血卟啉在H-22肝癌荷瘤小鼠体内的分布

目的探讨声敏剂血卟啉衍生物在肿瘤组织中的富集情况,以便在给药后超声结合血卟啉治疗肿瘤时选择最佳的超声处理时间。方法H-22肝癌荷瘤小鼠尾静脉注射HpD后,不同时间点取材,采用荧光分光光度法测定不同组织提取液中HpD的荧光强度,研究HpD在不同组织中的分布以及代谢变化。结果给药后2 h肿瘤组织以外的其他各组织内(血浆、肝、肾、皮肤、肌肉)血卟啉含量均达到其代谢过程的最高点,后逐渐下降;肿瘤组织中的HpD含量注射后不断上升,6 h时达到顶峰,随后又开始下降,10~24 h代谢比较缓慢,表现为肿瘤组织中对HpD的滞留作用,24 h时肿瘤组织中的HpD含量高于其他各组织,48~72 h趋于稳定在较低水平。结论提出了不同部位的肿瘤应选择各自适当的时间点进行超声处理。     

大肠正常组织和癌组织的自体荧光光谱特征分析

目的：研究大肠正常组织和癌组织的激光诱导自体荧光光谱特征，为大肠癌的早期诊断提供理论依据。方法：采用３７０ｎｍ激光诱导自体荧光检测分析采集２４例外科手术切下的大肠癌组织和正常组织的自体荧光光谱，分析两者的荧光光谱差异。结果：采集了４００～７００ｍｍ波长范围的自体荧光光谱。４００～５９０ｎｍ正常组织的荧光强度高于癌组织。５９０～７００ｎｍ癌组织的荧光强度高于正常组织。在波长４６０ｎｍ、６９０ｎｍ有特     

利用二乙基二硫代氨基甲酸钠—血卟啉衍生物—激光抗癌的研究

利用二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDC)-血卟啉衍生物(HpD)-激光抗癌的结果表明,DDC可以显著增强HpD-激光对癌细胞的杀伤作用。以HpD-激光处理,癌细胞(H_(22))的死亡率仅为15.9％,而以DDC-HpD-激光处理,其死亡率则高达92.9％。对于荷瘤(H_(22))小鼠,在HpD-激光治疗时,先给予DDC,可提高其疗效。DDC,HpD和激光在抗癌中,三者具有协同作用。     

七甲川菁荧光染料在肝细胞癌移植模型活体成像中的应用

目的探索七甲川菁近红外(NIR)荧光染料MHI-148在肝癌移植模型中的代谢特征,明确其识别肝细胞癌(HCC)细胞的特异性。方法体外培养人HCC细胞系Hep3B,荧光显微镜下观察荧光染料MHI-148在肿瘤细胞中富集强度;裸小鼠皮下注射Hep3B细胞建立移植模型,2周后,荷瘤鼠腹腔注射MHI-148溶液,NIR荧光活体成像检测不同时间点肿瘤部位和裸小鼠脏器中荧光强度的变化;连续检测肿瘤部位荧光强度(tumor,T)和临近正常组织荧光强度(background,B),计算最大T/B值。结果 MHI-148染料可特异性集聚于体外培养的HCC细胞,识别绿色荧光蛋白(GFP)标记的Hep3B细胞;肝癌皮下荷瘤鼠注射MHI-148,24 h后肿瘤部位荧光强度可达8.35×109/cm2,而小鼠其他脏器较少有荧光聚集;T/B值逐渐增加,并在24 h达到峰值。结论七甲川菁染料MHI-148可特异性识别人HCC细胞系Hep3B,通过NIR荧光成像或可检测到肝癌的发生。     

血卟啉—激光对小鼠正常皮肤生物效应的光镜观察

小鼠按每公斤体重50毫克腹腔注射HpD后2天,激光照射左耳5分钟,波长630nm,输出功率250mW,光斑直径1cm。除正常对照组3只小鼠外,单纯HpD组、单纯激光组和光敏处理组小鼠均于处理后即刻至14天分批处死取两耳,每组3只(少数组2只),切片,HE染色,观察。单纯HpD组鼠耳组织无明显改变。     

激光荧光光谱诊断恶性肿瘤的研究进展

激光是本世纪60年代最重大的科学技术成就之一,以其高亮度、高方向性、高单色性等突出特点,广泛运用于农业、通讯、医疗、军事等各个方而,并在科学技术的许多重大领域里,引起了革命性的变化。 激光荧光光谱技术用于诊断疾病具有灵敏、快速等优点,患者易于接受。所以近年来国内外应用荧光光谱诊断肿瘤的研究相当活跃,特别是早期诊断肿瘤方面已获得了一定进展,成为医学应用中的一个重要方面。荧光分为原子荧光、分子荧光、自发荧光、外源性荧光。 1 激光荧光光谱在诊断上的应用 1.1 激光荧光光谱仪 随着激光技术的发展,氙离子激光、氮分子激光、氪离子激光、可调染料激光等均作为激励光源,可观察并记录肿瘤组织的特征荧光,激光荧光光谱仪由激励光源、专输光纤及荧光检测记录系统三部分组成。 1.2 使用荧光药物诊断肿瘤 用激光荧光谱技术诊断肿瘤的方法早在70年代初期就引起了人们的关注。近年来获得新发展,肿瘤荧光辐射有两种类型：是由肿瘤组织本身经紫外光激发的,称自体荧光;另一种是聚集在肿瘤组织上荧光物质作光敏剂经激发后发出,然后根据荧光光谱对肿瘤进行鉴别诊断。使用荧光药物诊断肿瘤为其中的一种,在生物医学研究中常用的荧光物质主要有荧光素钠盐,血卟啉衍生物,即HPD(Hematoporphy rin Dirivative)。     

特征荧光谱在早期膀胱癌诊断中的应用

目的 寻找紫外激光诱发膀胱癌组织荧光特征光谱并探讨其在膀胱癌早期诊断中的应用价值。方法以血卟啉单甲醚作为光敏剂,全固态紫外激光作为激发光源（波长355nm）,检测膀胱癌组织特征荧光光谱。并对其特性进行分析研究。结果 膀胱癌组织自发荧光在445～490nm处存在双峰状组织特征蜂,经光敏剂孵育后癌组织药物荧光谱除出现组织峰外还在628．65nm处出现特征药物峰。结论 紫外激光诱发膀胱癌组织药物荧光光谱性质稳定,强度佳,特征药物峰处于可见光范围,肉眼易识别,有望提高早期膀胱癌诊断的阳性率。     

激光诱导荧光诊断大肠癌的临床研究

目的 探讨利用激光诱导自体荧光光谱对大肠癌进行临床诊断的可行性.方法 使用370 nm的激光器和荧光探测系统对临床病例进行大肠组织离体及在体实验,进行荧光光谱测定和分析.结果 大肠正常组织和癌组织的自体荧光光谱特征差异主要表现在谱峰位置和强度方面,在400～600 nm范围内正常组织的荧光强度显著高于癌组织,尤其是480m左右的荧光强度存在明显差异;癌组织在波长(623±8)nm附近有1个突起的小峰,光谱强度也明显高于正常组织.结论 用激光诱导自体荧光光谱对大肠癌进行临床诊断是可行的.     

Cr:LiSAF激光诱导的大肠癌自体荧光研究

目的研究利用激光诱导自体荧光对肿瘤进行诊断。方法用Cr:LiSAF激光器诱导癌组织和正常组织产生自体荧光,分析各试验组光谱强度差异。结果在(461.3±10.1)nm处,正常组织的荧光峰值强度明显大于癌症组织,而在(627.5±9.8)nm处,正常组织的荧光峰值强度则明显小于癌症组织。结论大肠正常组织和癌组织的激光诱导自体荧光光谱差异有显著性,具有较强的实用性。     

血卟啉-激光治疗肿瘤对转移影响的实验研究(简报)

用血卟啉加激光是一种很有前途的诊断和治疗肿瘤的新方法。应用脉冲激光能否引起或促进肿瘤扩敞是人们,特别是临床医生颇为关注的问题。有关这方面系统的研究工作尚不多。我们以可移植性小鼠前胃癌为治疗对象进行血卟啉-激光对转移影响的实验研究。选用近交系615小鼠85只,分为染料激光组(脉冲激光),氦氖激光组(连续激光)和对照组。给三组动物右肋部皮下接种小鼠前胃癌后5天,治疗组动物按5毫克/公斤体重剂量腹腔注射北京制药工业研究所生产的血卟啉衍生物(HpD)。第7天对治疗组动物瘤体分别用内光灯泵浦染料激光器(脉冲激光)和氦氖激光器(连续激光)进行照射,能量均相当     

人食管癌细胞体外光动力效应主要影响因素的实验研究

目的探讨光动力作用（PDT）对体外培养的人食管癌细胞Eca-109的杀伤效应．初步揭示影响Eca-109细胞光动力疗法杀伤效应的主要影响因素。方法以两种光敏剂血卟啉衍生物（HpD）和光敏素（Photofrin）不同浓度于特定光照剂量（15J／cm^2）下和不同浓度的HpD在三种不同光照能量密度（10J／cm2,30J／cm^2,50J／cm^2）下作用于食管癌Eca-109细胞,光源采用DIOMED630PDT系统,24h后通过MTT法检测细胞生存率,并应用荧光分光光度计RT-5000检测不同浓度HpD作用于Eca．109细胞4h后胞内光敏剂荧光值。结果两种光敏剂不同浓度间细胞生存率均有明显差异,三种不同光照能量密度下不同HpD浓度细胞生存率间亦存在明显差异（P〈0．05）。同一浓度不同光照能量密度的细胞生存率间,前4个低浓度生存率间未见明显差异（P〉0．05）,后4个高浓度生存率间则差异有统计学意义（P〈0．05）。根据荧光分光光度计RT-5000测得的胞内荧光值及标准曲线取得胞内光敏剂浓度,并与孵育浓度进行回归分析,得相关系数r=0．997,即胞内光敏剂浓度与孵育浓度呈正相关。结论特定光源下,光照能量密度、光敏剂的种类及其光敏剂的孵育浓度是影响Eca-109 PDT效应的主要因素。     

血卟啉衍生物光动力对两株人结肠癌细胞杀伤实验的对比研究

目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人结肠癌细胞株LoVo和CoLo205的生物作用.方法 在体外培养的LoVo和CoLo205细胞中分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 μg/ml)孵育6 h,予波长为630 nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20J/cm2,继续孵育24 h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率.荧光分光光度计检测LoVo与CoLo205细胞内HpD荧光强度.结果 HpD-PDT对体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞均有杀伤作用,两者无显著性差异(P＞0.05).其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P＜0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml时,其杀伤LoVo、CoLo205细胞的作用最明显;HpD-PDT对LoVo和CoLo205的半数杀伤度(IC50)分别为0.4 μg/ml、0.6 μg/ml,两者无显著性差异(P＞0.05).检测LoVo与CoLo205细胞内HpD荧光强度无显著性差异(P＞0.05).结论 HpD-PDT可有效杀伤体外培养的人结肠癌LoVo和CoLo205细胞,且对两种细胞的杀伤作用无明显差异.     

血管内皮细胞生长因子在结直肠组织中的表达及其意义

目的　研究血管内皮细胞生长因子 (VEGF)和结直肠癌的关系。方法　应用流式细胞技术 (FCM)对结直肠癌肿瘤组织和癌旁正常粘膜组织标本进行VEGF的测定 ,结果用阳性细胞百分率和平均荧光强度表示。结合临床资料探讨VEGF和结直肠癌的生物学行为以及发生、发展与预后的关系。结果　VEGF在结直肠癌肿瘤组织中阳性细胞表达百分率为 5 7%± 2 9%、阳性细胞平均荧光强度为 2 4 %± 11% ,在癌旁正常粘膜组织标本中的阳性细胞表达百分率为 4 2 %± 2 4 %、阳性细胞平均荧光强度为 16 %± 7% ,两者比较差异具有显著意义 (P <0 0 5 ) ,且VEGF的阳性表达和结直肠癌Dukes分期相关 (P <0 0 1)。结论　血管内皮细胞生长因子 (VEGF)与结直肠癌的发生、发展和预后相关 ,但与结直肠癌生物学分化程度之间的关系还有待进一步验证。     

人食管癌荷瘤裸鼠光动力效应机制的初步研究

目的 探讨光动力治疗(photodynamictherapy,PDT)对人食管癌细胞Eca-109荷瘤裸鼠的作用机制.方法 通过皮下接种Eca-109细胞建立人食管鳞癌荷瘤裸鼠模型,并将其随机分为血卟啉衍生物(Hematoporphyrin derivative,HpD)光动力治疗组(给予HpD及光照),单纯照光组(仅给予光照),单纯光敏剂组(仅给予HpD)及空白对照组.腹腔注射HpD24h后前两组行光照(光能量密度为120J/cm~2),3d后处死所有裸鼠并检测瘤组织丙二醛(MDA)含量,免疫组化检测caspase-3并HE染色观察.结果 HpD-PDT组与空白对照组.单纯照光组,单纯光敏剂组的MDA含量相比均显著增高(P<0.01),而后3组之问MDA含量均无明显差异(P>0.05).HpD-PDT组与空白对照组闻caspase-3蛋白阳性率无明显差异(P>0.05).光镜下,HE染色仅HpD-PDT组可见大片均质红染的坏死物.结论 HpD-PDT对人食管癌荷瘤裸鼠的作用机制主要是通过光照产生单态氧直接损伤肿瘤细胞并在过氧化反应中产生MDA.其凋亡途径中caspase-3可能未激活,即其凋亡途径可能是不依赖caspase-3通路的.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of photodynamic therapy (PDT) in nude mice bearing human esophageal cancer cell line Eca-109 xenografts. Methods A nude mouse model bearing human esophageal carcinoma was established by subcutaneous transplantation of Eca-109 cells. The mice were then randomized into 4 groups, namely hematoporphyrin derivative (HpD)-PDT group (given HpD and laser irradiation), exclusive laser irradiation group, exclusive HpD group and blank control group. In HpD-PDT group, the mice were exposed to irradiation at the light energy density of 120 J/cm~2 delivered via a DIOMED 630 PDT system 24 h after intraperitoneal HpD injection, and the mice in exclusive laser irradiation group received only laser irradiation. Three days later, all the nude mice were sacrificed for determination of malondialdehyde (MDA) production, immunohistochemistry for caspase-3 protein and HE staining of the tumor tissue. Results The MDA level was significantly higher in HpD-PDT group than in the other 3 groups (P<0.01), and comparable between the latter 3 groups. Expression of caspase-3 protein was similar between HpD-PDT group and the blank control group (P>0.05). Under light microscope, HE staining visualized massive tissue necrosis in HpD-PDT group with homogeneous red staining. Conclusion In human esophageal carcinoma xenografts in nude mice, HpD-PDT generates singlet oxygen to result in direct tumor cell damage and cause MDA production. Caspase-3 may not be activated in the apoptotic pathway, suggesting that this pathway may not be caspase-3-dependent.     

应用BSP联合TA克隆测序检测胰腺癌中RASSF1A基因启动子区异常甲基化

目的:检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用?方法:采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测胰腺癌细胞株PANC-1及胰腺癌组织?癌旁组织及正常胰腺组织中RASSF1A启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)处理PANC-1,观察处理前后甲基化率变化情况,逆转录PCR观察RASSF1A 的mRNA表达情况?结果:在PANC-1细胞中RASSF1A启动子的甲基化率平均为100.00%,在正常胰腺?癌旁及癌组织中平均分别为1.79%?93.75%和100.00%,与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P < 0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P > 0.05)?在PANC-1细胞?胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因无表达,在正常胰腺组织中RASSF1A基因呈阳性表达;PANC-1细胞经5-aza-dC处理后,RASSF1A的甲基化率下降(88.89%,P < 0.05),mRNA表达无变化?结论:胰腺癌细胞株PANC-1及癌组织?癌旁组织RASSF1A基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中RASSF1A基因的表达沉默?该基因异常甲基化有望成为胰腺癌的早期诊断指标和治疗靶点?     

血卟啉衍生物-激光杀伤恶性肿瘤的动物实验

近几年,应用光敏技术诊治恶性肿瘤,引起国内外的广泛重视。光敏技术是利用光敏剂,经光照射产生光动力效应杀伤细胞(亦称光敏效应)。血卟啉衍生物Hematopor-Phyrin—Derivative,HpD)是目前常用的光敏剂。光源采用复合光—白光或激光。此组合又称为血卟啉衍生物光动力治疗(简称HpD-PdT)。在载瘤(S_(180))小鼠尾静脉注入长春制血卟啉衍生物(16mg/kg)后隔72小时,用630um波长长春制染料激光器(382J/cm~2)照射,验证在此条件下杀伤动物恶性肿瘤的效应,结果显著。     

量子点免疫标记技术在肺癌组织芯片上的应用

目的:探讨新的标记试剂——量子点(QDs)在肺癌组织芯片上进行不同蛋白的检测并评价其效果。方法:在肺癌组织芯片上,利用QDs标记的链霉亲和素复合物(QDs-SA)能与生物素化二抗IgG结合的特点进行免疫荧光组织化学检测细胞角蛋白(CK)和增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达,评价蛋白的定位是否准确,并每隔1周在荧光显微镜下观察荧光信号的瘁灭情况。结果:观察到CK、PCNA蛋白分别定位于肺癌细胞的胞膜和胞核,定位准确,并且阳性信号呈现橙红色的光。直到4周后,才观察到荧光信号有明显的减弱。结论:QDs具有很好的耐光性,很宽的激发和发射光谱,荧光寿命也长。采用链霉亲合素修饰的QDs,能精确地检测肺癌组织芯片上不同蛋白的定位。     

盐酸塔斯品碱促进大鼠皮肤创伤愈合及其作用机制的研究

目的:研究盐酸塔斯品碱对皮肤创伤愈合的促进作用及其机制.方法:建立大鼠背部双侧圆形创伤模型,观察创伤创面的愈合时间,测量其面积,检测组织中羟脯氨酸与蛋白质含量的变化,并进行组织形态学观察.结果:盐酸塔斯品碱可明显缩短创面的愈合时间.创伤后第3～14天,盐酸塔斯品碱组大鼠创面愈合率显著高于自身二甲亚砜对照组(P＜0.05或P＜0.01);创伤后第3～7天,大鼠创伤肉芽组织中蛋白质含量在盐酸塔斯品碱2 mg/ml组明显高于模型组(P＜0.05),创伤后第7天蛋白质含量达到峰值,第14～21天逐渐降至正常皮肤组织的含量水平;创伤后第3～21天,大鼠创伤组织中羟脯氨酸的含量,在盐酸塔斯品碱组明显高于模型组(P＜0.05或P＜0.01),创伤后第14天羟脯氨酸的含量达到峰值,第21天接近正常皮肤组织的含量水平.组织形态学结果显示:在大鼠创伤组织修复早期,盐酸塔斯品碱能够促进新生毛细血管的形成.结论:盐酸塔斯品碱具有促进大鼠皮肤创伤愈合的作用,其作用机制可能与促进肉芽组织中新生毛细血管的生成以及蛋白质和胶原的合成有关.     

原发性乳腺癌组织中端粒酶活性表达与癌细胞凋亡相关性的研究

目的 :探讨原发性乳腺癌组织中端粒酶活性表达与细胞凋亡发生基因表达的相关性及其预后意义。　方法 :应用端粒酶 TRA P- PCR电泳、银染及 EL ISA法、凋亡细胞原位检测 (TU NEL法 )和 S- P免疫组化染色等技术 ,分别对端粒酶定性和定量测定其活性 (TA)、计算凋亡指数 (AI)、检测凋亡相关基因 Bcl- 2和 p5 3蛋白表达水平。　结果 :TA定性检测平均阳性率为 89.8%、定量测定吸光值中位数 0 .6 3± 0 .2 9,均明显高于正常乳腺和良性病变组织(P<0 .0 5 ) ,其表达阳性率高者预后较差 ,5年累积生存率 (6 0 .3% )低于阴性者 (77.4% ) ,二者有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,但酶表达与患者年龄、临床 TNM分期、肿瘤大小、发生部位、病理学类型、淋巴结转移等无关。 AI中位数4.83± 0 .74,与 TA表达高度相关 (r=0 .7331,P <0 .0 5 ) ,凋亡相关基因 Bcl- 2和 p5 3蛋白表达阳性率分别为6 3.4%和 40 .7% ,其中 Bcl- 2表达水平与 TA、AI高低呈高度正相关 (r=0 .7814,P<0 .0 5 ) ,p5 3与之呈负相关 (r=- 0 .6 2 5 5 ,P<0 .0 5 ) ;经多变量 Cox回归分析显示仅 TA、AI对乳腺癌患者生存期有影响 ,TA阳性率高、AI>4.0 %者的平均生存时间短于 TA阴性、AI<4.0 %者 (P<0 .0 5 )。此外 ,术前接受化疗者的 TA表达水平低于未化疗者 (6 4.7