厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾组织MMP-2、TIMP-2和Ⅳ-C表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及厄贝沙坦干预后的影响。方法:30只♂SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DM组)、糖尿病模型+厄贝沙坦(50mg·kg-1)组(DI组)。后2组腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠建立糖尿病模型后DI组灌胃厄贝沙坦。8周后,用免疫组化方法(SP法)和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2及Ⅳ-C的表达。结果:与NC组比较,DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白、mRNA的表达明显降低,TIMP-2及Ⅳ-C蛋白、mRNA明显增强(P<0.01),出现糖尿病肾病典型的病理改变。与DM组比较,DI组MMP-2蛋白、mRNA表达明显增强(P<0.01),TIMP-2和Ⅳ-C表达明显降低(P<0.01)。结论:厄贝沙坦可能通过调节MMP-2/TIMP-2的平衡,减少细胞外基质Ⅳ-C积聚而发挥对糖尿病大鼠的肾脏保护作用。     

姜黄素对糖尿病大鼠肾脏保护作用的机制研究

目的 探讨姜黄素对实验性糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）及其抑制物金属蛋白酶-2组织抑制物（tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2）表达的影响.方法 大鼠随机分为正常对照组（A组）、糖尿病组（B组）及姜黄素治疗组（C组）,采用腹腔单剂量注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）65 mg/kg建立糖尿病大鼠模型.治疗组给予姜黄素30 mg·kg-1·d-1腹腔注射.实验第3、6周各组分别宰杀6只大鼠,并检测24 h尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion rate,UAER）、肌酐清除率（creatinine clearance rate,Ccr）及肾重/体重.采用免疫组织化学染色法检测肾小球MMP-2、TIMP-2、纤维连接蛋白（fibronectin,FN）和Ⅳ型胶原表达.结果 治疗组大鼠UAER（P〈0.05或〈0.01）、Ccr（P〈0.05）、肾重/体重（P〈0.05）均明显低于糖尿病组大鼠.免疫组织化学染色可见糖尿病大鼠肾小球TIMP-2、 FN和Ⅳ型胶原表达均明显增加（P〈0.05或〈0.01）,治疗组上述指标的表达均受到明显抑制（P〈0.05）.MMP-2在糖尿病大鼠肾小球的表达明显被抑制（P〈0.01）,治疗组其表达明显增加（P〈0.05）.结论 姜黄素通过上调糖尿病大鼠肾小球MMP-2表达、下调TIMP-2表达,对糖尿病大鼠肾脏病变具有保护作用.     

Exendin-4对2型糖尿病大鼠肾组织MMP-9与TIMP-1表达的影响

目的观察Exendin-4对2型糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达的影响。方法建立2型糖尿病大鼠模型后,分为糖尿病组,exendin-4低、中、高剂量组。给药6周后,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肾组织中MMP-9、TIMP-1的蛋白表达。结果糖尿病组MMP-9、TIMP-1的表达较正常对照组明显增强(P<0.01);exendin-4各组较糖尿病组MMP-9、TIMP-1表达减弱(P均<0.01)。结论 Exendin-4对2型糖尿病大鼠有一定的肾脏保护作用,其机制可能部分是通过下调2型糖尿病大鼠肾组织MMP-9和TIMP-1的表达来实现的。     

祛瘀化痰、散结消癥中药复方对细胞外基质降解调控系统及TGF-β_1 mRNA的影响

目的:研究祛瘀化痰、散结消癥中药复方对肾小球硬化中细胞外基质(ECM)降解调控系统及转化生长因子(TGF)-β1 mRNA的影响。方法:采用脂多糖刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,复制细胞增殖模型,用给药动物血清干预后,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)的表达,计算MMP-9与TIMP-1比值,荧光定量PCR法检测细胞TGF-β1 mRNA表达。结果:各祛瘀化痰、散结消癥中药复方均能不同程度地抑制TIMP-1、上调MMP-9的表达,提高MMP-9与TIMP-1的比值,并下调细胞中TGF-β1 mRNA表达,其中以川芎+鳖甲+海藻组作用最明显。结论:祛瘀化痰、散结消癥中药复方能增强ECM降解,下调肾小球系膜细胞中TGF-β1 mRNA表达。     

不同ACEI类药物对糖尿病大鼠心肌间质纤维化的影响

目的通过研究卡托普利、贝那普利、福辛普利对糖尿病大鼠心肌转化生长因子β1（TGF—β1）及基质金属蛋白酶（MMPs）的影响,探讨这3种药物对糖尿病大鼠心肌的抗纤维化作用。方法50只SD大鼠分为10只正常组,40只糖尿病组,糖尿病组链脲佐菌素注射建模。建模成功后将成功的糖尿病鼠（37只,未成功2只,死亡1只）随机分糖尿病组（n=9）、卡托普利治疗组（n=9）、贝拉普利治疗组（n=9）、福辛普利治疗组（n=10）,免疫组化法测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,TGF-β1、基质金属蛋白酶特异性抑制物（TIMP—1）和MMP-1蛋白的表达。RT—PCR法测TIMP-1和MMP-1 mRNA的表达。结果糖尿病组心脏指数心室指数显著大于正常组（P〈0．05）,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达也增加（P〈0．05）,存在着心肌间质纤维化,胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、TGF—β1、TIMP-1蛋白及TIMP-1 mRNA的表达增高（P〈0．05）,MMP—1蛋白及mRNA的表达减少（P〈0．05）。经过卡托普利、福辛普利、贝那普利后,上述各异常指标均有所改善。结论3组药物通过对TGF-β1和MMPs的影响可明显改善糖尿病心肌间质纤维化。卡托普利的疗效比贝那普利与福辛普利稍差,贝那普利与福辛普利之间无差异。     

贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞外基质重塑中基质金属蛋白酶及转化生长因子表达的影响

目的研究贝那普利对糖尿病大鼠心肌基质重塑的作用机制。方法 SD大鼠ip注射链脲佐菌素制备糖尿病模型。治疗组ig给予BZ 10 mg.kg-1,连续12周。光镜及电镜下观察左心室心肌组织改变,测定心脏质量指数;Western印迹法测定左心室心肌组织胶原Ⅰ型及Ⅲ型含量,基质金属蛋白酶2(MMP-2),金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)表达及转化生子因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠心脏质量指数明显升高,胶原Ⅰ型及Ⅲ型表达明显增加(P<0.05),MMP-2表达减少、TIMP-2表达增加(P<0.01),TGF-β1和CTGF表达明显增强(P<0.05),心肌间质纤维增生。大鼠连续ig给予贝那普利12周后,心脏质量指数明显降低〔(4.13±0.18)vs(3.42±0.13)mg.g-1〕;胶原Ⅰ型及Ⅲ型表达明显减少(P<0.05),MMP-2表达增加,TIMP-2表达减少(P<0.05),TGF-β1及CTGF表达明显减弱(P<0.05),心肌间质纤维增生减轻。与正常对照组相比,贝那普利组大鼠心肌MMP-2表达减少,TIMP-2及CTGF表达仍增加。结论贝那普利可能通过抑制糖尿病大鼠心肌组织TGF-β1和CTGF表达以及增强基质金属蛋白酶表达,从而抑制糖尿病心肌间质纤维化,改善心肌细胞外基质重塑。     

2型糖尿病大鼠心肌间质胶原代谢的变化及罗格列酮的干预研究

目的观察糖尿病(DM)大鼠心肌间质胶原含量的变化及心肌组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织抑制物-1(TIMP-1)的表达变化及罗格列酮(RSG)对上述指标的影响。方法高脂高糖饮食加小剂量链尿佐菌素腹腔注射制备2型DM大鼠模型,将大鼠分为12周对照组和DM组,24周对照组、DM组和RSG组,分别检测各组大鼠心肌组织胶原含量、MMP-2,MMP-9,TIMP-1 mRNA表达变化及MMP-2,MMP-9,TIMP-1蛋白水平的变化。结果DM大鼠心肌间质胶原含量明显增加,MMP-2的表达明显减低,MMP-9,TIMP-1的表达均明显增加,但MMP-9/TIMP-1的比值下降。RSG治疗组胶原含量明显减少,MMP-2表达明显上调,MMP-9下调,TIMP-1明显下调,MMP-9/TIMP-1增加。结论MMP-2,MMP-9及其组织抑制物-1的调节失衡参与了DM心肌间质纤维化的发生与发展,RSG治疗可以通过调节基质金属蛋白酶-2、9及其组织抑制物-1的表达变化,抑制心肌纤维化,减轻心肌损伤。     

2型糖尿病大鼠心肌间质胶原代谢的变化及罗格列酮的干预研究

目的观察糖尿病(DM)大鼠心肌间质胶原含量的变化及心肌组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织抑制物-1(TIMP-1)的表达变化及罗格列酮(RSG)对上述指标的影响。方法高脂高糖饮食加小剂量链尿佐菌素腹腔注射制备2型DM大鼠模型,将大鼠分为12周对照组和DM组,24周对照组、DM组和RSG组,分别检测各组大鼠心肌组织胶原含量、MMP-2,MMP-9,TIMP-1 mRNA表达变化及MMP-2,MMP-9,TIMP-1蛋白水平的变化。结果DM大鼠心肌间质胶原含量明显增加,MMP-2的表达明显减低,MMP-9,TIMP-1的表达均明显增加,但MMP-9/TIMP-1的比值下降。RSG治疗组胶原含量明显减少,MMP-2表达明显上调,MMP-9下调,TIMP-1明显下调,MMP-9/TIMP-1增加。结论MMP-2,MMP-9及其组织抑制物-1的调节失衡参与了DM心肌间质纤维化的发生与发展,RSG治疗可以通过调节基质金属蛋白酶-2、9及其组织抑制物-1的表达变化,抑制心肌纤维化,减轻心肌损伤。     

虎杖苷对肾纤维化模型大鼠肾组织中MMP-9和TIMP-1蛋白表达的影响

目的:考察虎杖苷对肾纤维化模型大鼠肾组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)蛋白表达的影响,探讨其延缓大鼠肾纤维化的作用机制。方法:将40只大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、虎杖苷组(100 mg/kg)和贝那普利组(阳性对照,5 mg/kg)。除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管梗阻法制备肾纤维化大鼠模型。术后1 h,各组大鼠灌胃相应药物,每天给药1次。连续给药4周后,检测各组大鼠尿液中β_2微球蛋白(β_2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量和血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量;苏木素-伊红染色观察大鼠肾组织病理改变,并进行评分;免疫组织化学法检测大鼠肾组织中MMP-9和TIMP-1蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠尿液中β_2-MG、NAG含量和血清中BUN、Cr含量均显著升高(P<0.05),并且大鼠肾组织的病理评分和组织中MMP-9、TIMP-1蛋白的表达水平也显著升高(P<0.01)。与模型组比较,虎杖苷组和贝那普利组大鼠肾组织中MMP-9蛋白表达水平持续增高(P<0.01),其余各指标水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);且虎杖苷组与贝那普利组比较大鼠各指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:虎杖苷延缓大鼠肾纤维化进程的机制可能与上调大鼠肾组织中MMP-9蛋白表达和下调TIMP-1蛋白表达,升高MMP-9/TIMP-1的比值有关。     

MMP-2和TIMP-2在胃癌组织中的表达特点及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)在胃癌组织中的表达特点及临床意义.方法:选取完整的胃癌术后病例63例,采用S-P免疫组织化学方法,检测63例胃癌组织MMP-2、TIMP-2 的表达.结果:胃癌组织的MMP-2、TIMP-2的阳性表达率分别为52.4%(33/63)和54%(34/63).MMP-2的表达强度随着分化程度的升高而降低(P<0.05);TIMP-2 的表达强度随着的分化程度升高而升高(P<0.05),随着淋巴结转移的出现而下降(P<0.05).胃癌组织MMP-2、TIMP-2的表达呈明显负相关(P<0.05 ),MMP-2、TIMP-2 的表达与侵犯层次无相关性(P＞0.05).结论:MMP-2、TIMP-2是胃癌浸润转移的正/负调控因子,MMP-2、TIMP-2可做为判断胃癌恶性行为的重要生物学指标.     

葛根素对巨噬细胞基质金属蛋白酶9及其组织抑制物1表达的影响

目的 观察葛根素对巨噬细胞分泌和表达基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其组织抑制因子1(TIMP-1)的影响.方法 将人单核细胞系THP-1来源的巨噬细胞与不同浓度的葛根素进行培养,采用RT-PCR和ELISA方法 分别检测巨噬细胞的MMP-9、TIMP-1的基凶和蛋白质表达.结果 葛根素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1细胞MMP-9 mRNA及其蛋白质表达作用呈浓度依赖性地减少MMP-9 mRNA及其蛋白的表达,但对TIMP-1的表达无影响.结论 葛根素可以通过调节巨噬细胞分泌MMP-9途径发挥稳定动脉粥样硬化斑块的作用.     

2型糖尿病大鼠肺组织基质金属蛋白酶－2、9及其抑制因子－1的表达变化

目的通过检测2型糖尿病大鼠肺组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶－9（MMP-9）及基质金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP—1）的表达变化,探讨MMP－2、MMP－9及TIMP－1在糖尿病肺损伤中的作用。方法通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）的方法,建立2型糖尿病大鼠模型,采用光镜动态观察12周、24周时对照组、糖尿病组的大鼠肺组织的形态学改变,用MassoN三色染色观察肺组织胶原沉积情况,应用免疫组织化学方法检测2组大鼠肺组织MMP－2、MMP－9及TIMP－1的动态表达变化情况。结果糖尿病大鼠肺组织胶原含量明显增多,糖尿病大鼠肺组织MMP－2、MMP－9、TIMP－1表达增多,同时MMP－2／TIMP－1、MMP-9／TIMP－1比例也增加。随病情进展,上述变化更加明显。结论糖尿病大鼠出现了肺间质纤维化,MMP-2、9及TIMP－1表达增多及其比例紊乱参与了糖尿病肺组织病变的发生发展,可能是糖尿病肺纤维化发生的机制之一。     

基质金属蛋白酶-9与糖尿病肾病的相关性

目的观察大鼠糖尿病肾病(DN)发展过程中肾脏局部基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变,分析其与DN的相关性。方法对16只链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型分别于造模后第4、8周通过免疫组织化学染色法观察肾脏局部MMP-9的表达,以MMP-9平均积分吸光度(IDP)为观察指标。结果正常对照组第4、8周大鼠肾脏MMP-9表达(IDP分别为15.6±73.4,16.2±3.1)呈强阳性;实验组第4、8周大鼠肾脏MMP-9的表达(IDP分别为8.2±0.9,3.9±0.6)呈递减(P<0.01)。结论MMP-9表达减少是DN早期病理改变的重要原因之一。     

葛根素对糖尿病大鼠心肌糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的探讨葛根素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠心肌糖化终产物受体(RAGE)mRNA逆转录水平的影响。方法雄性SD大鼠30只,随机分为三组:正常对照组(C组),糖尿病组(D组),糖尿病葛根素治疗组(DP组),用STZ一次性腹腔注射建立糖尿病模型后,DP组每天给予葛根素腹腔注射100mg/(kg·d),C组、D组每天给予同等剂量的生理盐水腹腔注射。每隔2周称体质量、测量血糖一次。8周后麻醉取下腔静脉血测定血清心肌酶(CK-MB),并取心肌组织行半定量RT-PCR检测RAGE mRNA表达水平的变化。结果成模8周时糖尿病大鼠与正常组相比体质量、血糖差异有统计学意义(P<0.01),DP组与D组间的血糖差异有统计学意义(P<0.05),体质量差异无统计学意义(P>0.05);DP组、D组和C组各组间RAGE表达差异有统计学意义(P<0.01);DP组与D组相比血清CK-MB下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病大鼠心肌RAGE mRNA表达明显高于正常对照组。葛根素能下调糖尿病大鼠心肌RAGE在mRNA水平的表达,降低糖尿病大鼠CK-MB水平,减轻对心肌细胞的损害,对心脏具有保护作用。     

葛根素对糖尿病大鼠血脂和主动脉基膜粘连蛋白B1 mRNA表达的影响

目的：观察葛根素对糖尿病大鼠血脂和主动脉基膜粘连蛋白B1 mRNA表达的影响.方法：利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型, 将实验用SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病组、葛根素治疗组.治疗12周,观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖（BS）、甘油三脂（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、糖化血红蛋白（HbA1c）、糖化低密度脂蛋白（G-LDL）;分离主动脉,HE染色及原位杂交检测主动脉内膜基膜粘连蛋白B1 mRNA表达.结果：造模2组大鼠均出现血脂异常及主动脉病理形态改变;葛根素能改善基本状况,降低糖尿病大鼠的甘油三脂、胆固醇、低密度脂蛋白、糖化血红蛋白和糖化低密度脂蛋白（P＜0.05）;升高高密度脂蛋白（P＜0.05）;降低主动脉基膜粘连蛋白B1 mRNA表达（P＜0.05）.结论：葛根素具有确切的主动脉保护作用.     

葛根素对实验性糖尿病大鼠主动脉Ⅳ型胶原基因表达的抑制作用

目的观察葛根素对实验性糖尿病大鼠主动脉Ⅳ型胶原基因表达的抑制作用。方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型,将实验用SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、葛根素3个剂量(20、40、80 mg.kg-1,ip)治疗组。治疗16周,观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况及血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)的变化情况;用苏木精-伊红染色、原位杂交法检测主动脉内膜Ⅳ型胶原基因表达情况。结果造模4组大鼠均出现主动脉病理形态改变;葛根素能改善糖尿病模型大鼠的基本状况(体质量、精神状态等),降低糖化血红蛋白含量(P<0.05),降低主动脉Ⅳ型胶原基因(P<0.05)表达,且呈一定的剂量依赖关系。结论葛根素可通过抑制主动脉基因表达对糖尿病模型大鼠主动脉起到保护作用。     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶2表达的影响

目的 观察银杏叶提取物(GbE)对雄性SD糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶2(MMP-2)和Ⅳ型胶原表达的影响,从而探讨银杏叶对糖尿病肾病的保护机制.方法 24只链脲佐菌素诱导的SD大鼠完全随机分成糖尿病对照组(DM组)和GbE组,并以12只正常雄性SD大鼠作为正常对照组(NC组).分别于4、8周后,观察各组大鼠体重、肾重、随机血糖、尿蛋白排泄率等生化指标,并用免疫组化和逆转录聚合酶链反应方法 观察糖尿病大鼠肾脏MMP-2及Ⅳ型胶原的表达.结果 糖尿病大鼠的随机血糖、体重、肾脏/体重明显下降,尿白蛋白排泄率明显升高[DM组(31.59±4.59)mg/24 h比NC组(8.74±2.08)mg/24 h,P＜0.05],GbE组糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率[(21.38±3.86)mg/24 h]较DM组有所下降(P＜0.05).8周时,与正常对照组相比,DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白的表达水平明显下降[(0.49±0.07)mg/24 h比(0.15±0.04)mg/24 h,P＜0.05],而GbE组DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白的表达水平[(0.48±0.07)mg/24 h]较DM组无明显下降(P＞0.05);DM组大鼠Ⅳ型胶原的表达水平较NC组明显升高[(3.48±0.54)mg/24h比(1.68±0.51)mg/24 h],而GbE组糖尿病大鼠较NC组无明显升高[(2.55±0.50)mg/24 h比(1.68±0.51)mg/24 h].结论 GbE可通过抑制糖尿病大鼠MMP-2过表达,进而对糖尿病肾病发挥保护作用.

Abstract：

Objective To study the effect of ginkgo biloba extract (GbE) on the expression of matrix metalloproteinase (MMP)-2 in kidneys of diabetic rates and to analyze the protecting mechanism of GbE on diabetic nephropathy. Methods Totally 24 SD rats of diabetic nephropathy induced by streptozotocin were randomly divided into two groups: diabetes group and treatment group with GbE, and 12 rats with placebo therapy were enrolled as the normal control group. Rats were killed after 4 ～ 8 weeks treatment and the expression of MMP-2 and type Ⅳ collagen were studies by immunohistochemistry and RT-PCR. Results In diabetic rats, blood sugar, weight and kidney/body weight ratio were decreased significantly and the excretion of 24 hour urinary protein was increased significantly compared to the diabetes group. But the excretion of 24 hour urinary protein was improved in GbE group ( P ＜0.05 ). The expression level of MMP-2 protein and mRNA was decreased significantly in renal glomduri of diabetic rats ( P ＜ 0.05 ) but showed no changes in GbE treatment group compared to diabetes group( P ＞ 0.05 ). The expression level of type Ⅳ collagen was significantly increased in diabetic rats( P ＜0.05 ) but showed no changes in GbE group( P ＞0.05). Conclusion GbE can improve diabetic nephropathy by inhibiting the expression of MMP-2 in diabetic Rat.