酿酒酵母细胞四种转化方法的比较

1978年 ,Hinnen等和 Begges首先报道了酵母原生质体转化方法 [1 ,2 ] .该方法的优点是转化效率较高 ,但此方法容易形成多倍体细胞 ,且细胞再生困难 .后有人在此基础上进行改进[3] ,虽提高了转化效率 ,减少了多倍体细胞的形成 ,但菌落再生时间较长 ( 4～ 6d) .Ito等提出了不完全破坏细胞膜的完整酵母细胞的转化方法 ,并对多种金属离子对转化效率的影响进行研究 [4] .进入 90年代后 ,人们在 Li Ac的加入量、热冲击时间、PEG4 0 0 0的浓度等方面进行了改进 [5～ 7] .本文选取了四种不同的转化方法进行比较 ,以期找到最佳的转化方法 .1　材…     

一种高效的酿酒酵母和毕赤酵母电击转化法

 电击转化由于其高效率而被广泛地应用于酿酒酵母的转化过程中。但是由于菌种退化或是暴露于污染的环境,很多菌种的转化效率会显著地下降2~4个数量级。探索了一种改进的电击转化方法,它借助于单链载体DNA和转化后在YPD培养基中的复苏过程,可以使转化效率比之前曾报道过的已经最优化的用醋酸锂和二硫苏糖醇进行预处理的转化方法效率提高13倍。在毕赤酵母中使用这一改进的方法,可以使转化效率提高高达114倍,在一些已经退化的酿酒酵母菌株中,此方法也可以提高转化效率将近100倍。这一方法将为几乎所有酿酒酵母和毕赤酵母的分子操作提供极大的便利。     

转基因玉米遗传转化的研究进展

转基因玉米是目前植物基因工程的研究热点之一,已有转基因抗虫玉米、抗除草剂玉米进入商品化生产。通过对转基因玉米遗传转化方法的研究,概括了目前在转基因玉米的遗传转化中所用的各种方法、及其优缺点,以及已取得的成果和遗传转化的检测分析方法的研究进展。     

抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究

抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究＠李天然,张剑峰,李旭刚￥内蒙古大学生物学系甜菜,抗冷冻蛋白（ＡＦＰ）基因,遗传转化,根癌农杆菌,ＰＣＲ扩增抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究李天然,张剑峰,李旭刚（内蒙古大学生物学系,０１００２１,呼和浩特）ＳｔｕｄｙｏｎＴｒａｎ...     

如何实现高中英语教学后进生转化

高中英语教学过程中，后进生存在是一个普遍现象，实现后进生的转化，教师任重而道远，教师需要提高认识，正视后进生转化工作的重要性。分析后进生产生的原因，寻求对策，教师从而转变思路和改进实践等方面努力实现后进生转化。     

短小芽孢杆菌质粒pCJ转化枯草杆菌的研究

本文采用我国自己分离的短小芽孢杆菌抗四环素质粒pCJ3转化枯草杆菌的各种突变体.质粒DNA经氯化铯—溴化乙锭密度梯度离心纯化后转化枯草杆菌的感受态细胞.结果表明枯草杆菌BR151,SB202,168,QB1130及QB1133都可作为质粒pCJ3的受体,转化效率在10~3左右,其中以SB202这株突变体为最高,从各种转化体中提取的质粒及经BamHI消化后的质粒的电泳图均与原质粒pCJ3及其BamHI酶切片段相同,并具有pCJ3的抗四环素转化活性.将pCJ3DNA经BamHI酶切后重新用T_4-DNA连接酶连接再转化枯草杆菌细胞,其转化效率比原质粒高1—2个数量级.研究了二价金属离子、pH及培养基成分对转化的影响,结果证明:Ca~(++)对枯草杆菌转化有促进作用,Cu~(++),Zn~(++)则有抑制作用,转化的最适pH在7.2—7.5之间;营养丰富培养能提高转化效率.     

美国高校科技成果转化的成功经验及其启示

对美国高校科技成果转化过程中政府立法、设立专门机构、服务社会的办学理念、校企合作、风险投资等方面的成功经验进行了分析,在此基础之上,提出加快立法支持、转变大学办学理念与改进科技成果转化政策、建立或重建高校科技推广的机构、明确知识产权归属、增加科技成果转化资金投入等政策建议。     

拟南芥转录因子CBF1基因杂交狼尾草的转化

CBF1转录激活因子是一类存在于拟南芥中受低温诱导的反式作用因子,能有效提高植物抗低温、抗干旱的能力.因此以拟南芥叶片为材料,通过PCR方法成功地克隆CBF1转录因子基因,并将其连接到植物表达载体pBI121上,通过农杆菌介导法转化杂交狼尾草叶片,成功获得转基因再生植株.     

游荡型河流转化控制因素的二维数值模拟

改进已有平面二维水沙模型,进一步考虑弯道二次流及河床结构对泥沙输运的影响以及河岸植被影响;并提出新的非黏性土崩岸模拟方法,使其能模拟边滩的形成.利用改进后模型模拟游荡小河的形成,并在此基础上通过模拟流量、边岸植被、来沙量等控制因素变化后游荡小河的平面形态发展过程;分析讨论其对游荡河型转化的影响,并将结论与现有河型转化理论对比,说明改进后的数值模型能反映游荡河流的形成与转化,为深入研究其转化及成因机理提供新的技术手段.     

不同运动方式对Ⅱ型糖尿病患者转化生长因子β1释放的影响

目的：检验抗阻结合有氧运动对II型糖尿病患者促抗炎症细胞因子和转化生长因子的影响。方法：10名糖尿病患者,年龄55．5±5岁,参与监督下的系统性运动训练计划,包括有氧运动和抗阻训练,每周4天,共8周。结果：训练增加转化生长因子-β1浓度（＋50．4％）和降低高敏感C-反应蛋白（Hs-CRP）水平（-24．1％）,但没有改变白介素-6、白介素-10、干扰素-1和肿瘤坏死因子-α的水平。另外,还改善人体测量特征、糖化血红蛋白（HbAlc：-11．8％）,稳态模型评估胰岛素抵抗指数（HOMA-IR：-15％）和体质参数（上肢力量：＋32．4％;下肢力量：＋48．9％）。结论：抗阻训练结合有氧运动有潜在的抗动脉粥样硬化和抗炎效应,最大可能降低心血管疾病的危险,改善Ⅱ型糖尿病患者健康状态。     

感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响

通过研究转化实验中加入质粒DNA的量、大肠埃希菌感受态细胞制备和质粒转化过程中冰置时间长短对感受态细胞最终转化效率的影响,分析其最佳转化效率参数,优化感受态制备和转化方法.结果表明,加入质粒（pBR322）DNA量为1～10ng,感受态制备过程中菌液冰浴时间在30～60min,以及感受态细胞加入质粒DNA并混匀后的冰置...     

Expression in Escherichia coli of hepatitis B virus DNA sequences cloned in plasmid pBR322.

Fragments of hepatitis B virus DNA isolated from Dane particles have been inserted into the Escherichia coli plasmid pBR322 and cloned. Cells carrying the hybrid plasmid synthesise antigenic material that reacts specifically with antisera to hepatitis B viral antigens.     

氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125的构建及其在大肠杆菌之间的转移

对氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxidans)隐蔽性质粒pTt12进行了限制性酶切分析,并绘出了限制性酶切图谱,其大小为13.7Kb.将pTt12质粒与pBR325质粒重组,得到了重组质粒pSDT125(Cm',Ap',Tc~s).氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125本身不具有接合转移能力,但它在广泛寄主范围的转移性质粒RP4的带动下以较高的频率在大肠杆菌(Escherichia coli)之间转移,表明在氧化硫硫杆菌质粒pTt12上存在着与接合转移有关的DNA序列.     

聚乙烯基吡咯烷酮对质粒DNA降解效应的研究

为评估聚乙烯基吡咯烷酮（Polyvinylpyrrolidone,PVP）的生物可利用性,研究了不同相对分子质量PVP对闭合环状双链质粒DNA pBR322的降解效应.实验结果表明：在常温、非光催化条件下,相对分子质量小的PVP（PVP8000）可引起质粒DNA构象的改变,并且这种效应与反应温度、反应时间及PVP的相对...     

Study on the binding mode of Mg（Sal2trien） with DNA

Polyamide could not only combine with DNA out- side but also inhibit expressing of gene[1]. At the same time, polyamide could coordinate many molecules. Ren et al.[2] found that [MgⅡ(dien)(OH)] can cleave pBR322DNA effectively in 2004. Liu et al.[3,4] f…     

酵母人工染色体DNA的大尺度物理图谱分析

以不同ＰＢＲ３２２质粒ＤＮＡ片段作为ＹＡＣＤＮＡ左右臂探针，使用稀切点限制性内切酶和脉冲电泳技术对含有２ｂＡ３的８００ｋｂ ＹＡＣ作了４种限制酶大尺度物理图谱分析。     

钌(Ⅱ)配合物合成、表征与DNA 相互作用及其抗氧化性研究

 设计合成一个新的钌(Ⅱ)多吡啶配合物［Ru(dip)₂(DBHIP)］(ClO₄)₂ {dip = 4,7-二苯基-1,10-邻菲咯啉;DBHIP = 2-(3,5-二溴-4-羟基苯)并咪唑［4,4-f］-(1,10-邻菲啰啉)},采用元素分析,质谱和1H NMR对其进行表征。用电子吸收光谱、黏度测试、Job plot荧光滴定法研究配合物与CT DNA作用,结果表明配合物以经典的插入模式与DNA键合。采用琼脂糖凝胶电泳实验研究配合物诱导pBR322DNA断裂。同时也研究配合物在高浓度情况下使pGL3 DNA缩合。     

质粒pBR322DNA与内切酶EcoRI相互作用的研究

借助原子力显微镜(AFM)对DNA与内切酶的切割与结合作用进行研究.当缓冲液中有Mg2+存在时,内切酶EcoRI会在单一识别位点处切割pBR322DNA,如果缓冲液中的Mg2+用Ca2+代替,内切酶EcoRI则会与pBR322DNA在单一识别位点处结合,并且切割率与结合率都随着内切酶浓度的增加而增加.     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｕｓｖｅｒｓｕｔｕｓ）ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上,通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证．并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）中的表达情况进行了酶活性的测定,该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下,表达活性比ｌａｃ启动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高．