白藜芦醇抑制HCT116结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色和Western blot分析Res对HCT116细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和Western blot分析Res对HCT116细胞凋亡的促进作用;利用TCF4/LEF萤光素酶报告质粒检测Res对Wnt/β-catenin信号转导的影响。采用Western blot和PCR分析Res对HCT116细胞内β-catenin表达水平的影响。结果与对照组相比,Res能抑制HCT116细胞增殖,下调PCNA蛋白水平;流式细胞术和Western blot检测结果均显示,Res能明显促进HCT116细胞凋亡;报告质粒分析结果显示,Res呈浓度依赖性降低TCF4/LEF报告质粒萤光素酶活性(Res为20μmol·L-1时,P<0.05;Res为40或80μmol·L-1时,P<0.01);Western blot和PCR分析结果显示,Res不仅明显降低HCT116细胞中β-catenin的蛋白水平,同时也下调β-catenin mRNA的表达水平。结论Res能抑制HCT116细胞增殖并促进凋亡,其机制可能至少与Res下调β-catenin mRNA表达,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

小檗碱抑制HCT116细胞生长与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究小檗碱对结肠癌细胞的增殖抑制作用与Wnt/β-catenin信号的关系。方法结晶紫染色法检测小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用,采用流式分析及West-ern blot研究小檗碱诱导HCT116细胞凋亡;Western blot检测β-catenin蛋白表达、RT-PCR法检测β-catenin mRNA表达,确定小檗碱对其表达的影响;采用外源性过表达β-cate-nin研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与β-catenin的关系。结果小檗碱处理组细胞较对照组细胞增殖明显受到抑制,并诱导HCT116细胞凋亡。小檗碱处理组全细胞、胞质及核内β-catenin蛋白水平均明显较对照组低。外源性过表达β-catenin能减弱小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用。小檗碱处理组β-catenin mRNA表达明显受到抑制。结论小檗碱能抑制HCT116细胞增殖并抑制Wnt/β-catenin信号转导,其机制可能与下调β-catenin mRNA表达有关。     

TGF-β3与熊果酸抑制人结肠癌细胞增殖作用的研究

目的研究TGF-β3与熊果酸(ursolic acid,UA)抑制结肠癌细胞增殖作用的关系及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色法和流式细胞术分析不同浓度UA对HCT116细胞增殖的作用。利用Western blot和流式细胞术等方法分析UA对HCT116细胞凋亡的影响。通过RT-PCR和(或)Western blot实验分析UA在HCT116细胞中对TGF-β3、Smad2/3和β-catenin表达及磷酸化水平的影响。采用TGF-β3重组腺病毒和特异性抑制剂以及萤光素酶报告质粒分析TGF-β3介导UA抑制结肠癌细胞增殖的可能分子机制。结果UA能明显抑制HCT116细胞增殖,诱导G1期阻滞,并促进其凋亡。UA能明显降低TGF-β3的mRNA和蛋白表达水平;UA对Smad2/3的总蛋白水平无明显影响,但能明显降低Smad2/3的磷酸化水平;外源性过表达TGF-β3可部分逆转UA对HCT116细胞增殖的抑制作用,TGF-β3特异性抑制剂则增强UA对HCT116细胞增殖的抑制作用;UA降低β-catenin蛋白水平,并明显抑制Wnt/β-catenin信号转导;外源性过表达TGF-β3促进β-catenin蛋白表达,并部分逆转UA对β-catenin蛋白表达的抑制效应;TGF-β3特异性抑制剂增强UA对β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论 UA能抑制结肠癌细胞HCT116增殖并诱导凋亡,其作用可能是通过下调TGF-β3表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号转导。     

氧化苦参碱通过Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌HCT116细胞凋亡和焦亡作用研究

目的 探究氧化苦参碱诱导结肠癌HCT116细胞死亡的作用机制。方法 将结肠癌HCT116细胞随机分为对照组和氧化苦参碱（2、4、8、12、16、20、30、40 mmol·L^-1）组,通过CCK-8法检测各浓度氧化苦参碱作用24、48 h对结肠癌细胞存活率的影响;光学显微镜下观察氧化苦参碱（15、20、25 mmol·L^-1）对HCT116细胞形态的影响;通过Hoechst染色法和Annexin V/PI双染流式细胞术法观察氧化苦参碱对HCT116细胞凋亡的影响;JC-1染色观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blotting法检测各组细胞成熟体半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、BCL2关联X蛋白（Bax）、细胞色素C （Cyt-C）、消化道皮肤素E （GSDME）、细胞周期蛋白1（cyclin-D1）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（c-Myc）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、β-连环素（β-catenin）、生存素（survivin）的蛋白表达情况。结果 与对照组比较,氧化苦参碱可以明显降低HCT116细胞的存活率,且存在剂量及时间相关性,作用24、48h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为18.80、10.75 mmol·L^-1;氧化苦参碱组形状正常的HCT116细胞明显减少,均出现部分类圆球形的细胞,并且折光率明显降低;经Hoechst染色后氧化苦参碱组HCT116细胞的蓝色荧光明显加深,且相对集中,流式细胞术结果显示细胞凋亡率显著增加（P<0.05、0.01）;JC-1染色结果表明氧化苦参碱可以降低HCT116细胞线粒体膜电位;氧化苦参碱组Bcl-2、β-catenin、c-Myc、cyclin D1和survivin蛋白表达水平显著下降（P<0.05、0.01）,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Cyt-C、GSDME蛋白表达水平及Bax/Bcl-2显著上升（P<0.05、0.01）。结论 氧化苦参碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路,促进线粒体依赖的细胞内源性凋亡和细胞焦亡发挥抗结肠癌作用。     

白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞生长的研究

目地探讨白藜芦醇抗肿瘤活性的作用机制。方法本研究使用白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HCT116后,通过细胞生长实验和MTT增殖实验来探讨其对HCT116细胞生长、增殖的影响;通过免疫印迹实验检测β-catenin的表达水平和Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达,检测白藜芦醇对Wnt信号通路活化的影响。结果白藜芦醇能显著抑制HCT116的生长增殖,降低β-catenin的表达水平,抑制Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达。结论白藜芦醇通过抑制Wnt信号通路从而抑制肿瘤生长,本研究为白藜芦醇抗肿瘤机制提供了新的思路和方向。     

过表达的人β防御素-3可抑制结肠癌细胞增殖、迁移和细胞周期（英文）

本文研究探讨了人β防御素-3(hBD3)对结肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和细胞周期的影响。将真核表达载体(pcDNA3.1-hBD3)转染于人结肠癌HCT116细胞。采用qPCR和Westernblot方法检测转染效率。使用Westernblot方法检测细胞中β-catenin, E-cadherin, N-cadherin蛋白的分子表达水平;采用单通道Hoechst染色检测细胞核数量和增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期;划痕法和Transwell法检测结肠癌HCT116细胞的迁移能力。结果显示,转染过真核表达载体(pcDNA3.1-hBD3)的结肠癌HCT116细胞, hBD3的mR NA表达和蛋白表达水平显著高于结肠癌HCT116和转染pCMV-Blank的HCT116细胞;其增殖能力和迁移侵袭能力均受到不同程度的抑制;细胞周期的G2/M期受到阻滞; HCT116-hBD3细胞中β-catenin和N-cadherin两种蛋白的表达水平均低于HCT116和HCT116-Blank细胞,而E-cadherin蛋白表达的水平均高于HCT116和HCT116-Blank细胞。本文发现,...     

银莲花素A对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究银莲花素A(RA)对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡及β-连环蛋白(β-catenin)/c-Myc通路的影响。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,将细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用5、10和20μmol·L^-1 RA处理细胞。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测RA对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用;用荧光显微镜观察细胞核的形态学改变;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用蛋白质印迹法检测细胞β-catenin/c-Myc信号通路相关蛋白的表达情况。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞抑制率分别为0、(19.15±0.65)%、(35.11±0.40)%和(49.93±1.13)%,细胞凋亡率分别为(0.16±0.18)%、(9.26±0.42)%、(17.87±2.54)%和(38.10±2.70)%,β-catenin蛋白相对表达水平分别为0.74±0.03、0.69±0.01、0.33±0.02和0.16±0.04,c-Myc蛋白相对表达水平分别为0.89±0.01、0.54±0.03、0.29±0.03和0.1...     

美洛昔康抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究美洛昔康(meloxicam,Mel)对人结肠癌细胞Lo Vo增殖抑制作用及其机制。方法以人结肠癌细胞株Lo Vo为研究对象,体外药物敏感试验(结晶紫染色)和流式细胞术(FCM)分析Mel对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术和HE染色检测Mel对细胞凋亡的影响;萤光素酶报告质粒检测Mel对Wnt/β-catenin通路信号转导的影响;Western blot检测Mel对细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Mel能抑制Lo Vo细胞增殖,72 h、100μmol·L-1Mel的细胞抑制率高达(57.635±3.86)%(t=10.044,P=0.001);Mel能诱导Lo Vo细胞凋亡,24 h、60μmol·L-1Mel的细胞凋亡率达到(33.6±1.7)%(t=30.166,P=0.001);Mel能降低TCF/LEF及Myc/Max报告质粒的萤光素酶活性,24 h、60μmol·L-1Mel可使TCF/LEF和Myc/Mac报告的荧光素酶活性分别降至(40.05±2.79)%(t=14.864,P=0.001)和(35.9±2.38)%(t=16.904,P=0.001);Mel能下调细胞内β-catenin蛋白水平,40μmol·L-1Mel在24、48 h时,可将β-catenin蛋白水平分别降至(71±3.78)%(t=7.353,P=0.003)、(52.66±3.57)%(t=11.724,P=0.001)。结论 Mel能抑制Lo Vo细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路信号转导,降低细胞内β-catenin蛋白水平有关。     

青蒿琥酯诱导人结肠癌细胞凋亡与Wnt/β-catenin信号通路的关系研究

目的研究青蒿琥酯(ART)对人结肠癌Lovo细胞增殖的影响和可能的分子机制。方法采用噻唑蓝实验(MTT)检测ART对Lovo细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术和电镜检测ART对细胞凋亡的影响,荧光素酶报告质粒检测ART对Wnt/β-catenin通路中TCF4/LEF转录活性的影响,Western blot检测ART对细胞内β-catenin、GSK-3β、cMyc以及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,ART能抑制Lovo细胞增殖,72 h、320μmol·L~(-1)ART的细胞抑制率高达(78.99±1.95)%(F=898.301,P=0.000)。ART能诱导细胞凋亡,24 h、160μmol·L~(-1)ART的细胞早期凋亡率达到(19.00±0.05)%,同时电镜观察到细胞凋亡的形态学表现。ART能降低TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性,24 h、160μmol·L~(-1)ART可使TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性降至(0.36±0.30)%(F=470.954,P<0.01);ART处理48 h后,GSK-3β和caspase-3呈浓度依赖性升高(P<0.01),而β-catenin和c-Myc蛋白水平呈药物浓度依赖性降低(P<0.01)。结论青蒿琥酯能明显抑制结肠癌Lovo细胞增殖,并促进其凋亡,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡

目的探究人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,Rh2)诱导人结肠癌细胞SW480凋亡作用机制。方法 CCK-8法检测Rh2对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术(Flow cyto Metry,FCM)检测Rh2对SW480细胞凋亡的影响;Hoechst33258染色观察Rh2对SW480细胞凋亡形态学的影响;Western blot检测经Rh2诱导SW480细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cleaved caspase-3,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化;LY294002、Rh2单独及联合诱导SW480细胞后,蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化。结果CCK-8结果显示Rh2呈时间浓度依赖抑制SW480细胞增殖。FCM结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的(0.70±0.09)%增至(11.06±1.04)%(P<0.05)。Hoechst33258结果显示,Rh2诱导SW480细胞48h后呈现典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,经Rh2诱导的SW480细胞,凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低,Bax、p53、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达增加;PI3K/AKT/GSK-3β信号通路蛋白PI3K、P-AKT、P-GSK-3β表达量与对照组比较明显减少,AKT、GSK-3β表达量无明显变化;LY294002、Rh2和LY294002与Rh2联合诱导SW480细胞后,总AKT蛋白和总GSK-3β蛋白表达量基本一致,LY294002与Rh2联合用药对SW480细胞中PI3K、P-AKT和P-GSK-3β的表达抑制作用较单独用药更加明显。结论Rh2可能是通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路,激活p53信号通路,激活caspase-3,破坏Bcl-2/Bax比例,诱导结肠癌细胞SW480凋亡。     

TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞Wnt/β-catenin表达的影响

目的探讨TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞信号通路蛋白Wnt/β-catenin表达的影响。方法采用5μg·mL-1 TGF-β1诱导SMMC-7721发生上皮间质转化,分别采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和总蛋白的表达。结果 TGF-β1能显著诱导肝癌细胞SMMC-7721发生上皮间质转化,细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和相应总蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化时可促进细胞Wnt/β-catenin的表达。     

野黄芩苷调控Wnt/β-catenin信号通路对结肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 观察野黄芩苷(Scu)对人结肠癌细胞迁移和侵袭的影响及相关作用机制。方法 采用CCK8法检测40、80、120、160、200、240、280μmol·L^-1 Scu对人结肠癌SW480和HCT116细胞以及人肾皮质近曲小管上皮HK-2细胞活力的影响，计算半数抑制浓度(IC50)值。采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移和小室侵袭实验检测Scu对SW480和HCT116细胞迁移和侵袭的影响，Western blot法检测50、100、150μmol·L^-1 Scu对SW480细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化(EMT)和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果 120、160、200、240、280μmol·L^-1Scu显著抑制SW480和HCT116细胞的活力(P <0.01)，作用24 h后的IC50值分别为157.7和179.2μmol·L^-1。与空白组比较，50、100、150μmol·L^-1 Scu组SW480和HCT116细胞划痕宽度...     

和厚朴酚抑制结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白7关系的研究北大核心CSCD

目的研究和厚朴酚(honokial,HNK)对人源结肠癌细胞HCT116增殖的影响及其可能分子机制。方法采用结晶紫染色、流式细胞术检测和厚朴酚对HCT116细胞增殖和细胞周期的影响;Western blot分析和厚朴酚对增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指标Bcl-2的影响;Western blot及半定量PCR分析和厚朴酚对HCT116细胞中内源性骨形态蛋白7(BMP7)表达的影响;利用BMP7过表达腺病毒及抗体,通过结晶紫定量和Western blot,分析和厚朴酚联合应用BMP7腺病毒与抗体对HCT116细胞增殖的影响。结果和厚朴酚呈浓度和时间依赖性地抑制HCT116细胞增殖、诱导细胞凋亡、使细胞阻滞于G_2期,并上调PCNA的蛋白表达水平,下调Bcl-2的蛋白表达水平;和厚朴酚可上调HCT116细胞中BMP7的mRNA及蛋白表达水平;外源性BMP7过表达腺病毒可促进和厚朴酚的增殖抑制和促凋亡作用,而BMP7抗体可抑制此作用。结论和厚朴酚能够抑制HCT116的增殖并促进凋亡,其机制可能与上调BMP7的表达有关。     

Wnt10b、β-catenin与鼻咽癌放射敏感性的关系

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系.方法 收集对数生长期以及经直线加速器6MV X射线0、2、4、6 Gy照后48 h的鼻咽癌CNE2细胞和放射抗拒的CNE-2 (R743)细胞,RT-PCR方法检测Wnt10b基因、β-catenin基因mRNA的表达,Western blot检测Wnt10b、β-catenin蛋白的表达.结果 放射抗拒株CNE-2(R743)细胞的Wnt10b和β-catenin基因mRNA及蛋白的表达均高于放射敏感的CNE 2细胞(P＜0.05).经照射后CNE 2细胞和CNE-2 (R743)细胞的Wnt10b和β-catenin的mRNA及蛋白表达量随着照射剂量的增加而增加;在相同照射剂量下放射抗拒株CNE-2 (R743)细胞Wnt10b和β-catenin的表达量均高于CNE 2细胞(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号通路可能与鼻咽癌细胞放射敏感性有关.     

基于Wnt3a/β-catenin通路研究金银花提取物对脱氧胆酸诱导胃黏膜肠上皮化生的影响

目的探讨金银花提取物(FL)是否通过Wnt3a/β-连环蛋白(β-catenin)通路影响脱氧胆酸(DCA)诱导的胃黏膜肠上皮化生。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测1、10和100 g/L金银花提取物对DCA诱导的胃黏膜上皮细胞GES-1增殖的影响。将GES-1细胞分为对照组(未处理),DCA组(500μmol/L DCA),DCA+FL组(500μmol/L DCA+100 g/L FL),DCA+FL+Wnt3a/β-catenin通路激活剂LiCl组(500μmol/L DCA+100 g/L FL+LiCl)。采用流式细胞术和Western blot分别测定GES-1细胞的凋亡和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、三叶因子2(TFF2)、绒毛蛋白(VIL1)、CDX2、Wnt3a和β-catenin的表达水平。结果 1、10和100 g/L金银花提取物降低DCA诱导的GES-1增殖,差异有统计学意义(P0.05),选择金银花提取物浓度最明显的100 g/L进行后续研究。与对照组比较,DCA组GES-1细胞的凋亡率、Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2、TFF2、VIL1、CDX2、Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05);与DCA组比较,DCA+FL组GES-1细胞的凋亡率、Bax蛋白表达水平提高,并且Bcl-2、TFF2、VIL1、CDX2、Wnt3a和β-catenin蛋白水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。与DCA+FL组比较,DCA+FL+LiCl组GES-1细胞的凋亡率、Bax蛋白水平减少,Bcl-2、TFF2、VIL1和CDX2的蛋白水平增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论金银花提取物通过下调Wnt3a/β-catenin通路,促进DCA诱导的胃黏膜上皮细胞的凋亡和抑制肠上皮化生。     

褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡时Wnt/β-catenin通路的变化。方法褐藻糖胶不同浓度(25、50、100、200、400μg·mL-1)分别作用于PRMI8226细胞24、48、72 h,采用MTT法检测PRMI8226细胞增殖情况并求得半数抑制浓度(IC50);以1/2 IC50浓度的褐藻糖胶作用于PRMI8226细胞72 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。将细胞分为空白对照组、Wnt通路抑制剂(DKK-1)组(100 ng·mL-1)及褐藻糖胶(25μg·mL-1)组,采用Western blot检测β-catenin、c-myc、bax及caspase 3蛋白表达水平。结果褐藻糖胶对PRMI8226细胞增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性增强。PRMI8226细胞经褐藻糖胶25μg·mL-1处理72 h后,其凋亡率(12.22%)明显高于对照组(4.82%)(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,两组β-catenin和c-myc表达水平均有显著差异(P<0.05),褐藻糖胶组β-catenin和c-myc表达水平与DKK-1组比较无显著差异(P>0.05);褐藻糖胶组caspase3和bax蛋白表达水平较DKK-1组增加(P<0.05),两组与空白对照组比较表达亦增加,均有显著差异(P<0.05)。结论褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路的活化,能诱导多发性骨髓瘤PRMI8226细胞凋亡。     

AGGF1通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌发生发展

目的 研究G补缀FHA域血管新生因子1（angiogenic factor with G-patch and FHA domain 1，AGGF1）调控Wnt/β-catenin信号通路对结直肠癌细胞（colorectal cancer，CRC）增殖、侵袭和上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的可能机制。方法 通过裸鼠荷瘤免疫组化法检测AGGF1在正常组织和癌组织中的表达。qRT-PCR和Western blotting检测NCM460、SW620、HT29、HCT116、SW480中AGGF1的mRNA和蛋白表达水平。于HCT116细胞中过表达AGGF1，分为Vector组和AGGF1组；于SW620细胞中敲减AGGF1，分为shControl组和shAGGF1组。CCK-8法和克隆形成试验测定细胞活性和细胞克隆数目。划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭情况。免疫荧光检测细胞E-cadherin、N-cadherin的表达。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin、AGGF1、β-catenin、糖原合酶激酶-3β （glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）、p-GSK-3β蛋白表达水平。结果 AGGF1蛋白表达在CRC组织中明显增高。AGGF1 mRNA和蛋白表达水平在HCT116细胞中最低，在SW620细胞中最高。CCK-8法、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验结果显示，在HCT116细胞中，与Vector组比较，AGGF1组48，72，96 h细胞活性、克隆细胞数目、相对迁移距离、侵袭细胞数显著增加（P<0.05或P<0.01）；而在SW620细胞中，与shControl组比较，shAGGF1组结果相反（P<0.05或P<0.01）。免疫荧光和Western blotting检测结果显示，与Vector组比较，AGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平降低（P<0.01），N-cadherin增强（P<0.05或P<0.01），同时上调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.01）；与shControl组比较，shAGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平显著升高（P<0.01），N-cadherin显著降低（P<0.05或P<0.01），同时下调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。结论 AGGF1可通过激活Wnt/β-catenin信号通路异常表达，上调β-catenin、p-GSK-3β、N-cadherin表达，下调E-cadherin表达，促进CRC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT，从而促进CRC发生发展。     

Wnt/β-catenin信号通路在低氧促进hBMSCs体外增殖中的作用

目的 探讨持续低氧环境对入骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)体外增殖的影响,并初步探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用.方法 将购自江阴齐氏生物科技有限公司第2代hBMSCs进行传代、纯化,取第4代hBMSCs进行流式细胞仪检测鉴定;根据培养条件不同分为常氧组(20％氧浓度)和低氧组(3％氧浓度);CCK-8法测定各组生长曲线;采用RT-PCR检测Wnt/β-catenin信号通路关键组件β-catenin、cyclinD1 mRNA表达水平;Western blot检测β-catenin、P-β-catenin蛋白表达水平.结果 第4代hBMSCs流式鉴定结果显示:骨髓基质标志CD90表达为98.7％,而造血细胞标志CD19表达为0.3％;与常氧组比较,低氧组增殖速率更快,β-catenin、cyclinD1 mRNA表达升高(P＜0.05),β-catenin蛋白表达升高(P＜0.05),P-β-catenin蛋白表达下降(P＜0.05).结论 持续低氧环境可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路而促进hBMSCs体外增殖.     

核因子-κB抑制剂联合核因子E2相关因子2抑制剂对人结肠癌HCT116细胞凋亡的作用机制研究

目的探究核因子κB（NF-κB）抑制剂（BAY11-7082）联合核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）对人结肠癌细胞HCT116的作用机制。方法体外培养人结肠癌细胞HCT116,将细胞分为4组:空白对照组、NF-κB抑制剂组、Nrf2抑制剂和联合组。空白对照组以RPMI-1640培养基进行培养,NF-κB抑制剂组以10μmol·L^-1 BAY 11-7082干预,Nrf2抑制剂组以5μmol·L^-1 ML385干预,联合组以10μmol·L^-1 BAY 11-7082+5μmol·L^-1 ML385干预,干预时间为24 h。MTT法检测人结肠癌细胞HCT116增殖抑制率,以流式细胞术和Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡状况,以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白及Nrf2、NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果 ML385、BAY 11-7082均能显著抑制人结肠癌细胞HCT116增殖（均P<0.05）;干预24 h,空白对照组、Nrf2抑制剂组、NF-κB抑制剂组和联合组的细...