ,iNOS表达较强 ,血管内皮及平滑肌细胞内仅为eNOS免疫反应阳性 ,附睾间质中仅iNOS为免疫反应阳性。结论　两种NOS在附睾内均有不同程度的表达 ,各有特定的分布区域 ,提示NOS与附睾的功能密切相关     

OX-LDL诱导内皮细胞的条件培养基对内皮细胞LPO、NO和iNOS的影响

为了探讨受损内皮细胞的自分泌和旁分泌对受损内皮细胞本身的影响 ,本文收集正常内皮细胞条件培养基和用氧化型低密度脂蛋白 (OX-L DL )诱导内皮细胞的条件培养基分别作用于正常内皮细胞和氧化受损内皮细胞 ,检测其脂质过氧化物和一氧化氮代谢及诱导型一氧化氮合酶表达的变化。得到的结果是 :(1)正常内皮细胞的条件培养基和 OX-LDL 诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞和受损内皮细胞脂质过氧化代谢有明显下调作用 (P<0 .0 5 ) ,但 OX-LDL 诱导的内皮细胞条件培养基的下调作用更为明显 (P<0 .0 1)。 (2 )正常内皮细胞的条件培养基和 OX-LDL 诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞 NO的代谢表现为抑制作用 (P>0 .0 5 ) ,而对受损内皮细胞有轻微上调作用 (P>0 .0 5 )。 (3 )正常内皮细胞的条件培养基和 OX-L DL诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞诱导型一氧化氮合酶的表达表现出抑制作用 ,而对受损内皮细胞诱导型一氧化氮合酶的表达有上调作用 (P>0 .0 5 )。本文结果提示 :正常和受到氧化损伤内皮细胞的自分泌和旁分泌作用对正常和受损内皮细胞的脂质过氧化物的代谢均有下调作用 ,对 NO的代谢和诱导型一氧化氮合酶的表达则起抑制作用 ,而对受损内皮细胞有轻微上调作用。这种调节作用可能是内皮     

氧化修饰低密度脂蛋白对内皮细胞功能的影响

目的 观察氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）对内皮细胞NO／ET-1、t-PA／PAI-1合成、细胞表面细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 采用培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs），在分另0加入不同浓度ox-LDL（50、100、150、200mg／L）孵育24h后，观察培养液中NO、ET-1、t-PA、PAI-1水平及细胞表面ICAM-1的表达。结果 ox-LDL可显著抑制NO、t-PA的合成。ox-LDL还可明显增加ET-1、PAI-1的分泌及诱导细胞表面ICAM-1的表达。结论 ox-LDL对内皮细胞具有明显的细胞毒作用，它对NO／ET-1、t-PA／PAI-．1及ICAM-1表达的影响可能是其致动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

一氧化氮/诱导型一氧化氮合酶在动脉粥样硬化过程中的作用

 目的：探讨一氧化氮（NO）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）过程中的动态变化,分析其对动脉粥样硬化形成过程的影响。方法：将60只SD大鼠随机分成2组：对照组及AS组,每组30只。AS组采用维生素D3腹腔注射联合高脂饲料饲养的方法构建动脉粥样硬化模型。用相关生化方法检测血清各项生化指标：总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖和钙离子,比色法检测血清NO浓度,并对主动脉行HE染色,免疫组化技术检测iNOS蛋白表达,将所得数据进行统计分析,用简单线性相关分析NO与钙离子及动脉粥样硬化指数的相关性。结果：90 d后成功构建了主动脉中膜钙化型动脉粥样硬化模型。血清NO浓度在动脉粥样硬化过程中逐步下降,各组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。动脉粥样硬化过程中动脉粥样硬化指数与钙离子呈正相关,与NO呈负相关。在90 d的AS组粥样斑块区免疫组化技术检测到iNOS蛋白表达。结论:在动脉粥样硬化形成过程中,主动脉粥样斑块区iNOS蛋白高表达,但血清NO浓度逐渐降低,NO抗动脉粥样硬化作用减弱。     

氧化低密度脂蛋白促进血管内皮细胞表达基质金属蛋白酶-2

目的:用氧化低密度脂蛋白干预培养的人脐静脉内皮细胞, 观察内皮细胞表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的改变。方法:用胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞, 分组后分别予以25mg/LLDL、25mg/LOX-LDL进行干预。提取细胞总RNA和总蛋白分别进行RT-PCR、Westernblotting检测, 同时收集条件培养基行酶谱法(zymography)检测MMP-2的活性。结果:经mRNA、蛋白和酶活性检测, 发现25mg/LOX-LDL干预时, MMP-2的表达水平明显高于对照和25mg/LLDL。结论:OX-LDL能促进内皮细胞表达MMP-2, 这提示血管细胞外基质的降解在氧化脂蛋白诱发的动脉粥样硬化斑块产生和破裂机制中起着一定作用。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮量及其合酶的影响

目的和方法：利用体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察糖基化终产物对该细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其对一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的影响。结果：发现糖基化终产物组一氧化氮含量明显降低而一氧化氮合酶活性却明显增高,并随浓度、作用时间而发生相应变化。结论：糖基化终产物对内皮细胞产生一氧化氮的影响并不是通过降低ＮＯ合酶活性而起作用。     

Inducible and endothelial nitric oxide synthase expression in human atherogenesis: an immunohistochemical and ultrastructural study

BackgroundNitric oxide has been proven to play an important role in the maintenance of vascular tone and structure. Impairment of nitric oxide production is an early indicator of atherosclerosis, but not much is known about the real mechanisms underlying this phenomenon.MethodsIn the present study, immunocytochemical methods have been used to analyze the patterns of expression of endothelial nitric oxide synthase and inducible nitric oxide synthase proteins in healthy and atherosclerotic human aortae using both confocal laser scanning microscopy and electron microscopy.ResultsInduction of the expression of endothelial nitric oxide synthase and inducible nitric oxide synthase proteins was observed in smooth muscle cells of atherosclerotic human aortae. Altered nitric oxide synthase expression was reported in atheromatous plaques and in apparently normal vascular tissues adjacent to the lesions.ConclusionsOur data confirm and extend previous findings of a direct relationship between dysregulation of nitric oxide pathway and atherosclerosis, suggesting another possible mechanism by which nitric oxide synthase system abnormalities may promote vascular dysfunction during human atherogenesis. Changes in nitric oxide production might be the primary step in the development of atheroma.     

Atherosclerotic lesions are associated with increased immunoreactivity for inducible nitric oxide synthase and endothelin-1 in thoracic aortic intimal cells of hyperlipidemic Watanabe rabbits

The development and progression of atherosclerotic lesions in Watanabe heritable hyperlipidemic rabbits is associated with increases in inducible nitric oxide synthase (NOS2) and endothelin-1 (ET-1) immunoreactivity. In contrast, there is a reduction of immunoreactivity for neuronal NOS (NOS1) in aortic endothelial cells, but no change in endothelial NOS (NOS3) immunoreactivity. However, subendothelial macrophages and smooth muscle showed a different pattern of immunoreactivity of NADPH-diaphorase (NADPH-d), NOS2, ET-1, and NOS1. The lipid-rich macrophages in the intima were positively labeled for NADPH-d, NOS1, NOS2, NOS3, and ET-1. Smooth muscle cells in the subendothelium and the medial layers of the vascular wall were also positive for these markers. These results are consistent with the reduction of endothelium-dependent vasorelaxation that is known to occur during the development and progression of atherosclerosis in familial hypercholesterolemia. The data suggest a key role for vasoactive substances in the development of atherosclerosis.     

Asymmetric dimethylarginine: a molecule responsible for the coexistence of insulin resistance and atherosclerosis via dual nitric oxide synthase inhibition

Asymmetric dimethylarginine (ADMA) has been recently identified as the major endogenous inhibitor of soluble nitric oxide synthase. Its systemic accumulation was observed in conjunction with atherosclerosis and several cardiovascular and metabolic diseases. Here, we propose that ADMA causes insulin resistance by the inhibition of the neuronal isoform of nitric oxide synthase, while the simultaneously observed atherosclerosis is the consequence of endothelial nitric oxide synthase (NOS) inhibition. Our hypothesis rests on animal models in which experimental insulin resistance was induced by intraportal administration of non-selective and selective neuronal nitric oxide synthase inhibitors, N-methyl-L-arginine (L-NMMA) or 7-nitroindazole. In these models, loss of hepatic nitric oxide productions is presumed to hinder a very potent insulin sensitizing mechanism referred to as meal induced sensitization that is anatomically linked to the nitrergic fibers of the anterior hepatic plexus. Cause and effect relationship between ADMA and insulin resistance has been proposed previously by others however the nature of this relationship has not been elucidated in detail. In our hypothesis, we suggest that ADMA by inhibiting both the neuronal and the endothelial forms of NOS, results both in insulin resistance and in accelerated atherosclerosis, therefore ADMA is the molecule responsible for the coexistence of these two conditions. We also suggest animal models and human studies to test our hypothesis, the results of which may offer novel approaches in the prevention of insulin resistance and atherosclerosis.     

毁损弓状核后血清中不同成分及一氧化氮和脂质过氧化物的变化

目的探讨下丘脑弓状核在动脉粥样硬化(AS)形成中的影响。方法用谷氨酸单钠毁损弓状核后,检测血清中与AS形成密切相关的总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)、一氧化氮(NO)和脂质过氧化物(LPO)的变化。结果毁损弓状核后血清中促AS形成的物质如TC、OX-LDL、MDA明显增高,而有抗AS作用的NO则降低,HDL无变化。结论毁损下丘脑弓状核对AS的形成有促进作用,下丘脑可能参与AS的调控。