β—淀粉样蛋白与Alzheimer病

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）是以进行性痴呆为主要临床表现的中枢神经系统最常见的变性病。其病理特征为：（１）老年斑（ＳＰ）,散在于病变部位,由退变的神经轴突围绕β－淀粉样蛋白（β－ＡＰ）组成。（２）神经原纤维缠结（ＮＦＴ）,存在于病变部位的神经元胞浆内...     

阿尔茨海默病患者血小板淀粉样前体蛋白代谢的改变

目的 通过观察血小板活化后β淀粉样蛋白(Aβ)水平变化,探讨阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)患者血小板β-淀粉样前体蛋白(APP)代谢特点.方法 分离36例AD患者和30名健康对照的血小板,用免疫印迹检测凝血酶作用后的可溶性APP水平;同时用放射免疫法测定Aβ含量.结果 凝血酶作用后,血小板上清中可以检测到可溶性APP和Aβ.活化后AD患者血小板上清中可溶性APP水平较对照组水平下降31.0%(P＜0.05).凝血酶活化后,AD组血小板上清Aβ水平从(3.1±2.7)ng/L增加至(5.8±3.2)ng/L(P＜0.01),对照组Aβ水平由(6.1±4.4)ng/L增加为(11.5±5.9)ng/L(P＜0.01).AD组Aβ平均增加(2.8±2.1)ng/L,低于对照组增加水平(5.5±3.6)ng/L(P＜0.01).结论 血小板中含有APP的代谢产物可溶性APP和Aβ.AD血小板可能存在APP代谢异常.     

Alzheimer病皮肤组织β—淀粉样蛋白免疫组化研究

本文对皮肤β-AP蛋白进行光镜免疫组比研究。AD组8例;MID组8例;NDC组24例。结果显示:所有病例的皮肤角质层和毛囊以及部分汗腺、皮脂腺和血管有阳性免疫反应。3组间比较在角质层、毛囊、汗腺及皮脂腺阳性着色反应无显著差异,而皮肤血管阳性反应呈现AD>MID>NDC趋势,提示β-AP在皮肤血管的阳性免疫反应可能对AD诊断有意义。     

Alzheimer病患者淀粉样前体蛋白基因16、17外显子突变的研究

目的 探讨淀粉样β-蛋白(β/A_4)基因突变与Alzheimer病(AD)的关系。方法 运用限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP),检测分析20例散发性AD患者和8例正常老年人的淀粉样前体蛋白(APP)基因16、17外显子的多态性。结果 AD患者和正常对照的β/A_4基因均未发现C→T突变及其它异常SSCP泳动变位。结论 APP基因β/A_4编码区突变不是一突变“热点”,在AD不具有普遍意义。     

Alzheimer病与老年脑中β-淀粉样蛋白免疫组化的研究

目的探讨β－淀粉样蛋白（β－ＡＰ）与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）、脑老化之间的关系。方法采用免疫组化方法检查经过临床与病理确诊的３例ＡＤ与６例非痴呆老年对照（ＮＡＤ）脑组织广泛部位中β－ＡＰ的沉积，并且与淀粉样蛋白组化染色的方法如刚果红、爱先蓝（ＳＡＢ）染色相对比。结果发现１ＡＤ脑组织中β－ＡＰ的沉积较ＮＡＤ不仅部位广泛，而且程度严重。２β－ＡＰ的免疫组化染色方法较淀粉样蛋白组化染色方法敏感而可靠。结论β－ＡＰ在脑中的沉积可能与神经元的变性以致智能衰退、ＡＤ的发生有关。β－ＡＰ的免疫组化检测可作为ＡＤ组织学诊断的重要参考。     

家族性Alzheimer病淀粉样蛋白前体基因第16、17外显子的突变分析

目的:了解中国家族性Alzheimer病(familial Alzheimer disease,FAD)患者中21号染色体上淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP)基因第16、17外显子的突变情况。方法:应用限制性片段长度多态性(restrictionfragment length polymorphism,RFLP)、聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand con-formation polymorphsim,PCR-SSCP)及DNA直接测序技术,对两个FAD家系以及20例正常对照组进行了APP基因第16、17外显子检测。结果:全部家系成员及正常对照组经RFLP分析均存在EcoR Ⅰ酶切位点、BclⅠ消化后无Bcl Ⅰ多态性。经PCR-SSCP分析均未见异常泳动带。两个家系的全部成员及正常对照组经DNA序列分析也未见APP基因的缺失、插入和置换。结论:本研究中的两个家系中未发现APP基因第16、17外显子的突变,证实了APP基因突变所引起的FAD并不多见。     

降低细胞胆固醇水平对β-淀粉样肽生成的影响

目的观察降低细胞胆固醇水平对β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)生成的影响,初步探讨胆固醇和阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的相关性。方法以稳定表达人野生型淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为模型,分别给予β-甲基环糊精或洛伐他汀对细胞系进行处理;胆固醇定量试剂盒测定细胞内胆固醇水平的变化,放射免疫法测定细胞培养液中Aβ的含量,Western Blot方法半定量检测全长型APP和可溶性APPα的水平。结果β-甲基环糊精和洛伐他汀处理组分别降低细胞胆固醇水平67.5%和49.5%(P<0.05),细胞培养液中Aβ含量分别降低39.5%和25.7%(P<0.05),sAPPα含量分别增加3.5倍和2.0倍(P<0.05)。结论降低细胞胆固醇水平使细胞外Aβ含量减少,sAPPα含量增加,这提示胆固醇可能通过影响APP代谢途径而参与AD的病理过程。     

线粒体相关性β淀粉样前体蛋白及线粒体相关性β淀粉样蛋白针对阿尔茨海默病致病机制的研究

线粒体相关性β淀粉样前体蛋白(APP)和线粒体相关性β淀粉样蛋白(Aβ)正逐渐成为研究阿尔茨海默病(AD)病理生理学改变的热点。线粒体相关性APP和线粒体相关性Aβ是指以线粒体为特异性靶点,存在于线粒体膜上或沉积于线粒体基质内的APP和Aβ。文中将分别介绍线粒体相关性APP和线粒体相关性Aβ的来源、结构、功能等方面的研究进展,揭示其与AD发病的密切关系。     

多光子激光扫描成像技术对活细胞内淀粉样前体蛋白裂解和β-淀粉样蛋白生成的观察

目的在活细胞内探究淀粉样前体蛋白（amyloidprecursorprotein,APP）的裂解和β-淀粉样蛋白（amyloidbeta,AB）的生成机制。方法利用PCR扩增CFP（编码蓝色荧光蛋白）,YFP（编码黄色荧光蛋白）和C99（编码APP最后99个氨基酸）三片段。含有54个碱基（编码APP中间18个氨基酸）的片段54bp由生物公司合成。CFP,YFP,54bp和C99四个片段连入载体质粒pcDNA3．0得到重组质粒pcDNA3．0-CFP-54bp-YFP和pcDNA3．0-CFP-54bp-YFP-C99。将这两个重组质粒分别瞬时转染SH-SY5Y细胞。利用多光子激光扫描显微镜观察融合基因的表达,荧光共振能量转移（fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET）检测APP的B裂解。免疫细胞化学和多光子激光扫描显微镜观察AB的生成。MTT检测转染细胞活性。结果（1）限制性内切酶双酶切消化和测序分析鉴定重组质粒序列完全正确。（2）转染细胞内可以观察到蓝色和黄色荧光。（3）在pcDNA3．0-CFP-54bp-YFP转染细胞中存在FRET现象;在pcDNA3．0-CFP-54bp-YFP-C99转染细胞中观察不到FRET现象。（4）免疫细胞化学和多光子激光扫描显微镜观察到在pcDNA3．0-CFP．54bp-YFP—C99转染的细胞中有AD的生成。（5）AD的沉积广泛分布于细胞内。（6）随着AB在细胞内的产生和聚集,细胞的活性逐步下降。结论C99对于APP的β裂解非常重要。早期Aβ首先在细胞内生成并在细胞内形成广泛沉积。细胞内聚集的Aβ会影响细胞活性,带来不利结果。     

β-淀粉样蛋白前体蛋白胞内结构域(AICD)与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病的（Alzheimer＇s disease,AD）一个重要的病理学特征之一是脑内出现β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）组成的淀粉样斑。β-淀粉样蛋白前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）经β-分泌酶和γ-分泌酶依次水解后产生Aβ和APP胞内结构域（APPintracellular do-main,AICD）。现在已经知道Aβ在AD的发病机制中起着关键作用,但是关于AICD的生理及病理功能还不清楚。近年来研究发现AICD可以与细胞内多种蛋白相互作用,而且AICD在基因转录、细胞凋亡,突触可塑性,神经发生以及APP的加工和运输过程中均有调节功能。本文针对AICD的生理及病理功能进行探讨。     

人淀粉样前体蛋白基因与绿色荧光蛋白融合基因筛选系统的建立

目的 构建携带人淀粉样前体蛋白（APP）的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）载体。以利于初步筛选对APP mRNA水平作用的药物。方法 将pEGFP质粒和携带野生型APP695亚型的pXCJL经Hind Ⅲ酶切，连接．PCR初筛，酶切鉴定。进一步经测序证实。携带野生型人类APP751亚型cDNA的pCDNA3．1质粒用XbaⅠ酶切．Klenow酶填平．再用HindⅢ酶切．回收APP751片段；质粒EGFP用SmaⅠ和Hind Ⅲ酶切。将目的基因APP751片段与EGFP载体片段连接生成重组质粒．酶切鉴定．测序证实。构建好的重组质粒转染COS-7细胞．观察EGFP的表达情况。结果 APP695和APP751重组质粒上的EGFP在COS-7细胞内得以表达。结论 构建的APP—EGFP融合基因重组质粒．有助于方便、快速地初筛出作用于APP mRNA水平的药物。     

多光子激光扫描成像技术对活细胞内淀粉样前体蛋白裂解和β-淀粉样蛋白生成的观察(英文)

目的在活细胞内探究淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的裂解和p一淀粉样蛋白(amyloid beta,Aβ)的生成机制。方法利用PCR扩增CFP(编码蓝色荧光蛋白),YFP(编码黄色荧光蛋白)和C99(编码APP最后99个氨基酸)三片段。含有54个碱基(编码APP中间18个氨基酸)的片段54bp由生物公司合成。CFP,YFP,54bp和C99四个片段连入载体质粒pcDNA3.0得到重组质粒pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP和pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP- C99。将这两个重组质粒分别瞬时转染SH-SY5Y细胞。利用多光子激光扫描显微镜观察融合基因的表达,荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测APP的β裂解。免疫细胞化学和多光了激光扫描显微镜观察Aβ的生成。MTT检测转染细胞活性。结果(1)限制性内切酶双酶切消化和测序分析鉴定重组质粒序列完全正确。(2)转染细胞内可以观察剑蓝色平和黄色荧光。(3)在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP转染细胞中存在FRET现象;在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染细胞中观察不到FRET现象。(4)免疫细胞化学和多光子激光扫描显微镜观察到在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染的细胞中有Aβ的牛成。(5)Aβ的沉积广泛分布于细胞内。(6)随着Aβ在细胞内的产生和聚集,细胞的活性逐步下降。结论C99对于APP的β裂解非常重要。早期Aβ首先在细胞内生成并在细胞内形成广泛沉秋。细咆内聚集的Aβ会影响细胞活性,带来不利结果。     

β淀粉样蛋白及其前体在脑缺血性损伤中的机制研究进展

传统观念认为β淀粉样蛋白是阿尔茨海默病的主要致病物质，具有神经毒性，启动了阿尔茨海默病的病理过程。而近年来研究发现，它同时参与了脑缺血性损伤的过程。本文综述了β淀粉样蛋白在脑缺血性损伤中的机制。     

β-淀粉样蛋白前体降解产物对阿尔茨海默病致病作用的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是以进行性记忆力减退和认知功能障碍为主要特征的老年期常见神经系统变性疾病.其特征性病理变化之一表现为细胞外以β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积为核心的神经炎性斑[NPs,又称老年斑(SPs)]形成.     

尼古丁对Aβ25～35细胞毒性的拮抗作用及与β-淀粉样前体蛋白代谢的关系

目的研究尼古丁对β-淀粉样蛋白（Aβ）细胞毒性的拮抗作用及与β-淀粉样前体蛋白（APP）代谢之间的关系。方法不同浓度的尼古丁分别单独或与Aβ25～35同时作用于PC12细胞24h,然后采用MTT法检测细胞活力;WesternBlot法检测PC12细胞上清液中的可溶性β-淀粉样前体蛋白α片段（sAPPα）和细胞内胰岛素降解酶的表达水平。结果（1）尼古丁浓度于0.10～500μmol/L时,对PC12细胞无明显毒性作用（均P〉0.05）,当浓度升至1000μmol/L时则产生一定的毒性作用（P≤0.05）;Aβ25～35浓度于1～100μmol/L时对PC12细胞具有明显毒性作用（均P≤0.01）,Aβ25～35浓度降至0.10μmol/L时则失去其毒性作用（P〉0.05）。（2）尼古丁浓度于0.10～1000μmol/L时,对Aβ25～35诱导的细胞毒性呈现不同的作用：尼古丁浓度于0.10～100μmol/L时可部分拮抗Aβ25～35诱导的细胞毒性作用（均P〈0.01）,但不能使PC12细胞活力恢复至正常细胞水平（均P〈0.01）;而当尼古丁浓度于500μmol/L和1000μmol/L时则不产生拮抗Aβ25～35诱导的细胞毒性作用（均P〉0.05）。（3）Aβ25～35（20μmol/L）和尼古丁（100μmol/L,1000μmol/L）单独或联合作用均可引起PC12细胞可溶性β-淀粉样前体蛋白α片段分泌水平升高（均P〈0.01）,其中以尼古丁浓度为100μmol/L时可溶性β-淀粉样前体蛋白α片段的分泌水平最高。（4）浓度为20μmol/L的Aβ25～35可导致胰岛素降解酶表达水平降低（P〈0.01）,而浓度为100μmol/L的尼古丁可明显拮抗这种作用（P〈0.01）,1000μmol/L的尼古丁则无明显拮抗作用（P〉0.05）;将浓度为100μmol/L和1000μmol/L的尼古丁分别单独作用于PC12细胞时,胰岛素降解酶表达水平明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论尼古丁对Aβ25～35诱导的细胞毒性的拮抗作用与可溶性β-淀粉样前体蛋白α片段的分泌水平并无直接关系,而可能与胰岛素降解酶的表达水平相关。     

Alzheimer病和血管性痴呆病人脑脊液中β淀粉样蛋白含量比较

目的研究脑脊液中β－淀粉样蛋白量的变化对Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）和血管性痴呆（ＭＩＤ）的临床诊断有无鉴别意义。方法用单克隆抗体、ＥＬＩＳＡ方法检测两种痴呆患者各１６例和健康对照组３１例脑脊液中β－淀粉样蛋白（ＡＰ１－４０）的含量。结果在年龄构成和痴呆程度无明显差异的ＡＤ和ＭＩＤ两组间，脑脊液中ＡＰ１－４０的含量有明显差异。ＡＤ组Ａ值为０．２１７～０．３８０，平均０．２７４；ＭＩＤ组为０．２４１～０．４９２，平均０．２９０；ＡＤ组明显低于ＭＩＤ组。对照组Ａ值为０．２２８～０．５６７，平均０．３１１，明显高于ＡＤ组（Ｐ＜０．０１）而与ＭＩＤ组间差别不明显（Ｐ＞０．０５）。结论根据本研究结果，对于临床已诊断为痴呆的病例，检测脑脊液中β－淀粉样蛋白的含量对ＡＤ和ＭＩＤ的鉴别可能有所帮助     

β淀粉样前体蛋白羧基端肽对小鼠神经母细胞瘤细胞的毒性作用

目的 体外探讨β淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)羧基端肽(APPC31)对小鼠神经母细胞瘤(Neuro2a)细胞的毒性作用及在Aβ42致毒性中的作用.方法 分别将空载体质粒和过表达APPC31质粒通过脂质体转染法瞬时转染Neuro2a细胞,48 h后四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞活力,同时利用4',6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)核染色观察细胞形态,与空载体转染细胞组对照,观察APPC31对细胞有无毒性作用;然后通过相同方法,在Neuro2a细胞中,分别将过表达的空载体质粒、野生型APP695质粒、APP(D664A)质粒、APP氨基端长肽(APP△C31)质粒和APPC31质粒瞬时转染Neuro2a细胞,24 h后加Aβ42(10 μmol/L)共孵育24 h,MTT法检测细胞活力及DAPI核染色观察细胞形态,与空载体转染细胞组对照,观察Aβ42处理条件下APPC31的毒性作用;质粒转染细胞后通过免疫荧光检测目的 基因表达情况.结果 在无Aβ42共孵育时,空载体质粒转染组和APPC31质粒转染组细胞活力分别为:0.81±0.10、0.88±0.12,两组之间比较差异无统计学意义(t=-0.78,P=0.48),细胞核形态亦无明显凋亡或死亡改变;Aβ42(10 μmol/L)共孵育条件下,无转染组、空载体质粒组、野生型APP695质粒组、APP(D664A)质粒组和APPC31质粒组细胞活力分别为:0.82±0.01、0.78±0.03、0.55±0.04、0.81±0.04、0.78±0.02、0.54±0.02,且与空载体质粒组相比,野生型APP695质粒组及APPC31质粒组细胞活力明显下降(F=47.53,P＜0.05),细胞核呈明显浓缩、染色加深改变.结论 体外Neuro2a细胞单独过表达一定水平的APPC31并不能致细胞死亡;但此短肽可增强Aβ42的细胞毒性作用,为进一步明确阿尔茨海默病发病机制提供了一定的实验依据.     

S100β与Alzheimer病

Ｓ１００β是一种钙结合蛋白,在脑内它是轴突生长因子。正常情况下发挥重要的生理功能,但含量过高则具有神经毒性。本文综述了Ｓ１００β在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）各种可能的发病机制中的介导作用,尤其是它与炎症介质及β－淀粉样蛋白（Ａβ）三者之间相互作用,参与轴突变性和老年斑的形成,促成了ＡＤ的重要病理变化,值得高度重视。进一步探明过高水平的Ｓ１００β对神经元的影响,将有助于阐明ＡＤ的致病机制。     

阿尔茨海默病的淀粉样β蛋白前体基因的表达研究

】