日本血吸虫31／32kDa分子抗原快速诊断试剂盒的研制与 …

目的 基于纯化的日本血吸虫３１／３２ｋＤａ分子抗原,建立一种敏感、特异、简便、快速诊断血吸虫病的试剂盒。方法 采用Ｃｈａｐｐｅｌｌ方法分离纯化Ｓｊ３１／３２ｋＤａ抗原并建立快速ＥＬＩＳＡ,检测急、慢性血吸虫病人,并以肺吸虫病人、肝吸虫病人及正常人血清作为平行对照。结果 血吸虫病人４５７例,阳性检出率９４．３％,６７例肺吸虫病人及７６例肝吸虫病人血清均不出现明显交叉反应,正常人群假阳性率为１％。结论     

日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。     

日本血吸虫未成熟虫卵67kDa分子抗原诊断血吸虫病的研究

本文通过SDS－PAGE和电渗方法，从日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）中分离纯化出67kDa蛋白分子，以该分子包被微板进行ELISA，检测了急、慢性日本血吸虫病人血清，其阳性检出率达100％和94．6％，与60例正常人血清、30例肝吸虫和31例肺吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，慢性血吸虫病人治疗后3个月、半年和1年的阴转率分别为58．1％，75．4％和84．6％。提示SIEA67kDa分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

日本血吸虫虫卵组分抗原现场查病价值的评价

目的 评价日本血吸虫虫卵107／121ku组分抗原在现场查房中的应用价值。方法 采用虫卵可溶性107／121ku组分抗原酶联免疫吸附试验（FA－ELISA）与双面胶纸条环卵沉淀试验（DGS－COPT）和粪便孵化法平行试验的方法，观察其在现场查病中的敏感性、特异性和阳性检出率的符合情况。结果 虫卵107／121ku抗原FA－ELISA现场检测粪阳病人的阳性率为92．68％，血吸虫病治愈后8－18个月人群的假阳性率为42．25％，对治疗后8、12、18个月的阴转率分别为36．36％、48．15％、90．90％；该抗原与DGS－COPT平行检测现场普查血清的阳性率分别为9．43％和21．00％（x^2=29．1410，P＜0．01），虫卵107／121ku组分抗原和DGS－COPT有相关关系（rn=0.6263)，DGS－COPT和粪便孵化无相关关系（rn=-0.3783)，虫卵107／121ku组分抗原与粪便孵化有相关关系（rn=0.4324)。结论 虫卵107／121ku组分抗原的检测结果更接近于粪便孵化法，现场应用的价值明显高于DGS－COPT。     

日本血吸虫31／32kDa纯化诊断抗原现场应用研究

为了解洪灾后日本血吸虫病的流行情况,探讨日本血吸虫３１／３２ ｋＤａ纯化诊断抗原（Ｓｊ３１／３２）现场应用的价值,我们于 １９９８年 ９～１２月,应用 Ｓｊ３１／３２对流行区赤壁镇进行了人群日本血吸虫感染状况的调查。 材料和方法１检测对象 遭受洪灾的日本血吸虫病疫区的湖北赤壁镇八把刀村１、２组常住居民,共３４５人,其中,男性１８９人,女性 １５６人,年龄 ３～７０岁。抽取被检者静脉血５ ｍｌ,分离血清,低温冰箱保存备检,同时留取粪便作虫卵检查。２ Ｓｊ３１／３２诊断抗原的抽提和初步纯化 利用制备型 ＳＤＳ－…     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 ,具有诊断潜能     

日本血吸虫32kDa重组抗原的进一步研究

用慢性日本血吸虫病病人血清筛选以βgill构建的日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA表达库，获得一阳性克隆Sjgt4，将其插入片段经聚合酶链反应（PCR）法扩增后亚克隆入表达载体pTrcHisB并进行表达，获37kDa融合蛋白，它可溶于8M尿素，并可被日本血吸虫病病人血清中特异抗体所识别。以此37kDa融合蛋白免疫家免所得的抗血清，可特异地识别日本血吸虫成虫抗原的67kDa分子。     

日本血吸虫分子诊断抗原压电免疫传感器的研究

目的 将高灵敏度的生物传感技术与高特异性免疫反应相结合,研制诊断日本血吸虫病的压电免疫传感器。方法 采用柱层析方法纯化日本血吸虫３１／３２ｋＤａ分子抗原,然后将该抗原分子包被石英晶振,观察不同抗原浓度、检测时同及其频移植的变化,并对样品进行重复检比较。结果 基于化分子抗原建立的压电免疫传感器对阳性血清样品 具有较高的识别能力,而且还能定量测定血清样本中的抗体水平。结论采用免疫传感技术将是实现快速定     

日本血吸虫生殖相关抗原31～32kDa分子的质谱分析与鉴定

目的利用蛋白质组学技术分离、鉴定日本血吸虫天然分子31～32kDa抗原组分。方法收集感染后32d的日本血吸虫成虫，制备成虫蛋白，经一维电泳、固相pH梯度双向凝胶电泳分离，选取31-32kDa附近的蛋白点进行质谱分析鉴定，通过凝胶图像分析软件进行结果比较。结果二维电泳结果显示31～32kDa附近有13个蛋白点，经MALDI-TOF-MS鉴定及分析，发现3个蛋白分子分别与曼氏血吸虫Actine-2、日本血吸虫3-磷酸甘油脱氢酶、曼氏血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶有高度的同源性。结论31-32kDa组分中含有这3个蛋白点，它们与日本血吸虫31～32kDa天然分子中起保护性的有效分子密切相关。同时，它们的发现也为天然分子疫苗向基因工程疫苗的推进奠定了基础。     

日本血吸虫虫卵组分抗原现场查病价值的评价

目的　评价日本血吸虫虫卵 10 7/ 12 1ku组分抗原在现场查病中的应用价值。　方法　采用虫卵可溶性 10 7/ 12 1ku组分抗原酶联免疫吸附试验 (FA- EL ISA)与双面胶纸条环卵沉淀试验 (DGS- COPT)和粪便孵化法平行试验的方法 ,观察其在现场查病中的敏感性、特异性和阳性检出率的符合情况。　结果　虫卵 10 7/ 12 1ku抗原 FA- EL ISA现场检测粪阳病人的阳性率为 92 .6 8% ,血吸虫病治愈后 8～ 18个月人群的假阳性率为 4 2 .2 5 % ,对治疗后 8、12、18个月的阴转率分别为 36 .36 %、4 8.15 %、90 .90 % ;该抗原与 DGS- COPT平行检测现场普查血清的阳性率分别为 9.4 3%和 2 1.0 0 % (χ2 =2 9.14 10 ,P<0 .0 1) ;虫卵 10 7/ 12 1ku组分抗原和 DGS- COPT有相关关系 (rn=0 .6 2 6 3) ,DGS- COPT和粪便孵化无相关关系 (rn=- 0 .3783) ,虫卵 10 7/ 12 1ku组分抗原与粪便孵化有相关关系 (rn=0 .4 32 4 )。　结论　虫卵 10 7/ 12 1ku组分抗原的检测结果更接近于粪便孵化法 ,现场应用的价值明显高于 DGS- COPT。     

日本血吸虫31/32kDa循环免疫复合物的检测及其在疾病诊断中的作用

检测血吸虫循环免疫复合物（CIC）有助于提高疾病的检出率。利用抗血吸虫单克隆抗体H226和碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG（Fc）作捕捉ELISA，检测日本血吸虫病患者血清中CIC，其阳性检出率为92．2％，其中，EPG＜100的病人阳性检出率为90．0％，EPG＞100的病人阳性检出率为95．5％，两者无显著性差异。由于羊抗人IgGFc段能与CIC中人IgG的Fc段特异性结合，因此不仅省去了常规分离CIC的步骤，而且有助于提高试验的敏感性和特异性。     

佐剂对日本血吸虫31/32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白（ Ｓｊ３１／３２ 蛋白）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ Ｐ Ａ Ｏ）佐剂免疫小鼠,同时比较了 Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以福氏完全佐剂（ Ｆ Ｃ Ａ）对小鼠保护性免疫力的影响。 Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｐ Ａ Ｏ 组小鼠减虫率为３７５５％ ,肝减卵率为６７０２％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白组小鼠减虫率为２１１８％ , 肝减卵率为 ４９０３％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｆ Ｃ Ａ 组小鼠减虫率为 ２４０２％ , 肝减卵率为５２２４％ 。结果提示, Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以 Ｐ Ａ Ｏ 佐剂的减虫作用优于 Ｓｊ３１／３２ 辅以 Ｆ Ｃ Ａ 的减虫作用（ Ｐ＜ ００５）,且明显强于单纯 Ｓｊ３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白的保护性免疫作用（ Ｐ＜ ００１）。     

日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。     

日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。     

非游离循环抗原组分对血吸虫感染宿主虫卵肉芽肿保护性免疫调节机制的研究

首次采用特殊方法从感染兔红细胞上分离、纯化两种血吸虫组分抗原SjR47和SjR12，实验结果证明，前者属卵源性抗原，后者为虫源性抗原．两次实验结果均表明，两种组分抗原能诱导出明显的抗病免疫力，实验1获得54．95％－72．36％的肝内减卵率，实验2获得52．57％－57.27％的肝内减卵率和50.73％－74．70％的成熟卵减少率，并均可使肝内肉芽肿病变明显减小，尤以SjR47效果显著．两种抗原诱导的抗肝内肉芽肿保护性免疫调节机制的研究结果表明，两者均能诱导小鼠产生高水平的IgG，测定IgG及其亚类动态显示，在感染后0－12wk时，免疫小鼠血清IgG和IgG_1水平均显著高于佐剂和感染对照组者（P＜0.01），特别是能反映保护性免疫力指标的IgG_1升高非常明显：SjR47免疫鼠的脾T淋巴细胞亚群表型动态研究显示，SjR47免疫鼠的CD4~＋和CD8~＋T细胞在感染4wk时均升高，随后下降．CD4~＋／CD8~＋比值也随时间延长而下降，呈现免疫下调，其变化趋势同肉芽肿病变减小相一致；SjR47免疫鼠的细胞因子水平动态观察结果表明，SjR47免疫鼠后可使TNF－α在小鼠体内的活性水平较平显著上升（成虫期前），减弱了TNF－α对虫卵肉芽肿形成的介导作用以及对雌虫排卵的促进作用，导致肝内肉芽肿病变减小和虫卵减少。本研究结果表明，两     

巨噬细胞加工与呈递日本血吸虫抗原的作用

以免疫印迹技术探讨Mφ对日本血吸虫UEA(卵尿素溶性抗原)的加工情况。检测对象为UEA体外激活的Mφ匀浆及Mφ培养上清。所用结合物为辣根过氧化物酶标记的经亲和层析提纯的小鼠抗UEA抗体。结果可见抗原经Mφ作用后,大分子量UEA形成小分子多肽。它们与UEA及胰酶酶解的UEA有明显差异;培养上清与细胞匀浆条带较相似,仅见某些量的不同。根据以上结果而推论:(1)UEA可被Mφ加工为小分子片段,加工方式为裂解;(2)加工后的抗原多肽可释出Mφ外。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。     

日本血吸虫循环抗原动态消长的实验研究

目的：了解日本血吸虫三类循环抗原（CAg）在感染家兔的动态变化及治疗后的消长情况。方法：制备日本血吸虫的三株单抗，以辣根过氧化物酶标记，分别建立检测日本血吸虫肠相关抗原（GAA）、膜相关抗原（MAA）和可溶性虫卵抗原（SEA）的斑点酶联免疫吸附试验（dot－ELISA），观察感染日本血吸虫家兔血中三类抗原的动态变化情况。结果：家兔感染后第4wk，有39％家兔血中GAA呈阳性反应，而仅8．6％家兔MAA、SEA呈阳性反应，第8wk三类CAg均呈阳性反应，并于第10wk左右达高峰。未治疗组家兔直至感染后第27wk，血中三类CAg一直维持较高水平。感染后第9wk家兔接受吡喹酮治疗，治疗后第4wk，CAg水平开始下降，治疗后第6wk有10％家兔SEA阴转，治疗后第8wk，GAA阴转率为20％，SEA为70％，MAA为80％，治疗后第14wk除1例外，三类CAg全部阴转。结论：GAA早期诊断效果较好，而MAA和SEA在治疗后较GAA消失快，三类CAg的诊断和疗效考核价值不相同     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。