热休克蛋白47对转化生长因子β_1诱导肾小管上皮细胞合成细胞外基质的影响

目的探讨热休克蛋白47(HSP47)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肾小管上皮细胞(HK-2)合成细胞外基质(ECM)的影响。方法以10ng/mL TGF-β1刺激HK-2细胞0、12、24、48h,蛋白印迹法检测HSP47的表达,蛋白印迹法及Real-time聚合酶链反应(PCR)法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达。然后转染HSP47小干扰RNA(siRNA)及阴性对照,后采用蛋白印迹法检测HSP47的表达,蛋白印迹法及Real-time PCR法检测ColⅠ和ColⅣ的表达。结果 TGF-β1作用于HK-2细胞后,HSP47蛋白呈时间依赖性表达上调(P<0.05),同时ColⅠ和ColⅣ蛋白及mRNA呈时间依赖性表达上调(P<0.05),转染HSP47siRNA后,蛋白印迹法显示与对照组比,TGF-β1组HSP47表达增强(P<0.01),与TGF-β1组比,HSP47siRNA组HSP47表达降低(P<0.01),对照组无明显变化(P>0.05),蛋白印记及Real-time PCR结果显示,与对照组相比,TGF-β1组ColⅠ和ColⅣ表达明显上调(P<0.01);与TGF-β1组相比,HSP47siRNA组ColⅠ和ColⅣ表达明显下调(P<0.05和P<0.01);而HSP47siRNA(-)组无明显的变化(P>0.05)。结论HSP47可促进HK-2细胞ECM合成,抑制HSP47可延缓肾间质纤维化疾病进展。     

普罗布考对甲基胍诱导纤维化相关因子在HK-2细胞表达的影响

目的研究降脂药普罗布考对小分子尿毒素甲基胍诱导纤维化相关因子在人肾小管上皮细胞表达的影响。方法 HK-2细胞分3组培养,A组（正常对照,不加干预因素）;B组培养基中加入0.5mmol.L-1甲基胍;C组培养基中加入0.5mmol.L-1甲基胍和20μmol.L-1普罗布考。各组细胞培养48h后用免疫细胞化学、RT-PCR检测TGF-β1、CTGF和FN,并用流式细胞仪对以上因子作定量检测,以观察其在HK-2细胞中的表达。结果在甲基胍刺激后,细胞免疫化学染色,HK-2细胞质中着色,显示TGF-β1、CTGF和FN均有表达。正常对照组HK-2细胞质中无着色。测定结果显示甲基胍组TGF-β1、CTGF和FN显著高于正常对照组（P〈0.01）,加入普罗布考后,表达显著下降（P〈0.01）。结论甲基胍能促进纤维化相关因子在肾小管上皮细胞中表达;普罗布考能抑制甲基胍诱导纤维化相关因子在肾小管上皮细胞的表达。     

红景天苷对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞逆向分化的影响

目的：阐释红景天苷对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HKC）表型转分化的效应,探讨其对I型（colⅠ）和Ⅲ型（ColⅢ）胶原蛋白表达的影响。方法：体外培养HKC,应用不同浓度红景天苷处理经TGF-β1诱导活化的HKC细胞,显微镜观察细胞形态改变,免疫组化法检测角化蛋白-18和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达：应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测ColⅠ型和ColⅢ型胶原蛋白表达。结果：HKC细胞经过TGF-β1诱导,细胞角化蛋白．18表达明显下调,α-SMA、ColⅠ、ColⅢ型胶原表达明显上调,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。经红景天苷干预后,其表达有所下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：红景天苷可抑制TGF-β1诱导的HKC表型转分化,同时可以抑制肾小管上皮细胞外基质成分ColⅠ、ColⅢ型胶原的合成,在一定程度上具有阻止肾小管间质纤维化的作用。     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

α-酮戊二酸钠对转化生长因子β_1诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化的影响

目的探讨α-酮戊二酸钠对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化(EMT)的影响。方法 TGF-β10.5,2和5μg.L-1分别作用于葡萄糖5和30 mmol.L-1培养的HK-2细胞72 h,通过RT-PCR法检测EMT标志物E-钙黏着糖蛋白和波形蛋白mRNA表达的变化,以选择EMT病变模型的最佳诱导条件。在此基础上,观察α-酮戊二酸钠10,100和500μmol.L-1对HK-2细胞EMT病变及G蛋白偶联受体80(GPR80)mRNA表达的影响。结果①在葡萄糖5和30 mmol.L-1条件下,当TGF-β1为5μg.L-1时,与对照组比较,E-钙黏着糖蛋白mRNA的降低和波形蛋白mRNA的升高最明显(P<0.01),表明HK-2细胞发生了典型的EMT病变;②选择TGF-β15μg.L-1和葡萄糖30 mmol.L-1制备EMT病变模型,同时加入α-酮戊二酸钠100和500μmol.L-1作用72 h,与模型组比较,E-钙黏着糖蛋白mRNA明显升高,波形蛋白mRNA明显降低,GPR80 mRNA表达增加(P<0.01),表明α-酮戊二酸钠可逆转HK-2细胞EMT的发生。结论在葡萄糖5和30 mmol.L-1培养条件下,TGF-β15μg.L-1作用72 h,HK-2细胞可出现典型的EMT病变;α-酮戊二酸钠对该病变具有抑制作用。     

全反式维甲酸对HFL-Ⅰ细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、热休克蛋白47表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF-β1和ATRA分别作用3 d对HFL-Ⅰ细胞增殖能力的影响。随后分为6组:对照组、5μg·L-1 TGF-β1组、10μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1TGF-β1+0.1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+10μmol·L-1 AT-RA组,RT-PCR和Western blot方法分别检测各实验组细胞中α-SMA,Collagen-Ⅰ,HSP47 mRNA和蛋白的表达。结果①MTT法检测结果显示不同浓度的TGF-β1可刺激HFL-Ⅰ细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的ATRA对HFL-Ⅰ细胞增殖能力均有明显抑制作用,并随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。②5μg.L-1 TGF-β1诱导后,HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。③ATRA以浓度依赖性方式下调经TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mR-NA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 ATRA能够抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞的分化,其作用机制可能与降低Col-lagen-I、HSP47表达有关。     

丹酚酸B对肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的:用转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化,观察丹酚酸B(SA-B)对HK-2细胞转分化过程的干预作用并初步探讨其机制。方法:TGF-β1(5 ng.mL-1)刺激HK-2细胞,用丹酚酸B(SA-B)(10μmol.L-1)干预;用免疫荧光法检测各组HK-2细胞黏着斑激酶(FAK)、整合素β1(β1-integrin)的表达。结果:TGF-β1成功诱导HK-2转分化;相比空白对照组,SA-B可抑制HK-2转分化,且SA-B可有效降低HK-2细胞FAK及β1-integrin蛋白的表达(P均小于0.05)。结论:SA-B可有效调节人肾小管上皮细胞转分化过程,其机制可能与其能调控HK-2细胞FAK及β1-integrin蛋白的表达有关。     

曲格列酮对转化生长因子-β_1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型基因表达的影响

目的观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原Ⅰ型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用。方法将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,随后加入TGF-β15mg.L-1作用24h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,再加入TGF-β15mg.L-1作用24h,通过实时荧光定量PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原Ⅰ型mRNA和纤连蛋白mRNA表达。结果曲格列酮0.25～5μmol.L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10μmol.L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01)。与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmol.L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原Ⅰ型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10μmo.lL-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10μmol.L-1可显著下调胶原Ⅰ型mRNA表达(P<0.05)。结论曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型纤维的增加有关。     

氟伐他汀对糖基化终末产物诱导肾小管细胞转分化及ERK1/2信号通路的影响

目的观察氟伐他汀对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及ERK1/2信号通路的影响。方法将肾小管上皮细胞(HKC)分为对照组、AGEs刺激组、AGEs加氟伐他汀组和AGEs加ERK1/2阻断剂PD98059组,采用免疫细胞化学检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;Western blot检测α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadher-in)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、细胞外信号调节酶1和2(ERK1/2)及其磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和Col I蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调;AGEs刺激细胞15minp-ERK1/2表达明显增强,1h达到高峰。PD98059和氟伐他汀能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及ERK1/2的磷酸化;减少TGF-β1的含量;下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达;同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论氟伐他汀抑制AGEs诱导肾小管上皮细胞转分化和胶原I的合成可能是通过抑制ERK1/2信号通路活化实现的。     

抑瘤素M在肾小管上皮细胞转分化中作用及AG490的影响

目的探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在抑瘤素M(oncostatin M,OSM)诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为对照组、OSM(10μg.L-1)组、OSM(10μg.L-1)+AG490(10μmol.L-1)。于处理后72h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)水平。ELISA检测细胞培养上清液中FN和ColⅠ的浓度。结果 OSM能促使人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,同时促使HKC分泌FN和ColⅠ增多,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18在小管上皮细胞中的表达逐渐减少;AG490干预能减弱OSM对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导及细胞外基质FN和ColⅠ的分泌作用,同时使CK-18的表达逐渐回升。结论炎症因子OSM能诱导HKC表型转分化并促使细胞外基质的分泌,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断OSM的该作用。     

单剂量顺铂对大鼠肾间质纤维化指标的影响

目的:探讨单剂量顺铂对大鼠肾间质纤维化指标的影响。方法:将72只SD大鼠随机分为正常组和顺铂组,每组36只。正常组与顺铂组大鼠于实验第1天分别单次腹腔注射等体积生理盐水、顺铂5 mg/kg,于实验第8、14、30、50、60、90天分别处死6只大鼠,测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,检测肾小管间质损伤程度、肾小管间质纤维化相对面积和肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和转化生长因子β_1(TGF-β_1)表达情况。结果:与正常组比较,顺铂组大鼠各时间点血清BUN和Cr水平、肾小管间质损伤指数、肾小管间质纤维化相对面积和肾组织中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_1表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。在顺铂组中,在第8~90天内,大鼠血清BUN水平无明显变化,血清Cr水平、肾小管间质损伤指数、肾小管间质纤维化相对面积和肾组织中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_1表达水平均呈先升高后降低趋势。结论:临床剂量的顺铂单次给药可诱导大鼠肾间质纤维化,其机制可能与其肾组织中TGF-β_1表达有关。     

氟伐他汀对转化生长因子β_1诱导的系膜细胞结缔组织生长因子和Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨氟伐他汀对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的影响。方法选择对数生长期的MCs,分成对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1加不同浓度氟伐他汀(Flu)诱导组,采用MTT法检测MCs增殖,RT-PCR和Westernblot方法检测MCsCTGF表达,ELISA法检测ColⅣ表达。结果5μg.L-1TGF-β1能明显促进MCs的增殖及CTGF和ColⅣ的表达。Flu可呈浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导下的系膜细胞增殖和CTGF及ColⅣ的表达:1μmol.L-1Flu即能明显抑制MCs的增殖及CTGFmRNA和ColⅣ蛋白的表达,10μmol.L-1Flu即能明显抑制MCsCTGF蛋白的表达。同时,还观察到外源性CTGF呈浓度依赖性地促进MCsColⅣ的表达,2.5μg.L-1CTGF即可明显促进ColⅣ蛋白的表达。结论氟伐他汀可抑制MCs增殖和CTGF介导的ColⅣ表达。     

三七总苷对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞TGF-β_1、CTGF基因表达和蛋白分泌的影响

目的探讨三七总苷(PNS)对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达和蛋白分泌的影响,为临床上应用PNS延缓肾衰竭的进展提供理论依据。方法无菌条件下收集40份尿毒症病人血清和20例正常人血清。应用相差显微镜、扫描电镜结合细胞角蛋白18(CK-18)免疫组化鉴定人肾小管上皮细胞株(HK-2)。应用ELISA方法检测HK-2细胞培养上清液TGF-β1蛋白分泌量;W estern B lot方法检测CTGF的蛋白表达;RT-PCR方法检测TGF-β1、CTGFmRNA表达。结果10%尿毒血清组与正常对照组相比,TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量均增高(P<0.01),而PNS 400~800mg.L-1可恢复尿毒血清所诱导的TGF-β1基因表达(P<0.01),200~800 mg.L-1可恢复尿毒血清诱导的TGF-β1蛋白分泌(P<0.01);200~800 mg.L-1可恢复尿毒血清所诱导的CTGF基因表达和蛋白分泌(P<0.01)。结论在体外实验中,PNS可在一定程度上降低尿毒血清诱导的HK-2细胞TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量,减少细胞外基质聚集,从而延缓人肾小管-间质纤维化的进展,有望成为一种能有效延缓肾纤维化进展的中药。     

大黄素对 TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞上皮间质转分化及 Mfn2表达的影响

目的 探讨大黄素（EM）对转化生长因子 β1（TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）上皮间质转分化及线粒体融合蛋白 2（Mfn2）的影响。方法 采用 CCK-8法检测不同浓度 EM对 HK-2细胞增殖的影响;实验分空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+EM（10、20、40 μmol/L）组,EM干预组予以不同浓度的大黄素处理 HK-2细胞 30 min后,TGF-β1组和 EM干预组同时给予浓度为 10 μg/L的 TGF-β1刺激 48 h收集细胞,Western blot法检测 α-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、结缔组织生长因子（CTGF）及 Mfn2蛋白的表达。结果 CCK-8结果提示 0、10、20、40、80、160 μmol/L 浓度的 EM 处理组的 HK-2 细胞存活率（%）分别为 100.00±0.00、90.89±2.17、88.52±1.67、87.72±2.00、63.46±1.73、52.19±2.60 ,呈逐渐降低趋势（P＜0.01）;Western blot结果表明,与空白对照组比较,TGF-β1刺激后,HK-2细胞中 α-SMA、CTGF及 Mfn2蛋白水平升高,E-cadherin蛋白表达降低（P＜0.05）,与 TGF-β1组比较,给予不同浓度大黄素干预后,α-SMA、CTGF及 Mfn2蛋白水平降低,E-cadherin蛋白表达升高（P＜0.05）,且呈一定剂量依赖性。结论 大黄素缓解了 TGF-β1诱导的 HK-2细胞上皮间质转分化,可能通过减少 TGF-β1诱导的 Mfn2的表达来减缓肾脏纤维化。     

来氟米特抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察来氟米特对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化指标转化生长因子-β1(TGF-β1)及胶原(Col)Ⅰ、ColⅢ的表达程度的影响及相互关系,从而探讨其作用机制。方法将36只健康、雄性SD大鼠中的24只行左输尿管结扎术,另外12只行假手术。术后第2天开始给药,结扎后的大鼠分为单侧输尿管结扎(UUO)组和治疗组各12只。术后第7、14天分别处死各组中的6只大鼠,用免疫组织化学方法测定TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达情况。行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,动态观察肾间质病理学改变。结果来氟米特能显著减少UUO大鼠肾小管间质TGF-β1的表达,减轻ColⅠ和ColⅢ在肾小管间质的沉积。结论来氟米特抑制受伤的肾小管间质TGF-β1的表达,减少基质的聚集从而减轻肾间质纤维化。提示来氟米特有潜在的延缓慢性肾功能衰竭进程的作用。     

曲格列酮对转化生长因子-β1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原I型基因表达的影响

目的 观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原I型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用.方法 将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol·L-1预处理HK-2细胞2 h,随后加入TGF-β1 5 mg·L-1作用24 h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10 μmo·L-1预处理HK-2细胞2 h,再加入TGF-β1 5 mg·L-1作用24 h,通过实时荧光定量RT-PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原I型mRNA和纤连蛋白mRNA表达.结果 曲格列酮0.25～5 μmol·L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10 μmol·L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01).与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmo·L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原I型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原I型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原I型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10 μmo·L-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10 μmol·L-1可显著下调胶原I型mRNA表达(P<0.05).结论 曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原I型纤维的增加有关.     

青蒿琥酯抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及机制研究

目的研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用及其可能机制。方法制备牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组:正常对照组、模型对照组、Art组(5、15、45 mg.kg-1)、阳性对照Col组(0.1 mg.kg-1)。Masson染色观察肝组织病理变化,Jamall法测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,RT-PCR技术检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1),α-肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),用TGF-β1(5μg.L-1)刺激,与Art(终浓度6.25、25、50 mg.L-1)共培养后,检测HSC-T6中Ⅰ型前胶原(procollagenⅠ)mRNA及Ⅰ型胶原(collagenⅠ)蛋白的表达。结果与模型组相比,Art各组能减轻肝组织纤维增生的程度,降低肝组织Hyp含量,使肝组织α-SMA、TGF-β1 mRNA和HSC-T6中procollagenⅠmRNA和collagenⅠ蛋白的表达水平下降。结论 Art有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制HSC活化,降低TGF-β1 mR-NA及collagenⅠ蛋白的表达有关。     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。     

黄芪当归合剂对肾间质纤维化的多靶点抑制作用

目的动态观察复方中药黄芪当归合剂(A&A)对肾间质纤维化大鼠的抗纤维化治疗作用,了解A&A在疾病过程中的起效时间及不同阶段的主要作用环节。方法♂W istar大鼠随机分为对照(Control)、假手术(Sham)、单侧输尿管结扎(UUO)和UUO+A&A治疗组(UAA)。在给药(A&A 12 g.kg-1.d-1)后d 0、3、7、10处死动物,观察肾功能变化,对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化情况进行半定量评分。采用免疫组化、ELISA和W estern B lot分别分析肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA),转化生长因子β1(TGF-β1),纤粘连蛋白(FN)表达。结果与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾功能受损、病理损害进行性加重,肾小管间质中TGF-β1、α-SMA、FN表达均增高(P<0.01)。A&A治疗后d 3,可观察到其明显减轻UUO大鼠的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩及肾间质纤维化(P<0.05),同时可使肾组织中的TGF-β1表达减少(P<0.05),但此时并不影响α-SMA和FN表达。治疗后d 7,A&A的上述治疗作用持续存在,同时进一步使UUO大鼠肾间质的α-SMA表达减少(P<0.05)、FN表达下降(P<0.05)。治疗10 d后,UAA组肾小管萎缩和肾间质纤维化程度、TGF-β1、α-SMA、FN的表达仍较UUO组分别减轻18.95%,28.7%,39.6%,26%。结论在UUO模型中,A&A的肾保护作用从病变早期开始,主要表现为减少炎症细胞反应和TGF-β1表达分泌,随后可减少肾脏固有细胞转化、分化及细胞外基质成分沉积,其作用的高峰时间是在造模后d 3~7,并持续存在至d10,特征是通过减轻肾间质纤维化而改善肾功能。     

过表达THEM4对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响

目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell,HKC),将细胞随机分为正常对照组(5.5 mmol·L~(-1)normal glucose,Control)、高糖组(30 mmol·L~(-1)high glucose,HG)、高糖+p Yrads-4-THEM4质粒转染组(HG+THEM4)、高糖+p Yr-adshuttle-4空质粒对照组(HG+V)。后3组经高糖刺激48 h后终止培养,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser473)、TGF-β1、α-SMA的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况。结果高糖刺激可导致人肾小管上皮细胞内THEM4表达降低,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达增强及ColⅠ、ColⅢ分泌;过表达THEM4能够逆转高糖刺激所导致人肾小管上皮细胞phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达,抑制ColⅠ、ColⅢ的分泌。结论过表达THEM4能够降低高糖诱导的胶原分泌,可能是通过抑制phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现的。