抗辣根过氧化物酶杂交瘤细胞系的建立与初步应用

单克隆抗体已被广泛地用于免疫组织化学研究,但是要充分发挥单克隆抗体的优势,就必须认真地选择最佳的免疫组织化学方法。非标记抗体技术由于敏感性高,非特异性显色浅,而受到多数学者的推荐。随着单克隆抗体和非标记抗体技术应用的增多,对鼠源性辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶(PAP)复合物的需求也逐渐增加。为此,我们进行了抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体及鼠源性PAP的研制与初步应用。 通过用HRP常规免疫的BALB/c小鼠进行两次融合(融合率为100％)。和采     

辣根过氧化物酶—抗辣根过氧化物酶复合物(PAP)制备及质量鉴定

非标记抗体酶免疫试验是由 sternberger 等首先提出的一种较新的免疫实验方法。它以某一抗体为中间介质,应用免疫反应的方式将酶结合到受检标本中相应的抗原物质上。由于该试验的各个步骤均以抗原、抗体特异性结合的方式进行,具有高度的选择性,并能最大限度地保存辣根过氧化物酶(HRP)的活性,与标记法酶联免疫吸附试验相比,具有特异性强、敏感性高、背     

辣根过氧化物酶直接标记小鼠腹水单克隆抗体

<正> 酶免疫试验灵敏、准确,广泛应用于各种病原及相应抗体的检测。用于酶免疫试验的酶有碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,但在酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫酶组织化学中使用最为广泛的是辣根过氧化物酶(HRP)。HRP与抗体分子或蛋白质抗原交联方法很多。常用的为戊二醛法和过碘酸钠     

用辣根过氧化物酶追溯周围神经联系法

<正> 辣根过氧化物酶(Herseradish peroxidase)最早由Richard(1960)等人用来研究肾近端小管的早期吸收情况,将HRP注入鼠静脉内,离隔一定时间进行观察。70年代Kristensen是将HRP用于神经系统联系的创始,他的第一部分工作即是将     

辣根过氧化物酶结合物的质量鉴定

辣根过氧化物酶(HRP)和抗HBs(山羊IgG)按戊二醛二步法、苯醌法和改良过碘酸盐法交联反应分别制成酶结合物,用琼脂扩散、二氨基联苯胺染色法对酶结合物定性,并测定其HRP浓度和活性、羊IgG浓度和抗HBs免疫活性,阐明标记率(A403nm/A280nm)的含义,通过ELISA检测表明标记率可作为评价酶结合物质量的指标,且其计算简便。     

辣根过氧化物酶法用于追溯周围神经联系的体会

辣根过氧化物酶(HRP)是70年代神经解剖学的新方法,尤其是在我国,用HRP法研究神经联系的历史就更短,只有5—6年的历程,但是由于我国神经解剖学的研究者们努力而勤奋,在这短短的五、六年时间内做出了许多成绩。今年(81年)11月2日中国解剖学会在西安第四军医大学召开了辣根过氧化物酶及放射自显影技术经验及成果交流会,这次会议开得     

在面神经干引入辣根过氧化物酶四种方法的比较

自Kristensson开创应用辣根过氧化物酶(HRP)于神经系统的研究中并首先应用于周围神经系统以来,HRP在周围神经的应用,大多为将HRP注射于神经元的终末部位。例如Kristensson将HRP注射于舌肌;Brownson注射于交感神经节;李继硕注射于膀胱;山田、陶之理注射于胃等。在周围神经干中直接给以HRP的报告并不多见。     

抗辣根过氧化物酶和乙肝表面抗原的双特异单克隆抗体的研制

以HBsAg 免疫的Balb/c 小鼠脾细胞与HGPRT 缺陷型的分泌抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体的杂交瘤细胞融合,获得二株分泌双特异单克隆抗体的三杂交瘤,抗体的一个结合部位与HB-sAg 反应,另一个结合部位与HRP 反应。     

钼酸铵固定TMB反应产物方法的探讨

钼酸铵能固定四甲基联苯胺(TMB)反应产物使之抗酒精的退色作用,已有报道。本文则分别探讨其耐酒精及高pH的作用。用辣根过氧化物酶(HRP)标记的切片经TMB温育后用钼酸铵处理,再置入pH3.3的酒精30分钟,可见酒精对钼酸铵固定后的TMB反应产物无退色作用;若放入pH7.4的磷缓则明显退色,但比未经钼酸铵处理者退色慢。     

一种较理想的用于ELISA的辣根过氧化酶底物

比较了辣根过氧化酶(HRP)的三种还原底物,邻苯二胺(O-PD)、2,2′-连氮-双〔3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐〕(ABTS)及3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)的动力学,发现(1)不论以游离 HRP、HRP-IgG 或 HEP-Fab′为酶制剂,其 Km 均以 TMB 为最小;(2)TMB 所需的 H_2O_2最适浓度最低;(3)以 TMB 为底物时,酶活力受 pH 的影响最小;(4)酶活力测定的灵敏度最高;(5)蓝色的氧化产物可用于酶标定位,而加酸停止反应后的黄色产物又可用于酶标免疫测定的定量比色。再加上三种化合物中,仅 TMB 为非致癌性,故 TMB 是一个比较理想的 ELISA 的 HRP 底物。     

辣根过氧化物酶注入舌下神经干的逆向传递——光镜和电镜观察

辣根过氧化物酶(HRP)是一种大分子的蛋白质,其分子量约40,000。用它作为示踪物可以研究它从神经元的末梢逆向传递到胞体的途径。已有数种方法将它引入神经:如注射HRP溶液于舌肌或胃、回肠、膀胱壁、心外膜下等处。或将坐骨神经浸泡在HRP溶液中和放HRP乾粉于坐骨神经或面神经、臂丛上。但不同的方法结果並不一致。为求得到成功的标记,有人在引入HRP前压榨小白鼠的坐骨神经干,以破坏神经束膜对HRP     

免疫过氧化物酶技术

免疫过氧化物酶技术是近十多年来发展起来的一种新的免疫组织化学技术,由于它比免疫荧光和免疫铁蛋白技术有较多的优点,近几年来发展很快,已广泛应用于细胞生物学、病理学和医学理论方面的研究。一、几种免疫过氧化物酶的方法目前免疫过氧化物酶的技术已有多种(图1)。每一种都是利用特异的抗原抗体反应和辣根过氧化物酶(HRP)的活牲。HRP在H_2O_2存在的条件下,分解H_2O_2而使某些化合物(底物)氧化成有色的不溶性产物,沉着在抗原的部位。因此应用这种技术能在显微镜下观察组织和细胞内抗原的分布和定位。     

戊巴比妥对大鼠骨胳肌辣根过氧化物酶的轴突摄取和逆行传送的作用

巴比妥药物对顺行轴浆运输方面的作用已有不少报道,而对逆行轴突传送方面却报道甚少。本工作观察了在正常剂量戊巴比妥钠的连续作用下,大鼠骨胳肌辣根过氧化物酶(HRP)的轴突摄取和逆行传送作用及其与不活动的关系。 实验是在体重为182克左右的43只雄性大白鼠进行,按实验要求分为下列七组。即神经组织中内源性过氧化物酶测定组。正常对照组,即动物在清醒状态下,腓肠肌内注射5毫克HRP(Sigma Ⅵ,R.Z=3—3.2)。     

一种用于ELISA的过氧化物酶新底物

辣根过氧化物酶(HRP)是目前在ELISA中应用最普遍的标记酶。但是目前常用的显色底物,如 5氨基水杨酸、邻联茴香胺、邻联甲苯胺或邻苯二胺(OPD)等都被认为是致癌物质。寻找适用于ELIS人的非致癌性HRP显色底物有着重要的实际意义。磺基二氯苯酚(SDP)和4-氨基安替比林(AAP)经HRP催化氧化后结合成玫瑰红色化合物,这一反应曾被用于血液尿酸测定,即测定通过尿酸酶作用于尿酸而释放的H_2O_2。但在该反应中H_2O_2最适浓度极低,过量的H_2O_2对HRP产生强     

一种新的HRP—AChE双重染色法—TMB—ST法结合Karnovsky和Roots法联合反应

乙酰胆硷酯酶(AChE)和辣根过氧化物酶(HRP)联合反应是追踪胆硷能神经通路的常用方法之一.但目前所用的方法仍存在HRP的反应灵敏度不高、有较多背景沉淀的缺点.为此,本文试验了以显示HRP的高灵敏度的四甲基联苯胺(TMB)-钨酸钠(ST)和AChE显色法联合反应的程序,以期得到一种较理想的HRP-AChE联合反应方法.     

骨骼肌纤维内联苯胺阳性反应物质的横纹状分布

联苯胺、二氨基联苯眩(DAB)和四甲基联苯胺(TMB)等都可以用来显示给予体内的外源性过氧化物酶,如辣根过氧化物酶(HRP)等。此外体内也含有一些内源性过氧化物酶或具有过氧化物酶活性的物质,这些内源性过氧化物酶活性物质已在脑和其它许多器官组织中为DAB 法所证实。但是对骨骼肌纤维的     

用辣根过氧化物酶轴突逆行传送法研究猫脑干中缝大核的传入神经联系

本文用辣根过氧化物酶(HRP)轴突逆行传送法研究了猫脑干中缝大核的传入神经联系。中缝大核注入 HRP 后,在丘脑束旁核内侧部有少量标记细胞。中脑中央灰质腹外侧区有大量标记细胞。中缝背核、中脑网状结构、Darkschewitsch 氏核、巨细胞网状核、旁正中网状核、前庭神经内侧核和外侧核内观察到 HRP 标记细胞的分布。在丘脑下部后区、后连合核、被盖背侧核、环状核,延髓中央核和薄束核内也有少量标记细胞。本文还对中缝大核传入神经联系的机能意义进行了讨论。     

辣根皮过氧化物酶同功酶的分离和鉴定

辣根过氧化物酶商品制剂中同功酶的种类和相对含量常因制备方法而异。近来关于过氧化物酶结构功能方面的研究均以单一的同功酶为材料。用以测试的过氧化物酶制剂可能因其中同功酶的种类和相对含量的差异而影响测试结果。     

介绍一种简单、快速、高效的辣根过氧化物酶标记抗体的过碘酸钠法

辣根过氧化物酶标记抗体的方法以戊二醛二步法和过碘酸钠法应用最广。1980年我们曾报道应用戊二醛二步法中回收的游离HRP再经过碘酸钠法标记来制备结合物的方法,虽然提高了酶的利用率,但操作仍较烦复。1981年,骆加理等采用了甲醛(或戊二醛)-过碘酸钠法,并用乙醇沉淀氧化后     

用辣根过氧化物酶法研究胃与结状神经节的联系

<正> 近年来,应用辣根过氧化物酶(HRP)轴突逆行传送的方法进行周围神经的研究逐渐增多。总的说来,研究传出神经较多,而研究传入神经较少;在研究内脏传入神经中,对交感传入神经的研究较多,而对副交感传入神经的研究较少。胃的内脏传入神经,Ellison和Clark、山田、陶之理和沈阳医学院针麻研究组着重报导了胃交感内脏传入神经元的情况,而对胃迷走内脏传入神经元叙述